一種高速逆流色譜提取油茶中抑菌物質(zhì)的方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及高速逆流色譜分離純化領(lǐng)域，具體涉及一種高速逆流色譜提取油茶中 抑菌物質(zhì)的方法及應(yīng)用，還涉及一種油茶提取物。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，對(duì)植物源中活性成分的提取大部分采用水提法、水蒸氣蒸餾法、有機(jī)溶劑 法、超濾膜法等，這些方法不同程度地存在得率低、提取時(shí)間長(zhǎng)、流程多、能耗大、純度低等 缺點(diǎn)。
[0003] 而高速逆流色譜是一種新型的液一液分配色譜技術(shù)，可以在較短的時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)樣 品在兩個(gè)互不相溶的溶劑系統(tǒng)中的高效分配，從而實(shí)現(xiàn)樣品高度分離。HSCCC最大的優(yōu)點(diǎn)是 每次分離樣品的進(jìn)樣量比較大，可以達(dá)到毫克量級(jí)，甚至克量級(jí)；同時(shí)，HSCCC是一種不使用 固態(tài)支撐體或載體的液液分配色譜技術(shù)。它不需要任何固態(tài)載體，只是借助螺旋管的同軸 行星式運(yùn)動(dòng)實(shí)現(xiàn)固定相的高保留以充分分配分離，避免了分離樣品與固態(tài)載體表面發(fā)生化 學(xué)反應(yīng)而變性和不可逆吸附等情況。每次分離樣品結(jié)束后，管道中殘留溶劑均可沖出，不會(huì) 對(duì)后續(xù)分離產(chǎn)生任何影響，因此分離樣品均具有高回收率。
[0004] 目前，應(yīng)用HSCCC方法分離制備油茶中最強(qiáng)抑菌活性物質(zhì)的研究還尚未見(jiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種高速逆流色譜提取油茶中 抑菌物質(zhì)的方法及應(yīng)用、油茶提取物。
[0006] 第一方面，本發(fā)明提供了一種高速逆流色譜提取油茶中抑菌物質(zhì)的方法，包括以 下步驟：
[0007] (1)油茶粗提物的制備:連續(xù)相變萃取茶粉原料，獲得油茶粗提物；
[0008] (2)高速逆流色譜法分離:采用含I -10 %乙酸的乙酸乙酯、正丁醇、水混合液作為 兩相溶劑體系，在流速I(mǎi). 〇~3. OmL/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速500~900r/min，進(jìn)樣量IOOmg~600mg的 條件下，將步驟(1)制得的油茶粗提物進(jìn)行高速逆流色譜法分離，并根據(jù)峰形分段收集流出 液，獲得油茶中的抑菌物質(zhì)；其中，所述含1-10%乙酸的乙酸乙酯、正丁醇、水混合液中，乙 酸乙酯、正丁醇、水的體積比為1:2~4:4。
[0009] 優(yōu)選的，步驟(1)中所述的茶粉原料通過(guò)將油茶的茶葉或茶梗、根、花、籽柏粉碎制 得。
[0010] 進(jìn)一步優(yōu)選的，將油茶的茶葉或茶梗、根、花、籽柏粉碎至20-80目，得到茶粉原料。
[0011] 優(yōu)選的，步驟（1)所述的連續(xù)相變萃取茶粉原料，獲得油茶粗提物的步驟包括:將 茶粉原料裝入萃取釜中，在始終低于萃取劑的臨界壓力和臨界溫度的條件下，將萃取劑壓 縮為液體，在萃取溫度50-901，萃取壓力0.3-0.71〇^的條件下，流經(jīng)萃取釜，連續(xù)萃取1-5h，所得萃取物流經(jīng)解析釜，獲得油茶粗提物。
[0012] 優(yōu)選的，所述步驟（1)中，所述萃取劑包括但不限于乙醇、甲醇、丙酮、石油醚、苯、 氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷，丙烷、丁烷中的一種或多種。
[0013]優(yōu)選的，所述步驟(1)中，所述萃取劑的濃度為50-90%。
[0014]優(yōu)選的，所述步驟（1)中，所述萃取劑為70-90 %的乙醇水溶液，萃取溫度優(yōu)選為 70-90°C，萃取壓力優(yōu)選為0 · 4-0 · 6MPa，連續(xù)萃取l-3h。
[0015] 優(yōu)選的，所述步驟(1)中，所述流經(jīng)萃取釜的流速為80-150L/h。
[0016] 優(yōu)選的，所述步驟（1)中，所述流經(jīng)解析釜中解析并收集萃取物的條件為:解析溫 度為80-90°C，解析壓力為0 · 05-0 · 2MPa。
[0017]進(jìn)一步優(yōu)選的，所述步驟(1)中，解析溫度為90°C，解析壓力為0.2MPa。
[0018] 優(yōu)選的，所述步驟(1)中，所述萃取劑為70%的乙醇水溶液，萃取條件為:萃取溫度 70°C，萃取壓力0 · 4MPa，連續(xù)萃取lh。
[0019] 優(yōu)選的，所述步驟(1)中，所述萃取劑為70%的乙醇水溶液，萃取條件為:萃取溫度 80°C，萃取壓力0 · 5MPa，連續(xù)萃取2h。
[0020] 優(yōu)選的，所述步驟(1)中，所述萃取劑為70%的乙醇水溶液，萃取條件為:萃取溫度 90°C，萃取壓力0 · 6MPa，連續(xù)萃取3h。
[0021]優(yōu)選的，所述步驟(1)中，所述萃取劑為80%的乙醇水溶液，萃取條件為:萃取溫度 90°C，萃取壓力0 · 5MPa，連續(xù)萃取lh。
[0022]優(yōu)選的，所述步驟(1)中，所述萃取劑為80%的乙醇水溶液，萃取條件為:萃取溫度 70°C，萃取壓力0 · 6MPa，連續(xù)萃取2h。
[0023]優(yōu)選的，所述步驟(1)中，所述萃取劑為80%的乙醇水溶液，萃取條件為:萃取溫度 80°C，萃取壓力0 · 4MPa，連續(xù)萃取3h。
[0024] 優(yōu)選的，所述步驟(1)中，所述萃取劑為90%的乙醇水溶液，萃取條件為:萃取溫度 80°C，萃取壓力0 · 6MPa，連續(xù)萃取lh。
[0025] 優(yōu)選的，所述步驟(1)中，所述萃取劑為90%的乙醇水溶液，萃取條件為:萃取溫度 90°C，萃取壓力0 · 4MPa，連續(xù)萃取2h。
[0026] 優(yōu)選的，所述步驟(1)中，所述萃取劑為90%的乙醇水溶液，萃取條件為:萃取溫度 70°C，萃取壓力0 · 5MPa，連續(xù)萃取3h。
[0027]優(yōu)選的，所述步驟(1)中，所述萃取劑為80%的乙醇水溶液，萃取條件為:萃取溫度 70°C，萃取壓力0 · 5MPa，連續(xù)萃取lh。
[0028]優(yōu)選的，所述步驟(1)中，所述萃取劑為80%的乙醇水溶液，萃取條件為:萃取溫度 80°C，萃取壓力0 · 4MPa，連續(xù)萃取3h。
[0029]優(yōu)選的，所述步驟(1)中，所述萃取劑為80%的乙醇水溶液，萃取條件為:萃取溫度 80°C，萃取壓力0 · 4MPa，連續(xù)萃取lh。
[0030] 可以理解的是，本領(lǐng)域技術(shù)人員為了后續(xù)純化，可進(jìn)一步采用有機(jī)溶劑對(duì)步驟(1) 獲得的油茶粗提物進(jìn)一步萃取提純。所述有機(jī)溶劑包括但不限于石油醚、正丁醇、乙酸乙 酯、乙醚、苯、氯仿、二氯乙烷，丙烷、丁烷中的一種或多種。
[0031] 優(yōu)選的，所述采用有機(jī)溶劑對(duì)步驟（1)獲得的油茶粗提物進(jìn)一步萃取提純的步驟 包括：
[0032] 將步驟(1)所得油茶粗提物加入蒸餾水溶解后，加入石油醚，充分振搖萃取，靜置， 待溶液完全分層后，放出上層的乙酸乙酯萃取液，減壓濃縮得石油醚萃取物。
[0033]進(jìn)一步優(yōu)選的，采用有機(jī)溶劑對(duì)所得石油醚萃取物進(jìn)一步萃取提純的步驟包括： [0034]將所得石油醚萃取物加入蒸餾水溶解后，加入乙酸乙酯，充分振搖萃取，靜置，待 溶液完全分層后，放出上層的乙酸乙酯萃取液，減壓濃縮得乙酸乙酯萃取物。
[0035]更進(jìn)一步優(yōu)選的，采用有機(jī)溶劑對(duì)所得乙酸乙酯萃取物進(jìn)一步萃取提純的步驟包 括：
[0036]將所得乙酸乙酯萃取物加入蒸餾水溶解后，加入正丁醇，充分振搖萃取，靜置，待 溶液完全分層后，放出上層的正丁醇萃取液，直至正丁醇層澄清無(wú)色。將萃取液合并，減壓 濃縮得正丁醇萃取物。
[0037]優(yōu)選的，步驟(2)中，采用含3%乙酸的乙酸乙酯、正丁醇、水混合液作為兩相溶劑 體系。
[0038] 優(yōu)選的，步驟(2)中，所述含1-10 %乙酸的乙酸乙酯、正丁醇、水混合液中，乙酸乙 酯、正丁醇、水的體積比為1:4:4、1:3:4或1:2:4。
[0039] 可以理解的是，步驟(2)中乙酸乙酯-正丁醇-水(含I -10 %乙酸，優(yōu)選含3 %乙酸） 溶劑體系的配制方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解的常規(guī)技術(shù)，包括但不限于如下方法:將 乙酸乙酯、正丁醇、水、乙酸按一定體積比用分液漏斗配制，充分振搖后靜置過(guò)夜，分離上、 下相，兩相分別超聲脫氣15~30min，即得乙酸乙酯-正丁醇-水(含1-10%乙酸，優(yōu)選含3% 乙酸)溶劑體系，以上相溶液為高速逆流色譜的固定相，下相溶液為流動(dòng)相。
[0040] 優(yōu)選的，步驟(2)中，所述流速為1.5~3 .OmL/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速為800~850r/min，進(jìn) 樣量為100~500mg。
[0041 ] 進(jìn)一步優(yōu)選的，步驟(2)中，所述流速為1.5~1.7mL/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速為800~850r/ min，進(jìn)樣量為100~500mg。
[0042] 更進(jìn)一步優(yōu)選的，步驟(2)中，所述流速為1.5~1.7mL/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速為850r/min， 進(jìn)樣量為500mg。
[0043]優(yōu)選的，步驟（2)中，選用乙酸乙酯-正丁醇-水（含3%乙酸）（1:4:4)作為兩相溶 劑，在流速3mL/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速800r/min，進(jìn)樣量IOOmg的條件下，根據(jù)峰形分段收集流出液。 [0044]優(yōu)選的，步驟（2)中，選用乙酸乙酯-正丁醇-水（含3%乙酸）（1:4:4)作為兩相溶 劑，所述流速為1.7mL/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速為850r/min，進(jìn)樣量為500mg。
[0045]優(yōu)選的，步驟（2)中，選用乙酸乙酯-正丁醇-水（含3%乙酸）（1:4:4)作為兩相溶 劑，流速1.5mL/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速850r/min，進(jìn)樣量500mg。
[0046]優(yōu)選的，步驟（2)中，選用乙酸乙酯-正丁醇-水（含3%乙酸）（1:3:4)作為兩相溶 劑，所述流速為1.5mL/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速為800r/min，進(jìn)樣量為lOOmg。
[0047]優(yōu)選的，步驟（2)中，選用乙酸乙酯-正丁醇-水（含3%乙酸）（1:3:4)作為兩相溶 劑，所述流速為2. OmL/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速為850r/min，進(jìn)樣量為300mg。
[0048]優(yōu)選的，步驟（2)中，選用乙酸乙酯-正丁醇-水（含3%乙酸）（1:3:4)作為兩相溶 劑，所述流速為3. OmL/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速為850r/min，進(jìn)樣量為500mg。
[0049]優(yōu)選的，步驟（2)中，選用乙酸乙酯-正丁醇-水（含3%乙酸）（1:2:4)作為兩相溶 劑，所述流速為1.5mL/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速為800r/min，進(jìn)樣量為100mg。
[0050]優(yōu)選的，步驟（2)中，選用乙酸乙酯-正丁醇-水（含3%乙酸）（1:2:4)作為兩相溶 劑，所述流速為2. OmL/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速為850r/min，進(jìn)樣量為300mg。
[0051]優(yōu)選的，步驟（2)中，選用乙酸乙酯-正丁醇-水（含3%乙酸）（1:2:4)作為兩相溶 劑，所述流速為3. OmL/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速為850r/min，進(jìn)樣量為500mg。