白芨快繁和高效栽培方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物培養(yǎng)應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種白芨組織培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]白發(fā)，學(xué)名Bletilla striata，又名連及草、甘根、白給、箬蘭等，為蘭科白發(fā)屬多年生草本植物，主要分布在中國、日本以及緬甸北部。花有紫紅、白、藍(lán)、黃和粉等色，可盆栽室內(nèi)觀賞。具有收斂止血、消腫生肌等功效，廣泛應(yīng)用與醫(yī)藥、日化產(chǎn)品等領(lǐng)域，近年來其應(yīng)用不斷擴(kuò)展，需求量不斷增加，但由于種子發(fā)育不完全，自然環(huán)境下難以萌發(fā)，生產(chǎn)上多靠塊莖繁殖，然而繁殖系數(shù)有限，投入大，但產(chǎn)量低，難以滿足市場需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明提供一種白芨組織培養(yǎng)方法，以解決上述問題。
[0004]本發(fā)明實(shí)施例提供了一種白芨組織培養(yǎng)方法，包括步驟:
[0005]步驟A，將選取的白芨蒴果用水沖洗后進(jìn)行滅菌處理；
[0006]步驟B，在無菌條件下將所述白芨蒴果中的種子均勻抖落在第一培養(yǎng)基上，進(jìn)行暗培養(yǎng)4.5-5.5d，再移至培養(yǎng)室在預(yù)定的溫度和光照強(qiáng)度條件下進(jìn)行培養(yǎng)，至長成1.8-2.2cm高的白芨叢生苗；
[0007]步驟C，將所述白芨叢生苗接種于第二培養(yǎng)基中，在預(yù)定的溫度和光照強(qiáng)度下進(jìn)行培養(yǎng)，直至小苗基部有原球莖出現(xiàn)；
[0008]步驟D，將帶原球莖的小苗揭開瓶蓋，在室內(nèi)自然光下煉苗6-8天，提高小苗適應(yīng)性；
[0009]步驟E，將所述步驟D中得到的帶原球莖的小苗取出，洗凈根部附著的培養(yǎng)基，用800-1000倍多菌靈浸泡根部0.5-lh，晾干后移栽至育苗基質(zhì)中，于溫室遮陰保濕通風(fēng)處培養(yǎng)，溫度控制在22.5-23.5°C，直至小苗存活，長成健壯白芨植株。
[0010]其中，所述步驟A中進(jìn)行滅菌處理包括步驟:
[0011]在超凈工作臺(tái)上采用75%乙醇消毒28-32s，0.1%升汞消毒14_16min，再用無菌水沖洗3-5次，置于滅菌的濾紙上吸干水分，備用。
[0012]其中，所述步驟在超凈工作臺(tái)上采用75%乙醇消毒28_32s，0.1%升汞消毒14-16min，再用無菌水沖洗3_5次包括:
[0013]在超凈工作臺(tái)上采用75%乙醇消毒30s，0.1 %升汞消毒15min，再用無菌水沖洗4次。
[0014]其中，所述步驟B包括步驟:
[0015]在無菌條件下，用消過毒的手術(shù)刀切開所述白芨蒴果頂部，用無菌鑷子將種子均勻抖落在第一培養(yǎng)基上，立即蓋上瓶蓋，做好標(biāo)記后，放在培養(yǎng)箱進(jìn)行暗培養(yǎng)5d，再移至培養(yǎng)室，培養(yǎng)溫度23-27°C，光照度2000-25001x，光照時(shí)長11.5-12.5h/d，培養(yǎng)時(shí)間為29-31d，長成2cm高白芨叢生苗。
[0016]其中，所述步驟C包括步驟:
[0017]將所述白芨叢生苗接種于第二培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度23_27°C，光照度2000-25001x，光照時(shí)長11.5-12.5h/d，培養(yǎng)時(shí)間為89-91d，至小苗基部有直徑為0.5mm的原球莖出現(xiàn)。優(yōu)選地，此步驟中接種于第二培養(yǎng)基后的光照時(shí)長為12h/d，培養(yǎng)時(shí)間為90d。
[0018]其中，所述步驟A之前還包括步驟:
[0019]預(yù)先配置第一培養(yǎng)基，所述第一培養(yǎng)基包括l/2MS、30g/L蔗糖、7g/L瓊脂、lg/L活性炭，ph為5.8。
[0020]其中，所述步驟A之前還包括步驟:
[0021]預(yù)先配置第二培養(yǎng)基，所述第二培養(yǎng)基包括MS、(X 75mg/L ΝΑΑ、(λ 5mg/L6_BA、25g/L 鹿糖、200g/L 土豆、6.5g/L 瓊脂、5g/L 活性炭，ph 為 5.8。
[0022]其中，所述步驟E之前包括步驟:
[0023]配置育苗基質(zhì)，所述育苗基質(zhì)包括腐殖土、珍珠巖和河沙。
[0024]其中，所述育苗基質(zhì)中的成分按體積份數(shù)計(jì)為腐殖土:珍珠巖:河沙=2:1:1。
[0025]本發(fā)明實(shí)施例提供了一種白芨組織培養(yǎng)方法，以性狀優(yōu)良的白芨種子為外植體，在特定的溫度光照度條件下進(jìn)行消毒處理、接種誘導(dǎo)萌發(fā)、繼代培養(yǎng)，長成完整的白芨植株小苗，最后將完整小苗移栽至育苗基質(zhì)中，培養(yǎng)成白芨種苗，整個(gè)培養(yǎng)過程標(biāo)準(zhǔn)可控，實(shí)現(xiàn)了白芨種苗的工廠化標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)，繁殖速度快，一年四季均可繁殖生產(chǎn)種苗，不受地域和氣候影響，相比傳統(tǒng)的野生采挖和人工塊莖栽培，生產(chǎn)過程可控，出產(chǎn)率高，產(chǎn)量更大，解決了現(xiàn)有技術(shù)中白芨培養(yǎng)產(chǎn)出率低難以滿足市場需要的技術(shù)問題。
【附圖說明】
[0026]圖1為本發(fā)明提供的白芨組織培養(yǎng)方法的一個(gè)實(shí)施例的流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0027]本發(fā)明實(shí)施例提供了一種白芨組織培養(yǎng)方法。參見圖1所示，該方法包括步驟:
[0028]步驟S110，將選取的白芨蒴果用水沖洗后進(jìn)行滅菌處理。
[0029]白芨蒴果應(yīng)選用形狀優(yōu)良的白芨植株的成熟蒴果。
[0030]優(yōu)選地，滅菌處理采用如下方式:在超凈工作臺(tái)上采用75%乙醇消毒28-32S，
0.1 %升汞消毒14-16min，再用無菌水沖洗3_5次，置于滅菌的濾紙上吸干水分，備用。
[0031]其中，本發(fā)明中除非特別說明，s為時(shí)間計(jì)量單位秒，min為時(shí)間計(jì)量單位分鐘，d為時(shí)間計(jì)量單位天，h為時(shí)間計(jì)量單位小時(shí)，mm為長度計(jì)量單位毫米，cm為長度計(jì)量單位厘米，Ix為光照強(qiáng)度單位勒克斯。
[0032]步驟S111，在無菌條件下將所述白芨蒴果中的種子均勻抖落在第一培養(yǎng)基上，進(jìn)行暗培養(yǎng)4.5-5.5d，再移至培養(yǎng)室在預(yù)定的溫度和光照強(qiáng)度條件下進(jìn)行培養(yǎng)，至長成
1.8-2.2cm高的白芨叢生苗。
[0033]步驟S112，將白芨叢生苗接種于第二培養(yǎng)基中，在預(yù)定的溫度和光照強(qiáng)度下進(jìn)行培養(yǎng)，直至小苗基部有原球莖出現(xiàn)。
[0034]在該步驟中，預(yù)定的溫度和光照強(qiáng)度可以為:培養(yǎng)溫度23-27 °C，光照度2000-25001x ;而光照時(shí)長可以為11.5-12.5h/d，培養(yǎng)時(shí)間為29_31d。
[0035]步驟SI 13，將帶原球莖的小苗揭開瓶蓋，在室內(nèi)自然光下煉苗6-8天，提高小苗適應(yīng)性。
[0036]步驟SI 14，將所述步驟SI 13中得到的帶原球莖的小苗取出，洗凈根部附著的培養(yǎng)基，用800-1000倍多菌靈浸泡根部0.5-lh,晾干后移栽至育苗基質(zhì)中，于溫室遮陰保濕通風(fēng)處培養(yǎng)，溫度控制在22.5-23.5°C，直至小苗存活，長成健壯白芨植株。
[0037]育苗基質(zhì)，按體積份數(shù)計(jì)，為腐殖土:珍珠巖:河砂=2:1:1。
[0038]其中，第一培養(yǎng)基為種子萌發(fā)培養(yǎng)基，第二培養(yǎng)基為繼代培養(yǎng)基。優(yōu)選地，作為一種可實(shí)施方式，第一培養(yǎng)基包括:l/2MS+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂+lg/L活性炭，第一培養(yǎng)基Ph值為5.8。
[0039]第二培養(yǎng)基包括:MS+0.75mg/L NAA+0.5mg/L 6_BA+25g/L 蔗糖 +200g/L 土豆+6.5g/L瓊脂+5g/L活性炭，第二培養(yǎng)基ph值為5.8。
[0040]其中，MS為常規(guī)基本培養(yǎng)基Murashige&Skoogl962，即 Murashige 和 SkOog 于 1962年為煙草細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì)的常規(guī)培養(yǎng)基。將常規(guī)基本培養(yǎng)基MS中大量元素濃度減半即得到1/2MS ；6-BA為6-芐基腺嘌呤，NAA為萘乙酸。
[0041]下面列舉一個(gè)本發(fā)明提供的白芨組織培養(yǎng)方法的一個(gè)較佳的實(shí)施例，其步驟如下:
[0042]I)白芨種子蒴果的選取與滅菌:選取成熟的白芨蒴果，將白芨蒴果用水沖洗干凈，在超凈工作臺(tái)上采用75%乙醇消毒30s，0.1 %升萊消毒15min，再用無菌水沖洗4次，置