專利名稱：膠韌革菌10噸液體深層發(fā)酵培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食用菌發(fā)酵工業(yè)領(lǐng)域，特別是涉及膠韌革菌液體深層發(fā)酵培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
膠韌革菌[Gloeostereum incarnatum]，別名榆耳、榆磨。屬于擔(dān)子菌亞門、層菌綱、非褶菌目、伏革菌科、膠韌革菌屬。野生膠韌革菌主要分布于我國(guó)東北地區(qū)和日本北海道，遼寧省的鐵嶺、清原、新賓、本溪和撫順，吉林省的通化、渾江、撫松、長(zhǎng)白和安圖等，黑龍江省的東部山區(qū)是榆耳的主產(chǎn)區(qū)，新疆也有少量分布。膠韌革菌是著名的藥食兼用真菌。榆耳引入中藥已有悠久的歷史。明朝著名的醫(yī)藥學(xué)家李時(shí)珍所著《本草綱目》中載“榆耳八月采之”、“八月榆耳，以美酒漬曝，同青梁米、紫莧實(shí)蒸熟為末。每服三指撮，酒下，令人辟谷不饑?！蹦z韌革菌子實(shí)體營(yíng)養(yǎng)成分極為豐富。據(jù)中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生研究所分析，膠韌革菌主要含有蛋白質(zhì)、糖類、維生素E、維生素B1、維生素B2、鈣、磷、鐵、鋅等微量元素及谷氨酸、賴氨酸等人體所必需的各種氨基酸。發(fā)酵生產(chǎn)的菌絲體中各種功效成分的含量與子實(shí)體基本相同。
中國(guó)民間常把膠韌革菌水煎后，治療腸炎。欒恒淳、太龍杰等在1994第2期東北師大學(xué)報(bào)發(fā)表了“膠韌革菌(GloeostereumincarnatumS.ItoetImal)研究(I)——發(fā)酵產(chǎn)物體外抑菌作用的研究”的文章。論文闡述了膠韌革菌發(fā)酵液對(duì)人體致病菌的明顯抑制作用。
膠韌革菌野生資源極其稀少。人工栽培和液體深層發(fā)酵培養(yǎng)是獲得膠韌革菌的兩種有效方法，但人工栽培技術(shù)目前尚不成熟，不具備大規(guī)模種植的成熟技術(shù)。液體深層發(fā)酵培養(yǎng)是可以大量獲得膠韌革菌的一種有效方法，但目前只有實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的膠韌革菌液體深層發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)，液體深層培養(yǎng)技術(shù)仍處于試驗(yàn)室水平，太龍杰，欒恒淳，趙強(qiáng)等在1997第3期東北師大學(xué)報(bào)發(fā)表了“膠韌革菌(GloeostereumincarnatumS.ItoetImal)研究II——深層培養(yǎng)”的文章，文章報(bào)道了膠韌革菌實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的發(fā)酵法生產(chǎn)方法。但大規(guī)模工業(yè)化液體深層培養(yǎng)膠韌革菌的方法尚未見(jiàn)披露。由于工業(yè)化規(guī)模液體深層培養(yǎng)方法受到發(fā)酵設(shè)備和工藝參數(shù)的影響，其培養(yǎng)方法需要深入研究和實(shí)驗(yàn)才能得到。大規(guī)模培養(yǎng)膠韌革菌方法的缺乏影響了膠韌革菌良好功效的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明克服了目前膠韌革菌培養(yǎng)中缺乏大規(guī)模工業(yè)化培養(yǎng)方法的缺陷，本發(fā)明解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種大規(guī)模(10噸)膠韌革菌液體深層培養(yǎng)方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下(1)斜面菌種活化培養(yǎng)將保藏的膠韌革菌斜面菌種轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，22～28℃培養(yǎng)96～120小時(shí)左右，至菌絲長(zhǎng)滿斜面即可；最佳培養(yǎng)溫度25℃。
(2)一級(jí)種子培養(yǎng)將上述膠韌革菌斜面菌種挑取一塊接入裝有100毫升培養(yǎng)基的500毫升搖瓶中進(jìn)行一級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床80～180轉(zhuǎn)/分，22～28℃培養(yǎng)96～130小時(shí)左右；旋轉(zhuǎn)式搖床150轉(zhuǎn)/分為宜，培養(yǎng)溫度以25℃為宜。
(3)二級(jí)種子培養(yǎng)將一級(jí)搖瓶種子以5～20％接種量接入裝有100毫升培養(yǎng)基的500毫升搖瓶中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床80～180轉(zhuǎn)/分，22～28℃培養(yǎng)96～130小時(shí)左右；合適接種量為10％，旋轉(zhuǎn)式搖床150轉(zhuǎn)/分為宜，培養(yǎng)溫度以25℃為宜。
(4)三級(jí)種子培養(yǎng)將二級(jí)搖瓶種子以5～20％接種量接入裝有1000毫升培養(yǎng)基的5000毫升搖瓶中進(jìn)行三級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床80～180轉(zhuǎn)/分，22～28℃培養(yǎng)72～96小時(shí)；合適接種量為10％，旋轉(zhuǎn)式搖床100轉(zhuǎn)/分為宜，培養(yǎng)溫度以25℃為宜。
(5)一級(jí)種子罐培養(yǎng)以5～20％的接種量把三級(jí)種子接入裝有0.1噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為0.15噸的一級(jí)種子罐。培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度22～28℃，攪拌速度80～180轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.3～0.8，罐壓0.03～0.1Mpa，培養(yǎng)72～96小時(shí)；合適接種量為15％，最佳培養(yǎng)溫度25℃，最佳攪拌速度120轉(zhuǎn)/分，最佳通風(fēng)量(V/V)1∶0.6，最佳罐壓0.05Mpa。
(6)二級(jí)種子罐培養(yǎng)將一級(jí)種子罐的菌液以5～20％的接種量轉(zhuǎn)接入裝有1.0噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為1.5噸二級(jí)種子罐中，培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度22～28℃，攪拌速度80～180轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.3～0.8，罐壓0.03～0.1Mpa，培養(yǎng)72～96小時(shí)；合適接種量為15％，最佳培養(yǎng)溫度25℃，最佳攪拌速度120轉(zhuǎn)/分，最佳通風(fēng)量(V/V)1∶0.6，最佳罐壓0.05Mpa。
(7)發(fā)酵罐培養(yǎng)以5～20％的接種量將二級(jí)種子罐種子接入裝有10噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為15噸的發(fā)酵罐中。培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度22～28℃，攪拌速度80～180轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.3～0.8，罐壓0.03～0.1Mpa，培養(yǎng)150～200小時(shí)；合適接種量為15％，最佳培養(yǎng)溫度25℃，最佳攪拌速度120轉(zhuǎn)/分，最佳通風(fēng)量(V/V)1∶0.6，最佳罐壓0.05Mpa。
本發(fā)明中膠韌革菌的干菌絲體得率在1.5％～3.0％之間。
本發(fā)明菌絲體干重測(cè)定方法用離心機(jī)3000rpm 10分鐘離心分離發(fā)酵液，收集濕菌絲體，用無(wú)菌水離心洗滌2遍，將濕菌絲體于60-80℃恒溫干燥至恒重稱重即是菌絲體干重。
本發(fā)明菌絲體濕重測(cè)定方法用離心機(jī)3000rpm 10分鐘離心分離發(fā)酵液，收集濕菌絲體稱重即得。
本發(fā)明中膠韌革菌菌種購(gòu)于中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，菌號(hào)CICC14024。
本發(fā)明中斜面培養(yǎng)基組成可以為PDA斜面培養(yǎng)基或其他合適培養(yǎng)基。
本發(fā)明中種子和發(fā)酵培養(yǎng)碳源可以選擇葡萄糖、蔗糖、淀粉等常用原料，氮源可以選擇蛋白胨、脫脂大豆蛋白粉、豆餅粉、硫酸銨等；需要添加的無(wú)機(jī)鹽有磷酸二氫鉀，硫酸鎂，維生素添加維生素B1，培養(yǎng)基初始PH控制在6.0～7.0左右。
種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基組成相同，其比例為淀粉2～3％，蔗糖3～5％，葡萄糖1～3％，蛋白胨0.5％，脫脂大豆蛋白粉2～3％，磷酸二氫鉀0.13～0.2％，硫酸鎂0.1～0.15％，維生素B12PPm，PH6～7。
本發(fā)明中放罐條件為濕菌絲體含量為20％以上，發(fā)酵液由稀變稠，由渾濁變透明，pH值3.5～4.5左右即可。發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾操作即可獲得發(fā)酵清液和菌絲體。
本發(fā)明通過(guò)培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的反復(fù)試驗(yàn)，確定了膠韌革菌10噸發(fā)酵液液體深層發(fā)酵培養(yǎng)方法，膠韌革菌的干菌絲體得率在1.5％～3.0％之間。發(fā)明取得了良好的效果。為開(kāi)發(fā)加工膠韌革菌相關(guān)產(chǎn)品奠定了良好的基礎(chǔ)。
本發(fā)明方法適用于膠韌革菌屬其它菌種通過(guò)發(fā)酵法進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)。
具體實(shí)施例方式下面的實(shí)施例可以使本專業(yè)技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1(10噸發(fā)酵液)(1)斜面菌種活化培養(yǎng)將保藏的膠韌革菌斜面菌種轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)120小時(shí)，菌絲長(zhǎng)滿斜面；(2)一級(jí)種子培養(yǎng)將上述膠韌革菌斜面菌種挑取一塊接入裝有100毫升培養(yǎng)基的500毫升搖瓶中進(jìn)行一級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床80轉(zhuǎn)/分，25℃培養(yǎng)130小時(shí)。
(3)二級(jí)種子培養(yǎng)將一級(jí)搖瓶種子以5％接種量接入裝有100毫升培養(yǎng)基的500毫升搖瓶中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床80轉(zhuǎn)/分，25℃培養(yǎng)120小時(shí)。
(4)三級(jí)種子培養(yǎng)將二級(jí)搖瓶種子以5％接種量接入裝有1000毫升培養(yǎng)基的5000毫升搖瓶中進(jìn)行三級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床80轉(zhuǎn)/分，25℃培養(yǎng)96小時(shí)。
(5)一級(jí)種子罐培養(yǎng)以5％的接種量把三級(jí)種子接入裝有0.1噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為0.15噸的一級(jí)種子罐。培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度25℃，攪拌速度80轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.5，罐壓0.03Mpa，培養(yǎng)96小時(shí)。
(6)二級(jí)種子罐培養(yǎng)將一級(jí)種子罐的菌液以5％的接種量轉(zhuǎn)接入裝有1.0噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為1.5噸二級(jí)種子罐中，培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度25℃，攪拌速度80轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.5，罐壓0.03Mpa，培養(yǎng)96小時(shí)。
(7)發(fā)酵罐培養(yǎng)以5％的接種量將二級(jí)種子罐種子接入裝有10噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為15噸的發(fā)酵罐中。培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度25℃，攪拌速度80轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.3，罐壓0.03Mpa，培養(yǎng)200小時(shí)。
本例中斜面培養(yǎng)基組成為PDA斜面培養(yǎng)基。
本例中種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基組成為淀粉2％，蔗糖4％，葡萄糖2％，蛋白胨0.5％，脫脂大豆蛋白粉2.0％，磷酸二氫鉀0.2％，硫酸鎂0.1％，維生素B12PPm，PH6.0。
本例中膠韌革菌干菌絲體得率為2.5％。
實(shí)施例2(10噸發(fā)酵液)(1)斜面菌種活化培養(yǎng)將保藏的膠韌革菌斜面菌種轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，22℃培養(yǎng)120小時(shí)，菌絲長(zhǎng)滿斜面。
(2)一級(jí)種子培養(yǎng)將上述膠韌革菌斜面菌種挑取一塊接入裝有100毫升培養(yǎng)基的500毫升搖瓶中進(jìn)行一級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床150轉(zhuǎn)/分，25℃培養(yǎng)130小時(shí)。
(3)二級(jí)種子培養(yǎng)將二級(jí)搖瓶種子以10％接種量接入裝有100毫升培養(yǎng)基的500毫升搖瓶中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床100轉(zhuǎn)/分，25℃培養(yǎng)100小時(shí)。
(4)三級(jí)種子培養(yǎng)將二級(jí)搖瓶種子以10％接種量接入裝有1000毫升培養(yǎng)基的5000毫升搖瓶中進(jìn)行三級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床100轉(zhuǎn)/分，25℃培養(yǎng)72小時(shí)。
(5)一級(jí)種子罐培養(yǎng)以10％的接種量把三級(jí)種子接入裝有0.1噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為0.15噸的一級(jí)種子罐。培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度25℃，攪拌速度100轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.5，罐壓0.05Mpa，培養(yǎng)80小時(shí)。
(6)二級(jí)種子罐培養(yǎng)將一級(jí)種子罐的菌液以10％的接種量轉(zhuǎn)接入裝有1.0噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為1.5噸二級(jí)種子罐中，培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度25℃，攪拌速度100轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.3，罐壓0.05Mpa，培養(yǎng)80小時(shí)。
(7)發(fā)酵罐培養(yǎng)以10％的接種量將二級(jí)種子罐種子接入裝有10噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為15噸的發(fā)酵罐中。培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度25℃，攪拌速度100轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.5，罐壓0.05Mpa，培養(yǎng)180小時(shí)。
本例中斜面培養(yǎng)基組成為PDA斜面培養(yǎng)基。
本例中種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基組成為淀粉2％，蔗糖3％，葡萄糖2％，蛋白胨0.5％，脫脂大豆蛋白粉2.0％，磷酸二氫鉀0.2％，硫酸鎂0.1％，維生素B12PPm，PH6.0。
本例中膠韌革菌干菌絲體得率為1.5％。
實(shí)施例3(發(fā)酵液10噸)(1)斜面菌種活化培養(yǎng)將保藏的膠韌革菌斜面菌種轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)100小時(shí)，菌絲長(zhǎng)滿斜面；(2)一級(jí)種子培養(yǎng)將上述膠韌革菌斜面菌種挑取一塊接入裝有100毫升培養(yǎng)基的500毫升搖瓶中進(jìn)行一級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床120轉(zhuǎn)/分，25℃培養(yǎng)100小時(shí)。
(3)二級(jí)種子培養(yǎng)將一級(jí)搖瓶種子以15％接種量接入裝有100毫升培養(yǎng)基的500毫升搖瓶中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床150轉(zhuǎn)/分，25℃培養(yǎng)96小時(shí)。
(4)三級(jí)種子培養(yǎng)將二級(jí)搖瓶種子以15％接種量接入裝有1000毫升培養(yǎng)基的5000毫升搖瓶中進(jìn)行三級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床100轉(zhuǎn)/分，25℃培養(yǎng)96小時(shí)。
(5)一級(jí)種子罐培養(yǎng)以15％的接種量把三級(jí)種子接入裝有0.1噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為0.15噸的一級(jí)種子罐。培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度24℃，攪拌速度120轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.5，罐壓0.03Mpa，培養(yǎng)96小時(shí)。
(6)二級(jí)種子罐培養(yǎng)將一級(jí)種子罐的菌液以15％的接種量轉(zhuǎn)接入裝有1.0噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為1.5噸二級(jí)種子罐中，培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度25℃，攪拌速度120轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.5，罐壓0.03Mpa，培養(yǎng)96小時(shí)。
(7)發(fā)酵罐培養(yǎng)以15％的接種量將二級(jí)種子罐種子接入裝有10噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為15噸的發(fā)酵罐中。培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度25℃，攪拌速度120轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.3，罐壓0.03Mpa，培養(yǎng)160小時(shí)。
本例中斜面培養(yǎng)基組成為PDA斜面培養(yǎng)基。
本例中種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基組成為淀粉3％，蔗糖3％，葡萄糖2％，蛋白胨0.5％，脫脂大豆蛋白粉2.0％，磷酸二氫鉀0.15％，硫酸鎂0.1％，維生素B12PPm，PH6.0。
本例中膠韌革菌干菌絲體得率為2.0％。
實(shí)施例4(發(fā)酵液10噸)(1)斜面菌種活化培養(yǎng)將保藏的膠韌革菌斜面菌種轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)96小時(shí)左右，至菌絲長(zhǎng)滿斜面即可；最佳培養(yǎng)溫度28℃。
(2)一級(jí)種子培養(yǎng)將上述膠韌革菌斜面菌種挑取一塊接入裝有100毫升培養(yǎng)基的500毫升搖瓶中進(jìn)行一級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床180轉(zhuǎn)/分，28℃培養(yǎng)96小時(shí)左右。
(3)二級(jí)種子培養(yǎng)將一級(jí)搖瓶種子以20％接種量接入裝有100毫升培養(yǎng)基的500毫升搖瓶中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床80轉(zhuǎn)/分，28℃培養(yǎng)96小時(shí)左右。
(4)三級(jí)種子培養(yǎng)將二級(jí)搖瓶種子以20％接種量接入裝有1000毫升培養(yǎng)基的5000毫升搖瓶中進(jìn)行三級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床180轉(zhuǎn)/分，28℃培養(yǎng)72小時(shí)。
(5)一級(jí)種子罐培養(yǎng)以20％的接種量把三級(jí)種子接入裝有0.1噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為0.15噸的一級(jí)種子罐。培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度28℃，攪拌速度180轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.8，罐壓0.1Mpa，培養(yǎng)72小時(shí)。
(6)二級(jí)種子罐培養(yǎng)將一級(jí)種子罐的菌液以20％的接種量轉(zhuǎn)接入裝有1.0噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為1.5噸二級(jí)種子罐中，培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度28℃，攪拌速度180轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.8，罐壓0.1Mpa，培養(yǎng)72小時(shí)。
(7)發(fā)酵罐培養(yǎng)以20％的接種量將二級(jí)種子罐種子接入裝有10噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為15噸的發(fā)酵罐中。培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度28℃，攪拌速度180轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.8，罐壓0.1Mpa，培養(yǎng)150小時(shí)。
本例中斜面培養(yǎng)基組成可以為PDA斜面培養(yǎng)基。
本例中種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基組成為淀粉2％，蔗糖4％，葡萄糖2％，蛋白胨0.5％，脫脂大豆蛋白粉2.0％，磷酸二氫鉀0.15％，硫酸鎂0.1％，維生素B12PPm，PH6.0。
本例中膠韌革菌干菌絲體得率為2.4％。
實(shí)施例5(發(fā)酵液10噸)(1)斜面菌種活化培養(yǎng)將保藏的膠韌革菌斜面菌種轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，22℃培養(yǎng)120小時(shí)左右，至菌絲長(zhǎng)滿斜面即可；(2)一級(jí)種子培養(yǎng)將上述膠韌革菌斜面菌種挑取一塊接入裝有100毫升培養(yǎng)基的500毫升搖瓶中進(jìn)行一級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床150轉(zhuǎn)/分，22℃培養(yǎng)130小時(shí)左右；(3)二級(jí)種子培養(yǎng)將一級(jí)搖瓶種子以20％接種量接入裝有100毫升培養(yǎng)基的500毫升搖瓶中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床100轉(zhuǎn)/分，22℃培養(yǎng)96小時(shí)左右；(4)三級(jí)種子培養(yǎng)將二級(jí)搖瓶種子以20％接種量接入裝有1000毫升培養(yǎng)基的5000毫升搖瓶中進(jìn)行三級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床130轉(zhuǎn)/分，22℃培養(yǎng)80小時(shí)；(5)一級(jí)種子罐培養(yǎng)以20％的接種量把三級(jí)種子接入裝有0.1噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為0.15噸的一級(jí)種子罐。培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度22℃，攪拌速度80轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.8，罐壓0.1Mpa，培養(yǎng)80小時(shí)；(6)二級(jí)種子罐培養(yǎng)將一級(jí)種子罐的菌液以20％的接種量轉(zhuǎn)接入裝有1.0噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為1.5噸二級(jí)種子罐中，培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度22℃，攪拌速度80轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.8，罐壓0.06Mpa，培養(yǎng)96小時(shí)；(7)發(fā)酵罐培養(yǎng)以15％的接種量將二級(jí)種子罐種子接入裝有10噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為15噸的發(fā)酵罐中。培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度22℃，攪拌速度120轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.4，罐壓0.05Mpa，培養(yǎng)180小時(shí)；本例中斜面培養(yǎng)基組成可以為PDA斜面培養(yǎng)基或其他合適培養(yǎng)基。
本例中種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基組成為淀粉2％，蔗糖5％，葡萄糖1％，蛋白胨0.5％，脫脂大豆蛋白粉3.0％，磷酸二氫鉀0.15％，硫酸鎂0.15％，維生素B12PPm，PH7.0。
本例中膠韌革菌干菌絲體得率為1.7％。
實(shí)施例6(發(fā)酵液10噸)(1)斜面菌種活化培養(yǎng)將保藏的膠韌革菌斜面菌種轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，26℃培養(yǎng)96小時(shí)左右，至菌絲長(zhǎng)滿斜面即可。
(2)一級(jí)種子培養(yǎng)將上述膠韌革菌斜面菌種挑取一塊接入裝有100毫升培養(yǎng)基的500毫升搖瓶中進(jìn)行一級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床130轉(zhuǎn)/分，26℃培養(yǎng)90小時(shí)左右；(3)二級(jí)種子培養(yǎng)將一級(jí)搖瓶種子以10％接種量接入裝有100毫升培養(yǎng)基的500毫升搖瓶中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床140轉(zhuǎn)/分，26℃培養(yǎng)96小時(shí)左右；(4)三級(jí)種子培養(yǎng)將二級(jí)搖瓶種子以10％接種量接入裝有1000毫升培養(yǎng)基的5000毫升搖瓶中進(jìn)行三級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床100轉(zhuǎn)/分，26℃培養(yǎng)72小時(shí)；(5)一級(jí)種子罐培養(yǎng)以10％的接種量把三級(jí)種子接入裝有0.1噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為0.15噸的一級(jí)種子罐。培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度26℃，攪拌速度150轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.4，罐壓0.06Mpa，培養(yǎng)86小時(shí)；(6)二級(jí)種子罐培養(yǎng)將一級(jí)種子罐的菌液以10％的接種量轉(zhuǎn)接入裝有1.0噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為1.5噸二級(jí)種子罐中，培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度26℃，攪拌速度130轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.5，罐壓0.06Mpa，培養(yǎng)96小時(shí)；(7)發(fā)酵罐培養(yǎng)以10％的接種量將二級(jí)種子罐種子接入裝有10噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為15噸的發(fā)酵罐中。培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度26℃，攪拌速度120轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.6，罐壓0.08Mpa，培養(yǎng)150小時(shí)。
本例中斜面培養(yǎng)基組成為PDA斜面培養(yǎng)基。
本例中種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基組成為淀粉3％，蔗糖3％，葡萄糖3％，蛋白胨0.5％，脫脂大豆蛋白粉3.0％，磷酸二氫鉀0.13％，硫酸鎂0.10％，維生素B12PPm，PH7.0。
本例中膠韌革菌干菌絲體得率為3.0％。
權(quán)利要求
1.一種膠韌革菌10噸液體深層發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征在于包括如下步驟(1)斜面菌種活化培養(yǎng)將保藏的膠韌革菌斜面菌種轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，22～28℃培養(yǎng)96～120小時(shí)左右，至菌絲長(zhǎng)滿斜面即可；(2)一級(jí)種子培養(yǎng)將上述膠韌革菌斜面菌種挑取一塊接入裝有100毫升培養(yǎng)基的500毫升搖瓶中進(jìn)行一級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床80～180轉(zhuǎn)/分，22～28℃培養(yǎng)96～130小時(shí)左右；(3)二級(jí)種子培養(yǎng)將一級(jí)搖瓶種子以5～20％接種量接入裝有100毫升培養(yǎng)基的500毫升搖瓶中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床80～180轉(zhuǎn)/分，22～28℃培養(yǎng)96～130小時(shí)；(4)三級(jí)種子培養(yǎng)將二級(jí)搖瓶種子以5～20％接種量接入裝有1000毫升培養(yǎng)基的5000毫升搖瓶中進(jìn)行三級(jí)種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床80～180轉(zhuǎn)/分，22～28℃培養(yǎng)72～96小時(shí)；(5)一級(jí)種子罐培養(yǎng)以5～20％的接種量把三級(jí)種子接入裝有0.1噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為0.15噸的一級(jí)種子罐。培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度22～28℃，攪拌速度80～180轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.3～0.8，罐壓0.03～0.1Mpa，培養(yǎng)72～96小時(shí)；(6)二級(jí)種子罐培養(yǎng)將一級(jí)種子罐的菌液以5～20％的接種量轉(zhuǎn)接入裝有1.0噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為1.5噸二級(jí)種子罐中，培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度22～28℃，攪拌速度80～180轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.3～0.8，罐壓0.03～0.1Mpa，培養(yǎng)72～96小時(shí)；(7)發(fā)酵罐培養(yǎng)以5～20％的接種量將二級(jí)種子罐種子接入裝有10噸發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為15噸的發(fā)酵罐中。培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度22～28℃，攪拌速度80～180轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1∶0.3～0.8，罐壓0.03～0.1Mpa，培養(yǎng)150～200小時(shí)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種膠韌革菌10噸液體深層發(fā)酵培養(yǎng)方法，其中種子和發(fā)酵培養(yǎng)基碳源為葡萄糖、蔗糖和淀粉，氮源為蛋白胨、脫脂大豆蛋白粉、豆餅粉和硫酸銨；無(wú)機(jī)鹽為磷酸二氫鉀，硫酸鎂。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種膠韌革菌10噸液體深層發(fā)酵培養(yǎng)方法，其中種子和發(fā)酵培養(yǎng)基組成相同，其比例為淀粉2～3％，蔗糖3～5％，葡萄糖1～3％，蛋白胨0.5％，脫脂大豆蛋白粉2～3％，磷酸二氫鉀0.13～0.2％，硫酸鎂0.1～0.15％，維生素B12PPm，PH6～7。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種膠韌革菌10噸液體深層發(fā)酵培養(yǎng)方法，其中培養(yǎng)溫度為25℃。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了膠韌革菌10噸液體深層發(fā)酵培養(yǎng)方法，本發(fā)明屬于食用菌發(fā)酵工業(yè)領(lǐng)域，特別是涉及膠韌革菌液體深層發(fā)酵培養(yǎng)方法。本發(fā)明的技術(shù)方案包括(1)斜面菌種活化培養(yǎng)，(2)一級(jí)種子培養(yǎng)，(3)二級(jí)種子培養(yǎng)，(4)三級(jí)種子培養(yǎng)，(5)一級(jí)種子罐培養(yǎng)，(6)二級(jí)種子罐培養(yǎng)，(7)發(fā)酵罐培養(yǎng)；本發(fā)明中種子和發(fā)酵培養(yǎng)碳源為葡萄糖、蔗糖、淀粉等常用原料，氮源為蛋白胨、脫脂大豆蛋白粉、豆餅粉、硫酸銨等；需要添加的無(wú)機(jī)鹽有磷酸二氫鉀，硫酸鎂，維生素需添加維生素B1。本發(fā)明確定了膠韌革菌10噸發(fā)酵液液體深層發(fā)酵培養(yǎng)方法，為開(kāi)發(fā)加工膠韌革菌相關(guān)產(chǎn)品奠定了良好的基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)C12M1/00GK1724634SQ20041006906
公開(kāi)日2006年1月25日 申請(qǐng)日期2004年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月19日
發(fā)明者蔡永峰, 岳國(guó)海, 李績(jī), 程池, 黃宇彤 申請(qǐng)人:中國(guó)食品發(fā)酵工業(yè)研究院