專利名稱：一種適用于秈稻離體培養(yǎng)的分化培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于新植物技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種秈稻的離體培養(yǎng)方法，更具體地說，涉及到秈稻愈傷組織繼代和分化培養(yǎng)基的改良及其在秈稻離體培養(yǎng)和轉(zhuǎn)基因中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
培養(yǎng)基是植物離體培養(yǎng)方法的關(guān)鍵，任何植物離體培養(yǎng)方法的建立都主要是圍繞培養(yǎng)基的篩選來進(jìn)行。植物離體培養(yǎng)是室內(nèi)人工模擬植物自然生長的過程，不同物種有不同的生長條件和環(huán)境，因此，可以想象，設(shè)計(jì)一種適合所有物種組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基是不可能實(shí)現(xiàn)的，每種培養(yǎng)基都有其最適的物種甚至基因型范圍。眾所周知，目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用的幾種經(jīng)典培養(yǎng)基，由于其組分含量不同。其作用和效果也不相同。B5培養(yǎng)基(Gamborg OL等，1968.Nutrient requirements of suspension culture of soybean roots cells.Exp Cell Res，50150-158)主要適用于十字花科植物的離體培養(yǎng)；N6培養(yǎng)基(Chu CC等.1975.Establishment of an efficientmedium for anther culture of rice through comparative experiments on the nitrogen sources.ScientiaSinica，18659-668)主要適合于粳稻的組織培養(yǎng)；MS培養(yǎng)基(Murashige T，Skoog F.1962.Arevised medium for rapid growth and bioassays with tobacco cultures.Plant Physiol，15473-493)使煙草、番茄、馬鈴薯等茄科植物的離體培養(yǎng)變得十分容易和方便。這些培養(yǎng)基被稱為植物組織培養(yǎng)的常用培養(yǎng)基而被沿用至今。
上述這些經(jīng)典培養(yǎng)基的組成一般是由基本培養(yǎng)基和附加成分組成，其中基本培養(yǎng)基主要包括無機(jī)鹽(大量元素和微量元素)，維生素、甘氨酸和肌醇等有機(jī)營養(yǎng)成份，碳源等。植物激素和有機(jī)添加物，則是根據(jù)不同的培養(yǎng)目的、不同的培養(yǎng)對象和不同的培養(yǎng)時(shí)期進(jìn)行調(diào)整的。對基本培養(yǎng)基的部分成分進(jìn)行調(diào)整的培養(yǎng)基稱為改良的基本培養(yǎng)基，如改良的MS、改良的B5培養(yǎng)基等等。
至今，在秈稻品種離體培養(yǎng)過程中，愈傷組織不耐繼代以及繼代后愈傷組織難以分化仍是很突出的問題，這也是秈稻成為轉(zhuǎn)基因的遺難物種的主要原因。因?yàn)楝F(xiàn)在用于植物轉(zhuǎn)基因的任何成熟方法都是建立在植物離體培養(yǎng)方法基礎(chǔ)之上，且需要一個(gè)較長時(shí)間的抗性愈傷的篩選和繼代過程。目前，絕大多數(shù)關(guān)于秈稻品種離體培養(yǎng)過程中的愈傷組織繼代和分化報(bào)道試驗(yàn)都是采用MS或N6培養(yǎng)基進(jìn)行的，但使用這類培養(yǎng)基效果非常不能令人滿意。主要問題是現(xiàn)有的繼代的的愈傷組織生長速度很慢，而且愈傷組織的褐化嚴(yán)重，不能連續(xù)繼代培養(yǎng)，從而導(dǎo)致整個(gè)試驗(yàn)失敗。因此，篩選適合秈稻愈傷組織繼代和分化的培養(yǎng)基，從而建立一種秈稻品種的離體培養(yǎng)方法對于秈稻的組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)基因研究及其應(yīng)用具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于建立一種秈稻離體培養(yǎng)的方法，篩選適合于秈稻離體培養(yǎng)用的愈傷組織繼代和分化培養(yǎng)基，這種新的培養(yǎng)方法和培養(yǎng)基，能夠廣泛地適應(yīng)于離體條件下的秈稻組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)基因的應(yīng)用。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種秈稻離體培養(yǎng)的方法，其步驟包括1)將去殼的成熟種子、幼胚或花藥的秈稻外植體，置于75％酒精中清洗1分鐘，0.15％升汞浸泡10-15分鐘，無菌水漂洗，接入MS+2，4-D 2.5mg/L+谷氨酰胺300mg/L+脯氨酸500mg/L+3-5％蔗糖+0.3％植物膠(Phytagel)的培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基的pH為5.9，培養(yǎng)條件為26±1℃，暗培養(yǎng)，將所述的外植體誘導(dǎo)出愈傷組織；2)將步驟1)所得到的愈傷組織接入繼代培養(yǎng)基(編號為J3)培養(yǎng)，該培養(yǎng)基的組分為KNO31900-2000mg/L，NH4NO31500-1650mg/L，KH2PO4150-170mg/L，MgSO4·7H2O350-370mg/L，CaCl2·2H2O 350-400mg/L，F(xiàn)eSO4·7H2O 35-42mg/L，Na2EDTA 50-56mg/L，MnSO4·4H2O 80-100mg/L，ZnSO4·7H2O 15-25mg/L，H3BO325-30mg/L，KI 6.0-8.0mg/L，CuSO4·5H2O 0.2-0.3mg/L，Na2MoO4·2H2O 2.0-3.0mg/L，CoCl2·6H2O 0.2-0.3mg/L，甘氨酸2.0-3.0mg/L，VB10.5-1.0mg/L，VB61.0-1.5mg/L，煙酸1.0-1.5mg/L，肌醇100-150mg/L，谷氨酰胺300-500mg/L，脯氨酸500-800mg/L，2，4-D 2.0-3.0mg/L，麥芽糖30g/L，植物膠3.0g/L，pH為5.9，培養(yǎng)條件為26±1℃，暗培養(yǎng)，每隔20天繼代一次；3)取步驟2)所得到的繼代愈傷組織接入分化培養(yǎng)基(編號為DL3)，該培養(yǎng)基的組分如下KNO32800-3000mg/L，(NH4)2SO4350-450mg/L，KH2PO4300-400mg/L，MgSO4·7H2O180-200mg/L，CaCl2·2H2O 170-200mg/L，F(xiàn)eSO4·7H2O 45-55mg/L，60-74mg/L Na2EDTA，MnSO4·4H2O 80-100mg/L，ZnSO4·7H2O 15-25mg/L，H3BO325-30mg/L，KI 6.0-8.0mg/L，CuSO4·5H2O 0.2-0.3mg/L，Na2MoO4·2H2O 2.0-3.0mg/L，CoCl2·6H2O 0.2-0.3mg/L，甘氨酸2.0-3.0mg/L，VB10.5-1.0mg/L，VB61.0-1.5mg/L，煙酸1.0-1.5mg/L，肌醇100-150mg/L，谷氨酰胺300-500mg/L，脯氨酸500-800mg/L，麥芽糖30-50g/L，6-芐基氨基嘌呤2mg/L，激動(dòng)素2mg/L，吲哚乙酸0.2mg/L，萘乙酸0.2mg/L，植物膠5g/L，pH為6.0，培養(yǎng)條件為26±1℃，光照培養(yǎng)(16小時(shí)光/8小時(shí)暗)，再生出植株。
一種用于離體培養(yǎng)的秈稻愈傷組織繼代培養(yǎng)基(編號為J3)，其組分如下
KNO31900-2000mg/L，NH4NO31500-1650mg/L，KH2PO4150-170mg/L，MgSO4·7H2O350-370mg/L，CaCl2·2H2O 350-400mg/L，F(xiàn)eSO4·7H2O 35-42mg/L，Na2EDTA 50-56mg/L，MnSO4·4H2O 80-100mg/L，ZnSO4·7H2O 15-25mg/L，H3BO325-30mg/L，KI 6.0-8.0mg/L，CuSO4·5H2O 0.2-0.3mg/L，Na2MoO4·2H2O 2.0-3.0mg/L，CoCl2·6H2O 0.2-0.3mg/L，甘氨酸2.0-3.0mg/L，VB10.5-1.0mg/L，VB61.0-1.5mg/L，煙酸1.0-1.5mg/L，肌醇100-150mg/L，谷氨酰胺300-500mg/L，脯氨酸500-800mg/L，2，4-D 2.0-3.0mg/L，麥芽糖30g/L，植物膠3.0g/L。
一種用于離體培養(yǎng)的秈稻愈傷組織分化培養(yǎng)基(編號為DL3)，其組分如下KNO32800-3000mg/L，(NH4)2SO4350-450mg/L，KH2PO4300-400mg/L，MgSO4·7H2O180-200mg/L，CaCl2·2H2O 170-200mg/L，F(xiàn)eSO4·7H2O 45-55mg/L，60-74mg/L Na2EDTA，MnSO4·4H2O 80-100mg/L，ZnSO4·7H2O 15-25mg/L，H3BO325-30mg/L，KI 6.0-8.0mg/L，CuSO4·5H2O 0.2-0.3mg/L，Na2MoO4·2H2O 2.0-3.0mg/L，CoCl2·6H2O 0.2-0.3mg/L，甘氨酸2.0-3.0mg/L，VB10.5-1.0mg/L，VB61.0-1.5mg/L，煙酸1.0-1.5mg/L，肌醇100-150mg/L，谷氨酰胺300-500mg/L，脯氨酸500-800mg/L，麥芽糖30-50g/L，6-芐基氨基嘌呤2mg/L，激動(dòng)素2mg/L，吲哚乙酸0.2mg/L，萘乙酸0.2mg/L，植物膠5g/L。
本發(fā)明的方法可應(yīng)用于秈稻組織培養(yǎng)或轉(zhuǎn)基因上。
本發(fā)明的秈稻愈傷組織繼代培養(yǎng)基和/或分化培養(yǎng)基，可應(yīng)用于秈稻組織培養(yǎng)或轉(zhuǎn)基因上。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于利用生產(chǎn)上廣泛種植的、基因型差異較大的四個(gè)秈稻品種如明恢63(一種秈稻三系恢復(fù)系)、珍汕97B(一種秈稻三系保持系)、中419(一種秈稻三系或兩系恢復(fù)系)和W9864S(一種秈稻兩系不育系)為試驗(yàn)材料，以現(xiàn)有的經(jīng)典培養(yǎng)基做平行對比試驗(yàn)，篩選得到的秈稻愈傷組織繼代培養(yǎng)基和分化培養(yǎng)基以及由此建立的秈稻離體培養(yǎng)方法，具有廣泛的針對性和適用性，可用于大多數(shù)秈稻品種的組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)基因的研究與應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1秈稻愈傷組織繼代培養(yǎng)基的篩選試驗(yàn)設(shè)計(jì)共分兩部分1、用MS、N6、B5和N6B(該培養(yǎng)基為N6的大量營養(yǎng)成分和B5的微量和有機(jī)營養(yǎng)成分)四種最常用的基本培養(yǎng)基(參見表5所示)為基礎(chǔ)，設(shè)置1倍(以X表示，下同)、2X，與蔗糖、麥芽糖兩種碳源組合成16種培養(yǎng)基；2、以MS大量營養(yǎng)元素為基礎(chǔ)，麥芽糖為碳源，設(shè)置MS、N6、B5的微量元素，每種微量元素設(shè)1X、2X、5X、10X四個(gè)水平，F(xiàn)e2+設(shè)1X、1.5X、3X、5X四個(gè)梯度組合成48種培養(yǎng)基。將設(shè)計(jì)的共64種培養(yǎng)基分別接種秈稻愈傷組織進(jìn)行繼代，每種培養(yǎng)基分別接愈傷組織5瓶。在26±1℃下暗培養(yǎng)20天。通過觀察比較各種培養(yǎng)基上的愈傷組織的生長情況(生長速度、質(zhì)地和顏色)，篩選出適合秈稻離體愈傷組織的繼代培養(yǎng)基(編號為J3)。該培養(yǎng)基的組分如下KNO31900-2000mg/L，NH4NO31500-1650mg/L，KH2PO4150-170mg/L，MgSO4·7H2O 350-370mg/L，CaCl2·2H2O350-400mg/L，F(xiàn)eSO4·7H2O 35-42mg/L，Na2EDTA 50-56mg/L，MnSO4·4H2O 80-100mg/L，ZnSO4·7H2O 15-25mg/L，H3BO325-30mg/L，KI 6.0-8.0mg/L，CuSO4·5H2O 0.2-0.3mg/L，Na2MoO4·2H2O 2.0-3.0mg/L，CoCl2·6H2O 0.2-0.3mg/L，甘氨酸2.0-3.0mg/L，VB10.5-1.0mg/L，VB61.0-1.5mg/L，煙酸1.0-1.5mg/L，肌醇100-150mg/L，谷氨酰胺300-500mg/L，脯氨酸500-800mg/L，2，4-D 2.0-3.0mg/L，麥芽糖30g/L，植物膠3.0g/L，pH為5.9。
實(shí)施例2秈稻愈傷組織繼代效果的比較試驗(yàn)試驗(yàn)采用中國目前生產(chǎn)上廣泛種植的、基因型差異較大的并具有代表性的四個(gè)秈稻品種明恢63(一種秈稻三系恢復(fù)系)、珍汕97B(一種秈稻三系保持系)、中419(一種秈稻三系或兩系恢復(fù)系)和W9864S(一種秈稻兩系不育系)。將本發(fā)明的J3培養(yǎng)基與另外三種由常用的基本培養(yǎng)基MS(編號為J1)、N6(編號為J2)和B5(編號為J4)組成的繼代培養(yǎng)基，這些培養(yǎng)基中添加的附加成分和植物激素如2，4-D、脯氨酸、谷氨酰胺、麥芽糖和植物膠用量相同，區(qū)別僅僅在于基本培養(yǎng)基的成分及用量，pH均為5.9。做培養(yǎng)基性能的比較試驗(yàn)。
不同秈稻繼代培養(yǎng)基的試驗(yàn)設(shè)計(jì)編號J1MS的無機(jī)鹽、微量元素和有機(jī)成分(下同)+2，4-D 2.5mg/L+脯氨酸500mg/L+谷氨酰胺300mg/L+3％麥芽糖(碳源)+0.3％植物膠，pH5.9；編號J2N6的無機(jī)鹽、微量元素和有機(jī)成分(下同)+2，4-D 2.5mg/L+脯氨酸500mg/L+谷氨酰胺300mg/L+3％麥芽糖+0.3％植物膠，pH5.9；編號J3J3無機(jī)鹽、微量元素和有機(jī)成分(下同)+2，4-D 2.5mg/L+脯氨酸500mg/L+谷氨酰胺300mg/L+3％麥芽糖+0.3％植物膠，pH5.9；編號J4B5的無機(jī)鹽、微量元素和有機(jī)成分(下同)+2，4-D 2.5mg/L+脯氨酸500mg/L+谷氨酰胺300mg/L+3％麥芽糖+0.3％植物膠，pH5.9。
在本試驗(yàn)中，四個(gè)用于試驗(yàn)的秈稻品種的愈傷組織來自于實(shí)驗(yàn)室接種誘導(dǎo)培養(yǎng)30天左右的新鮮愈傷組織，將這些愈傷組織稱量后分別接入四種以及按標(biāo)準(zhǔn)滅菌程序制備的固體繼代培養(yǎng)基(按常量預(yù)先加入瓊脂)上，每種培養(yǎng)基接種供試品種的愈傷組織各5瓶，接種后立即置于26℃暗培養(yǎng)。培養(yǎng)20天后，稱量愈傷組織的重量(以鮮重計(jì))，計(jì)算不同培養(yǎng)下的愈傷組織的增重率。試驗(yàn)結(jié)果見表1所示。
表1 不同培養(yǎng)基對秈稻愈傷組織繼代培養(yǎng)的效果

注表中統(tǒng)計(jì)的接種時(shí)愈傷組織鮮重和培養(yǎng)20天后的愈傷組織鮮重均為每品種5瓶愈傷組織鮮重的平均重量。
從試驗(yàn)及方差分析結(jié)果可以看出在設(shè)計(jì)的四種培養(yǎng)基中，本發(fā)明的培養(yǎng)基J3對四個(gè)秈稻品種愈傷組織的繼代效果大大優(yōu)于其余三種培養(yǎng)基；且J3培養(yǎng)基繼代的愈傷組織的質(zhì)地鮮黃緊實(shí)，呈現(xiàn)很強(qiáng)的胚性狀態(tài)，有利于進(jìn)一步培養(yǎng)。
實(shí)施例3秈稻愈傷組織繼代培養(yǎng)基J3對秈稻愈傷組織連續(xù)繼代的效果試驗(yàn)按實(shí)施例提供的將上述四種供試秈稻品種的愈傷組織接入所述的J3培養(yǎng)基，進(jìn)行連續(xù)繼代培養(yǎng)試驗(yàn)，每次繼代培養(yǎng)的時(shí)間為20天。每次繼代后，稱量接種每個(gè)供試品種愈傷組織各5瓶做分化活力測定，以評價(jià)本發(fā)明的J3培養(yǎng)基對連續(xù)繼代愈傷胚性的保持能力。試驗(yàn)效果見表2所示。
表2 秈稻愈傷組織繼代培養(yǎng)基J3對連續(xù)繼代的秈稻愈傷組織的分化活力測定

注a接種五瓶愈傷的總重量；b五瓶愈傷總分化的植株數(shù)結(jié)果顯示，本發(fā)明的繼代培養(yǎng)基，雖然隨著繼代次數(shù)的增加，愈傷的分化活力呈下降趨勢。但下降速度緩慢。繼代三次后各供試材料的愈傷組織仍保持較高的分化活力。完全可滿足轉(zhuǎn)化愈傷篩選繼代的要求，實(shí)施例4秈稻分化培養(yǎng)基的篩選與比較試驗(yàn)試驗(yàn)材料和方法以及愈傷組織的處理按照實(shí)施例1的步驟進(jìn)行，通過觀察比較各種培養(yǎng)基上的愈傷組織的分化情況(分化速度和分化苗數(shù))，篩選出的愈傷組織分化培養(yǎng)基(DL3)的成分如下KNO32800-3000mg/L，(NH4)2SO4350-450mg/L，KH2PO4300-400mg/L，MgSO4·7H2O180-200mg/L，CaCl2·2H2O 170-200mg/L，F(xiàn)eSO4·7H2O 45-55mg/L，60-74mg/L Na2EDTA，MnSO4·4H2O 80-100mg/L，ZnSO4·7H2O 15-25mg/L，H3BO325-30mg/L，KI 6.0-8.0mg/L，CuSO4·5H2O 0.2-0.3mg/L，Na2MoO4·2H2O 2.0-3.0mg/L，CoCl2·6H2O 0.2-0.3mg/L，甘氨酸2.0-3.0mg/L，VB10.5-1.0mg/L，VB61.0-1.5mg/L，煙酸1.0-1.5mg/L，肌醇100-150mg/L，谷氨酰胺300-500mg/L，脯氨酸500-800mg/L，麥芽糖30-50g/L，6-芐基氨基嘌呤2mg/L，激動(dòng)素2mg/L，吲哚乙酸0.2mg/L，萘乙酸0.2mg/L，植物膠5g/L；pH為6.0。
以本發(fā)明的培養(yǎng)基DL3的基本營養(yǎng)組分(包括大量成分、微量成分和維生素)與MS、N6基本培養(yǎng)基，另添加植物激素6-芐基氨基嘌呤2mg/L、激動(dòng)素2mg/L、吲哚乙酸(IAA)0.2mg/L、萘乙酸(NAA)0.2mg/L、氨基酸脯氨酸500mg/L、谷氨酰胺500mg/L，與兩種不同碳源組成的培養(yǎng)基進(jìn)行分化效率測試。結(jié)果見表3。
不同秈稻分化培養(yǎng)基的試驗(yàn)設(shè)計(jì)編號DL1MS，2.0mg/l 6-芐基氨基嘌呤，2.0mg/l激動(dòng)素，0.2mg/l萘乙酸，0.2mg/l吲哚乙酸，500mg/l脯氨酸，500mg/l谷氨酰胺，5％麥芽糖，0.3％植物膠，pH 6.0；編號DL2MS，2.0mg/l 6-芐基氨基嘌呤，2.0mg/l激動(dòng)素，0.2mg/l萘乙酸，0.2mg/l吲哚乙酸，500mg/l脯氨酸，500mg/l谷氨酰胺，5％蔗糖，0.3％植物膠，pH 6.0；編號DL3DL3基本培養(yǎng)基，2.0mg/l 6-芐基氨基嘌呤，2.0mg/l激動(dòng)素，0.2mg/l萘乙酸，0.2mg/l吲哚乙酸，500mg/l脯氨酸，500mg/l谷氨酰胺，5％麥芽糖，0.3％植物膠，pH 6.0；編號DL4DL3基本培養(yǎng)基，2.0mg/l 6-芐基氨基嘌呤，2.0mg/l激動(dòng)素，0.2mg/l萘乙酸，0.2mg/l吲哚乙酸，500mg/l脯氨酸，500mg/l谷氨酰胺，5％蔗糖，0.3％植物膠，pH 6.0；編號DL5N6，2.0mg/l 6-芐基氨基嘌呤，2.0mg/l激動(dòng)素，0.2mg/l萘乙酸，0.2mg/l吲哚乙酸，500mg/l脯氨酸，500mg/l谷氨酰胺，5％麥芽糖，0.3％植物膠，pH 6.0；編號DL6N6，2.0mg/16-芐基氨基嘌呤，2.0mg/l激動(dòng)素，0.2mg/l萘乙酸，0.2mg/l吲哚乙酸，500mg/l脯氨酸，500mg/l谷氨酰胺，5％蔗糖，0.3％植物膠，pH 6.0；說明a每個(gè)三角瓶接種的愈傷組織鮮重。
說明b每個(gè)三角瓶內(nèi)分化的植株數(shù)。
表3 不同秈稻分化培養(yǎng)基對秈稻愈傷組織分化效率的影響

試驗(yàn)結(jié)果顯示，本發(fā)明的DL3培養(yǎng)基的分化效率極顯著高于其它培養(yǎng)基，即在設(shè)計(jì)的六種分化培養(yǎng)基中，DL3培養(yǎng)基最適于秈稻愈傷組織的分化培養(yǎng)。
實(shí)施例5本發(fā)明的秈稻離體培養(yǎng)方法在農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因上的應(yīng)用采用本發(fā)明的實(shí)施例1-4所述的秈稻品種的外植體，詳細(xì)的技術(shù)步驟按照本申請人同日提出的另一份申請中關(guān)于農(nóng)桿菌介導(dǎo)的秈稻轉(zhuǎn)基因方法的發(fā)明申請所提供的技術(shù)步驟，用本發(fā)明提供的秈稻誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)出愈傷組織，然后用所述的編號為J3的培養(yǎng)基進(jìn)行愈傷組織繼代，經(jīng)過愈傷組織預(yù)培養(yǎng)、共培養(yǎng)和篩選培養(yǎng)，在篩選培養(yǎng)基上長出抗性愈傷組織。將篩選獲得的抗性愈傷組織經(jīng)預(yù)分化和分化培養(yǎng)(采用編號為DL3的培養(yǎng)基)，最后再生出完整的轉(zhuǎn)基因植株。試驗(yàn)結(jié)果如表4所示。
表4 本發(fā)明的秈稻離體培養(yǎng)方法在農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因上的應(yīng)用

表4顯示四個(gè)供試的秈稻品種均獲得較高的轉(zhuǎn)化效率，說明本發(fā)明的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的秈稻基因轉(zhuǎn)化方法是非常有效的。
表5 MS、N6、B5培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基及其組成

注配方來源MS培養(yǎng)基(Murashige和Skoog，1962)；B5培養(yǎng)基(Gamborg等，1968)；N6培養(yǎng)基(Chu等，1975)；AA(Toriyama和Hinata，1985)。
權(quán)利要求
1.一種適用于秈稻離體培養(yǎng)的分化培養(yǎng)基，其組分如下所述KNO32800-3000mg/L，(NH4)2SO4350-450mg/L，KH2PO4300-400mg/L，MgSO4·7H2O180-200mg/L，CaCl2·2H2O 170-200mg/L，F(xiàn)eSO4·7H2O 45-55mg/L，60-74mg/L Na2EDTA，MnSO4·4H2O 80-100mg/L，ZnSO4·7H2O 15-25mg/L，H3BO325-30mg/L，KI 6.0-8.0mg/L，CuSO4·5H2O 0.2-0.3mg/L，Na2MoO4·2H2O 2.0-3.0mg/L，CoCl2·6H2O 0.2-0.3mg/L，甘氨酸2.0-3.0mg/L，VB10.5-1.0mg/L，VB61.0-1.5mg/L，煙酸1.0-1.5mg/L，肌醇100-150mg/L，谷氨酰胺300-500mg/L，脯氨酸500-800mg/L，麥芽糖30-50g/L，6-芐基氨基嘌呤2mg/L，激動(dòng)素2mg/L，吲哚乙酸0.2mg/L，萘乙酸0.2mg/L，植物膠5g/L，pH為6.0。
2.權(quán)利要求1所述的分化培養(yǎng)基，其特征在于在秈稻離體培養(yǎng)中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于新植物技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種適用于秈稻離體培養(yǎng)的分化培養(yǎng)基的制備及應(yīng)用。本發(fā)明的特征是，在離體條件下先誘導(dǎo)秈稻外植體得到愈傷組織、再通過繼代培養(yǎng)，最后將繼代的愈傷組織轉(zhuǎn)移到本發(fā)明所述的分化培養(yǎng)基，進(jìn)而分化為完整的植株。培養(yǎng)基組分如下KNO
文檔編號C12N5/04GK1924008SQ20061014170
公開日2007年3月7日 申請日期2004年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月24日
發(fā)明者林擁軍, 張啟發(fā) 申請人:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)