專利名稱：活體分枝桿菌快速鑒定試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物醫(yī)學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種快速鑒定活體分枝桿菌的試劑盒。
背景技術(shù)：
分枝桿菌是一類廣泛分布于自然界的細(xì)菌，多數(shù)為腐生菌，少數(shù)可使人和動(dòng)物致病。近年來，國內(nèi)外普遍報(bào)道分支桿菌的感染日益嚴(yán)重，特別是免疫功能低下患者繼發(fā)感染、以及醫(yī)院內(nèi)感染的暴發(fā)流行顯著增加。通常能引起人類感染的分枝桿菌主要有恥垢、堪薩斯、鳥、胞內(nèi)、偶然、結(jié)核、龜、膿腫、海、潰瘍、瘰疬等，它們可以引起人體各個(gè)器官及全身各部位的嚴(yán)重感染，給人體健康帶來極大危害。由于細(xì)菌學(xué)檢查是診斷分枝桿菌所致疾病的確診依據(jù)，因此快速準(zhǔn)確的分枝桿菌活體檢查極為重要。
目前，傳統(tǒng)的分支桿菌活體檢查方法就是細(xì)菌培養(yǎng)。通常是將待檢標(biāo)本接種至改良羅氏培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，待菌落生長后再依據(jù)生物學(xué)特征及生化反應(yīng)多項(xiàng)指標(biāo)綜合判斷。這種鑒定方法通常需時(shí)1-4周，而且操作煩瑣、準(zhǔn)確性差，因此遠(yuǎn)不能滿足臨床診治的需要。急需建立快速、簡便、準(zhǔn)確的分支桿菌活體鑒定方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種能快速、簡便、準(zhǔn)確地鑒定分枝桿菌活體的試劑盒。
本發(fā)明提出的鑒定分枝桿菌活體的試劑盒，由下述組份組成(1)前處理液為一種含有氯化鈣、氯化鎂和廣譜抗生素的分枝桿菌液體培養(yǎng)基；(2)分枝桿菌病毒體為一種從污水中分離的能感染高濃度活體分枝桿菌的病毒，能被感染的分枝桿菌有丁酸、偶然、胞內(nèi)、金色、恥垢、膿腫、結(jié)核、龜、草分枝桿菌等；(3)稀釋劑為1-3％的硫酸溶液；(4)指示平皿為含有快速生長菌的瓊脂平皿。
本發(fā)明中，前處理液的分枝桿菌液體培養(yǎng)基可采用市售的米氏7H9培養(yǎng)基，其中氯化鈣、氯化鎂和廣譜抗生素的配比關(guān)系為在1000ml米氏7H9培養(yǎng)基中，氯化鈣1-2克，氯化鎂1-2克，廣譜抗生素75-150克(例如氨芐青霉素25-50克，二性霉素B25-50克，阿洛西林25-50克等)。
本發(fā)明中，指示平皿中所含的快速生長菌可以是草分枝桿菌或金色分枝桿菌液。
本發(fā)明提出快速鑒定分枝桿菌活體的試劑盒的使用方法如下(1)將待檢分枝桿菌處于感染態(tài)狀態(tài)，并被分枝桿菌病毒體感染；
(2)將感染物經(jīng)離心、洗滌，沉淀移至指示平皿上溫育；(3)根據(jù)指示平皿細(xì)菌裂解情況判定結(jié)果。
本發(fā)明采用污水中分離的分枝桿菌病毒體，并與前處理液、稀釋液和指示平皿一起組成活體分枝桿菌快速鑒定試劑盒。該發(fā)明的原理是通過制備感受態(tài)細(xì)胞方式，將待檢菌株處于易感狀態(tài)，并被分枝桿菌病毒體感染，病毒體在感染菌中增殖、并將感染菌裂解，釋放出的病毒體立即感染指示平皿中的指示菌、并使其裂解，在指示平皿上出現(xiàn)肉眼可見的透亮圈。如待檢樣品不含活體分枝桿菌，則分枝桿菌病毒體隨上清液的丟棄和硫酸作用而失活，指示菌未受病毒體感染，因此指示平皿不會(huì)出現(xiàn)透明圈。
由于處于感受態(tài)的活體分枝桿菌易被相應(yīng)的病毒體感染，而且指示菌生長快速、結(jié)果容易觀察，因此本法快速、簡便，非常適用于基層衛(wèi)生部門。同時(shí)只有活菌才能被病毒體感染，而且感染結(jié)果是將活菌裂解，因此本法既可鑒定活體分枝桿菌，又可保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員免受感染。
具體實(shí)施例方式
1.前處理液的配制在1000毫升市售的米氏7H9培養(yǎng)基中，分別加入氯化鈣1～2克、氯化鎂1～2克、氨芐青霉素25～50克、二性霉素B 25～50克、阿洛西林25～50克，無菌濾膜過濾后即為前處理液。
2.指示平皿的制備取1.5～3％濃度的熔化瓊脂6～8毫升，加入到市售的一次性無菌平皿中，再加入6～8毫升的液體培養(yǎng)基和1～2毫升的快速生長的草分枝桿菌或金色分枝桿菌菌液，混勻、凝集成型后即為指示平皿。
3.活體分枝桿菌的快速鑒定方法(1)在待檢樣品(污水、藥液、食物、工作人員的手、珍療器械等的浸泡液或可疑患者的膿、血、便、尿、痰、穿刺液、分泌物等)中加入10～20毫升的前處理液，在每分鐘8000～10000轉(zhuǎn)的條件下離心5～10分鐘；(2)取出待檢樣品管，棄去上清，沉淀中再次加入10～20毫升的前處理液，在每分鐘8000～10000轉(zhuǎn)的條件下離心5～10分鐘；(3)取出待檢樣品管，棄去上清，吸取沉淀0.1～0.2毫升加入到含有分枝桿菌病毒體的1毫升反應(yīng)管中，35-38℃溫育50-70分鐘；(4)吸取1毫升稀釋劑加入到上述反應(yīng)管中，混勻，在每分鐘5000-6000轉(zhuǎn)的條件下離心5-10分鐘，棄去上清；(5)吸取沉淀30～50微升，滴于指示平皿上的某一區(qū)域，35～38℃培養(yǎng)15～20小時(shí)觀察結(jié)果；
(6)結(jié)果判斷在指示平皿上的滴樣區(qū)域出現(xiàn)全透或半透明圈，表明待檢樣品中存在活體分枝桿菌，反之為不存在活體分枝桿菌。
權(quán)利要求
1.一種快速鑒定活體分枝桿菌的試劑盒，其特征在于由下列成份組成(1)前處理液為一種含有氯化鈣、氯化鎂和廣譜抗生素的分枝桿菌液體培養(yǎng)基；(2)分枝桿菌病毒體為一種從污水中分離的能感染高濃度活體分枝桿菌的病毒；(3)稀釋劑為1-3％的硫酸溶液；(4)指示平皿為含有快速生長菌的瓊脂平皿。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速鑒定活體分枝桿菌的試劑盒，其特征在于所述前處理液的分枝桿菌液體培養(yǎng)基采用市售的米氏7H9培養(yǎng)基，其中氯化鈣、氯化鎂和廣譜抗生素的配比關(guān)系為在1000ml米氏7H9培養(yǎng)基中，氯化鈣1-2克，氯化鎂1-2克，廣譜抗生素75-150克。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速鑒定活體分枝桿菌的試劑盒，其特征在于所述指示平皿中的生長菌為草分枝桿菌或金色分枝桿菌。
4.一種權(quán)利要求1所述的快速鑒定活體分枝桿菌試劑盒的使用方法，其特征在于具體步驟如下(1)將待檢分枝桿菌處于感染態(tài)狀態(tài)，并被分枝桿菌病毒體感染；(2)將感染物經(jīng)離心、洗滌，沉淀移至指示平皿上溫育；(3)根據(jù)指示平皿細(xì)菌裂解情況判定結(jié)果。
全文摘要
本發(fā)明屬生物醫(yī)學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體分析為一種快速鑒定活體分枝桿菌的試劑盒。該試劑盒由前處理液、分枝桿菌病毒體、稀釋劑和指示平皿所組成?？稍?4小時(shí)內(nèi)即可鑒定待檢樣品中是否存在活體分枝桿菌?？捎糜诟鞣N待檢樣品中的活體分枝桿菌檢測。本試劑盒操作簡便、不需特殊儀器設(shè)備，結(jié)果觀察容易，非常適合基層衛(wèi)生單位應(yīng)用。
文檔編號C12Q1/04GK1699591SQ20051002561
公開日2005年11月23日 申請日期2005年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月29日
發(fā)明者胡忠義, 倪蓮娣, 靳安佳, 崔振玲, 王潔 申請人:上海市肺科醫(yī)院