專利名稱：被檢物的皮膚吸收測定法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及作用于頭發(fā)的成分等的篩選方法及篩選用裝置，以及根據(jù)此篩選方法的含有確認(rèn)有促進(jìn)經(jīng)毛吸收效果乃至皮脂轉(zhuǎn)移促進(jìn)效果成分的組合物。
背景技術(shù)：
開發(fā)養(yǎng)發(fā)劑時，其有效成分當(dāng)然具有優(yōu)良的養(yǎng)發(fā)作用，但重要的是其有效成分確實(shí)具有能到達(dá)作用點(diǎn)的滲透性。是否能確實(shí)到達(dá)作用點(diǎn)，很大程度上依賴于其有效成分的性質(zhì)及養(yǎng)發(fā)劑基質(zhì)的性質(zhì)。
此外，從毛囊的藥物吸收，不只是養(yǎng)發(fā)劑，作為疫苗或基因等的給藥途徑也值得注意。
另外，已有報道表明藥物的皮脂轉(zhuǎn)移性大小決定藥物到達(dá)皮膚內(nèi)作用點(diǎn)(例如，毛囊和皮脂腺)的難易(Critical Reviews，14(3)207-219(1997))。
目前，從毛囊的藥物吸收，進(jìn)行了①熒光標(biāo)記·放射性同位素的組織切片觀察[Suzuki，M.，et.Al.，J.Soc.Consmet Chem.(1978)、Nicholau，G.，et.al.，Xenobiolica(1987)、Lieb，L.M.，et.al.，J.Invest.Dermatol.(1995)]，②有毛皮膚與無毛皮膚的藥物透皮滲透性的比較〔無毛大鼠和有毛大鼠的比較Illel，B.，et.al.，J.Pherm.Sci.(1991)；人正常皮膚和燙傷愈合皮膚的比較Hueber，F(xiàn).，et.al.，J.Skin Phermacol.(1994)〕等方面的研究。
然而，上述①的方法不是定量而只是定性的方法，并且存在組織切片的調(diào)制很費(fèi)工夫的缺點(diǎn)。另外，上述②的方法，藥物的吸收只從透皮吸收的方面進(jìn)行研究，作為養(yǎng)發(fā)劑很重要的經(jīng)毛吸收及皮脂轉(zhuǎn)移性沒有進(jìn)行直接的研究。
所以，只根據(jù)這些以前的技術(shù)，直接篩選藥物是否到達(dá)作用點(diǎn)、是否充分發(fā)揮期望效果等很困難。
這里，本發(fā)明要解決的課題是，得到藥物等被檢物是否到達(dá)作用點(diǎn)、是否充分發(fā)揮期望效果的直接指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)簡便、準(zhǔn)確定量經(jīng)毛吸收性與皮脂轉(zhuǎn)移性的方法，更進(jìn)一步，根據(jù)經(jīng)毛吸收及優(yōu)良的皮脂轉(zhuǎn)移性，提供藥物等能確實(shí)到達(dá)作用點(diǎn)的頭皮頭發(fā)用組合物。
還有，藥物等的皮脂轉(zhuǎn)移性今后可作為判斷藥物等是否容易到達(dá)皮膚內(nèi)特定作用點(diǎn)的有用指標(biāo)，雖不好說能容易作為體內(nèi)評價的指標(biāo)，但對于藥物等的皮脂轉(zhuǎn)移性，由此而準(zhǔn)確、簡便地評價，將其作為體外的方法則是具體的課題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明者經(jīng)過深入地研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以滲透到毛囊組織的被檢物量作為經(jīng)毛吸收的被檢物量的指標(biāo)，通過體外或體內(nèi)的相關(guān)聯(lián)，可以簡便且準(zhǔn)確地定量被檢物的經(jīng)毛吸收性，測定被檢物的皮膚吸收。
所謂“經(jīng)毛吸收”，是指與“透皮吸收”這種皮膚全面吸收相對的通過毛孔吸收的概念。如后述，即使確定有透皮吸收作用的藥劑也不一定有經(jīng)毛吸收。并且，鑒于多數(shù)養(yǎng)發(fā)劑的作用點(diǎn)在毛囊組織附近，很顯然研究藥劑經(jīng)毛吸收的意義就非常大了。
本發(fā)明提供了將滲透到毛囊組織的被檢物量作為經(jīng)毛吸收被檢物量的指標(biāo)來定量相關(guān)被檢物的經(jīng)毛吸收量、測定被檢物的皮膚吸收的皮膚吸收測定法(以下稱為本測定法1)。
另外，所謂“經(jīng)毛吸收”的現(xiàn)象，從吸收的角度來說，是被檢物向毛囊組織的滲透，一般是通過毛孔而進(jìn)行的。為此，在本發(fā)明中，所謂“經(jīng)毛吸收”與“經(jīng)毛囊吸收”具有基本相同的含義。
因此，本測定法1也提供了一種皮膚吸收測定法，是將滲透到毛囊組織的被檢物量作為經(jīng)毛囊吸收的被檢物量的指標(biāo)來定量相關(guān)被檢物的經(jīng)毛囊吸收量，從而測定被檢物的皮膚吸收。
本測定法1是指，(1)通過測定從在保持機(jī)體模擬狀態(tài)的皮膚模型中受被檢物作用的皮膚的真皮層取下的毛囊組織(皮膚組織也可)各部位的被檢物的吸附量而定量測定毛囊組織及皮膚組織的各部位所滲透的藥物等被檢物量的離體(in vitro)定量法(以下，稱為本測定法1-1)；和(2)通過測定從受被檢物作用的人頭皮上回收的毛囊組織中的被檢物吸附量而對毛囊組織滲透的藥物等的被檢物量進(jìn)行定量測定的在體(invivo)定量法(以下稱為本測定法1-2)兩大類。
此外，本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)，利用使用人工皮脂的皮膚模型，能容易地在體外(離體)評價被檢物的皮脂移動性。
即，本發(fā)明提供了使薄膜的一側(cè)表面與人工皮脂相接觸，在其類似皮膚表層的另一側(cè)與藥劑等的被檢物相接觸，以這種被檢物向上述人工皮脂轉(zhuǎn)移的程度作為指標(biāo)，評價被檢物的皮脂轉(zhuǎn)移性，測定被檢物皮膚吸收的皮膚吸收測定法(下面稱為本測定法2)。
更進(jìn)一步，根據(jù)本測定法，本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)，I.O.B值在0.06-4.0的油分，對于從水溶性物質(zhì)到脂溶性物質(zhì)廣泛極性范圍內(nèi)的物質(zhì)能發(fā)揮優(yōu)良的經(jīng)毛吸收促進(jìn)作用及優(yōu)良的皮脂轉(zhuǎn)移性。
即，本發(fā)明提供了含有I.O.B.值為0.06～4.0的油分的頭皮頭發(fā)用組合物(下面稱為本發(fā)明組合物)。
I.O.B值(Inorganic Organic Balance無機(jī)有機(jī)平衡值的簡稱)是表示油分(廣義上的油分，不僅油脂、蠟類、烴油、高級脂肪酸、高級醇、酯類等油分，一般的醇和脂肪酸等也屬于這個范疇。下同)的極性度的指標(biāo)，為無機(jī)性與有機(jī)性的比值(其油分分子中的碳原子每個的“有機(jī)性值”為20，羥基每個的“無機(jī)性值”為100，以此為基準(zhǔn)，得出其它取代基(無機(jī)性基)的無機(jī)性值[1、藤田著《有機(jī)分析》(1930年)，カニヤ書店，2、同著《有機(jī)化合物的預(yù)測與有機(jī)概念圖(化學(xué)的領(lǐng)域11-10)》(1957年)719-725頁，3、藤田及赤冢著《系統(tǒng)性有機(jī)定性分析(純粹物篇)》487頁(1970年)，風(fēng)間書店，4、甲田著《有機(jī)概念圖基礎(chǔ)與應(yīng)用》227頁(1984年)，三共出版，5、矢口著《根據(jù)有機(jī)概念圖的乳化處方設(shè)計(jì)]98頁》(1985年)，日本Emulsion株式會社，6、R.H.Ewell，J.M.Harrison，L.BergInd Eng Chem 36，871(1944)]，具體的I.O.B.值＝該油分的無機(jī)性值/其油分的有機(jī)性值此外，頭皮頭發(fā)用組合物是指，如其字面含義，為頭皮或頭發(fā)用的組合物，作為其代表性的制品形式例如有養(yǎng)發(fā)劑，但并不僅限于此，脫毛劑、染發(fā)劑、毛發(fā)脫色劑等毛發(fā)處理用組合物；香波、護(hù)發(fā)香波等洗發(fā)劑組合物；護(hù)發(fā)素、護(hù)理素(treatment)等護(hù)發(fā)用組合物；還有防白發(fā)劑等的制品形式。更進(jìn)一步，還可以有經(jīng)頭部以外皮膚吸收的一般化妝品，疫苗及基因制劑等醫(yī)藥品的形式。
附圖的簡要說明

圖1本發(fā)明裝置一種方案的結(jié)構(gòu)圖。
圖2本測定法1-1的解說圖。
圖3本測定法1-1精度研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果的示意圖。
圖4根據(jù)本測定法1-1成分評價結(jié)果的示意圖。
圖5以本測定法1-1測定皮膚標(biāo)本的角質(zhì)層、表皮及真皮的泛基乙基醚吸收量結(jié)果的示意圖。
圖6研究I.O.B.值為0.06～4.0油分對泛基乙基醚經(jīng)毛吸收促進(jìn)效果的結(jié)果的示意圖。
圖7研究I.O.B.值為0.06-4.0油分的多種油分對泛基乙基醚經(jīng)毛吸收促進(jìn)效果的結(jié)果的示意圖。
圖8本測定法1-2評價結(jié)果示意圖。
圖9透皮吸收劑比較評價結(jié)果的示意圖。
圖10根據(jù)本測定法1-2的清涼劑研究結(jié)果示意圖。
圖11根據(jù)本測定法1-1的清涼劑研究結(jié)果示意圖。
圖12使用本裝置進(jìn)行本測定法2的結(jié)果示意圖。
具體實(shí)施例方式
下面就本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行說明。
A.本測定法1本測定法1-1本測定法1-1是指本測定法離體方案的一種作為本測定法1-1所用的皮膚模型，可以使用模型動物的皮膚、也可以是細(xì)胞等構(gòu)成的皮膚重構(gòu)物。作為皮膚模型提供源的模型動物沒有特別的限定，豬、人、牛、小鼠、大鼠等都可作用。但是，本測定法因?yàn)橐芯克巹┩ㄟ^毛孔向毛囊組織的滲透性，因而通常必須使用有毛動物。所以，無毛化突變體等通常不宜作為上述的模型動物。此外，本測定法1-1通常采用適用于人的藥物篩選法作為定量方法，因而模型動物的皮膚優(yōu)選盡可能與人相近。因此，除人以外，優(yōu)選用豬作為模型動物。
本測定法1-1中的“機(jī)體模似狀態(tài)”是指可以把皮膚看作為機(jī)體一部分時存在的狀態(tài)，只要滿足這個條件就行，其它沒有特別的形式限定。例如，如后述實(shí)施例，可采用將皮膚模型在膠原凝膠上固定等的方法。
這樣，將藥物等被檢物作用于保持機(jī)體模似狀態(tài)的皮膚模型，定量從其皮膚真皮層取出的毛囊組織中吸附的被檢物量，以此作為被檢物經(jīng)毛吸收性的指標(biāo)。
這些藥物等被檢物的作用條件可根據(jù)被檢物的種類和目的等進(jìn)行自由設(shè)定。通常，在和人體溫相近的37℃附近在根據(jù)預(yù)定的被檢物使用形式相應(yīng)的時間內(nèi)進(jìn)行溫育。
測定被檢物吸收量的部位限于皮膚真皮層，這是因?yàn)椋瑢τ谄つw角質(zhì)層和表皮層，在毛囊組織周圍有表皮組織和皮脂腺等雜質(zhì)，不能正確地測定被檢物的吸收量。
另外，被檢的吸收量的測定方法沒有特別限定，例如有液相色譜法(含高效液相色譜法)和使用熒光標(biāo)記抗體的熒光抗體法、質(zhì)量分析、放射性同性素法等，考慮到簡便的原因，優(yōu)選使用上述的液相色譜法。
這樣測得的被檢物毛囊組織吸收量越多，可判定這種被檢物的經(jīng)毛吸收性越好。而根據(jù)以往的定性方法，只能得到被檢物是否具有經(jīng)毛吸收性的信息。
此外，在定量測定上述的滲透到毛囊組織的藥物等的被檢物量同時，也定量測定滲透到角質(zhì)層、表皮、真皮等其它的皮膚組織的被檢物量，以這些定量值作為經(jīng)毛吸收和透皮吸收的被檢物量的指標(biāo)而相關(guān)聯(lián)，也可以測定被檢物的皮膚吸收。
這樣，根據(jù)本測定法1-1就可測定被檢物的皮膚吸收。
本測定法1-2在本測定法1-2中，藥物等被檢物與人頭皮作用的方法可根據(jù)被檢物的性質(zhì)和預(yù)定的使用形式進(jìn)行自由選擇。
此外，與被檢物作用后的被檢者的毛囊組織能確保作為拔下的頭發(fā)的毛干和/或外毛根鞘。即，測定被檢者頭發(fā)皮下部份的毛干和/或外毛根鞘吸附的被檢物量，可將此吸收量作為被檢物經(jīng)毛吸收性的指標(biāo)。
還有，被檢物吸收量的測定可以和本測定法1-2一樣進(jìn)行。
這樣，根據(jù)本測定法1-2，可測定被檢物的皮膚吸收。
本測定法1-2因?yàn)橐苯影稳ト说拿l(fā)，因而評價很多種被檢物的經(jīng)毛吸收時可能并不適用。因此，經(jīng)毛吸收性的第一次的篩選采用本測定法1-1，這樣，對于確認(rèn)了經(jīng)毛吸收性的被檢物，作為此被檢物的最終評價手段使用本測定法1-2。
B.關(guān)于本測定法2本測定法2使用的人工皮脂是基于天然的皮脂成分調(diào)制而成的，主要為油脂類的混合物。
作為人工皮脂里含有的油分，例如有甘油三酯、碳原子數(shù)14～18的飽和或不飽和脂肪酸、角鯊烯、角鯊?fù)?、膽固醇、碳原子?shù)18～72的蠟酯等，但并不僅限于此。
人工皮脂具體處方的一例記載于后述實(shí)施例中。
還有，為了正確評價物質(zhì)的移動性，人工皮脂優(yōu)選為流動狀態(tài)。此流動狀態(tài)例如使用攪拌機(jī)和磁力攪拌器，攪拌人工皮脂，很容易獲得。
人工皮脂與除去真皮層的皮膚類似的薄膜(以下也單獨(dú)稱為“薄膜”)的一面相接觸，正好可形成與人體皮膚表面附近相似的狀態(tài)。還有，將預(yù)定的皮膚構(gòu)造作為皮膚表層，因?yàn)樽鳛槠ぶ┙o源皮脂腺的開口部存在于皮膚表層。所以，與藥物等被檢物相接觸的薄膜表面，因?yàn)橐３峙c皮膚相同的接觸狀態(tài)，優(yōu)選與皮膚表層相似。具體地說，作為基底膜，選用確認(rèn)無表面反應(yīng)性的薄膜，如單層硅酮膜、聚碳酸乙二醇酯膜、纖維素膜、其它高分子膜等，對于這些基底膜的一側(cè)表面，使之成為和角質(zhì)層相類似狀態(tài)的方法例如實(shí)施角蛋白處理、粉體處理等，此處理面建立角質(zhì)層，使角質(zhì)層在預(yù)定側(cè)(下面稱為角質(zhì)層側(cè))形成，可用于本發(fā)明。
這樣，人工皮脂在表皮層側(cè)(角質(zhì)層側(cè)的對側(cè))相接觸的薄膜的角質(zhì)層側(cè)同被檢物接觸，對于此被檢物向人工皮脂的轉(zhuǎn)移程度，例如可以將單位時間內(nèi)被檢物向人工皮脂的轉(zhuǎn)移量作為人工皮脂中被檢物的存在量檢測，以此存在量為指標(biāo)，評價被檢物的皮膚轉(zhuǎn)移性。
人工皮脂中被檢物的定量方法沒有特別限制，可根據(jù)被檢物的性質(zhì)等從現(xiàn)有的方法中自由選擇。例如，可以使用高效液相色譜、薄層層析、質(zhì)量分析等。
本測定法2為了和現(xiàn)實(shí)藥物等使用的環(huán)境想類似，通常優(yōu)選將薄膜的角質(zhì)層側(cè)作為開放系統(tǒng)。當(dāng)然，根據(jù)預(yù)定藥物等的使用形式，也可以使薄膜角質(zhì)層側(cè)成為封閉系統(tǒng)(例如密閉狀態(tài)并要促進(jìn)藥物滲透作用時)。
本測定法2具體地優(yōu)選實(shí)施下面的形式。
即，本發(fā)明者為了進(jìn)行本測定法2，提供了至少包含以下1-3要素的評價裝置(以下也稱本裝置)。
①封入部，其中設(shè)有開口部，此開口部設(shè)有以可能將薄膜以可脫落的狀態(tài)被覆固定的固定手段的全部或一部分，以封入人工皮脂。
②被覆固定于封入部分開口部的類皮膚表層薄膜。
③封入部封入的人工皮脂。
就圖對本實(shí)驗(yàn)裝置進(jìn)行說明。圖1為本實(shí)驗(yàn)裝置的一種實(shí)施方案。
在圖1(1)中，封入部11為一面開口、一面為底的筒狀容器。在其開口部111的頂端部，沿著其形成的圓周，向外側(cè)突出。
封入部11，應(yīng)能容易地觀察其內(nèi)部的狀態(tài)，優(yōu)選使用透明的材料。此外，為了能從外側(cè)容易地取出人工皮脂，優(yōu)選使用插入拔出注射器等針狀物也不會使其內(nèi)容物輕易漏出的材料。
薄膜12的一面121為經(jīng)角蛋白等處理的處于和皮膚表層類似狀態(tài)的、確認(rèn)無表面反應(yīng)性的薄膜。
本實(shí)驗(yàn)裝置使用時，將薄膜12被覆固定于其封入部11的開口端111(通常于封入部外側(cè)在一面121，向另一面122向內(nèi)側(cè)被覆固定)。在封入部11，以可能固定手段的全部或一部分在開口端111上以可脫落的狀態(tài)被覆固定薄膜，在此實(shí)施形式中，以薄膜固定器件13作為主要的固定手段。
薄膜固定部件13設(shè)計(jì)為兩端為開口，并且一邊的開口部131的頂端部往形成圓周的外部突出，能和封入部11的開口部111的頂端部相結(jié)合的結(jié)構(gòu)。此封入部11的開口部111的項(xiàng)端部和薄膜固定部13一側(cè)的開口部131頂端部的構(gòu)造只要是能相互結(jié)合，并沒有特殊限定，例如，相互的頂端部可設(shè)計(jì)為能相互嵌合的凹凸結(jié)構(gòu)。此外，為了加強(qiáng)封入部11與薄膜固定部13結(jié)合時的結(jié)合性和密封性，可使用任何辦法。
在圖1(1)中，薄膜12的一面121與薄膜固定部13之間夾入墊片14(墊片14的材料一般為硅橡膠、合成橡膠、天然橡膠等橡膠類材料，硅橡膠因?yàn)椴灰赘g，很適用)，以[薄膜固定部件13-墊片14-薄膜12-封入部11]的狀態(tài)固定，可使上述結(jié)合性和密封性升高。
另外，在本裝置中，為了穩(wěn)定地固定[薄膜固定部件13-墊片14-薄膜12-封入部11]的狀態(tài)，使用了固定部件15[參照圖1(2)]。固定部件15由長度(Φ)〔比“薄膜固定部13-墊片14-薄膜12-封入部11”狀態(tài)的接合部的厚度(φ)稍長〕的由4根大致一樣長的支持棒(151a，b，c，d)支撐的保持相互平行位置的2塊板狀材料(152·153)構(gòu)成〔固定部件15可設(shè)計(jì)能調(diào)節(jié)長度Φ的機(jī)構(gòu)。例如在支持棒(151a，b，c，d)上，以可調(diào)節(jié)長度Φ的螺栓構(gòu)造，設(shè)定長度調(diào)節(jié)機(jī)構(gòu)，可以調(diào)節(jié)所需的長度〕。板狀材料152·153設(shè)計(jì)為在相對位置比開口部111和閉口部131的外緣要大、可以在此閉口部嵌入的凹形形狀。
在具有此結(jié)構(gòu)的固定部15上設(shè)定的凹構(gòu)造中，嵌入接合部100，進(jìn)一步往一定長度支持棒上的固定部15上設(shè)定的空隙內(nèi)，插入粗箭頭所指方向，依靠2塊板狀材料152·153上棒狀材料(151a，b，c，d)的支持力，可以維持“薄膜固定部件13-墊片14-薄膜12-封入部11”的層疊狀態(tài)。毫無疑問，可以用其它的層疊狀態(tài)穩(wěn)定化手段代替此形式的固定部件15，例如使用夾子夾住進(jìn)行固定。
第1圖(2)為使用本裝置10的一種形式。墊片14插入封入部11與薄膜固定部13中，形成[薄膜固定部件13-墊片14-薄膜12-封入11]，薄膜12經(jīng)過上述處理過的面121向上，將人工皮脂被覆固定于封入部11的開口部111，面122與封入部11內(nèi)的人工皮脂相接觸。封入部11的底部配置有磁力攪拌子，使人工皮脂能成為流動狀態(tài)。另外，上述的層疊固定狀態(tài)用上述的固定部件15保持。
被檢物從薄膜固定部件13的另一端開口部132開始，與薄膜12的面121接觸，通過研究此被檢物由薄膜12介導(dǎo)向封入部11封入的人工皮脂的轉(zhuǎn)移程度，可考查被檢物的皮脂轉(zhuǎn)移性。還有，本發(fā)明評價方法在封閉體系進(jìn)行時，一端的開口部132可用蓋進(jìn)行封閉。
此被檢物的人工皮脂轉(zhuǎn)移程度，可以通過使用注射器17抽樣分析得到。
這樣，根據(jù)本測定法2，可測定被檢物的皮膚吸收。
B.關(guān)于本組合物如后述實(shí)施例所示，根據(jù)本測定法1、2，發(fā)現(xiàn)I.O.B.值為0.06～4.0的油分具有藥物等的經(jīng)毛吸收促進(jìn)效果以及皮脂轉(zhuǎn)移促進(jìn)效果。
即，在養(yǎng)發(fā)劑等形式的頭皮頭發(fā)用組合物中，通過配合I.O.B.值為0.06～4.0油分的1種或2種以上，能促進(jìn)養(yǎng)發(fā)成分等通過毛孔滲透到靶位毛囊組織。I.O.B.值小于0.06或者大于4.0時，則很難認(rèn)定具有所期望的經(jīng)毛吸收促進(jìn)和皮脂轉(zhuǎn)移促進(jìn)效果。
具體地說，上述I.O.B.值為0.06～4.0的油分，有機(jī)性值為100～750，且無機(jī)性值為50～400，特別優(yōu)選無機(jī)性值為100～400的油分。
另外，I.O.B.值為0.06-4.0的油分，優(yōu)選常溫下為液態(tài)的、以碳數(shù)6～18的烴為基本骨架的烴衍生物(這類烴衍生物優(yōu)選常溫下液態(tài)的兩性物質(zhì)滿足“常溫下為液體”條件的烴衍生物，其總碳數(shù)多數(shù)為24以下)。作為烴衍生物的種類例如有脂肪酸、醇、酰胺和酯等，但并不僅限于此。優(yōu)選醇或脂肪酸。
這些油分中，記載的優(yōu)選具體例子，例如有月桂醇(I.O.B.值為0.41有機(jī)性值為240、無機(jī)性值為100)、月桂酸(I.O.B.值為0.68有機(jī)性值為220、無機(jī)性值為150)、月桂酸乙醇胺酰胺(I.O.B.值為1.25有機(jī)性值為240、無機(jī)性值為300)、月桂酸二乙醇胺酰胺(I.O.B.值為1.53有機(jī)性值為260、無機(jī)性值為400)、月桂酸單甘油酯(I.O.B.值為0.92有機(jī)性值為280、無機(jī)性值為260)、月桂酸二甘油酯(I.O.B.值為0.32有機(jī)性值為500、無機(jī)性值為160)、油醇(I.O.B.值為0.28有機(jī)性值為360、無機(jī)性值為102)、油酸(I.O.B.值為0.45有機(jī)性值為340、無機(jī)性值為152)、油酸乙醇胺酰胺(I.O.B.值為0.83有機(jī)性值為360、無機(jī)性值為302)、油酸二乙醇胺酰胺(I.O.B.值為1.05有機(jī)性值為380、無機(jī)性值為402)、油酸單甘油酯(I.O.B.值為0.66有機(jī)性值為400、無機(jī)性值為262)、油酸二甘油酯(I.O.B.值為0.30有機(jī)性值為740、無機(jī)性值為222)、異硬脂醇(I.O.B.值為0.29有機(jī)性值為350、無機(jī)性值為100)、異硬脂酸(I.O.B.值為0.45有機(jī)性值為330、無機(jī)性值為150)、異硬脂酸乙醇胺酰胺(I.O.B.值為0.86有機(jī)性值為350、無機(jī)性值為300)、異硬脂酸二乙醇胺酰胺(I.O.B.值為1.08有機(jī)性值為370、無機(jī)性值為400)、異硬脂酸單甘油酯(I.O.B.值為0.66有機(jī)性值為390、無機(jī)性值為260)、異硬脂酸二甘油酯(I.O.B.值為0.30有機(jī)性值為730、無機(jī)性值為220)、硬脂醇(I.O.B.值為0.27有機(jī)性值為360、無機(jī)性值為100)、硬脂酸(I.O.B.值為0.44有機(jī)性值為340、無機(jī)性值為150)、硬脂酸乙醇胺酰胺(I.O.B.值為0.83有機(jī)性值為360、無機(jī)性值為300)、硬脂酸二乙醇胺酰胺(I.O.B.值為1.05有機(jī)性值為380、無機(jī)性值為400)、硬脂酸單甘油酯(I.O.B.值為0.67有機(jī)性值為390、無機(jī)性值為260)、硬脂酸二甘油酯(I.O.B.值為0.30有機(jī)性值為740、無機(jī)性值為220)或芐醇(I.O.B.值為0.96有機(jī)性值為120、無機(jī)性值為115)等。其中更優(yōu)選月桂醇、月桂酸、異硬脂酸、異硬脂醇、異硬脂酸單甘油酯和異硬酯酸乙醇胺酰胺，特別優(yōu)選異硬脂醇。
另外，萜類雖不一定符合上述[I.O.B.值為0.06～4.0]的條件，但確認(rèn)其有優(yōu)良的經(jīng)毛吸收促進(jìn)作用。特別是，樟腦在萜類中具有最優(yōu)良的經(jīng)毛吸收促進(jìn)作用。
本組合物是至少由異硬酯醇等I.O.B.值為0.06～4.0的油分和作為促進(jìn)經(jīng)毛吸收及皮脂轉(zhuǎn)移的成分(樟腦等萜類作為經(jīng)毛吸收成分可以單獨(dú)或與I.O.B.值為0.06～4.0的油分共同配合使用)配合而成的，根據(jù)其它的目的也可以配入相應(yīng)的成分。例如，異硬脂醇可作為油劑、藥物的溶劑、皮脂溶解劑等配合使用，樟腦等萜類可作為清涼劑、血流促進(jìn)劑等配合使用。
本組合物中I.O.B.值為0.06～4.0油分的配比量依本組合物的形態(tài)，此外也因目的而異，無特殊限制。
本組合物采用養(yǎng)發(fā)劑的形式時，上述成分至少發(fā)揮經(jīng)毛吸收促進(jìn)的機(jī)制，或者，要發(fā)揮藥物的皮脂轉(zhuǎn)移促進(jìn)機(jī)制時，大致占組合物的1ppm～20質(zhì)量％，優(yōu)選0.01～5質(zhì)量％的范圍。
本組合物除了I.O.B.值為0.06-4.0的油分外，可根據(jù)其它具體形式配合藥效成分和基質(zhì)成分。
例如，本組合物為養(yǎng)發(fā)劑時，作為藥效成分，例如有獐牙菜提取物、風(fēng)箱樹素、維生素E類、γ-硫胺、懸鉤子提取物等血流促進(jìn)劑；辣椒酊、生姜酊、斑蝥酊、煙酸芐酯等局部刺激劑；以各種維生素類和氨基酸類為代表的營養(yǎng)劑；雌二醇、乙炔基雌二醇等雌性激素；泛酸類、胎盤提取物、尿囊素、感光素301等毛囊組織激活劑；甘氨酰視黃酸、甘氨酰甘草次酸等消炎藥。
作為組合物必需成分配合的I.O.B.值為0.06～4.0的油分，能夠提高這些藥效成分的經(jīng)毛吸收和皮脂轉(zhuǎn)移，提高向毛囊組織的滲透性.
其它可配合眾所周知的成分，如保濕劑、角質(zhì)溶解劑、清涼劑、油分、表面活性劑、硅酮、紫外線吸收劑、香料、水等。
實(shí)施例下面就實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行具體的說明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例。除非特別指明，配比量為配合對象的質(zhì)量％。
本測定法1-11.本測定法1-1精度的評價作為被檢試樣，使用0.5％的泛基乙基醚(90％乙醇制劑)。作為皮膚模型使用微豬皮膚(Yucatan Micropig Skin SetCharles River公司)。
即，如圖2所示，制好2×2cm的微豬皮膚標(biāo)本10(保持角質(zhì)層11，表皮12，真皮13)，固定于膠原凝膠上，形成模擬機(jī)體的狀態(tài)。在含有毛孔14的皮膚標(biāo)本上直徑1.5cm的范圍(涂有硅潤滑油的檢測環(huán)內(nèi))涂上20μl的被檢試樣。保持此狀態(tài)，于37℃放置16小時后，洗凈皮膚標(biāo)本10，將其分離為角質(zhì)層11、表皮12和真皮13。在這些皮膚分離層中拔出真皮13的毛囊組織15，用液相色譜〔NANOSPACE(株式會社資生堂制造)、流動相(CH3CN∶H2O＝3∶7)、檢測波長210nm〕按單位重量的吸收量測定毛囊組織里泛基乙基醚的量。
還有，微豬的皮膚標(biāo)本10是以微豬軀干上方及軀干下方的皮膚制成的(n＝3)。
精度研究的結(jié)果如圖3所示(第3圖的縱軸為泛基乙基醚的毛囊組織吸收量)。根據(jù)圖3，本測定法1-1所得結(jié)果，微豬的皮膚部份幾乎無波動，可認(rèn)為根據(jù)本測定法1-1能夠得到具有優(yōu)良重現(xiàn)性的數(shù)據(jù)。
2.以本測定法1-1進(jìn)行成分評價1)成分評價實(shí)驗(yàn)調(diào)制下述表1所示的被測試樣〔對照制劑(乙醇制劑)和5％異硬脂醇制劑〕。
表1

以上述精度評價實(shí)驗(yàn)相同的方法研究此二種被檢試樣(對照制劑和異硬脂醇制劑)的經(jīng)毛吸收量(實(shí)驗(yàn)數(shù)n＝5，微豬的軀干上方與軀干下方的皮膚為標(biāo)本)。結(jié)果如圖4所示。由圖4可見，使用異硬脂醇使泛基乙基醚的毛囊組織吸收量表現(xiàn)出具有顯著性的增大。
同時，以上述相同的液相色譜法研究所用的各種皮膚標(biāo)本角質(zhì)層〔圖5(1)〕、表皮〔圖5(2)〕和真皮〔圖5(3)〕的泛基乙基醚吸收量。
由圖5的結(jié)果可見，真皮的吸收量有一定的增加(但絕對量少)，而角質(zhì)層與表皮的吸收量減少?？膳卸ó愑蝉ゴ紝Ψ夯一训慕?jīng)毛吸收具有特異的促進(jìn)作用，但不能確定是否具有促透皮吸收作用。
另外，本實(shí)驗(yàn)可見，經(jīng)毛吸收為與透皮吸收不同的皮膚吸收指標(biāo)，同時，圖4所示結(jié)果為毛囊組織中被檢物的吸附量，圖5所示結(jié)果為微豬皮膚的其它皮膚組織(角質(zhì)層、表皮及真皮)中被檢物的吸附量。以這些定量值作為經(jīng)毛吸收和透皮吸收的被檢物量的指標(biāo)，可見能夠測定被檢物的皮膚吸收。
2)成分評價實(shí)驗(yàn)2如下述表2所示，調(diào)制含有I.O.B.值為0.06～4.0油份的被檢試樣。
表2



以上述精度研究試驗(yàn)相同方法研究這6種被檢試樣中泛基乙基醚的經(jīng)毛吸收量(實(shí)驗(yàn)數(shù)n＝5，以微豬的軀干上方與軀干下方的皮膚為標(biāo)本)。結(jié)果如圖6所示。根據(jù)圖6，和對照制劑相比，含有I.O.B.值為0.06～4.0油分能夠使泛基乙基醚的毛囊組織吸收量增大。特別是異硬脂醇制劑和異硬脂酸制劑中泛基乙基醚的毛囊組織吸收量增大。
3)成分評價實(shí)驗(yàn)3作為I.O.B.值為0.06～4.0的油分，例如選擇月桂醇、月桂酸、月桂酸乙醇胺酰胺、月桂酸二乙醇胺酰胺、月桂酸單甘油脂、月桂酸二甘油酯、油醇、油酸、油酸乙醇胺酰胺、油酸二乙醇胺酰胺、油酸單甘油酯、油酸二甘油酯、異硬酯醇、異硬脂酸、異硬脂酸乙醇胺酰胺、異硬脂酸二乙醇胺酰胺、異硬脂酸單甘油酯、異硬脂酸二甘油酯、硬脂醇、硬脂酸、硬脂酸乙醇胺酰胺、硬脂酸二乙醇胺酰胺、硬脂酸單甘油酯和硬脂酸二甘油酯，調(diào)制含有其的被檢試樣。被檢試樣的處方依照上述成分評價實(shí)驗(yàn)2使用的處方。即對照制劑和成分評價實(shí)驗(yàn)2中使用的相同，各種油分各含1％，對照制劑中99％乙醇的含量為87％。
以上述精度研究實(shí)驗(yàn)相同的方法研究這24種被檢試樣中泛基乙基醚的經(jīng)毛吸收量(實(shí)驗(yàn)數(shù)n＝5，以微豬的軀干上方和軀干下方的皮膚為標(biāo)本)。結(jié)果如圖7所示。從圖7可見，與對照制劑相比，I.O.B.值為0.06～4.0的油分一般能增大泛基乙基醚的毛囊組織吸收量。
本測定法1-2為了確認(rèn)上述的本測定法1-1結(jié)果的合理性，對人的毛發(fā)實(shí)施測定法1-2，研究異硬脂醇的經(jīng)毛吸收促進(jìn)效果。
在30名男性志愿者的頭部，以1cm2/0.5ml的比率在頭皮上涂上被檢試樣(上述的成分評價試驗(yàn)1的被檢試樣一樣，泛基乙基醚量都為1％)，保持16個小時后，洗凈頭皮，每人20根的比例，撥下應(yīng)用了被檢試樣的頭發(fā)。切取頭發(fā)的發(fā)根，以上述同樣的液相色譜法測定發(fā)根的毛干和外毛根鞘部泛基乙基醚的吸收量(20根頭發(fā))。
結(jié)果如圖8所示。
從結(jié)果可見，在本測定法1-2中，異硬脂醇能增大泛基乙基醚的毛囊組織吸收量，即泛基乙基醚具有促進(jìn)經(jīng)毛吸收的作用。
3.同透皮吸收劑的比較研究實(shí)驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)是將已知的特定透皮吸收劑氧化胺作為比較試劑，研究本測定法1-1的傾向。
具體地說，用第3表處方所示的被檢試樣，同樣地進(jìn)行本測定法1-1試驗(yàn)，分別以液相色譜法(條件同上)測定β-甘氨酰視黃酸和米諾地爾的毛囊組織吸收量。
表3

結(jié)果如圖9[圖9(1)β-甘氨酰視黃酸的毛囊組織吸收量、圖9(2)米諾地爾的毛囊組織吸收量]所示。根據(jù)結(jié)果，異硬脂醇制劑與氧化胺相比，有明顯的經(jīng)毛吸收促進(jìn)作用，此外，還顯示透皮吸收和經(jīng)毛吸收是完全不同的現(xiàn)象。
4.清涼劑的研究試驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)，使用作為清涼劑的各種已知的萜類化合物為被檢試樣(配比如表4所示)，研究關(guān)于本測定法的傾向。
表4

圖10所示結(jié)果為上述的被檢試樣以本測定法1-2進(jìn)行評價的結(jié)果。從圖中可見，清涼劑中只有樟腦促進(jìn)泛基乙基醚的經(jīng)毛吸收。
此外，圖11[圖11(1)泛基乙基醚的毛囊組織吸收量、圖11(2)泛基乙基醚的表皮和真皮的吸收量]顯示上述被檢試樣用本測定法1-1評價的結(jié)果。也可從圖中得到圖10的結(jié)果。
本測定法2使用上述的本裝置10，具體地對米諾地爾制劑的皮脂轉(zhuǎn)移性進(jìn)行評價。
1、米諾地爾制劑是按表5所示處方的調(diào)制的2％米諾地爾制劑，取20μl進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
表5

2、所用人工皮脂處方如下配合成分配合量(質(zhì)量％)三油酸甘油酯 40.0棕櫚油酸 26.0蠟酯 20.0角鯊?fù)?10.0棕櫚酸 2.0膽固醇 2.0100.0將此人工皮脂11.5ml裝入封入部11中。
3、作為封入部11，為了能用注射器吸取人工皮脂，采用11.5ml容量的Franz池(Franz cell)。
4、作為薄膜12，使用一面經(jīng)角蛋白處理過的單層硅酮膜。
具體條件為如上述1-4的設(shè)定，實(shí)驗(yàn)溫度設(shè)定為37℃，以24小時米諾地爾向人工皮脂的轉(zhuǎn)移量作為人工皮脂中米諾地爾的量，進(jìn)行時程研究。
對于米諾地爾的定量，每到測定時間，用帶針頭的注射器吸取0.5ml，吸取液進(jìn)行攪拌，加入1.0ml的甲醇，靜置后，4000rpm離心處理5分鐘。吸取分離后的甲醇層0.5ml，用2倍量的甲醇稀釋，以此作為試樣，用高效液相色譜〔SHISEIDO Nanospace，柱為capselpack(カプセルパツク)C18，洗脫劑為CH3CN∶H2O＝20∶80〕定量米諾地爾。結(jié)果如圖12所示。
可以看出，異硬脂醇能增加米諾地爾的皮脂轉(zhuǎn)移性。
4、本組合物的處方例下面記載了典型的本組合物(養(yǎng)發(fā)劑-香波)的處方例，均以常法調(diào)制而成。
處方例1養(yǎng)發(fā)劑配合成分 配合量(質(zhì)量％)泛基乙基醚0.5β-甘氨酰視黃酸 0.5獐牙菜提取物糊0.5煙酰胺0.5維生素E乙酸酯 0.5乙醇 70.0離子交換水21.41異硬脂醇 5.0月桂基二甲基胺氧化物油酸鈉0.49硬化蓖麻油環(huán)氧乙烷(40mol加成物) 0.5處方例2香波配合成分 配合量(質(zhì)量％)椰子油脂肪酸?；谆；撬徕c 10.0
椰子油脂肪酸酰胺丙基甜菜堿 5.0甘油 1.0檸檬酸 1.0異硬脂醇 5.0牛磺酸 1.5甲基?；撬?0.5陽離子化纖維素 0.5香料 適量離子交換水 余量處方例3護(hù)發(fā)素·護(hù)理素配合成分 配合量(質(zhì)量％)氯化硬脂基三甲基銨 1.0異硬脂醇 3.0棕櫚酸 1.0L-谷胺酰胺 0.1精制水 余量處方例4護(hù)發(fā)香波配合成分 配合量(質(zhì)量％)N-椰油基-N-甲基牛磺酸鈉7.0椰子油脂肪酸酰胺丙基甜菜堿 7.0硬脂酸二甲基氨基丙酰胺 0.1異硬脂醇 0.25精制水 余量處方例5防白發(fā)劑配合成分 配合量(質(zhì)量％)95％乙醇 55.0秦椒提取物 5.0煙酰胺 0.5日柏醇 0.2
1，3-丁二醇 1.5硬化蓖麻油環(huán)氧乙烷(60mol加成物) 1.0異硬脂醇 5.0琥珀酸 適量香料 適量色素 適量精制水 余量處方例6脫毛劑配合成分 配合量(質(zhì)量％)95％乙醇 55.0巰基乙酸鈣 5.01，3-丁二醇 1.5硬化蓖麻油環(huán)氧乙烷(60mol加成物) 1.0異硬脂醇 5.0琥珀酸 適量香料 適量色素 適量根據(jù)本發(fā)明，可以簡便、準(zhǔn)確地定量被檢物的經(jīng)毛吸收性以至皮脂轉(zhuǎn)移性，發(fā)現(xiàn)簡便、準(zhǔn)確測定皮膚吸收的方法，以此提供了促進(jìn)藥物等的經(jīng)毛吸收以至皮脂轉(zhuǎn)移、使藥物到達(dá)養(yǎng)發(fā)劑等的靶點(diǎn)毛囊組織的方法。
權(quán)利要求
1.被檢物的皮膚吸收測定法，是通過測定從被檢物作用的人頭皮回收的毛囊組織中的被檢物吸附量，對毛囊組織中滲透的被檢物量進(jìn)行定量，通過使用以被檢物量作為經(jīng)毛吸收的被檢物量的指標(biāo)而決定被檢物的經(jīng)毛吸收量，從而測定被檢物的皮膚吸收。
2.根據(jù)權(quán)利要求1記載的被檢物的皮膚吸收測定法，其中經(jīng)毛吸收為經(jīng)毛囊吸收。
全文摘要
本發(fā)明提供了被檢物的皮膚吸收測定法，是通過測定從被檢物作用的人頭皮回收的毛囊組織中的被檢物吸附量，對毛囊組織中滲透的被檢物量進(jìn)行定量，通過使用以被檢物量作為經(jīng)毛吸收的被檢物量的指標(biāo)而決定被檢物的經(jīng)毛吸收量，從而測定被檢物的皮膚吸收。
文檔編號C12Q1/00GK1530652SQ200410033420
公開日2004年9月22日 申請日期2000年10月30日 優(yōu)先權(quán)日1999年10月29日
發(fā)明者武岡永里子, 高本隆一, 梁木利男, 一, 男 申請人:株式會社資生堂