一種具有抗腫瘤活性的桑黃高效工廠化袋料栽培工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種具有抗腫瘤活性的桑黃高效工廠化袋料栽培工藝，該工藝包括以下步驟：(1)從桑樹采集獲得野生桑黃子實(shí)體，經(jīng)過(guò)菌株分離純化后接種到母種培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得桑黃母種，桑黃母種接種到液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得桑黃原種，桑黃原種接種到液體發(fā)酵罐中進(jìn)行放大發(fā)酵培養(yǎng)獲得桑黃栽培種；(2)將桑黃栽培種接種到菌棒中進(jìn)行發(fā)菌生產(chǎn)；(3)出菇管理：將布滿菌絲體的菌棒進(jìn)行切口，轉(zhuǎn)入出菇室進(jìn)行工廠化管理出菇。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：自動(dòng)化液體接種極大的提高接種效率、減少污染；工廠化栽培保證桑黃出菇率高、桑黃子實(shí)體生長(zhǎng)迅速，生長(zhǎng)周期縮短，子實(shí)體成熟期統(tǒng)一，顏色金黃、外形大小均一，經(jīng)過(guò)大量培養(yǎng)實(shí)踐證明，桑黃可實(shí)現(xiàn)高效工廠化培養(yǎng)。CGMCC No.1140720151023
【專利說(shuō)明】
一種具有抗腫瘤活性的桑黃高效工廠化袋料栽培工藝
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及一種具有抗腫瘤活性的桑黃高效工廠化袋料栽培工藝。
【背景技術(shù)】
[0002]桑黃是一種真菌，因寄生于桑樹而得名。分類上屬真菌界(Fungi)、擔(dān)子菌門(Basid1mycotas)、層菌綱(Hymenomycetes)非裙菌目(AphyI lophoraIes)銹革孔菌科(Hymenochaetaceae)針層孔菌屬(PhellinusQuel.)。主要分布于東亞(中國(guó)、日本、韓國(guó)、朝鮮、俄羅斯)一帶。在中國(guó)，桑黃的使用從漢朝起至今已經(jīng)有2000多年的歷史了，中國(guó)最早的本草學(xué)著作《神農(nóng)本草經(jīng)》就已經(jīng)有了 “桑寄生”的藥物功效記載(戴玉成，崔寶凱.藥用真菌桑黃種類研究;北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2014;36(5):2-8)?，F(xiàn)代研究證實(shí)桑黃含有多種活性成分，如多糖、黃酮、多酚等，具有抗癌、護(hù)肝、抗過(guò)敏等藥理作用，備受消費(fèi)者青睞(張維博，王家國(guó)，李正闊，楊麗群，秦檢，向仲懷，崔紅娟.藥用真菌桑黃的研究進(jìn)展，中國(guó)中藥雜志，2014,39(15):2838-2845)o
[0003]由于桑黃人工馴化栽培過(guò)程較為復(fù)雜，難度較大，現(xiàn)有的桑黃栽培方法存在出菇率低，人工培養(yǎng)生長(zhǎng)情況不好，桑黃子實(shí)體顏色成褐色，生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，導(dǎo)致生產(chǎn)成本較高等問(wèn)題，需要對(duì)現(xiàn)有的栽培方法進(jìn)行改良。自動(dòng)化液體接種、高效工廠化栽培是現(xiàn)代高效農(nóng)業(yè)的典范，屬新興產(chǎn)業(yè)，是高效現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)的發(fā)展趨勢(shì)和重要模式。通過(guò)現(xiàn)代設(shè)施設(shè)備的調(diào)控減少人為操作和氣候因素的影響，進(jìn)行工廠化常年生產(chǎn)，提高栽培成功率，形成穩(wěn)定的產(chǎn)品來(lái)源是目前桑黃生產(chǎn)的關(guān)鍵問(wèn)題。同時(shí)由于“桑黃”種類繁多，尋找具有藥用活性和價(jià)值的桑黃菌種進(jìn)行人工栽培才具有市場(chǎng)化應(yīng)用價(jià)值，才能實(shí)現(xiàn)真正的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供了一種接種高效、培養(yǎng)簡(jiǎn)單，管理容易，出菇率高、可進(jìn)行大面積工廠化人工栽培的桑黃袋料栽培工藝。
[0005]為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:一種具有抗腫瘤活性的桑黃高效工廠化袋料栽培工藝，包括以下步驟:
[0006]A、栽培設(shè)施
[0007]a、栽培房:栽培房要求:高2.6-3.2111，長(zhǎng)8-12111，寬5-6111，栽培房分為菌種室、接種室、發(fā)菌室、出菇室，接種室、發(fā)菌室和出菇室之間設(shè)有內(nèi)隔門相連，每?jī)蓚€(gè)室之間有緩沖室，房?jī)?nèi)外地面及周圍用水泥磚石鋪設(shè)，栽培房?jī)?nèi)設(shè)有通風(fēng)設(shè)備和控溫控濕設(shè)備;b、栽培床:搭建栽培床架用不銹鋼搭建，栽培床設(shè)有橫梁托撐，能承受菌棒重壓，床寬0.5-0.8m，長(zhǎng)1.8-2.0m，床架層數(shù)以3-4層，床架底層離地面0.1-0.2m，最頂層離房頂1.2-1.5m，上下層間距0.4-0.5m，床架排與排之間留有0.5-0.6m的走道；
[0008]B、菌種的制備
[0009]本發(fā)明所使用的桑黃菌(InonotusIinteus)來(lái)自浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑所，是從浙江省桐廬縣桑樹上寄生的野生桑黃子實(shí)體分離純化菌株，該菌株經(jīng)過(guò)ITS分子生物學(xué)鑒定后，于2015年10月23日保存在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏編號(hào)為CGMCC N0.11407，地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所郵編100 101，本發(fā)明保藏提供的生物材料為桑黃S9，分類命名為:桑黃InonotusIinteus；
[0010]母種培養(yǎng)基配方(PDA培養(yǎng)基):馬鈴薯200克，白砂糖20克，瓊脂20克，MgSO4 1.5克，KH2PO4 1.5克，水 1000毫升;
[0011]原種、栽培種培養(yǎng)基配方:馬鈴薯200克，白砂糖20克，MgSO4 1.5克，KH2PO4 1.5克，水1000毫升；
[0012]原種是由母種液體接種培養(yǎng)而成，栽培種則由原種放大發(fā)酵而成。本發(fā)明中桑黃菌種活化后，在無(wú)菌條件下將母種接種到液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，20°C-3(TC震蕩培養(yǎng)獲得桑黃原種;待菌絲成熟后在無(wú)菌條件下接種至液體發(fā)酵罐中，20°C-30°C培養(yǎng)獲得栽培種；
[0013]C、菌棒的制備
[0014]袋料培養(yǎng)基配方:桑黃栽培培養(yǎng)基的含水量為50-70%，固相配方為:桑樹枝木肩20-60重量份，棉籽殼25-60重量份，麩皮10-25重量份，白糖0.5_2重量份，石膏0.5_2重量份，具體配置方法為:先將桑樹枝條用粉碎機(jī)加工成粒度為0.5-2cm的木肩；再按培養(yǎng)基配方稱取白糖、石膏用水溶化;繼續(xù)稱取桑樹枝木肩、棉籽殼、麩皮，加入溶化好的白糖、石膏充分混勻，并補(bǔ)充水分，使培養(yǎng)料含水量達(dá)到50-70 % ;用17cm X 33cm X 0.05cm的聚乙烯菌袋裝袋，每袋裝濕料0.8-lkg，套上菌環(huán)和菌蓋封口 ；
[0015]D、菌棒滅菌
[0016]菌棒進(jìn)行高壓滅菌時(shí)壓力為3-5個(gè)大氣壓，溫度120°C，滅菌時(shí)間為6-8小時(shí);常壓滅菌時(shí)壓力為為I個(gè)大氣壓，溫度100°C，滅菌時(shí)間為24-36小時(shí)，滅菌結(jié)束后冷卻至室溫；
[0017]E、接種
[0018]接種開始前，對(duì)接種箱進(jìn)行清洗消毒。按常規(guī)的無(wú)菌接種法，在無(wú)菌條件下，打開菌蓋，接入15_30ml液體菌種迅速蓋上菌蓋，移入發(fā)菌室內(nèi)培養(yǎng)；
[0019]F、出菇管理
[0020]發(fā)菌時(shí)溫度控制在18-300C，濕度控制在40-50%，培養(yǎng)30_40天。待栽培袋內(nèi)菌絲開始呈現(xiàn)黃色或出現(xiàn)突起的瘤狀原基時(shí)，將菌袋移至出菇室進(jìn)行出菇管理。在菌袋中部用手術(shù)刀開兩個(gè)1-1.5\4-7(^長(zhǎng)方形的小口，菌袋與菌袋之間留有10-15(^空間，溫度控制在20-300C，濕度控制在80-95 %，每天通風(fēng)3次，每次1_3小時(shí)。培養(yǎng)50-60天，當(dāng)桑黃子實(shí)體由橙黃色轉(zhuǎn)成深黃色，邊緣硬化，表明已經(jīng)成熟，可采收。
[0021]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:本發(fā)明的高效工廠化人工袋料栽培桑黃工藝經(jīng)過(guò)大量的培養(yǎng)實(shí)踐證明，可真正實(shí)現(xiàn)桑黃的工廠化人工培養(yǎng)，自動(dòng)化液體接種不僅可以節(jié)省大量勞動(dòng)力成本，而且還可以避免人為操作所帶來(lái)接種量不均、易污染等因素，使得生產(chǎn)過(guò)程高效可控;工廠化栽培可以節(jié)省大量空間，溫濕度可控，使得桑黃生產(chǎn)管理簡(jiǎn)化易于掌控。根據(jù)本發(fā)明方法得到的桑黃子實(shí)體出現(xiàn)在菌棒切口處，桑黃出菇率大于>90 %，桑黃子實(shí)體生長(zhǎng)迅速，生長(zhǎng)周期縮短，子實(shí)體成熟期統(tǒng)一，顏色金黃、外形大小均一，桑黃子實(shí)體鮮品重30-60克，干重為15-30克。經(jīng)成分檢測(cè)分析發(fā)現(xiàn):人工袋料栽培的桑黃子實(shí)體藥用活性成分含量顯著高于野生桑黃，這可能是由于野生桑黃常年野外生長(zhǎng)木質(zhì)化造成有效成分下降。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)本發(fā)明所生產(chǎn)的桑黃子實(shí)體具有顯著的抑制腫瘤細(xì)胞，特別是腸道腫瘤細(xì)胞增殖的功效。
【附圖說(shuō)明】
[0022]圖1是采用本發(fā)明栽培桑黃子實(shí)體圖；
[0023]圖2是多糖含量分析的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0024]圖3是野生桑黃和采用本發(fā)明栽培桑黃子實(shí)體的多糖含量；
[0025]圖4是黃酮含量分析的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；
[0026]圖5是野生桑黃和采用本發(fā)明栽培桑黃子實(shí)體的黃酮含量；
[0027]圖6是多酚含量分析的沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；
[0028]圖7是野生桑黃和采用本發(fā)明栽培桑黃子實(shí)體的多酚含量；
[0029]圖8是野生桑黃和采用本發(fā)明栽培桑黃多糖對(duì)HT-29細(xì)胞增殖抑制作用；
[0030]圖9是野生桑黃和采用本發(fā)明栽培桑黃黃酮對(duì)HT-29細(xì)胞增殖抑制作用；
[0031]圖10是野生桑黃和采用本發(fā)明栽培桑黃多酚對(duì)HT-29細(xì)胞增殖抑制作用；
[0032]圖11是野生桑黃和采用本發(fā)明栽培桑黃多糖對(duì)HCT116細(xì)胞增殖抑制作用；
[0033]圖12是野生桑黃和采用本發(fā)明栽培桑黃黃酮對(duì)HCT116細(xì)胞增殖抑制作用；
[0034]圖13是野生桑黃和采用本發(fā)明栽培桑黃多酚對(duì)HCT116細(xì)胞增殖抑制作用。
【具體實(shí)施方式】
[0035]—種具有抗腫瘤活性的桑黃高效工廠化袋料栽培工藝，包括以下步驟:
[0036]A、栽培設(shè)施
[0037]a、栽培房:栽培房要求:高2.6-3.2111，長(zhǎng)8-12111，寬5-6111，栽培房分為菌種室、接種室、發(fā)菌室、出菇室，接種室、發(fā)菌室和出菇室之間設(shè)有內(nèi)隔門相連，每?jī)蓚€(gè)室之間有緩沖室，房?jī)?nèi)外地面及周圍必須用水泥磚石鋪設(shè)，整個(gè)建筑設(shè)施應(yīng)結(jié)構(gòu)牢固，具有良好的通風(fēng)條件，各個(gè)房間都應(yīng)保證水電供應(yīng)，并配置控溫控濕設(shè)備;b、栽培床:搭建栽培床架用不銹鋼搭建，栽培床設(shè)有橫梁托撐，能承受菌棒重壓，床寬0.5-0.8m，長(zhǎng)1.8-2.0m，床架層數(shù)以3_4層，床架底層離地面0.1-0.2m，最頂層離房頂1.2-1.5m，上下層間距0.4-0.5m，床架排與排之間留有0.5-0.6m的走道；
[0038]B、菌種的制備
[0039]本發(fā)明所使用的桑黃菌(Inonotuslinteus)來(lái)自浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑所，是從浙江省桐廬縣桑樹上寄生的野生桑黃子實(shí)體分離純化菌株，該菌株經(jīng)過(guò)ITS分子生物學(xué)鑒定后，于2015年10月23日保存在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC N0.11407，地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所郵編100101，本發(fā)明保藏提供的生物材料為桑黃S9，分類命名為:桑黃Inonotus linteus；
[0040]母種培養(yǎng)基配方(PDA培養(yǎng)基):馬鈴薯200克，白砂糖20克，瓊脂20克，MgSO4 1.5克，KH2PO4 1.5克，水 1000毫升;
[0041 ] 原種、栽培種培養(yǎng)基配方:馬鈴薯200克，白砂糖20克，MgSO4 1.5克，KH2PO4 1.5克，水1000毫升；
[0042]原種是由母種液體接種培養(yǎng)而成，栽培種則由原種放大發(fā)酵而成。本發(fā)明中桑黃菌種活化后，在無(wú)菌條件下將母種接種到液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，20°C-3(TC震蕩培養(yǎng)獲得桑黃原種;待菌絲成熟后在無(wú)菌條件下接種至液體發(fā)酵罐中，20°C-30°C培養(yǎng)獲得栽培種；
[0043]C、菌棒的制備
[0044]袋料培養(yǎng)基配方:桑黃栽培培養(yǎng)基的含水量為50-70%，固相配方為:桑樹枝木肩20-60重量份，棉籽殼25-60重量份，麩皮10-25重量份，白糖0.5_2重量份，石膏0.5_2重量份，具體配置方法為:先將桑樹枝條用粉碎機(jī)加工成粒度為0.5-2cm的木肩；再按培養(yǎng)基配方稱取白糖、石膏用水溶化;繼續(xù)稱取桑樹枝木肩、棉籽殼、麩皮，加入溶化好的白糖、石膏充分混勻，并補(bǔ)充水分，使培養(yǎng)料含水量達(dá)到50-70 % ;用17cm X 33cm X 0.05cm的聚乙烯菌袋裝袋，每袋裝濕料0.8-lkg，套上菌環(huán)和菌蓋封口 ；
[0045]D、菌棒滅菌
[0046]菌棒進(jìn)行高壓滅菌時(shí)壓力為3-5個(gè)大氣壓，溫度120°C，滅菌時(shí)間為6-8小時(shí);常壓滅菌時(shí)壓力為為I個(gè)大氣壓，溫度100°C，滅菌時(shí)間為24-36小時(shí)，滅菌結(jié)束后冷卻至室溫；
[0047]E、接種
[0048]接種開始前，對(duì)接種箱進(jìn)行清洗消毒。按常規(guī)的無(wú)菌接種法，在無(wú)菌條件下，打開菌蓋，接入15_30ml液體菌種迅速蓋上菌蓋，移入發(fā)菌室內(nèi)培養(yǎng)；
[0049]F、出菇管理
[0050]發(fā)菌時(shí)溫度控制在18-300C，濕度控制在40-50%，培養(yǎng)30_40天。待栽培袋內(nèi)菌絲開始呈現(xiàn)黃色或出現(xiàn)突起的瘤狀原基時(shí)，將菌袋移至出菇室進(jìn)行出菇管理。在菌袋中部用手術(shù)刀開兩個(gè)1-1.5\4-7(^長(zhǎng)方形的小口，菌袋與菌袋之間留有10-15(^空間，溫度控制在20-300C，濕度控制在80-95 %，每天通風(fēng)3次，每次1_3小時(shí)。培養(yǎng)50-60天，當(dāng)桑黃子實(shí)體由橙黃色轉(zhuǎn)成深黃色，邊緣硬化，表明已經(jīng)成熟，可采收。
[0051 ]桑黃活性物質(zhì)含量測(cè)定:
[0052] 1.總多糖含量測(cè)定
[0053 ]稱取樣品，用50mL雙蒸水(料液比1:1O) 95 °C提取4h，過(guò)濾，重復(fù)3次，合并濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，加3倍無(wú)水乙醇4°C醇沉2次，5000rpm離心5min，純水溶解后定容至50mL備用。測(cè)定方法采用硫酸-苯酸(sulfuric acid-phenol)法測(cè)定，以葡萄糖作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算總多糖類物質(zhì)含量。
[0054]2.總黃酮含量測(cè)定
[0055]稱取樣品，用70 %乙醇50mL(料液比1:10)避光超聲波提取4h，過(guò)濾，重復(fù)3次，合并濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，70%乙醇定容至50mL備用。采用Al (NO3)3-KAC分光光度比色法測(cè)定，以蘆丁作標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮含量。
[0056]3.總多酚含量測(cè)定
[0057]稱取樣品，用70%乙醇50mL(料液比1:10)避光提取4h，過(guò)濾，重復(fù)3次，合并濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，去除乙醇，純水定容至50mL備用。采用福林-肖卡(Folin-C1calteu)法測(cè)定，以沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算總酚類物質(zhì)含量。
[0058]桑黃活性物質(zhì)抗腫瘤活性試驗(yàn)(MTT法):
[0059]取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期腫瘤細(xì)胞(人原性結(jié)腸癌HT29和HCT116細(xì)胞)經(jīng)胰酶消化后，用培養(yǎng)液吹打配成細(xì)胞I X 18IT1懸液，加入96孔培養(yǎng)板，每孔10ul，在5 % C02，37 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h待細(xì)胞完全貼壁后，分別加入人工和野生桑黃活性提取物(多糖、黃酮、多酚)100uL，終濃度分別為12.5,50,100,200和400ug.mL—1，每組8孔，正常對(duì)照孔(含細(xì)胞10uL)加入無(wú)血清培養(yǎng)lOOuL，培養(yǎng)箱中孵育48h后，加入20uL 5g.L一1MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4h，去上清液，加入DMSO 150uL，混合均勻后在酶標(biāo)儀570nm波長(zhǎng)下測(cè)得各孔吸光度(absorbance，A)值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。按下式計(jì)算肝細(xì)胞的存活率存活率(% )=(實(shí)驗(yàn)組A570nm—正常對(duì)照組A570nm)/正常對(duì)照組A570nmX 100% ο
[0060]經(jīng)成分檢測(cè)分析發(fā)現(xiàn):人工袋料栽培的桑黃子實(shí)體藥用活性成分含量顯著高于野生桑黃，如圖2至圖13，工廠化人工栽培桑黃子實(shí)體中多糖、黃酮、多酚含量分別為7.69%、5.49 %和9.31 %，野生桑黃子實(shí)體中這三種活性物質(zhì)含量分別為0.70 %、1.55 %和2.86 %，僅為人工袋料栽培桑黃子實(shí)體的9.10%,28.23%和30.72 %。這可能是由于野生桑黃常年野外生長(zhǎng)木質(zhì)化造成有效成分下降的緣故。而MTT試驗(yàn)結(jié)果表明野生桑黃和工廠化栽培桑黃子實(shí)體中這三類活性物質(zhì)對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29和HCT116具有顯著的增殖抑制作用，但作用效果并沒(méi)有明顯差別。
[0061]本發(fā)明的高效工廠化人工袋料栽培桑黃工藝經(jīng)過(guò)大量的培養(yǎng)實(shí)踐證明，可真正實(shí)現(xiàn)桑黃的工廠化人工培養(yǎng)，自動(dòng)化液體接種不僅可以節(jié)省大量勞動(dòng)力成本，而且還可以避免人為操作所帶來(lái)接種量不均、易污染等因素，使得生產(chǎn)過(guò)程高效可控;工廠化栽培可以節(jié)省大量空間，溫濕度可控，使得桑黃生產(chǎn)管理簡(jiǎn)化易于掌控。根據(jù)本發(fā)明方法得到的桑黃子實(shí)體出現(xiàn)在菌棒切口處，桑黃出菇率大于>90%，桑黃子實(shí)體生長(zhǎng)迅速，生長(zhǎng)周期縮短，子實(shí)體成熟期統(tǒng)一，顏色金黃、外形大小均一，見圖1，桑黃子實(shí)體鮮品重30-60克，干重為15-30克。經(jīng)成分檢測(cè)分析發(fā)現(xiàn):人工袋料栽培的桑黃子實(shí)體藥用活性成分含量顯著高于野生桑黃，這可能是由于野生桑黃常年野外生長(zhǎng)木質(zhì)化造成有效成分下降。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)本發(fā)明所生產(chǎn)的桑黃子實(shí)體具有顯著的抑制腫瘤細(xì)胞，特別是腸道腫瘤細(xì)胞增殖的功效。
[0062]以上所述僅為本發(fā)明的具體實(shí)施例，但本發(fā)明的技術(shù)特征并不局限于此，任何本領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明的領(lǐng)域內(nèi)，所作的變化或修飾皆涵蓋在本發(fā)明的專利范圍之中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種具有抗腫瘤活性的桑黃高效工廠化袋料栽培工藝，其特征在于:包括以下步驟: A、栽培設(shè)施 a、栽培房:栽培房要求:高2.6-3.2m，長(zhǎng)8-12m，寬5-6m，栽培房分為菌種室、接種室、發(fā)菌室、出菇室，接種室、發(fā)菌室和出菇室之間設(shè)有內(nèi)隔門相連，每?jī)蓚€(gè)室之間有緩沖室，房?jī)?nèi)外地面及周圍用水泥磚石鋪設(shè)，栽培房?jī)?nèi)設(shè)有通風(fēng)設(shè)備和控溫控濕設(shè)備;b、栽培床:搭建栽培床架用不銹鋼搭建，栽培床設(shè)有橫梁托撐，能承受菌棒重壓，床寬0.5-0.8m，長(zhǎng)1.8-2.0m，床架層數(shù)以3-4層，床架底層離地面0.1-0.2m，最頂層離房頂1.2-1.5m，上下層間距0.4-.0.5m，床架排與排之間留有0.5-0.6m的走道； B、菌種的制備 母種培養(yǎng)基配方(PDA培養(yǎng)基):馬鈴薯200克，白砂糖20克，瓊脂20克，MgSO4 1.5克，KH2PO4 1.5克，水 1000毫升; 原種、栽培種培養(yǎng)基配方:馬鈴薯200克，白砂糖20克，MgSO4 1.5克，KH2PO4 1.5克，水.1000暈升； 原種是由母種液體接種培養(yǎng)而成，栽培種則由原種放大發(fā)酵而成，本發(fā)明中桑黃菌種活化后，在無(wú)菌條件下將母種接種到液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，20°c-3(rc震蕩培養(yǎng)獲得桑黃原種;待菌絲成熟后在無(wú)菌條件下接種至液體發(fā)酵罐中，20°C-30°C培養(yǎng)獲得栽培種； C、菌棒的制備 袋料培養(yǎng)基配方:桑黃栽培培養(yǎng)基的含水量為50-70 %，固相配方為:桑樹枝木肩20-60重量份，棉籽殼25-60重量份，麩皮10-25重量份，白糖0.5_2重量份，石霄0.5_2重量份，具體配置方法為:先將桑樹枝條用粉碎機(jī)加工成粒度為0.5-2cm的木肩;再按培養(yǎng)基配方稱取白糖、石膏用水溶化;繼續(xù)稱取桑樹枝木肩、棉籽殼、麩皮，加入溶化好的白糖、石膏充分混勻，并補(bǔ)充水分，使培養(yǎng)料含水量達(dá)到50-70 % ;用17cm X 33cm X 0.05cm的聚乙烯菌袋裝袋，每袋裝濕料0.8-lkg，套上菌環(huán)和菌蓋封口 ； D、菌棒滅菌 菌棒進(jìn)行高壓滅菌時(shí)壓力為3-5個(gè)大氣壓，溫度120°C，滅菌時(shí)間為6-8小時(shí)；常壓滅菌時(shí)壓力為為I個(gè)大氣壓，溫度100°C，滅菌時(shí)間為24-36小時(shí)，滅菌結(jié)束后冷卻至室溫； E、接種 接種開始前，對(duì)接種箱進(jìn)行清洗消毒，按常規(guī)的無(wú)菌接種法，在無(wú)菌條件下，打開菌蓋，接入15-30ml液體菌種迅速蓋上菌蓋，移入發(fā)菌室內(nèi)培養(yǎng)； F、出菇管理 發(fā)菌時(shí)溫度控制在18_30°C，濕度控制在40-50%，培養(yǎng)30-40天，待栽培袋內(nèi)菌絲開始呈現(xiàn)黃色或出現(xiàn)突起的瘤狀原基時(shí)，將菌袋移至出菇室進(jìn)行出菇管理，在菌袋中部用手術(shù)刀開兩個(gè)l-1.5X4-7Cm長(zhǎng)方形的小口，菌袋與菌袋之間留有10-15Cm空間，溫度控制在20-.30°C，濕度控制在80-95 %，每天通風(fēng)3次，每次1-3小時(shí)，培養(yǎng)50-60天，當(dāng)桑黃子實(shí)體由橙黃色轉(zhuǎn)成深黃色，邊緣硬化，表明已經(jīng)成熟，可采收。
【文檔編號(hào)】A01G1/04GK105993593SQ201610345986
【公開日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年5月23日
【發(fā)明人】鐘石, 李有貴, 計(jì)東風(fēng)
【申請(qǐng)人】浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院