專利名稱：一種微生物驅(qū)油方法以及一種微生物－三元復(fù)合驅(qū)油劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及石油開采技術(shù)，特別涉及應(yīng)用微生物作用于原油從而提高驅(qū)油效率的方法，以及應(yīng)用該微生物與三元復(fù)合體系組配的驅(qū)油劑。
背景技術(shù)：
當(dāng)今世界正在進(jìn)行一場(chǎng)以生物工程及應(yīng)用為標(biāo)志的新技術(shù)革命，而生物開發(fā)能源技術(shù)成為生物工程中經(jīng)濟(jì)潛力最大、最有希望和前途的領(lǐng)域之一，現(xiàn)代化分析儀器和手段也使微生物科學(xué)進(jìn)入一個(gè)嶄新的發(fā)展時(shí)期，這些因素推動(dòng)了微生物強(qiáng)化采油技術(shù)的研究和應(yīng)用。
石油是一種非再生的能源，經(jīng)過一次采油和二次采油后，地層中仍有約60％-70％的原油無法開采出來。如何提高采收率，從地下采出更多的原油，多年來一直是許多國家不斷研究的課題。目前普遍采用的是用化學(xué)方法開采原油，如堿、表面活性劑、聚合物組成的ASP三元復(fù)合驅(qū)油體系(牟建海，李干佐.[J].化工科技市場(chǎng).2000，23(7)17)。從1980年以來，很多國家開展了用微生物方法提高原油采收率的技術(shù)，經(jīng)過二十多年的努力，該技術(shù)取得了極大進(jìn)展。這種使用化學(xué)或生物制劑提高采收率的技術(shù)被稱為三次采油技術(shù)，國外亦稱強(qiáng)化采油(EOR，Enhanced OilRecovery)技術(shù)。為了將它們區(qū)分開來，用微生物提高采收率技術(shù)也可以稱為四次采油技術(shù)或微生物強(qiáng)化采油(MEOR，Microbial Enhanced Oil Recovery)技術(shù)，它是指利用微生物生產(chǎn)有用的代謝產(chǎn)品或者利用微生物能夠分解碳?xì)浠衔锏男阅?，從而提高原油采收率的技術(shù)。
微生物強(qiáng)化采油技術(shù)是一項(xiàng)科技含量高、發(fā)展迅猛的新技術(shù)，是現(xiàn)代生物技術(shù)在采油工程領(lǐng)域中開拓性的應(yīng)用，對(duì)于高含水和接近枯竭的老油田更顯示出其強(qiáng)大的生命力。微生物強(qiáng)化采油技術(shù)主要包括兩類(李虞庚.石油微生物學(xué).[M].上海上海交通大學(xué)出版社.1996)一類是利用微生物產(chǎn)品如生物聚合物和生物表面活性劑作為油田用化學(xué)劑進(jìn)行驅(qū)油，稱為微生物地上發(fā)酵提高采收率工藝，即生物工藝法，目前該技術(shù)在國內(nèi)外已趨成熟；另一類是利用微生物及其代謝產(chǎn)物提高采收率，主要是利用微生物地下發(fā)酵和利用油層中固有微生物的活力，稱為微生物地下發(fā)酵提高采收率方法。
降解石油微生物的分離是實(shí)現(xiàn)微生物強(qiáng)化采油技術(shù)的基礎(chǔ)，菌種的好壞是微生物采油的關(guān)鍵。目前，已分離得到一些降解石油的微生物，如賓西法尼亞原油協(xié)會(huì)的Beck報(bào)道了用硫酸鹽還原菌進(jìn)行釋放原油的實(shí)驗(yàn)，研究表明硫酸鹽還原菌在細(xì)菌石油分解中出現(xiàn)的良好效果(1947年)，該實(shí)驗(yàn)后來由厄普德格拉斐和雷恩進(jìn)一步證實(shí)(1954年)。拉里維雷(1955年)觀測(cè)了銅綠假單胞菌、分枝桿菌、枯草芽孢桿菌、脂解酶念球菌等在甘油等培養(yǎng)物中的表面張力，表面張力下降明顯，但利用烴類并不好。有必要尋找更加有效的菌種和使用更有效的方法使采油效率得以提高。
發(fā)明創(chuàng)造內(nèi)容本發(fā)明的目的是在提供一種利用能夠降解石油的微生物進(jìn)行驅(qū)油的方法。
本發(fā)明的驅(qū)油方法順序包括以下步驟1)將蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)HP，CGMCC №.1141，和短短芽孢桿菌(Brevibacillus brevis)HT，CGMCC №.1142中至少一株在以原油為碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到發(fā)酵液；2)將得到的發(fā)酵液注入油層中3至7天；3)用三元復(fù)配體系驅(qū)油。
上述驅(qū)油方法，所述步驟1)中培養(yǎng)基A為K2HPO40.1％，NaH2PO40.2％，(NH4)2SO40.2％，CaCl2·2H2O 0.001％，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.001％，酵母0.1％，，PH 7.0-7.2，碳源為10-20％原油；培養(yǎng)條件為溫度45℃，搖床轉(zhuǎn)速120rpm，培養(yǎng)時(shí)間7天；另一種培養(yǎng)基B為KH2PO40.1-1％，Na2HPO40.05-1％，NH4Cl0.05-1％，NaCl0.1-1.0％，MgSO4·7H2O0.01-0.5％，KCl0.05-0.5％，F(xiàn)eCl20.001-0.01％，CaCl20.001-0.01％，MnCl20.001-0.01％，CuCl20.001-0.01％，ZnCl20.001-0.01％，酵母浸粉0.01-0.2％，牛肉膏0.01-0.2％，蛋白胨0.01-0.2％，液體石蠟0.5-2％或原油1-20％，Tween800.01-0.2％，Tween950.01-0.2％，羧酸鹽0.005-0.1％，pH6.8-7.5，121℃滅菌1520Min。
上述驅(qū)油方法中，步驟2)中的注入油層的發(fā)酵液其濃度為1～5wt％，其中含有107-108個(gè)細(xì)胞/ml。
上述驅(qū)油方法中，所述步驟3)中三元復(fù)配體系中各組分為步驟1)得到的發(fā)酵液8wt％-50wt％，表活劑0.04wt％，堿1.0wt％以及聚合物0.25wt％。
上述驅(qū)油方法中，步驟3)中三元復(fù)配體系中各組分為表活劑0.2wt％，堿1.0wt％以及聚合物0.25wt％。
其中，能夠降解石油的微生物為蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)HP或短短芽孢桿菌(Brevibacillus brevis)HT，其中蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)HP已于2004年04月08日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC)，保藏號(hào)為CGMCC №.1141；短短芽孢桿菌(Brevibacillus brevis)HT已于2004年04月08日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC)，保藏號(hào)為CGMCC №.1142。
本發(fā)明另一目的在于提供一種可以有效提高石油采收率的利用上述微生物的三元復(fù)合驅(qū)油劑。
本發(fā)明提供的微生物-三元復(fù)合驅(qū)油劑包括如下組分微生物發(fā)酵液 8％-50wt％，表活劑0.04wt％，堿1.0wt％以及聚合物0.25wt％；其中，微生物發(fā)酵液為蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)HP，CGMCC №.1141，或短短芽孢桿菌(Brevibacillus brevis)HT，CGMCC №.1142菌種在以原油為碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到發(fā)酵液。
實(shí)驗(yàn)證明，蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)HP和短短芽孢桿菌(Brevibacillusbrevis)HT均能有效地改善原油的性質(zhì)，原油酸值提高8倍以上，輕組份增加，含蠟含膠降低率30-50％，原油流變性變好，油水間界面張力降低，發(fā)酵液中有機(jī)酸等物質(zhì)含量增加；其代謝原油途徑為次末端氧化，產(chǎn)生了一種新型脂類表面活性劑。
實(shí)驗(yàn)還證明，利用HP、HT得到的微生物發(fā)酵液作用原油后，原油物性得到改善，作用后原油與現(xiàn)有三元配方界面張力較未作用原油降低，稀釋2-12倍(濃度50％～8wt％)微生物發(fā)酵液加入少量的烷基苯磺酸鹽表活劑S1(0.01wt％-0.04wt％)，界面張力可達(dá)到10-3mN/m，大大降低了成本，并具有較好的穩(wěn)定性。
室內(nèi)巖心驅(qū)油實(shí)驗(yàn)表明，在加入少量磺酸鹽表活劑(0.04％)的情況下，利用HP、HT得到的微生物發(fā)酵液稀釋2倍(50wt％)，發(fā)酵液作用后室內(nèi)天然巖心驅(qū)油提高采收率幅度平均在20.25％，與現(xiàn)有三元配方相當(dāng)，但可以節(jié)省原三元配方中表面活性劑的用量；先注發(fā)酵液，用現(xiàn)有三元配方驅(qū)替，提高采收率幅度平均在29％，比單獨(dú)三元復(fù)合體系驅(qū)油幅度增加9％左右。


圖1a為HP作用后原油全烴色譜1b為HT作用后原油全烴色譜2為菌種HP、HT作用前后原有流變性變化曲線圖3a為空白油樣非烴顯微-紅外分析圖譜圖3b為HP作用后油樣非烴顯微-紅外分析圖譜圖3c為HT作用后油樣非烴顯微-紅外分析圖譜圖4為烷烴微生物氧化一般途徑圖5為烷烴次末端氧化途徑圖6a為有機(jī)酸混合標(biāo)樣的色譜6b為HT樣品中有機(jī)酸色譜6c為HP樣品中有機(jī)酸色譜7a為乙酸的質(zhì)譜7b為丙酸的質(zhì)譜7c為丁酸的質(zhì)譜7d為異戊酸的質(zhì)譜8a為有機(jī)醇標(biāo)樣的色譜8b為HP樣品的有機(jī)醇色譜8c為HT樣品的有機(jī)醇色譜9a為HT樣品中提取的B1物質(zhì)的紅外光譜9b為HT樣品中提取的B2物質(zhì)的紅外光譜圖9c為HT樣品中提取的C物質(zhì)的紅外光譜圖9d為HP樣品中提取的B物質(zhì)的紅外光譜9e為HP樣品中提取的C物質(zhì)的紅外光譜10為微生物發(fā)酵液一三元體系的界面張力的對(duì)比曲線11為三元體系與作用前后原油間界面張力圖12a為微生物發(fā)酵液稀釋4倍加堿(0.8)油水間界面張力圖12b為微生物發(fā)酵液稀釋4倍加堿(1.0)油水間界面張力圖12c為微生物發(fā)酵液稀釋4倍加堿(0.6)油水間界面張力圖13a為發(fā)酵液A與A作用原油30分鐘時(shí)活性區(qū)域圖13b為發(fā)酵液A與A作用原油120分鐘時(shí)活性區(qū)域圖13c為發(fā)酵液B與B作用原油30分鐘時(shí)活性區(qū)域圖13d為發(fā)酵液B與B作用原油120分鐘時(shí)活性區(qū)域具體實(shí)施方式
在本發(fā)明技術(shù)方案和實(shí)施例中提到的“％”，如無特殊說明，均為質(zhì)量百分濃度。
實(shí)施例1、菌種的篩選1、蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)HP和短短芽孢桿菌(Brevibacillusbrevis)HT的分離分為取樣和富集培養(yǎng)，篩選和純化兩個(gè)步驟，具體方法如下(1)取樣和富集培養(yǎng)取黑龍江省大慶市的第一采油廠的油水樣后立即富集培養(yǎng)，使所需的菌種在數(shù)量上占優(yōu)勢(shì)，抑制不需要的菌種生長(zhǎng)。富集培養(yǎng)基用的是無機(jī)鹽培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基AK2HPO40.1-1％，NaH2PO40.1-0.5％，(NH4)2SO40.05-0.2％，MgSO4·7H2O0.01-0.5％，F(xiàn)eCl20.001-0.01％，CaCl20.001-0.01％，酵母浸粉0.02-0.2％，原油0.5-20％。pH6.8-7.5 121℃，滅菌15-20min。45℃120rpm搖床培養(yǎng)5-7天。
(2)菌種的篩選和純化篩選用的兩種選擇性培養(yǎng)基是原油無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基和血平板培養(yǎng)基。
a.原油無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基上的篩選這種選擇性培養(yǎng)基中除了原油之外未加任何碳源，篩選出的菌種就是可以以原油為唯一碳源生長(zhǎng)的菌種。在無菌條件下制備步驟(1)所述的富集無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基平板，把稀釋后的原油倒入制備好的無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基平板上(原油的加入量為1ml原油/L培養(yǎng)基)，待原油均勻地平鋪在無機(jī)鹽平板表面凝固后，將步驟(1)中的富集培養(yǎng)液均勻涂布在平板上。45℃培養(yǎng)3-5天，可以明顯地看出長(zhǎng)菌地方的原油被利用，無機(jī)鹽平板上的原油層變薄形成透明圈。選擇能形成透明圈的菌種，待進(jìn)一步純化。
b.血平板培養(yǎng)的篩選將步驟(1)中的富集培養(yǎng)液均勻涂布在血平板上。45℃培養(yǎng)1-2天，表明培養(yǎng)后的菌落周圍形成明顯的溶血透明圈，挑選這樣的菌落待進(jìn)一步純化。由于生物表面活性劑具有能夠溶血的特性，溶血的單菌落即是產(chǎn)生生物表面活性劑的菌種。血平板培養(yǎng)基的組成牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，酵母膏0.01％，氯化鈉0.5％，瓊脂2％，羊血5％。
C.將通過上述選擇性培養(yǎng)基得到的單菌落顯微鏡下染色觀察，如果不純，再一次地利用上述的培養(yǎng)基分離，直到得到純的菌落。為了獲得厭氧和兼性的菌種，把通過上述的兩種選擇性培養(yǎng)基獲得的菌種在厭氧工作站中45℃培養(yǎng)5天，獲得以原油為唯一碳源的一株菌HP和HT，這兩株菌具有良好的產(chǎn)表面活性劑、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、改善原油物性等特性。
可選用下述兩種方法對(duì)兩菌株進(jìn)行長(zhǎng)期的菌種保藏①低溫保藏取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌種，用15％無菌甘油作保護(hù)劑在-70C保存；②冷凍干燥制備干粉離心發(fā)酵液得到菌體，用脫脂牛奶作保護(hù)劑，冷凍干燥制成干粉。
2、培養(yǎng)條件利用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，確定了培養(yǎng)基的配方培養(yǎng)基A為K2HPO40.1％，NaH2PO40.2％，(NH4)2SO40.2％，CaCl2·2H2O 0.001％，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.001％，酵母0.1％，，PH 7.0-7.2。碳源為10-20％原油；培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度30-50C，搖床轉(zhuǎn)速120rpm，培養(yǎng)時(shí)間5-7天。
另一種培養(yǎng)基B為KH2PO40.1-1％，Na2HPO40.05-1％，NH4Cl0.05-1％，NaCl0.1-1.0％，MgSO4·7H2O0.01-0.5％，KCl0.05-0.5％，F(xiàn)eCl20.001-0.01％，CaCl20.001-0.01％，MnCl20.001-0.01％，CuCl20.001-0.01％，ZnCl20.001-0.01％，酵母浸粉0.01-0.2％，牛肉膏0.01-0.2％，蛋白胨0.01-0.2％，液體石蠟0.5-2％或原油1-20％，Tween800.01-0.2％，Tween950.01-0.2％，羧酸鹽0.005-0.1％，pH6.8-7.5，121℃滅菌15-20Min；培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度30-50℃，搖床轉(zhuǎn)速120rpm，培養(yǎng)時(shí)間1-2天。
實(shí)施例2、菌種對(duì)原油的作用1、分散乳化效果實(shí)驗(yàn)蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)HP菌種和短短芽孢桿菌(Brevibacillusbrevis)HT菌種在K2HPO40.1％，NaH2PO40.2％，(NH4)2SO40.2％，CaCl2·2H2O 0.001％，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.001％，酵母0.1％，，PH 7.0-7.2。碳源10％原油。45℃，120rpm搖床培養(yǎng)5天后的結(jié)果表明與對(duì)照(未加菌)相比，發(fā)酵液的顏色明顯加深，而且，作用后原油具有不掛瓶的特點(diǎn)。由于微生物以原油為唯一碳源生長(zhǎng)，改變了原油的性質(zhì)，使原油的組分發(fā)生了變化。發(fā)酵后的原油在顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)原油中有菌液存在。細(xì)菌存在油水界面上，并以油為碳源，適應(yīng)環(huán)境產(chǎn)生驅(qū)油物質(zhì)，從而起到乳化、潤(rùn)濕、分散原油的作用。
2、菌種作用前后原油全烴色譜圖取上述發(fā)酵5天后的原油，按常規(guī)方法作原油的全烴分析。結(jié)果如表1和圖1a和圖1b所示，表明兩菌株可選擇性的降解原油中的某些高碳數(shù)烷烴，長(zhǎng)鏈烴含量相對(duì)減少，短鏈烴或低鏈烴含量相對(duì)增加，原油的輕質(zhì)組分增加；另外，∑C21/∑C22和C21+C22/C28+C29是描述油氣運(yùn)移的參數(shù)，那么∑C21/∑C22和C21+C22/C28+C29的比值增加，表示原油運(yùn)移的方向，隨著高分子化合物含量相對(duì)減少，輕組分化合物含量相對(duì)增加。圖1a和圖1b表明由于高分子量烴類的熱降解而向低碳數(shù)范圍轉(zhuǎn)移，色譜圖逐漸變?yōu)榍案咪h型，正烷烴碳數(shù)分布曲線向輕組份方向移動(dòng)。原油的流動(dòng)性變好。
表1.菌株HP發(fā)酵后的原油的飽和烴色譜檢測(cè)結(jié)果

3、原油流變性變化情況兩株菌在K2HPO40.1％，NaH2PO40.2％，(NH4)2SO40.2％，CaCl2·2H2O 0.001％，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.001％，酵母0.1％，PH 7.0-7.2。碳源為10％原油。45℃，分別在120rpm搖床培養(yǎng)5天后，按常規(guī)方法分析微生物作用前后原油流變性，結(jié)果如圖2所示，表明作用后原油流變性明顯變好，粘度降低。當(dāng)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)數(shù)為6l/s時(shí)，作用前原油粘度為101mPa·s，菌株HT作用后原油粘度降低到56.9mPa·s，原油粘度降低了43.7％，菌株HP作用后原油粘度降低到43.4mPa·s，原油粘度降低了57.03％，原油粘度大幅下降。
4、原油含蠟、含膠變化在分析了原油烷烴分布情況后，為了進(jìn)一步探討菌株作用前后原油含蠟、膠的變化情況，按常規(guī)方法做了原油含蠟、含膠變化實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表2所示，表明菌種作用前后原油的蠟和膠質(zhì)的含量都有不同程度的變化，菌株作用后原油含蠟量下降。
表2.菌種作用前后原油蠟、膠的變化表

5、原油中芳烴的變化取發(fā)酵5天后的原油按常規(guī)方法進(jìn)行GC-MS，分析原油芳烴中菲系列的相對(duì)含量，結(jié)果如表3所示，表明菌株選擇性地降解了菲系列中的不同組分，引起MPI、DPI指數(shù)的變化。原油中的菲系列一般認(rèn)為是來自甾萜化合物的裂解。由于烷基在菲環(huán)上位置不同，穩(wěn)定性也有差異，一般處在β位的甲基，如3-甲基和2-甲基菲較穩(wěn)定，在α位的1-甲基、4-甲基菲以及處于中位的9-甲基菲比較活躍，二甲基菲也有相似規(guī)律，從αα型、αβ型至ββ型，穩(wěn)定性依次增高，該菌株作用后，原油的MPI和DPI指數(shù)均有一定的提高，說明菲系列中化學(xué)性質(zhì)較為活躍的組分易被該菌株降解。
表3.菌株HP作用前后原油中芳烴GC-MS分析結(jié)果序號(hào) 樣品名稱 菲系列含量(％) MPI DPI1空白油7.260.670.872HT油 7.210.720.913HP油 6.540.891.02備注MPI＝1.5×(2-甲基菲+3-甲基菲)/(菲+1-甲基菲+9-甲基菲)DPI＝4×(二甲基菲①+二甲基菲②+二甲基菲③+二甲基菲④)/(菲+二甲基菲⑤+二甲基菲⑥+二甲基菲⑦)6、原油中非烴的變化取發(fā)酵5天后的原油采用顯微-紅外法分析兩菌株作用前后原油中非烴成分和結(jié)構(gòu)的變化，結(jié)果如圖3a和圖3b(HP油樣)、圖3c(HT油樣)所示，圖3a表明2924cm-1和2853cm-1處的吸收峰分別代表甲基和亞甲基的C-H不對(duì)稱和對(duì)稱伸縮振動(dòng)，亞甲基占優(yōu)，因?yàn)橐话慵谆腃-H伸縮振動(dòng)峰在2960cm-1和2870cm-1處，被亞甲基峰覆蓋，加上722cm-1峰為長(zhǎng)碳鏈(n＞4)中亞甲基的吸收峰，說明原油非烴以長(zhǎng)碳飽和鏈為主，而且支鏈程度不大；1461cm-1和1376cm-1處甲基、亞甲基的C-H彎曲振動(dòng)峰是以上推斷的旁證。1601cm-1處的吸收峰可能是C＝N、C＝C雙鍵伸縮振動(dòng)引起的，但根據(jù)指紋區(qū)910cm-1以下的不明顯紅外吸收峰(與苯環(huán)的取代位置有關(guān))，可以推斷原油非烴中含有一定量的芳烴成分。1650-1900cm-1范圍內(nèi)的吸收峰主要表現(xiàn)為羰基化合物，如醛、酮、酸、酯、酸酐以及酰胺等的C-O伸縮振動(dòng)，從紅外光譜上看，該范圍內(nèi)峰的吸收強(qiáng)度弱，且成寬帶形，可能是因?yàn)樵头菬N中含有少量帶羰基的混合化合物。圖3b表明HP菌株作用后與微生物作用前相比主要區(qū)別是在3303cm-1處出現(xiàn)新的紅外吸收峰，圖3c表明HT菌株作用后與微生物作用前相比主要區(qū)別是在2463cm-1處出現(xiàn)新的紅外吸收峰，峰形寬而鈍，這是由于羥基在分子間或分子內(nèi)形成氫鍵而產(chǎn)生的，但在1603cm-1處沒有明顯的紅外吸收峰，說明氫鍵不是因?yàn)闃悠分泻兴?。根?jù)峰形特征和化學(xué)位移的偏移規(guī)律，推斷菌株作用后原油菲烴中有一定量的羧酸生成，羧酸內(nèi)由于羰基和羥基的強(qiáng)烈締合，依據(jù)羧酸含量的不同紅外吸收峰可從3300cm-1延續(xù)到2500cm-1以下。
為了進(jìn)一步證實(shí)，測(cè)定了菌株作用前后原油非烴的酸值，結(jié)果如表4所示，表明菌株作用以后，原油非烴的酸值增加到原來的8倍和14倍，說明菌株在對(duì)原油不同組分的降解過程中發(fā)生了生物氧化反應(yīng)，生成了高碳有機(jī)酸，提高了原油的酸值。
表4.菌株作用前后原油非烴酸值分析結(jié)果序號(hào)樣品名稱非烴酸值(％) 酸值增加(倍)1 空白油 0.10372 HP油0.8362 8.063 HT油1.4799 14.277、原油中飽和烴生物降解機(jī)理分析從以上的研究可以看出，菌株對(duì)原油的降解以氧化降解為主要途徑。大多數(shù)微生物對(duì)烷烴的主要氧化途徑都可以用圖4概括，首先是對(duì)烷烴進(jìn)行末端氧化(或β-氧化)生成脂肪酸，再按-氧化途徑降解烷烴，并伴生?；?CoA參與微生物的代謝活動(dòng)。一般地，對(duì)于一特定的烷烴，微生物降解產(chǎn)物脂肪酸是一彼此相差兩個(gè)碳的混合酸，只是降解條件和碳數(shù)的不同，混合酸的碳數(shù)分布各異。菌株HP、HT對(duì)原油降解的成分分析結(jié)果表明，混合肪酸酸的碳數(shù)集中在C2-C20范圍內(nèi)。這說明菌株對(duì)原油的生物氧化可能從一較為特殊的途徑——次末端氧化(subterminaloxidation)開始(如圖5)。原油中高碳鏈飽和烴首先經(jīng)次末端氧化生成兩種中碳鏈的脂肪酸，再進(jìn)行末端氧化和β-氧化。
實(shí)施例3、菌株發(fā)酵液的制取與分析1、發(fā)酵液的制取將用實(shí)施例1方法篩選的蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)HP和短短芽孢桿菌(Brevibacillus brevis)HT菌種在實(shí)施例1中選定的培養(yǎng)基A中培養(yǎng)5天，或在培養(yǎng)基B中培養(yǎng)2天后，用冷凍離心機(jī)3500rpm離心，去除上層原油，收集菌體和培養(yǎng)液得到發(fā)酵液。
2、發(fā)酵液的分析(1)有機(jī)酸的定性分析結(jié)果利用6890N/5973N氣-質(zhì)聯(lián)用儀(美國Agilent公司)，F(xiàn)FAP石英毛細(xì)管柱(0.25mm×30m)，載氣為高純氦氣，流量1ml/min，汽化室溫度250℃，柱溫采用程序升溫，開始溫度為160℃，速率為2℃/min，最終溫度為180℃，進(jìn)樣量0.5μl.按照常規(guī)方法進(jìn)行有機(jī)酸的定性測(cè)定，有機(jī)酸標(biāo)樣的色譜圖如圖6a，在色譜條件下的保留時(shí)間如表5所示。
HP樣品的有機(jī)酸氣相色譜圖如圖6c，HT樣品的有機(jī)酸氣相色譜圖如圖6b，經(jīng)質(zhì)譜檢測(cè)和與有機(jī)酸標(biāo)樣對(duì)照，樣品中含有四種有機(jī)酸即乙酸、丙酸、丁酸、異戊酸，有機(jī)酸質(zhì)譜檢測(cè)圖如圖7a、7b、7c和7d所示。
表5.有機(jī)酸標(biāo)樣的保留時(shí)間乙酸 丙酸 丁酸 異戊酸保留時(shí)間(min) 2.16 2.50 2.99 3.26(2)有機(jī)酸的定量分析結(jié)果水樣蒸餾效果試驗(yàn)該提取方法(量取預(yù)處理后的樣品100ml，置于蒸餾燒瓶中，加7ml磷酸酸化，蒸餾。當(dāng)蒸餾燒瓶剩下少量溶液時(shí)，稍冷，再分兩次各加20ml蒸餾水繼續(xù)蒸餾。用NaOH溶液中和餾出液，用酸度計(jì)控制PH為8～9。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至5ml左右后，將試樣轉(zhuǎn)入10ml容量瓶中，用鹽酸酸化至PH≤3，定容，待測(cè)有機(jī)酸)能充分地提取出各種有機(jī)酸，做了蒸餾效果試驗(yàn)。即各取100ml五份HP發(fā)酵液，經(jīng)上述方法處理進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如表6所示表6.有機(jī)酸蒸餾效果試驗(yàn)測(cè)定值 變異系標(biāo)準(zhǔn)偏差(五次平均數(shù)有機(jī)酸mg/L) (％)乙酸 24.351.02 4.2丙酸 20.410.73 3.6丁酸 3.0820.16 5.3異戊酸 1.2690.37 1.6
表6表明同一樣品五次測(cè)定結(jié)果重現(xiàn)性較好，說明采用蒸餾的方法可以充分地將水樣中的低分子量有機(jī)酸蒸出。
將HP、HT菌種在K2HPO40.1％，NaH2PO40.2％，(NH4)2SO40.2％，CaCl2·2H2O 0.001％，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.001％，酵母0.1％，，PH 7.0-7.2。碳源為10％原油。45℃，分別在120rpm搖床培養(yǎng)5天后的培養(yǎng)液分別做三個(gè)平行樣，按6890N/5973N氣-質(zhì)聯(lián)用儀(美國Agilent公司)，F(xiàn)FAP石英毛細(xì)管柱(0.25mm×30m)，載氣為高純氦氣，流量1ml/min，汽化室溫度250℃，柱溫采用程序升溫，開始溫度為160℃，速率為2℃/min，最終溫度為180℃，進(jìn)樣量0.5μl分別進(jìn)行測(cè)定，得到有機(jī)酸濃度平均值，結(jié)果如表7、表8所示，表明HP、HT樣品中乙酸含量較大，以乙酸為主。
計(jì)算公式標(biāo)樣濃度(mg/L)＝20/50×ρ×1000＝400ρ(ρ為標(biāo)樣密度，g/ml) 表7.HP樣品中有機(jī)酸的定量分析結(jié)果濃度(mg/L)標(biāo)準(zhǔn)偏差 變異系數(shù)(％)摩爾濃度(mmol/L)乙酸23.22 1.49 6.4 0.3870丙酸21.12 1.18 5.6 0.2854丁酸2.932 0.12 4.1 0.0333異戊酸 7.201 0.47 3.6 0.07060總酸量0.7763mmol/L表8.HT樣品中有機(jī)酸的定量分析結(jié)果濃度(mg/L)標(biāo)準(zhǔn)偏差 變異系數(shù)(％) 摩爾濃度(mmol/L)乙酸574.0 45.3 7.9 9.5667丙酸8.318 0.44 5.3 0.1124丁酸14.68 1.15 7.8 0.1668異戊酸 7.131 0.83 6.1 0.0699總酸量9.9158mmol/L3、發(fā)酵液的有機(jī)醇定性和定量分析利用6890N/5973N氣-質(zhì)聯(lián)用儀(美國Agilent公司)，F(xiàn)FAP石英毛細(xì)管柱(0.25mm×30m)，載氣為高純氦氣，流量1ml/min，汽化室溫度200℃，柱溫采用程序升溫，開始溫度為80℃，保留1分鐘，速率為4℃/min，最終溫度110℃，進(jìn)樣量1.0μl.按照常規(guī)方法進(jìn)行有機(jī)醇的定性測(cè)定，有機(jī)醇標(biāo)樣的色譜圖如圖8a(原圖24)所示，表明在該色譜條件下，四種有機(jī)醇分離效果很好；在色譜條件下的保留時(shí)間如表9a、9b所示。
HP樣品的有機(jī)醇?xì)庀嗌V圖如圖8b所示，HT樣品的有機(jī)醇?xì)庀嗌V圖如圖8c。經(jīng)質(zhì)譜檢測(cè)，HT樣品中只含有乙醇，HP樣品中未檢測(cè)到有機(jī)醇。
表9a.有機(jī)醇標(biāo)樣的保留時(shí)間乙醇 丙醇 丁醇 戊醇保留時(shí)間(min) 1.93 2.47 3.51 5.00HT樣品中的乙醇定量結(jié)果如表9b。其中20μl乙醇定容在50ml容量瓶中，濃度為315.7mg/L，定量分析計(jì)算方法同有機(jī)酸。
表9b.HT樣品乙醇的定量分析結(jié)果濃度(mg/L)標(biāo)準(zhǔn)偏差 變異系數(shù)(％)摩爾濃度(mmol/L)乙醇759.9 28.5 3.8 16.524、生物表面活性劑的鑒定(1)生物表面活性劑的初步鑒定①脂肽類生物表面活性劑的鑒定取HP、HT和HP+HT各50ml，用濃鹽酸調(diào)PH值至2，4℃靜置過夜，觀察是否有沉淀產(chǎn)生。結(jié)果表明三種發(fā)酵液均無沉淀產(chǎn)生，由此證明三種發(fā)酵液中不含有脂肽類生物表面活性劑。
②紫外吸收鑒定對(duì)按常規(guī)方法提純后的生物表面活性劑做了紫外吸收測(cè)定，它們?cè)谧贤夥秶鷥?nèi)均無吸收?？梢猿醪脚袛嗖缓蟹枷阕寤衔?。
(2)生物表面活性劑的元素分析按常規(guī)方法從HP和HT發(fā)酵液中提純得到的生物表面活性劑，分別對(duì)其進(jìn)行C、H、N含量的測(cè)定，數(shù)據(jù)如表10所示表10表明這五種生物表面活性劑N的含量都在3.5％以下，而文獻(xiàn)上報(bào)道的氨基酸中N的含量都在10％以上，可見，這些生物表面活性劑不是氨基酸和脂肽類。并且用茚三酮溶液檢測(cè)，沒有出現(xiàn)氨基酸的特征反應(yīng)，進(jìn)一步確定了上述結(jié)論。
表10.生物表面活性劑的元素分析結(jié)果C(％) H(％) N(％)HP中提取的B物質(zhì)73.2612.233.01HP中提取的C物質(zhì)73.6410.823.15HT中提取B1物質(zhì) 73.0611.293.50HT中提取B2物質(zhì) 77.3015.532.93HT中提取C物質(zhì) 66.338.71 2.38(3)生物表面活性劑的紅外光譜分析HP、HT樣品提純后得到的B物質(zhì)的紅外譜圖分別如圖9a/9b/9c所示，表明2924--2853cm-1、1456cm-1是甲基、亞甲基的C-H振動(dòng)峰，沒有其它生物表面活性劑的特征峰。
HP、HT樣品提純后得到的C物質(zhì)的紅外譜圖如圖9d/9e所示，表明2872cm-1、1455cm-1是甲基、亞甲基的C-H振動(dòng)峰；在1724cm-1附近的峰為C＝O的伸縮振動(dòng)；在1103cm-1附近為C-O-C的對(duì)稱伸縮振動(dòng)，表明有酯的存在。在3400cm-1有明顯的O-H的伸縮振動(dòng)峰，表明化合物中有羥基。
從紫外和紅外譜圖分析，HP、HT樣品提純后得到的C物質(zhì)為脂類表面活性劑。但用對(duì)糖類的定性方法即蒽酮試劑法測(cè)定，又不顯糖類的特征反應(yīng)。因此C物質(zhì)應(yīng)是一種新型脂類表面活性劑。
5、HP、HT菌株發(fā)酵液的界面張力分析利用德國LAUDA公司生產(chǎn)的滴體積界面張力儀，在45℃動(dòng)態(tài)情況下對(duì)蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)HP、短短芽孢桿菌(Brevibacillus brevis)HT菌種在K2HPO40.1％，NaH2PO40.2％，(NH4)2SO40.2％，CaCl2·2H2O 0.001％，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.001％，酵母0.1％，，PH 7.0-7.2。碳源為10％原油。45℃，分別在120rpm搖床培養(yǎng)5天后的培養(yǎng)液分別并混合與原油間界面張力進(jìn)行了檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如表11所示，表明HP、HT菌株可以很好的代謝生物表面活性劑。細(xì)菌的代謝產(chǎn)物中生物表面活性劑具有親水和疏水基團(tuán)，在油水界面上定向排列，改善界面活性，降低界面張力。
表11.菌株發(fā)酵液的界面張力測(cè)定數(shù)據(jù)

實(shí)施例4微生物發(fā)酵液與現(xiàn)有三元體系復(fù)配界面張力實(shí)驗(yàn)菌株HP、HT培養(yǎng)基AK2HPO40.1％，NaH2PO40.2％，(NH4)2SO40.2％，CaCl2·2H2O 0.001％，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.001％，酵母0.1％，，PH 7.0-7.2，碳源為10-20％原油。溫度45℃，搖床轉(zhuǎn)速120rpm，培養(yǎng)時(shí)間7天。
培養(yǎng)基BKH2PO40.1-1％，Na2HPO40.05-1％，NH4Cl0.05-1％，NaCl0.1-1.0％，MgSO4·7H2O0.01-0.5％，KCl0.05-0.5％，F(xiàn)eCl20.001-0.01％，CaCl20.001-0.01％，MnCl20.001-0.01％，CuCl20.001-0.01％，ZnCl20.001-0.01％，酵母浸粉0.01-0.2％，牛肉膏0.01-0.2％，蛋白胨0.01-0.2％，液體石蠟0.5-2％或原油1-20％，Tween800.01-0.2％，Tween950.01-0.2％，羧酸鹽0.005-0.1％，pH6.8-7.5，121℃滅菌15-20Min。溫度35℃，搖床轉(zhuǎn)速120rpm，培養(yǎng)時(shí)間1天。
培養(yǎng)后得到發(fā)酵液A和發(fā)酵液B。
圖10是微生物發(fā)酵液-三元體系的界面張力的對(duì)比曲線圖。實(shí)驗(yàn)條件為微生物發(fā)酵液注入濃度為5％，然后注入活性劑(烷基苯磺酸鹽)0.1wt％，NaOH 0.6wt％，聚合物P(聚丙烯酰胺)0.1wt％組成的三元配方。實(shí)驗(yàn)用油、水為大慶采油三廠油水。
實(shí)驗(yàn)表明，在加入NaOH0.6wt％，磺酸鹽表面活性劑0.1wt％時(shí)發(fā)酵液配制的三元體系與作用原油界面張力較注入污水配制的三元體系界面張力要低一些。
實(shí)施例5微生物作用后與現(xiàn)有三元配方界面張力實(shí)驗(yàn)采用實(shí)施例4制備微生物發(fā)酵液A配制成濃度5％的稀釋液，注入油層，3天后，注入現(xiàn)有三元體系段塞(表面活性劑烷基苯磺酸鈉0.1％，NaOH 0.6％，聚丙烯酰胺1000PPm)，同時(shí)作參照實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖11所示，表明微生物發(fā)酵液A作用原油后界面張力明顯低于未作用原油，而空白發(fā)酵液與作用前后原油界面張力均很高在10-1mN/m以上。說明微生物在生長(zhǎng)過程中，利用原油生長(zhǎng)，并代謝出生物表面活性劑。而且原油粘度等物性變好的同時(shí)，檢測(cè)結(jié)果顯示，作用后原油酸值可由空白的0.01mgKOH/g升高到0.2mgKOH/g，堿與這部分含羧基物質(zhì)生成鹽類，對(duì)界面張力的降低也起到了一定的作用，因此作用后原油界面張力要低一些。
實(shí)施例6生物發(fā)酵液在不加入人工合成表活劑情況下界面張力實(shí)驗(yàn)發(fā)酵液A(實(shí)施例4制備)稀釋4倍(此時(shí)其濃度為25％)，加堿NaOH至0.8％，聚丙烯酰胺1000PPm，此時(shí)與微生物作用原油A間界面張力在2小時(shí)時(shí)可穩(wěn)定保持在10-3mN/m。而發(fā)酵液B在稀釋4倍(此時(shí)其濃度為25％)，加堿NaOH至1.0％；和發(fā)酵液稀釋6倍(此時(shí)其濃度為16.7％)，加堿NaOH至0.6％、0.8％時(shí)界面張力在2小時(shí)時(shí)可穩(wěn)定保持在10-3mN/m。界面張力圖見圖12a、12b、12c。
同時(shí)，從界面張力圖中可以看到，微生物作用前后原油界面張力存在一些差別，這種不同是由于微生物對(duì)原油物性的改變及微生物產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物與三元體系配伍性導(dǎo)致的。微生物作用后原油分子量發(fā)生變化，從原油全烴色譜圖可以知道作用后的分子量降低，而且原油粘度降低，這種物性改變的原油與微生物代謝產(chǎn)生的生物表面活性劑匹配，因此得到較低的界面張力。同時(shí)，檢測(cè)結(jié)果顯示，作用后原油酸值可由空白的0.01mgKOH/g升高到0.2KOHmg/g，堿與這部分含羧基物質(zhì)生成鹽類，對(duì)界面張力的降低也起到了一定的作用。
圖13a、13b、13c、13d為發(fā)酵液A、B稀釋2-10倍(其濃度變化為50％～10％)，堿NaOH至0.4％-1.2％時(shí)30分鐘、60分鐘和120分鐘的活性圖。從圖中可以看出，30分鐘時(shí)活性好于120分鐘，很多點(diǎn)動(dòng)態(tài)界面張力很好，但維持時(shí)間很短，在與人工合成的表活劑配伍時(shí)會(huì)充分注意并利用這一點(diǎn)。
實(shí)施例7物理模擬驅(qū)油實(shí)驗(yàn)采用天然巖心柱進(jìn)行室內(nèi)物理模擬驅(qū)油實(shí)驗(yàn)，分別驗(yàn)證下述兩個(gè)配方。原油為三廠聯(lián)合站原油，粘度19.9mPa·s。微生物菌液為實(shí)施例4制備的菌株HT、HP的發(fā)酵液。
配方一微生物作用后用菌液+表活劑配制的復(fù)合體系微生物作用后用菌液+S1表活劑配制的復(fù)合體系驅(qū)替。采用該配方主要為了降低成本。
注入方式模型水驅(qū)后，注入濃度5％的菌液(發(fā)酵液)0.3PV，45℃恒溫條件下放置3-5天，注入復(fù)合體系段塞0.3PV，后續(xù)聚合物保護(hù)段塞0.2PV。段塞組成復(fù)合體系為發(fā)酵液稀釋2倍(50wt％)+表活劑0.04％+1.0％堿+2500mg/L聚合物，后續(xù)為1800mg/L聚合物，其中，表活劑為烷基苯磺酸鈉，堿為氫氧化鈉，聚合物為大慶助劑廠產(chǎn)聚丙烯酰氨，分子量1300-1400萬，粘度57.6mPa·s。
使用配方一進(jìn)行室內(nèi)驅(qū)油實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表12所示，表明提高采收率幅度在19.5％--21.2％之間，平均提高采收率幅度為20.25％，與單獨(dú)三元復(fù)合體系驅(qū)油幅度相當(dāng)。使用該配方，價(jià)格昂貴的表活劑只需要0.04％，大大節(jié)約該項(xiàng)費(fèi)用支出。
表12配方一實(shí)驗(yàn)結(jié)果

配方二微生物作用后用現(xiàn)有三元配方驅(qū)替微生物作用后用現(xiàn)有三元配方驅(qū)替；采用該配方主要為了進(jìn)一步提高采收率。
注入方式模型水驅(qū)后，注入濃度5％的菌液0.3PV，45℃恒溫條件下放置3-5天，注入三元體系段塞0.3PV，后續(xù)聚合物保護(hù)段塞0.2PV。段塞組成表活劑0.2wt％+1.0％堿+2500mg/L聚合物，后續(xù)聚合物保護(hù)段塞為1800mg/L聚合物，表活劑為烷基苯磺酸鹽，堿為氫氧化鈉，聚合物為大慶助劑廠產(chǎn)聚丙烯酰氨，分子量1300-1400萬，粘度46.7mPa·s。
使用配方二進(jìn)行室內(nèi)驅(qū)油實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表13所示，表明提高采收率幅度在27.6％--30.2％之間，平均提高采收率幅度為29％，較單獨(dú)三元復(fù)合體系驅(qū)油幅度增加9％左右。
表13配方二實(shí)驗(yàn)結(jié)果

本發(fā)明通過以上實(shí)施例，說明利用HP、HT得到的微生物發(fā)酵液作用原油后，原油物性得到改善，作用后原油與現(xiàn)有三元配方界面張力較未作用原油降低。稀釋2-12倍微生物發(fā)酵液加入少量的烷基苯磺酸鹽表活劑S1(0.01wt％-0.04wt％)，界面張力可達(dá)到10-3mN/m，大大降低了成本，并具有較好的穩(wěn)定性。
室內(nèi)巖心驅(qū)油實(shí)驗(yàn)表明，在加入少量磺酸鹽表活劑(0.04％)的情況下，發(fā)酵液稀釋2倍，微生物作用后室內(nèi)天然巖心驅(qū)油提高采收率幅度平均在20.25％，與現(xiàn)有三元配方相當(dāng)；先注微生物，用現(xiàn)有三元配方驅(qū)替，提高采收率幅度平均在29％，比單獨(dú)三元復(fù)合體系驅(qū)油幅度增加9％左右。
權(quán)利要求
1.一種驅(qū)油方法，順序包括以下步驟1)將蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)HP，CGMCC №.1141，和短短芽孢桿菌(Brevibacillus brevis)HT，CGMCC №.1142中至少一株在以原油為碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到發(fā)酵液；2)將得到的發(fā)酵液注入油層中3至7天；3)用三元復(fù)配體系驅(qū)油。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述驅(qū)油方法，其特征在于所述步驟1)中培養(yǎng)基為培養(yǎng)基AK2HPO40.1％，NaH2PO40.2％，(NH4)2SO40.2％，CaCl2·2H2O 0.001％，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.001％，酵母0.1％，PH 7.0-7.2，碳源為10-20％原油；培養(yǎng)條件為溫度45℃，搖床轉(zhuǎn)速120rpm，培養(yǎng)時(shí)間7天。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述驅(qū)油方法，其特征在于所述步驟1)中培養(yǎng)基為培養(yǎng)基BKH2PO40.1-1％，Na2HPO40.05-1％，NH4Cl0.05-1％，NaCl0.1-1.0％，MgSO4·7H2O0.01-0.5％，KCl0.05-0.5％，F(xiàn)eCl20.001-0.01％，CaCl20.001-0.01％，MnCl20.001-0.01％，CuCl20.001-0.01％，ZnCl20.001-0.01％，酵母浸粉0.01-0.2％，牛肉膏0.01-0.2％，蛋白胨0.01-0.2％，液體石蠟0.5-2％或原油1-20％，吐溫800.01-0.2％，吐溫950.01-0.2％，羧酸鹽0.005-0.1％，pH6.8-7.5；培養(yǎng)條件為溫度30～45℃，搖床轉(zhuǎn)速120rpm，培養(yǎng)時(shí)間1～2天。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一所述驅(qū)油方法，其特征在于所述步驟2)中的注入油層的發(fā)酵液其濃度為1～5wt％，其中含有107-108個(gè)細(xì)胞/ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一所述驅(qū)油方法，其特征在于所述步驟3)中三元復(fù)配體系中各組分為步驟1)得到的發(fā)酵液10-50wt％，表活劑0-0.04wt％，堿0.4-1.2wt％以及聚合物0.25wt％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一所述驅(qū)油方法，其特征在于所述步驟3)中三元復(fù)配體系中各組分為表活劑 0.2wt％，堿 0.8-1.0wt％以及聚合物 0.25wt％。
7.一種微生物-三元復(fù)合驅(qū)油劑，包括如下組分微生物發(fā)酵液 10-50wt％，表活劑 0-0.04wt％，堿 0.4-l.2wt％以及聚合物 0.25wt％。其中，微生物發(fā)酵液為蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)HP，CGMCC №.1141，或短短芽孢桿菌(Brevibacillus brevis)HT，CGMCC №.1142菌種在以原油為碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到的發(fā)酵液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述微生物-三元復(fù)合驅(qū)油劑，其特征在于，所述培養(yǎng)基為培養(yǎng)基AK2HPO40.1％，NaH2PO40.2％，(NH4)2SO40.2％，CaCl2·2H2O 0.001％，F(xiàn)eSO4·7H2O0.001％，酵母0.1％，，PH 7.0-7.2，碳源為10-20％原油；培養(yǎng)條件為溫度45℃，搖床轉(zhuǎn)速120rpm，培養(yǎng)時(shí)間7天。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述微生物-三元復(fù)合驅(qū)油劑，其特征在于，所述培養(yǎng)基為培養(yǎng)基BKH2PO40.1-1％，Na2HPO40.05-1％，NH4Cl0.05-1％，NaCl0.1-1.0％，MgSO4·7H2O0.01-0.5％，KCl0.05-0.5％，F(xiàn)eCl20.001-0.01％，CaCl20.001-0.01％，MnCl20.001-0.01％，CuCl20.001-0.01％，ZnCl20.001-0.01％，酵母浸粉0.01-0.2％，牛肉膏0.01-0.2％，蛋白胨0.01-0.2％，液體石蠟0.5-2％或原油1-20％，吐溫800.01-0.2％，吐溫950.01-0.2％，羧酸鹽0.005-0.1％，pH6.8-7.5；培養(yǎng)條件為溫度30～45℃，搖床轉(zhuǎn)速120rpm，培養(yǎng)時(shí)間1～2天。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種驅(qū)油方法，順序包括以下步驟將蠟狀芽孢桿菌(Bacilluscereus)HP，CGMCC №.1141，和短短芽孢桿菌(Brevibacillus brevis)HT，CGMCC№.1142中至少一株在以原油為碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到發(fā)酵液；將得到的發(fā)酵液注入油層中3至5天；再用三元復(fù)配體系驅(qū)油。本發(fā)明利用HP、HT得到的微生物發(fā)酵液作用原油后，原油物性得到改善，作用后原油與現(xiàn)有三元配方界面張力較未作用原油降低，稀釋2－12倍微生物發(fā)酵液加入少量的烷基苯磺酸鹽表活劑S1(0.01wt％－0.04wt％)，界面張力可達(dá)到10－3mN/m，大大降低了成本，并具有較好的穩(wěn)定性。
文檔編號(hào)C12N11/00GK1580486SQ20041003805
公開日2005年2月16日 申請(qǐng)日期2004年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月17日
發(fā)明者侯兆偉, 伍曉林, 石梅, 韓培慧, 楊振宇 申請(qǐng)人:大慶油田有限責(zé)任公司