一種沼澤小葉樺胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種沼澤小葉樺胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法，具體步驟如下：（1）選取苗齡28-35d、苗高3-6cm的沼澤小葉樺組培生根苗；（2）將組培生根苗的莖段切成0.2-0.3cm的小段得到外植體；（3）將外植體接種于脫分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-7d進(jìn)行脫分化，形成愈傷組織，培養(yǎng)溫度為23-27℃，光照時(shí)間為12-14h/d，光照強(qiáng)度為40-60umol/m2·s；（4）將愈傷組織轉(zhuǎn)入再分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)7-10d，培養(yǎng)溫度為23-27℃，光照時(shí)間為12-14h/d，光照強(qiáng)度為40-60umol/m2·s。本發(fā)明可為沼澤小葉樺的突變體篩選研究提供大量胚性愈傷組織作為基礎(chǔ)材料，對沼澤小葉樺的育種研究具有促進(jìn)作用。
【專利說明】
一種沼澤小葉樺胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體是一種沼澤小葉樺胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法。

【背景技術(shù)】
[0002]沼澤小葉樺為樺樹科樺木屬小葉樺的新變種，是原產(chǎn)于新疆阿勒泰縣內(nèi)朗河下游的特有種，是極為稀有和瀕臨絕滅的溫帶落葉闊葉樹種，國家二級稀有瀕危植物。高3至4米落葉小喬木或直立大灌木，耐寒、耐旱、耐鹽堿，是鹽堿地造林綠化的優(yōu)良樹種。
[0003]目前，關(guān)于沼澤小葉樺的引種栽培、嫩枝扦插繁殖、利用組培技術(shù)進(jìn)行種苗快繁的研究已有報(bào)道。有關(guān)利用沼澤小葉樺試管苗莖段為外植體，誘導(dǎo)胚性細(xì)胞發(fā)生技術(shù)的研究尚未見報(bào)道。胚性細(xì)胞是具有全能性表達(dá)能力的一種細(xì)胞，因其數(shù)量龐大，以其作為單位進(jìn)行誘變處理，則可獲得數(shù)量多，種類多的突變植株，對于進(jìn)行突變體篩選具有重要的意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種為進(jìn)行沼澤小葉樺突變體篩選提供誘變處理材料的沼澤小葉樺胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法，以解決上述【背景技術(shù)】中提出的問題。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
一種沼澤小葉樺胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法，具體步驟如下:(I)選取苗齡28-35d、苗高3_6cm的沼澤小葉樺組培生根苗；(2)將組培生根苗的莖段切成0.2-0.3cm的小段得到外植體；(3)將外植體接種于脫分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-7d進(jìn)行脫分化，形成愈傷組織,培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照時(shí)間為12-14h/d，光照強(qiáng)度為40-60umol/m2.s ; (4)將愈傷組織轉(zhuǎn)入再分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)7-10d，培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照時(shí)間為12-14h/d，光照強(qiáng)度為40_60umol/
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[0006]作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案:所述脫分化培養(yǎng)基包括培養(yǎng)基母液、0.1-0.5mg/L的6-芐氨基腺嘌呤、0.5-1.0mg/L的萘乙酸和500_1000mg/L的水解酪蛋白。
[0007]作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案:所述再分化培養(yǎng)基包括培養(yǎng)基母液、0.5-1.0mg/L的6-芐氨基腺嘌呤和0-0.lmg/L的萘乙酸。
[0008]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:
本發(fā)明可為沼澤小葉樺的突變體篩選研究提供大量胚性愈傷組織作為基礎(chǔ)材料，對沼澤小葉樺的育種研究具有促進(jìn)作用。

【具體實(shí)施方式】
[0009]下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0010]實(shí)施例1
一種沼澤小葉樺胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法，具體步驟如下:(I)選取苗齡28d、苗高3cm的沼澤小葉樺組培生根苗；(2)將組培生根苗的莖段切成0.2cm的小段得到外植體；(3)將外植體接種于包括培養(yǎng)基母液、0.2mg/L的6-芐氨基腺嘌呤、0.5mg/L的萘乙酸和500mg/L的水解酪蛋白的脫分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)7d進(jìn)行脫分化，形成愈傷組織，培養(yǎng)溫度為23°C，光照時(shí)間為12h/d,光照強(qiáng)度為40umol/m2.s ； (4)將愈傷組織轉(zhuǎn)入包括培養(yǎng)基母液、0.5mg/L的6-芐氨基腺嘌呤和0.02mg/L的萘乙酸的再分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)10d，培養(yǎng)溫度為23°C，光照時(shí)間為12h/d,光照強(qiáng)度為40umol/m2.S。
[0011]實(shí)施例2
一種沼澤小葉樺胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法，具體步驟如下:(I)選取苗齡32d、苗高5cm的沼澤小葉樺組培生根苗；(2)將組培生根苗的莖段切成0.25cm的小段得到外植體；(3)將外植體接種于包括培養(yǎng)基母液、0.3mg/L的6-芐氨基腺嘌呤、0.8mg/L的萘乙酸和800mg/L的水解酪蛋白的脫分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)5d進(jìn)行脫分化，形成愈傷組織，培養(yǎng)溫度為25°C，光照時(shí)間為13h/d,光照強(qiáng)度為50umol/m2.s ； (4)將愈傷組織轉(zhuǎn)入包括培養(yǎng)基母液、0.8mg/L的6-芐氨基腺嘌呤和0.05mg/L的萘乙酸的再分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)8d，培養(yǎng)溫度為25°C，光照時(shí)間為13h/d,光照強(qiáng)度為50umol/m2.S。
[0012]實(shí)施例3
一種沼澤小葉樺胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法，具體步驟如下:(I)選取苗齡35d、苗高6cm的沼澤小葉樺組培生根苗；(2)將組培生根苗的莖段切成0.3cm的小段得到外植體；(3)將外植體接種于包括培養(yǎng)基母液、0.5mg/L的6-芐氨基腺嘌呤、1.0mg/L的萘乙酸和100mg/L的水解酪蛋白的脫分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)4d進(jìn)行脫分化，形成愈傷組織，培養(yǎng)溫度為27°C，光照時(shí)間為14h/d,光照強(qiáng)度為60umol/m2.s ； (4)將愈傷組織轉(zhuǎn)入包括培養(yǎng)基母液、1.0mg/L的6-芐氨基腺嘌呤和0.lmg/L的萘乙酸的再分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)7d,培養(yǎng)溫度為27°C，光照時(shí)間為14h/d,光照強(qiáng)度為60umol/m2.S。
[0013]以上實(shí)施例中沼澤小葉樺組培生根苗的愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)100%，胚性愈傷組織平均發(fā)生率為83%。
[0014]本發(fā)明可為沼澤小葉樺的突變體篩選研究提供大量胚性愈傷組織作為基礎(chǔ)材料，對沼澤小葉樺的育種研究具有促進(jìn)作用。
[0015]對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點(diǎn)來看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種沼澤小葉樺胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法，其特征在于，具體步驟如下:(1)選取苗齡28-35d、苗高3-6cm的沼澤小葉樺組培生根苗；(2)將組培生根苗的莖段切成0.2-0.3cm的小段得到外植體；(3)將外植體接種于脫分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-7d，直到外植體進(jìn)行脫分化，形成愈傷組織，培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照時(shí)間為12-14h/d，光照強(qiáng)度為40-60umol/m2.s ;(4)將愈傷組織轉(zhuǎn)入再分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)7-10d，培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照時(shí)間為12_14h/d,光照強(qiáng)度為 40_60umol/m2.S。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的沼澤小葉樺胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述脫分化培養(yǎng)基包括培養(yǎng)基母液、0.1-0.5mg/L的6-芐氨基腺嘌呤、0.5-1.0mg/L的萘乙酸和500-1000mg/L的水解酪蛋白。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的沼澤小葉樺胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述再分化培養(yǎng)基包括培養(yǎng)基母液、0.5-1.0mg/L的6-芐氨基腺嘌呤和0-0.lmg/L的萘乙酸。
【文檔編號】A01H4/00GK104322368SQ201410494639
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2014年9月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月25日
【發(fā)明者】陳權(quán), 孫建, 肖建梅, 周羽, 崔心紅, 朱義 申請人:上海孫橋現(xiàn)代溫室種子種苗有限公司, 上海市園林科學(xué)研究所, 上海農(nóng)業(yè)科技種子有限公司