垂枝櫻花的組織培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種垂枝櫻花的組織培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 櫻花傳統(tǒng)的繁殖方式為嫁接繁殖，但其成苗慢，難以大量快速生產(chǎn)。隨著組織培養(yǎng) 技術(shù)的發(fā)展，組織培養(yǎng)為櫻花的快速繁殖和工廠化生產(chǎn)提供了一條有效途徑。國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì) 櫻花的研究主要集中在山櫻花、東京櫻花、福建山櫻花、野山櫻等種類和品種上。垂枝櫻花 為近年來才發(fā)展起來的觀賞櫻花，由于其枝條柔垂飄逸、美觀，越來越多的應(yīng)用于園林綠化 和美化中。
[0003] 對(duì)于垂枝櫻花組織培養(yǎng)方面的研究主要有：南京林業(yè)大學(xué)榮冬青等報(bào)道了垂枝早 櫻"紅枝垂"的組培技術(shù)，以帶芽莖段為外植體，啟動(dòng)培養(yǎng)基為MS+BA1. 0mg/L+NAA0.1 mg/ L，芽的誘導(dǎo)率為80% ;增殖培養(yǎng)基為MS+BAO. 5mg/L+NAA0. lmg/L+蔗糖35g/L，增殖系數(shù)為 4.15;生根培養(yǎng)基為1/213+熟41.〇11^/1+1841.〇11^/1，生根率達(dá)95%(榮冬青，王賢榮.垂 枝早櫻"紅枝垂"的組培快繁試驗(yàn).林業(yè)科技開發(fā)，2008)。
[0004] 徐兆波等人也就垂枝櫻花的引種觀察與繁殖技術(shù)進(jìn)行了研究，繁殖技術(shù)中組織培 養(yǎng)僅就垂枝櫻花抗寒砧木的組培進(jìn)行了研究，采用的繁殖材料為休眠芽和萌動(dòng)芽，但研究 中未形成完整植株（徐兆波，陳秀云等.垂枝櫻花引種觀察與繁育技術(shù)研究.萊陽農(nóng)學(xué)院 學(xué)報(bào)，2001)。
[0005] 綜上所述，目前對(duì)于垂枝櫻花的組織培養(yǎng)方法的研究報(bào)道較少，且不系統(tǒng)，并且存 在繁殖系數(shù)不高的一些問題。究其原因，在櫻花的組織培養(yǎng)過程中，大部分種類或品種都會(huì) 遇到節(jié)間不伸長(zhǎng)，容易老化，或出現(xiàn)葉片卷曲，玻璃化等現(xiàn)象，只有此問題徹底解決，才能使 組培達(dá)到較好的效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種垂枝櫻花的組織培養(yǎng)方法，以克服現(xiàn)有垂枝櫻花的組織 培養(yǎng)中存在的節(jié)間縮短，增殖系數(shù)低的問題。
[0007] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：
[0008] 本發(fā)明所述的垂枝櫻花的組織培養(yǎng)方法，包括：外植體的準(zhǔn)備、啟動(dòng)培養(yǎng)、增殖培 養(yǎng)和生根培養(yǎng)；所述增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基含有6-BA0. 2~0. 5mg/L、ΝΑΑ0. 03~0. 07mg/L和 GA5 ~15mg/L〇
[0009] 本發(fā)明改良增殖培養(yǎng)基配方，能夠解決垂枝櫻花中普遍存在的節(jié)間縮短、繁殖系 數(shù)低的問題，優(yōu)選的，所述增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基的配方為：MS+6-BA0. 2~0. 5mg/L+NAA0. 03~ 0· 07mg/L+GA5 ~15mg/L+ 鹿糖 30 ~40g/L+ 瓊脂 5 ~8g/L。
[0010] 進(jìn)一步優(yōu)選的，所述增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基中，6-BA的濃度為0. 3~0. 5mg/L，NAA的 濃度為〇. 〇5mg/L，GA的濃度為10mg/L。更進(jìn)一步的，所述增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基中，6-BA的濃 度為 0· 3mg/L 或 0· 5mg/L。
[0011] 優(yōu)選的，所述的外植體為帶腋芽莖段或莖尖，取自當(dāng)年生春稍枝條的中上部。
[0012] 消毒后，對(duì)莖尖基部、帶腋芽莖段的兩端切口進(jìn)行修剪，修剪成1~I. 5cm的單芽 莖尖或單芽莖段進(jìn)行啟動(dòng)培養(yǎng)。
[0013] 優(yōu)選的，所述啟動(dòng)培養(yǎng)的培養(yǎng)基的配方為：
[0014] MS+BA0. 4 ~0· 6mg/L+NAA0. 03 ~0· 07mg/L+ 蔗糖 30 ~40g/L+ 瓊脂 5 ~8g/L。
[0015] 進(jìn)一步優(yōu)選的，所述啟動(dòng)培養(yǎng)的培養(yǎng)基中，6-BA的濃度為0. 5mg/L，NAA的濃度為 0. 05mg/L〇
[0016] 增殖培養(yǎng)基和啟動(dòng)培養(yǎng)基中，蔗糖的濃度具體可以為30g/L，瓊脂的濃度具體可以 為 6. 5g/L。
[0017] 優(yōu)選的，所述增殖培養(yǎng)的方法包括：?jiǎn)?dòng)培養(yǎng)20~30天后，從組培苗上取1~2cm 的單芽莖段，垂直接種于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
[0018] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明垂枝櫻花的組培方法具有較低的 污染率，啟動(dòng)效果好，啟動(dòng)培養(yǎng)的誘導(dǎo)分化率可達(dá)到84%，增殖培養(yǎng)階段能夠正常拔節(jié)，組 培苗生長(zhǎng)健壯，解決了傳統(tǒng)櫻花組織培養(yǎng)過程中普遍出現(xiàn)的節(jié)間縮短，容易老化的問題，且 增殖系數(shù)可達(dá)到7. 0。
【附圖說明】
[0019] 圖1為實(shí)施例1對(duì)外植體進(jìn)行消毒滅菌的圖片；
[0020] 圖2為實(shí)施例1外植體接種到啟動(dòng)培養(yǎng)基時(shí)的圖片；
[0021] 圖3為實(shí)施例1啟動(dòng)培養(yǎng)10天的圖片；
[0022] 圖4為實(shí)施例1增殖培養(yǎng)20天的圖片；
[0023] 圖5為實(shí)施例1增殖培養(yǎng)25天的圖片；
[0024] 圖6為實(shí)施例1生根培養(yǎng)20天全株的圖片；
[0025] 圖7為實(shí)施例1生根培養(yǎng)20天根部的圖片；
[0026] 圖8為實(shí)施例2采用僅添加6-BA0. 5mg/L和ΝΑΑ0. 05mg/L兩種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的 培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)20天的圖片。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的各種等價(jià) 形式的修改均落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求所限定的范圍。
[0028] 實(shí)施例1
[0029] 材料：材料為櫻花其中之一品種"垂枝櫻花"，選取當(dāng)年生帶腋芽莖段。
[0030] 本實(shí)施例垂枝櫻花的組織培養(yǎng)方法包括以下步驟：
[0031] 1、材料采集
[0032] 在3-5月份晴朗天氣條件的中午，截取垂枝櫻花健壯無病害嫩枝中上部位作為外 植體，去掉葉片留葉柄。采集外植體時(shí)要注意所選材料的優(yōu)良性、純正性、準(zhǔn)確性，切忌隨便 采取，以免造成不必要的損失。選擇生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的春稍枝段為材料，對(duì)所采的材料 要及時(shí)接種，防止失水萎蔫或污染霉?fàn)€。
[0033] 2、材料預(yù)處理
[0034] 將采集來的櫻花材料進(jìn)行修整，去掉不需要的部分，剪切成2_3cm小段，每段至少 保留1-2個(gè)腋芽，然后將材料放在洗衣粉中浸泡15分鐘，用流水反復(fù)沖洗lh。
[0035] 3、消毒滅菌
[0036] 對(duì)材料進(jìn)行預(yù)處理之后，轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)進(jìn)行消毒處理。把外植體剪成1-1. 5cm 長(zhǎng)的莖尖或帶有一個(gè)腋芽的莖段，用70%的酒精處理lmin，然后用0. 1 %的HgClJI毒處理 lOmin，處理期間不斷搖晃，使材料充分達(dá)到滅菌效果，再用無菌水沖洗5遍。
[0037] 4、啟動(dòng)培養(yǎng)
[0038] 將經(jīng)過消毒滅菌的莖尖基部、莖段兩端切口稍作修剪，修剪成1-1. 5cm的單芽莖 尖或單芽莖段。直立式接種于啟動(dòng)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25°C，光照強(qiáng)度30001x， 光照時(shí)間12h/天。
[0039] 啟動(dòng)培養(yǎng)基的配方為：MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. 05mg/L+蔗糖30g/L，并附加瓊脂 6. 5g/L，pH 值調(diào)整為 5. 8。
[0040] 5、增殖培養(yǎng)
[0041] 將經(jīng)過啟動(dòng)培養(yǎng)25d生長(zhǎng)的組培苗，截取成I. 5cm左右的單芽莖段，減去下部較大 的能接觸到培養(yǎng)基的葉片，垂直接種于增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25°C，光照強(qiáng)度 30001x，光照時(shí)間12h。