一種大苞水竹葉的組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明設及一種植物繁殖方法，特別是一種大巷水竹葉組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 大巷水竹葉，為大巷水竹葉科植物大巷水竹葉(Euphorbia pekinensis Rupr.)， 多年生常綠草本。根圓柱狀，長20-30厘米?；ㄆ?-8月，果期6-9月。廣布于全國（除臺灣、云 南、西藏和新疆），北方尤為普遍。生于山坡、灌叢、路旁、荒地、草叢、林緣和疏林內(nèi)。根入藥， 具有較高的藥用價值，約100元/公斤，具有逐水通便，消腫散結(jié)，主治水腫，并有通經(jīng)之效， 用于治療慢性腎炎，治療晚期血吸蟲病腹水或其他肝硬變腹水等癥。近年來其資源遭到了 嚴重破壞，且對生長環(huán)境要求苛刻，隨著市場需求量的不斷增加，野生大巷水竹葉資源溯臨 枯竭了，生產(chǎn)上難W實現(xiàn)大面積栽培。采用生物技術(shù)組織培養(yǎng)技術(shù)，可W有效快速地提高大 巷水竹葉種苗的繁殖速度和質(zhì)量，實現(xiàn)大巷水竹葉優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化育苗，W滿足生產(chǎn)上 的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種大巷水竹葉組織培養(yǎng)快速繁殖方法，它能夠快速繁殖出 大量適合移栽的優(yōu)良大巷水竹葉種苗。
[0004] 本發(fā)明通過W下技術(shù)方案達到上述目的：一種大巷水竹葉組織培養(yǎng)快速繁殖方 法，包括W下步驟： (1) 外植體的選擇與消毒:取大巷水竹葉頂芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡 5~lOmin、線狀自來水沖洗5~15min、75%乙醇中表面消毒30~45 S、添加了2-3滴吐溫-20的 0.1% Hgcb消毒8~lOmin、無菌水沖洗3~5次，最后用消毒濾紙吸去表面水分，得到外植體， 其中無菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸饋水； (2) 頂芽分化獲得叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟（1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中， 在培養(yǎng)溫度為23~26°C，光照強度1400~20001UX，光照時間為10~12小時/天的條件下培養(yǎng)30 天，偵踩分化后獲得叢生芽，其中MS培養(yǎng)基中含0. . 4mg/L的KT、1.0~2. Omg/L的6-BA、1.0 ~2. Omg/L的NAA、20~30g/L薦糖和3.8~4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的抑值為5.8; (3) 叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(2)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng) 溫度23~26°C，光照強度1400~20001UX，光照時間為10~12小時/天的條件下培養(yǎng)40天得到健 壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含0.5~1.5mg/L的6-BA、0.2~0.6mg/L的IAA、20~30g/L薦糖和 3.8~4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的抑值為5.8; (4) 健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(3)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫 度23~26°C，光照強度1400~20001UX，光照時間為10~12小時/天的條件下培養(yǎng)40天得到帶根 的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基中含0.5~1.5mg/L的IAA、1.0~2.0 mg/L的IBA、25~30g/L薦 糖和3.8~4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的抑值為5.8。
[0005] 采用本發(fā)明所述方法得到的種苗健壯、成活率高，可在短期內(nèi)提供大量大巷水竹 葉的優(yōu)質(zhì)種苗，有效解決了大巷水竹葉的規(guī)?；鐔栴}。
【具體實施方式】
[0006] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進一步說明。
[0007] -種大巷水竹葉組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括W下步驟： (1) 外植體的選擇與消毒:取大巷水竹葉頂芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡 5~lOmin、線狀自來水沖洗5~15min、75%乙醇中表面消毒30~45 s、0.1% Hgcl2(添加了2~3 滴吐溫-20)消毒8~lOmin、無菌水沖洗3~5次，最后用消毒濾紙吸去表面水分，得到外植體， 其中無菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸饋水； (2) 頂芽分化獲得叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟（1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中， 在培養(yǎng)溫度為23~26°C，光照強度1400~20001UX，光照時間為10~12小時/天的條件下培養(yǎng)30 天，偵踩分化后獲得叢生芽，其中MS培養(yǎng)基中含0. . 4mg/L的KT、1.0~2. Omg/L的6-BA、1.0 ~2. Omg/L的NAA、20~30g/L薦糖和3.8~4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的抑值為5.8，觀察發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng) 基中6-BA和NAA濃度增加，大巷水竹葉叢生芽數(shù)均增加；結(jié)果，在培養(yǎng)基中添加0.2mg/L的 KT、2. Omg/L的6-BA和1.5mg/L的NAA叢生芽效果最好。
[0008] 表1不同激素對大巷水竹葉組織培養(yǎng)快速繁殖效果的影響
注:芽增殖倍數(shù)=(30天后芽數(shù)一接種時芽數(shù))/接種時芽數(shù) (3) 叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(2)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng) 溫度23~26°C，光照強度1400~20001UX，光照時間為10~12小時/天的條件下培養(yǎng)40天得到健 壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含0.5~1.5mg/L的6-BA、0.2~0.6mg/L的IAA、20~30g/L薦糖和 3.8~4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的抑值為5.8，觀察發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基中添加1. Omg/L的6-BA和0.6mg/ L的IAA時壯苗效果最好，株高達到5.37cm。
[0009] 表2不同激素水平對大巷水竹葉叢生芽壯苗效果的影響
(4)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(3)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫 度23~26°C，光照強度1400~20001UX，光照時間為10~12小時/天的條件下培養(yǎng)40天得到帶根 的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基中含0.5~1.5mg/L的IAA、1.0~2.0 mg/L的IBA、25~30g/L薦 糖和3.8~4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的抑值為5.8，觀察發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基中IAA濃度增加，組培苗的 生根率也增加；培養(yǎng)基中添加2 . Omg/L的IBA和1. Omg/L的IAA生根效果最好，生根率達 93.1%，平均根長達到4.49畑1。
[0010] 表3不同激素水平對大巷水竹葉組培苗生根效果的影響
備注:6-BA(6-節(jié)氨基嚷嶺），NAA(糞乙酸），KT(激動素），IAA(嗎I噪乙酸），AC(活性 炭)。
【主權(quán)項】
1. 一種大苞水竹葉組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:該方法包括以下步驟： (1) 外植體的選擇與消毒:取大苞水竹葉頂芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡 5~lOmin、線狀自來水沖洗5~15min、75%乙醇中表面消毒30~45 s、添加了2-3滴吐溫-20的 0.1 % H g c 12消毒8~10 m i η、無菌水沖洗3~5次，最后用消毒濾紙吸去表面水分，得到外植體， 其中無菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水； (2) 頂芽分化獲得叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟（1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中， 在培養(yǎng)溫度為23~26° C，光照強度1400~20001ux，光照時間為10~12小時/天的條件下培養(yǎng)30 天，側(cè)芽分化后獲得叢生芽;其中MS培養(yǎng)基中含0.1~0.4mg/L的KT、1.0~2. Omg/L的6-BA、1.0 ~2 · Omg/L的NAA、20~30g/L蔗糖和3 · 8~4 · 8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5 · 8; (3) 叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(2)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng) 溫度23~26° C，光照強度1400~20001ux，光照時間為10~12小時/天的條件下培養(yǎng)40天得到健 壯植株;其中MS壯苗培養(yǎng)基中含0 · 5~1 · Smg/l的6-BA、0 · 2~0 · 6mg/L的IAA、20~30g//L蔗糖和 3.8~4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8; (4) 健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(3)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫 度23~26°C，光照強度1400~20001ux，光照時間為10~12小時/天的條件下培養(yǎng)40天得到帶根 的完整植株;其中MS生根培養(yǎng)基中含0 · 5~1 · Smg/l的IAA、1 · 0~2 · 0 mg/L的IBA、25~30g/L蔗 糖和3.8~4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8。
【專利摘要】一種大苞水竹葉組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括如下步驟：取大苞水竹葉頂芽作為外植體進行消毒；將消毒后的外植體置于MS基本培養(yǎng)基中誘導得到叢生芽；將所述叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)得到健壯植株；將所述健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到完整的帶根苗。采用本發(fā)明所述方法得到的種苗健壯、成活率高，可在短期內(nèi)提供大量大苞水竹葉的優(yōu)質(zhì)種苗，有效解決了大苞水竹葉的規(guī)模化育苗問題。<b />
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105660413
【申請?zhí)枴緾N201610108545
【發(fā)明人】張占江, 李翠, 趙以民, 繆劍華, 韋瑩, 韋坤華, 李林軒, 王一諾, 肖冬
【申請人】廣西壯族自治區(qū)藥用植物園
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2016年2月29日