專利名稱：一種脂肪酸合成酶抑制劑及其制造方法與應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及酶的抑制劑及其制造方法與應用，特別是涉及一種脂肪酸合成酶抑制劑及其制造方法與應用。
研究表明，高等動物的體脂一方面靠直接攝入，更多的由體內(nèi)自身合成(Lenninger，A.L.，1982.Principles of Biochemistry，Chapter 13，p333-360 andChapter 21，p593-614；Wakil，S.J.et al.，1983.Ann.Rev.Biochem.52，p537-579)。脂肪酸合成酶是生物細胞內(nèi)合成脂肪過程中最重要的酶。田維熙等對家禽脂肪酸合成酶的研究發(fā)現(xiàn)，家禽腹腔的脂肪水平和脂肪酸合成酶活性有很高的正相關(guān)，并提出控制脂肪酸合成酶活性是控制動物體脂水平的有效方法的理論(田維熙，1994.動物的體脂水平和脂肪酸合成酶活性的調(diào)控.生命的化學，14，(1)184；田維熙等，1996.不同生長期蛋雞的體脂水平和肝臟脂肪酸合成酶活性的關(guān)系.生物化學雜志，12(2)234-236；Mei Li et al.，1999.Factors influencingthe levels of fatty acid synthase complex activity in fowl.Biochemistry andMolecular Biology International，47(1)63-69)。最近，霍普金斯大學Loftus等對小鼠脂肪酸合成酶的研究結(jié)果證明，抑制脂肪酸合成酶可造成丙二酰輔酶A的積累，而后者抑制與進食相關(guān)的下丘腦神經(jīng)肽Y的表達，在不影響小鼠活動能力的情況下使食欲下降，體重降低。Loftus等指出，脂肪酸合成酶可以作為控制體重潛在的治療靶位(Loftus.T.M.et al.，2000.Science，288(5475)2379-2381)。以上結(jié)果表明，抑制脂肪酸合成酶的活性，不僅可抑制細胞內(nèi)脂肪的合成，而且還能抑制動物的食欲，進而限制直接攝入的熱量。因此，研制和開發(fā)脂肪酸合成酶的抑制劑將具有重大的現(xiàn)實意義及開發(fā)潛力。
本發(fā)明的目的是提供一種能有效抑制脂肪酸合成酶活性的脂肪酸合成酶抑制劑。
本發(fā)明的另一目的是提供一種制造上述脂肪酸合成酶抑制劑的方法。
本發(fā)明的又一目的是提供上述脂肪酸合成酶抑制劑的用途。
本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑是用有機溶劑或水或有機溶劑與水的混合物，從中藥桑寄生中萃取出的物質(zhì)。
所述的有機溶劑為極性有機溶劑，其中，優(yōu)選的是乙醇。所述乙醇的濃度可以在15％-95％的范圍內(nèi)，其中，優(yōu)選的是40％-70％的乙醇，最優(yōu)選的是50％的乙醇。
生產(chǎn)上述脂肪酸合成酶抑制劑的方法，包括以下步驟(1)、將粉碎后的桑寄生置于容器中，加入有機溶劑或水或有機溶劑與水的混合物；(2)、在20℃-40℃條件下萃取4-9小時；(3)、離心或過濾，收集上清液。
在上述生產(chǎn)方法中，所述加入的有機溶劑或水或有機溶劑與水的混合物的重量可以為所述桑寄生重量的4-15倍，其中優(yōu)選的為5-8倍。
如果萃取在攪拌、30℃條件下進行，則萃取4小時即可；如果離心是在8000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下進行，則進行15分鐘。
以本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑為活性成分生產(chǎn)的藥物，是本發(fā)明脂肪酸合成酶抑制劑的主要應用領(lǐng)域。
本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑還可以作為食品添加劑、日用化學品(特別是化妝品)添加劑及保健品添加劑。
中藥桑寄生為桑寄生科植物桑寄生Loranthus Parasticus(L.)，Merr.或槲寄生Uiscum Coloratum(Kom.)Nakai的枝葉。桑寄生又名桃木寄生、沙梨寄生、枇杷寄生、油茶寄生、廣寄生，產(chǎn)于我國廣東、廣西、云南、貴州、四川、江西等地。槲寄生又名北寄生、柳寄生，產(chǎn)于我國河北、遼寧、吉林、安徽、內(nèi)蒙古、湖南、浙江、河南、黑龍江、山西、陜西、四川、江西、福建、湖北、江蘇、青海等地。中藥桑寄生“性苦，平”(《本經(jīng)》)，“甘，無毒”(《別錄》)，“入肝、腎”(《本草求真》)。中醫(yī)認為，桑寄生的功用主要為補肝腎，強筋骨，除風濕，通經(jīng)絡，益血，安胎。主治腰膝酸痛，筋骨瘺弱，偏枯，腳氣，風寒濕，胎漏血崩，產(chǎn)后乳汁不下。
本發(fā)明巧妙地將傳統(tǒng)的中藥桑寄生用有機溶劑或水或有機溶劑與水的混合物，特別是乙醇進行萃取，創(chuàng)造性地揭示出，所萃取出的物質(zhì)是有效的脂肪酸合成酶抑制劑。由于中藥桑寄生本身無毒，因而為該脂肪酸合成酶抑制劑的進一步開發(fā)利用提供了廣闊的前景。實驗表明脂肪酸合成酶抑制劑可以有效抑制脂肪酸合成酶的活性，而脂肪酸合成酶活性的強弱直接影響到生物細胞內(nèi)合成脂肪的多少。也就是說，抑制了脂肪酸合成酶的活性，生物細胞內(nèi)合成脂肪的過程會弱化，脂肪含量即會得到控制，甚至減少，而且，脂肪酸合成酶抑制劑還可以控制動物的食欲，因此本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑可以作為減肥藥物的活性成分，生產(chǎn)口服液、沖劑、膠囊、片劑、針劑等各種劑型的減肥藥物。本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑還可以作為保健品、食品的添加劑，比如可作為高熱量食品的添加劑，使喜食高熱量食品的人既滿足了口福，又不用擔心會增胖。本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑還可以作為美容日用化學品的添加劑，如可以制成減肥霜，對需要減肥的部位進行定點涂抹。同時，由于中藥桑寄生的源植物分布廣泛，因而價格較低，為脂肪酸合成酶抑制劑的工業(yè)化生產(chǎn)提供了保證。
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。
在下述的實施例中，所用的脂肪酸合成酶均為用常規(guī)方法(W.X.Tian et al.，1985.J.Biol.Chem.，260(20)11375-11387；田維熙等，1996.不同生長期蛋雞的體脂水平和肝臟脂肪酸合成酶活性的關(guān)系.生物化學雜志，12(2)234-236)自新鮮雞肝中分離提純的，并經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測為單一帶。
脂肪酸合成酶活性采用乙酰輔酶A、丙二酰輔酶A、NADPH為底物的標準測活方法測定(W.X.Tian et al.，1985.J.Biol.Chem.，260(20)11375-11387；田維熙等，1996.不同生長期蛋雞的體脂水平和肝臟脂肪酸合成酶活性的關(guān)系.生物化學雜志，12(2)234-236)。
脂肪酸合成酶(FAS)活性被抑制的程度用I％(抑制程度)來表示，其計算方法為以底物中只加入相應提取溶劑的為對照，測定其脂肪酸合成酶活性值，該值用A0表示，并設定其為100％。底物中加入脂肪酸合成酶抑制劑提取液的為實驗組，測得其脂肪酸合成酶活性的數(shù)值為A；RA％(剩余活性)＝A/A0×100％I％(抑制程度)＝100％-RA％在以下的實施例中，每項實驗均分別用桑寄生科植物桑寄生及槲寄生制成的中藥進行了對比實驗，實驗結(jié)果沒有顯著差異，推論其萃取出的有效物質(zhì)相同，因此統(tǒng)稱為中藥桑寄生。
實施例1用乙醇從中藥桑寄生中萃取脂肪酸合成酶抑制劑(1)取中藥桑寄生，粉碎后置于容器中，加入5倍重量95％的乙醇，充分攪拌后密封；(2)在30℃、攪拌的條件下萃取4小時；(3)將上述萃取液在8000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心15分鐘，取上清液，即為含脂肪酸合成酶抑制劑的提取液，以備下面的實驗使用。
可以用與該實施例相同的方法，用不同梯度的乙醇(如17％，40％，50％，70％，80％)、水、與乙醇極性相近或較弱的有機溶劑(如丙酮)來萃取脂肪酸合成酶抑制劑。如果是在非攪拌條件下進行萃取，則至少應每隔4小時攪拌一次，萃取8小時。用該實施例的方法自中藥桑寄生中萃取脂肪酸合成酶抑制劑，攪拌條件下，萃取時間只要不低于4小時，溫度在20-100℃之間均能萃取出有效成分。在實際生產(chǎn)中，萃取后一般采用壓濾機來收取上清液。
實施例2相同的實驗底物中加入不同數(shù)量的脂肪酸合成酶抑制劑對FAS活性的影響(測活的酶加入量為每毫升實驗底物10微克)。每毫升底物中加實施例1提取液的微升數(shù) 0.125 0.25 0.51.0折算成加入中藥桑寄生的毫克數(shù)0.025 0.05 0.10.2折算成每毫克酶加入中藥桑寄生的毫克數(shù)2.5 5 10 20FAS酶活性被抑制的程度I％37 83 93 98由以上實驗結(jié)果可以看出，隨著加入提取液量的增加，F(xiàn)AS酶活性被抑制程度I％升高，當每毫升底物中加入1.0微升的提取液時，I％已高達98％，表明脂肪酸合成酶的活性基本被抑制。
實施例3萃取溶劑對脂肪酸合成酶活性的影響取與實施例2相同的底物，分別向每毫升底物中加0.125、0.25、0.5、1.0微升95％的乙醇，檢測計算FAS酶活性被抑制的程度I％，結(jié)果是I％均為0，表明所加量的萃取溶劑乙醇不會抑制脂肪酸合成酶的活性，抑制脂肪酸合成酶活性的是從中藥桑寄生中萃取出的物質(zhì)。
實施例4脂肪酸合成酶抑制劑的半抑制濃度用實施例1所得的提取液進行實驗，結(jié)果表明，要達到I％＝50％，每毫升溶液中需加入0.15微升的提取液，折算成加入中藥桑寄生的毫克數(shù)為0.03，折算成每毫克酶加入中藥桑寄生的毫克數(shù)為3，半抑制濃度非常低，說明本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑對脂肪酸合成酶的活性有強烈的抑制作用，并且所需有效劑量很低。
實施例5不同萃取劑對萃取出的脂肪酸合成酶抑制劑數(shù)量的影響萃取劑 水 50％ 95％ 丁醇 丙酮 乙醚 石油醚乙醇乙醇每毫升底物中加入1.00.2 0.5 0.50.50.5 0.5提取液的微升數(shù)折算成加入中藥 0.20.040.1 0.10.10.1 0.1桑寄生的毫克數(shù)折算成每毫克酶加入 20 4 10 10 10 10 10中藥桑寄生的毫克數(shù)FAS酶活性被抑959693274000制的程度I％從以上實驗結(jié)果可以看出，本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑可以溶于水，但溶解性以在乙醇中為佳，最好的是50％左右的乙醇，而在弱極性的丁醇、丙酮中溶解性不高，在非極性溶劑中不溶。
實施例6動物試驗以50％酒精為萃取溶劑，按實施例1所述的方法由中藥桑寄生中萃取脂肪酸合成酶抑制劑。所得提取液用2倍純水稀釋，以稀釋液用灌胃法給大鼠每只每天口服飼喂3毫升，連續(xù)25天。對照組用2倍純水稀釋的50％酒精取代提取液同樣每只大鼠每天飼喂3毫升。試驗組共10只雌性大鼠，起始平均體重280.45克，對照組共10只雌性大鼠，起始平均體重278.50克。飼喂15天后試驗組平均體重268.45克，降低12克；對照組平均體重280.70克，增加2.2克。飼喂25天后試驗組平均體重259.56克，降低20.89克；對照組平均體重267.25克，降低10.65克。經(jīng)統(tǒng)計分析，試驗組和對照組體重下降差異較顯著。
大鼠血清甘油三脂測定的初始平均值為1.5，試驗25天后測定試驗組為0.897，對照組為1.02，試驗組血清甘油三脂降低40％，比對照組低12％。
試驗期，日平均進食量試驗組為每只10.98克標準飼料，對照組為每只12.64克，試驗組比對照組少進食13.13％。
以上結(jié)果表明，口服自桑寄生中萃取出的脂肪酸合成酶抑制劑后，可減少大鼠體重，血清甘油三脂和進食量，對減肥降脂有明顯作用。
權(quán)利要求
1.脂肪酸合成酶抑制劑，它是用有機溶劑或水或有機溶劑與水的混合物，從中藥桑寄生中萃取出的物質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制劑，其特征在于所述有機溶劑為極性有機溶劑，其中，優(yōu)選乙醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的脂肪酸合成酶抑制劑，其特征在于所述乙醇的濃度為15％-95％，其中，優(yōu)選的是40％-70％，最優(yōu)選的是50％。
4.一種生產(chǎn)權(quán)利要求1所述脂肪酸合成酶抑制劑的方法，包括以下步驟(1)將粉碎后的桑寄生置于容器中，加入有機溶劑或水或有機溶劑與水的混合物；(2)在20℃-40℃條件下萃取4-9小時；(3)離心或過濾，收集上清液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的生產(chǎn)脂肪酸合成酶抑制劑的方法，其特征在于所述加入的有機溶劑或水或有機溶劑與水的混合物的重量為所述桑寄生重量的4-15倍；其中優(yōu)選的為5-8倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的生產(chǎn)脂肪酸合成酶抑制劑的方法，其特征在于所述萃取在攪拌、30℃條件下，進行4小時；所述離心是在8000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下進行15分鐘。
7.以權(quán)利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制劑為活性成分的藥。
8.權(quán)利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制劑作為食品添加劑的應用。
9.權(quán)利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制劑作為日用化學品添加劑的應用。
10.權(quán)利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制劑作為保健品添加劑的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種脂肪酸合成酶抑制劑,它是用有機溶劑或水或有機溶劑與水的混合物,從中藥桑寄生中萃取出的物質(zhì);所述有機溶劑優(yōu)選乙醇;所述乙醇的濃度優(yōu)選的是40%－70%,最優(yōu)選的是50%。一種生產(chǎn)上述脂肪酸合成酶抑制劑的方法,包括以下步驟:(1)將粉碎后的桑寄生置于容器中,加入有機溶劑或水或有機溶劑與水的混合物;(2)在20℃－40℃條件下萃取4－9小時;(3)離心或過濾,收集上清液。本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑可以在制藥、食品添加劑及日用化學品添加劑等領(lǐng)域得到廣泛應用。
文檔編號A23L1/30GK1372947SQ0110923
公開日2002年10月9日 申請日期2001年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2001年2月28日
發(fā)明者田維熙, 李麗春, 吳曉東, 陳傳楚, 王玄 申請人:田維熙