專利名稱：烏桕組培不定芽高頻率植株再生的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及烏桕組織培養(yǎng)獲得高頻率不定芽植株再生的技術方法，屬于生物技術領域，專用于中國原產烏桕試管苗微繁殖和體細胞突變體篩選，并適用于農桿菌介導法基因轉化。
背景技術：
烏桕(Sapium Sebiserum)為大戟科烏桕屬的落葉喬木，它是我國七大秋季觀賞紅葉景區(qū)中林相的主要組成樹種。烏桕的葉子是染絲織品的一種黑色染料。葉的浸出液是一種土農藥，用來殺滅棉蚜等害蟲，還可防治稻熱病，烏桕也是我國特有的油用經濟樹種，它種子表面附有一層白色蠟質，叫做“皮油”，可以用作蠟燭、肥皂的原料，制造蠟紙、護膚脂、固體酒精、高級香料和金屬防銹涂料等；而用種子榨的油叫梓油，它的物理化學性質可跟桐油媲美。榨油后的烏桕子餅可作飼料，也是一種優(yōu)質有機肥料。最近的研究發(fā)現(xiàn)它對二氧化硫、氟化氫和氯氣抗性均強，也是很好的凈化環(huán)境的樹種，研究表明烏桕還是一種理想的生物質能源作物，可見，烏桕是一種具有多種經濟用途和巨大價值的觀賞能源兼優(yōu)的高效經濟植物，國內外種植面積有迅速擴大的趨勢。但由于烏桕是兩種基因型間的異花授粉植物，在長期反復異花授粉過程中，使得當今自然分布和栽培的品種都是雜種，有性繁殖不能充分固定和利用雜種優(yōu)勢，再加上它的果皮堅硬，它生理和環(huán)境的強迫休眠特性，繁育周期長，自然結果需要4～5年以上。自然開花或人工誘導其開花，均由于種子成熟期不一、易于落粒和發(fā)芽率極低，在生產上只能采用種莖無性繁殖的方法提供種苗，成活率只有30％，而且長期的扦插繁殖容易造成真菌與病毒的累積，導致品種退化，嚴重地影響了其大面積推廣和其他經濟用途的研究。
有關烏桕微繁的研究最早見于印度科學家烏桕芽微繁的報告(1997)，主要通過腋芽再生，經10個月繁殖成苗，但其中沒有涉及繁殖系數(shù)和成活率的報道；國內韓珊等(2006a)報道，以紅葉烏桕新抽出的幼嫩葉片為材料，進行組織培養(yǎng)，已成功培育出試管苗并移栽至大田，移栽成活率為76％。韓珊等(2006b)報道，以帶芽莖段、莖尖做外植體，通過腋芽生枝，再生出植株。結果表明①外植體用升汞分兩次共處理8min，污染率低；②啟動培養(yǎng)以MS+6-BA 1.0mg/L+2，4-D 0.05mg/L+NAA 0.1mg/L為最佳配方；③接種后先進行暗培養(yǎng)1周，啟動較快；④繼代培養(yǎng)以MS+6-BA1.0mg/L+IBA 0.1mg/L；⑤生根誘導以1/2MS+NAA 1.0mg/L+IBA 0.1mg/L效果最好，其生根率為87.6％；⑥生根苗移栽到珍珠巖∶蛭石∶河沙＝3∶2∶1的育苗基質中，成活率為83.2％，且不論它在我國的適應性，上述方法均是用帶芽的組織為外植體，其生根和移栽成活率都不高，繁殖系數(shù)沒有增加，而且通過芽誘導的植株也會隨擴繁代數(shù)的增加其分化再生能力逐漸減弱，而涉及我國原產烏桕離體培養(yǎng)的報道極少，也未見相關的專利技術。迄今為止尚未見國內外通過不定芽誘導的高頻率烏桕組織培養(yǎng)植株再生技術的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于針對烏桕自然繁殖周期長，長期反復異花授粉過程中，容易影響品種品質，且自然開花或人工誘導其開花，均由于種子成熟期不一、易于落粒和發(fā)芽率極低，而采用種莖無性繁殖的方法成活率低，長期的扦插繁殖容易造成真菌與病毒的累積，導致品種退化的問題，以及已有的通過腋芽生枝的烏桕微繁技術尚存在的優(yōu)良品種變異、繁殖系數(shù)低以及成活率不高等問題，需要提供一種通過不同的外植體，擴大繁殖母體以及大幅度提高繁殖系數(shù)的烏桕組培不定芽高頻率植株再生的方法。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種烏桕組培不定芽高頻率植株再生的方法，其特征在于取烏桕種子去除種皮，表面消毒后接種到種子發(fā)芽培養(yǎng)基中，每50ml的三角瓶中放入1粒種子，置于培養(yǎng)室培養(yǎng)，經過16～20d，長出完整的烏桕植株；在無菌條件下，沿烏桕種子苗的縱向一分為二分割獲得子葉塊、含未展開真葉的頂芽以及橫向分割獲得下胚軸切段和根切段，將它們分別接種于子葉、頂芽、下胚軸以及根不定芽誘導培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)室培養(yǎng)，20d后獲得嫩綠色不定芽叢；將嫩綠色不定芽叢移入不定芽伸長培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)室生長20～25d后，長出2～3cm高的具展開3～5片真葉的健壯幼苗；再轉入幼苗擴繁培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室進行擴大繁殖，14～21d后將經擴繁的幼苗轉接于生根培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室，12～15d長成根系發(fā)達的健壯試管植株，最后移栽到菜園土經濕熱高壓滅菌的營養(yǎng)缽中在室外自然光照條件下練苗，得到烏桕的健壯苗；培養(yǎng)室的溫度為26℃～28℃，每天由散射光照14～16h。
在本發(fā)明中所述的表面消毒是指用75％的乙醇表面消毒1min，再用10％的H2O2雙氧水消毒30min，然后用無菌水沖洗三遍；所述的下胚軸和根切段的長度為5mm；所述培養(yǎng)室的散射光的光強為2000lux。
在本發(fā)明中所述的烏桕種子為中國原產的烏桕種子；基本培養(yǎng)基為含有質量比3％的蔗糖和質量比0.8％的瓊脂條的WPM；所述的種子發(fā)芽培養(yǎng)基采用基本培養(yǎng)基WPM；所述的不定芽誘導培養(yǎng)基、不定芽伸長培養(yǎng)基、幼苗擴繁培養(yǎng)基均以基本培養(yǎng)基WPM為基礎；不定芽誘導培養(yǎng)基的WPM中包括添加量為0.2～3.0mg/L的6-BA，其中，子葉、頂芽、下胚軸的不定芽誘導培養(yǎng)基還包括添加量為0.1～0.5mg/L的IBA，根不定芽誘導培養(yǎng)基中還包括添加量為0.1～0.5mg/L的IBA或包括添加量為0.5mg/L的NAA；不定芽伸長培養(yǎng)基為WPM+0.1mg/LIBA+0.2mg/L6-BA；幼苗擴繁培養(yǎng)基為WPM+0.1mg/L IBA+0.1mg/L IAA+0.2mg/L 6-BA+5.0mg/L Vc+5.0mg/L AgNO3；所述的生根培養(yǎng)基為含有質量比3％的蔗糖和質量比0.8％的瓊脂條的1/2MS，并附加0.5mg/L IBA；上述各種培養(yǎng)基均需要在高壓滅菌前用氫氧化鉀調整pH值至5.8。
在本發(fā)明中所述的子葉不定芽誘導培養(yǎng)基WPM+0.2mg/L IBA+1.0mg/L KT+2.0mg/L 6-BA；所述的頂芽不定芽誘導培養(yǎng)基WPM+0.1mg/L IBA+0.1mg/L IAA+0.2mg/L 6-BA；所述的下胚軸不定芽誘導培養(yǎng)基WPM+0.2～0.5mg/L IBA+0.5～2.0mg/L KT+2.0～3.0mg/L 6-BA，或WPM+0.1mg/L IBA+0.1mg/L IAA+0.2mg/L 6-BA；所述的根不定芽誘導培養(yǎng)基WPM+0.5mg/L NAA+3.0mg/L 6-BA，或WPM+0.1mg/L IBA+0.1mg/L IAA+0.2mg/L 6-BA，或WPM+0.5mg/L IBA+0.5mg/L KT+3.0mg/L 6-BA。
本發(fā)明的優(yōu)點在于采用人工誘導不定芽分化的方法，選取中國原產烏桕無菌種子苗的子葉、頂芽、下胚軸和根為材料，通過激素調控，在離體培養(yǎng)條件下，有效地解決了烏桕在組織培養(yǎng)過程中由于植株生長緩慢，植株根分化緩慢和移栽成活率低的難題。本發(fā)明通過子葉、下胚軸、頂芽以及根進行不定芽的誘導，誘導率可達95％以上、綠苗生根率可達100％，移栽成活率在95％以上。
本發(fā)明的優(yōu)點還在于使用本發(fā)明方法可使無菌苗的不同部位都可以誘導出高頻的不定芽，并在90天內獲得生長健壯的再生植株。首先可以通過無菌種子苗的培育克服我國原產烏桕常規(guī)自然繁育需要2-3年才能發(fā)芽的困難，可以當年獲得無菌的烏桕種苗，使繁殖系數(shù)比自然繁育增加300％(增加3倍)，在此基礎上再通過不同組織誘導不定芽，可以在90天左右同時獲得一批組培種苗，這樣通過增加繁育周期每年還可以增加4次擴繁，繁殖系數(shù)又可在原來300％的基礎上再增加400％，通過子葉、下胚軸和根分別誘導不定芽，通過增加外植體母體的數(shù)量，一年可以擴繁12批次，年繁植系數(shù)增加12倍，從而不受季節(jié)和年際間的限制，大大提高了繁殖的頻率，加快了繁殖的周期，有效地解決了烏桕種苗供應緊張的問題，也為開展烏桕細胞生物學和分子生物學育種提供了重要的基礎條件。


圖1由中國原產烏桕種子萌發(fā)的無菌苗；圖2由子葉誘導的不定芽；圖3由下胚軸無愈傷組織直接分化出不定芽叢誘導的不定芽；圖4由下胚軸通過愈傷組織分化出不定芽叢誘導的不定芽；圖5由根無愈傷組織直接分化出不定芽叢誘導的不定芽；
圖6由根通過愈傷組織分化出不定芽叢誘導的不定芽；圖7由種子苗頂芽誘導的不定芽和側芽；圖8不定芽叢的伸長生長；圖9芽的增殖生長；圖10芽的生根。
具體實施例方式
實施例1外植體材料的培育烏桕品種2006年從江蘇省植物研究所引進的中國南京產的烏桕。
種子發(fā)芽培養(yǎng)基采用WPM，所述的WPM中加入質量比3％的蔗糖和質量比0.8％的瓊脂條，并在高壓滅菌前用氫氧化鉀調整pH值至5.8。
將烏桕成熟的的果實去除種皮，用75％的乙醇表面消毒1min，再用10％的H2O2雙氧水消毒30min，然后用無菌水沖洗三遍，接種到種子發(fā)芽培養(yǎng)基中，每50ml的三角瓶中放入1粒種子，培養(yǎng)室溫度為26℃～28℃，每天光照16h，在散射光下培養(yǎng)，光強為2000lux，經過16～20天，約38％烏桕種子子葉展開，有3～4片未展開真葉的頂芽，2～3cm長的下胚軸，根系亦得到迅速發(fā)育，并有側根形成的種子苗(見圖1)。
上述種子苗的子葉、頂芽、下胚軸以及根均可以作為本發(fā)明中用于不定芽誘導的外植體材料。
實施例2烏桕不同外植體不定芽的誘導培養(yǎng)A基本培養(yǎng)基WPM，蔗糖質量比3％，瓊脂條質量比0.8％，pH5.8；子葉不定芽誘導培養(yǎng)基WPM+0.2mg/L IBA+1.0mg/L KT+2.0mg/L6-BA。
頂芽、下胚軸和根不定芽誘導培養(yǎng)基WPM+0.1mg/L IBA+0.1mg/LIAA+0.2mg/L 6-BA。
上述各培養(yǎng)基均需在高壓滅菌前用氫氧化鉀調整pH值至5.8。
培養(yǎng)室環(huán)境溫度26℃～28℃，每天散射光照16h，光強為2000lux。
不定芽的誘導培養(yǎng)將無菌的烏桕種子苗，在無菌條件下，將其縱向一分為二分割獲得子葉塊、含未展開真葉的頂芽以及橫向分割獲得5mm長的下胚軸切段和根切段，將它們分別接種在相應的子葉、頂芽、下胚軸以及根不定芽誘導培養(yǎng)基上，21d后獲得嫩綠色不定芽叢。
子葉誘導的不定芽(參見圖2)，誘導率可達100％，是在一定的愈傷基礎上誘導出不定芽叢，該培養(yǎng)基較適合烏桕突變體篩選和運用農桿菌介導法轉化外源基因；下胚軸不定芽培養(yǎng)基WPM+0.1mg/L IBA+0.1mg/LIAA+0.2mg/L 6-BA是在誘導一定的愈傷組織基礎上，分化不定芽叢，其中單個外植體平均肉眼可見不定芽數(shù)超過7個(參見圖4)，誘導率高達100％，該培養(yǎng)基較適合烏桕突變體篩選和運用農桿菌介導法轉化外源基因；誘導根形成不定芽的培養(yǎng)基WPM+0.1mg/L IBA+0.1mg/L IAA+0.2mg/L 6-BA誘導根產生不定芽叢主要集中在外植體兩段以及較粗根系上，是在一定的愈傷基礎上誘導出不定芽叢(參見圖6)，不定芽誘導率達95％；而帶未展開真葉的頂芽于不定芽誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)基中，21天后基部在一定的愈傷基礎上誘導出不定芽叢，其中單個外植體平均肉眼可見不定芽數(shù)超過7個(參見圖7)，不定芽的誘導率可達95％，同時頂芽亦得到迅速伸長，且側芽大量萌發(fā)，用該培養(yǎng)基誘導烏桕頂芽的分化是在短時間進行烏桕基礎苗快速擴繁的有效途徑。該培養(yǎng)基也適合用烏桕頂芽做外植體進行突變體篩選和運用農桿菌介導法轉化外源基因。
實施例3烏桕不同外植體不定芽的誘導培養(yǎng)B本實施例與實施例2的區(qū)別僅在于針對無菌的烏桕種子苗的下胚軸和根切段實施不定芽高頻率植株再生的過程中，選擇了不同的不定芽誘導培養(yǎng)基，實現(xiàn)了無愈傷組織直接誘導出不定芽叢。
下胚軸不定芽誘導培養(yǎng)基WPM+0.5mg/L IBA+2.0mg/L KT+3.0mg/L6-BA。
根不定芽誘導培養(yǎng)基WPM+0.5mg/L NAA+3.0mg/L 6-BA。
上述培養(yǎng)基均需在高壓滅菌前用氫氧化鉀調整pH值至5.8。
將5mm長的下胚軸切段置于這種下胚軸不定芽誘導培養(yǎng)基，下胚軸是在兩端傷口直接分化出不定芽叢，誘導率亦高達100％(參見圖3)。因未經過愈傷階段，從而降低了烏桕芽的突變率，該培養(yǎng)基較適合烏桕保持原種種性的擴大繁殖以及運用農桿菌介導法轉化外源基因。
將5mm長的根切段置于這種根不定芽誘導培養(yǎng)基，未見愈傷組織直接分化出不定芽叢，不定芽誘導率達95％以上，由圖5可見，不定芽不限在外植體切口端，其中細根較粗根不定芽誘導量大，因未經過愈傷階段，該培養(yǎng)基較適合烏桕保持原種種性的擴大繁殖；但因不定芽不限在外植體切口處，不適于運用農桿菌介導法轉化外源基因。
實施例4不定芽叢的伸長生長不定芽伸長培養(yǎng)基WPM+0.1mg/L IBA+0.1mg/L IAA+0.2mg/L 6-BA，培養(yǎng)基需在高壓滅菌前用氫氧化鉀調整pH值至5.8。
將實施例2獲得的烏桕下胚軸嫩綠色不定芽叢置于不定芽叢伸長培養(yǎng)基，培養(yǎng)室溫度應該控制在26℃～28℃，光強為2000lux，每天光照16h，生長20～25d后，長出2～3cm高的具未展開3～5片真葉的健壯幼苗(參見圖8)。
實施例5芽的增殖生長與生根幼苗擴繁培養(yǎng)基WPM+0.1mg/L IBA+0.1mg/L IAA+0.2mg/L 6-BA+5.0mg/L Vc+5.0mg/LAgNO3。
幼苗生根培養(yǎng)基1/2MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)基含有質量比3％的蔗糖和質量比0.8％的瓊脂條，附加0.5mg/L IBA。
上述培養(yǎng)基均需在高壓滅菌前用氫氧化鉀調整pH值至5.8。
將實施例4獲得的2～3cm高的3～5片真葉的健壯幼苗轉入幼苗擴繁培養(yǎng)基進行擴大繁殖，培養(yǎng)室溫度應該控制在26℃～28℃，光強為2000lux，每天光照14～16h，在散射光下生長14～21d后，使健壯幼苗的真葉展開，同時誘導大量的側芽萌發(fā)，且枝條健壯，葉色深綠，常大，增殖率達5倍以上(參見圖9)，該培養(yǎng)既可保持原芽的種性，又可得到迅速增殖。
將具有3～5片展開真葉的增殖芽轉接于生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)室溫度應該控制在26℃～28℃，光強為2000lux，每天光照14～16h，在散射光下生長15d，皆可獲得根系發(fā)達的試管植株(圖10)。最后移栽到菜園土經濕熱高壓滅菌的營養(yǎng)缽中在室外自然光照條件下練苗，移栽成活率可達95％以上。
實施例6不同培養(yǎng)基對烏桕組織培養(yǎng)的影響選擇的培養(yǎng)基的組合見表1表1

注WPM中含有質量比3％的蔗糖和質量比0.8％的瓊脂條。
不同培養(yǎng)基對不同外植體不定芽誘導的影響，見表2表2

注培養(yǎng)21d的平均數(shù)不同培養(yǎng)基組分對不定芽叢的伸長生長的影響參見表3表3

不同增殖培養(yǎng)對植株生長的影響參見表4
表4

注培養(yǎng)21d的平均數(shù)上述各實施例不是對本發(fā)明的具體限制，可以在權利要求限定的范圍內配制各種培養(yǎng)基，通過烏桕種子培育外植體材料，利用子葉、頂芽、下胚軸以及根在不定芽誘導培養(yǎng)基中誘導不定芽，然后通過不定芽在相應的培養(yǎng)基中伸長、幼苗擴繁、生根，最后移栽到菜園土經濕熱高壓滅菌的營養(yǎng)缽中在室外自然光照條件下練苗，得到烏桕的健壯苗。在本發(fā)明涉及的各種培養(yǎng)基中，IBA吲哚丁酸；IAA吲哚乙酸；KT細胞分裂素；6-BA6-芐基氨基嘌呤；Vc抗壞血酸；AgNO3硝酸銀；NAA萘乙酸。
權利要求
1.一種烏桕組培不定芽高頻率植株再生的方法，其特征在于取烏桕種子去除種皮，表面消毒后接種到種子發(fā)芽培養(yǎng)基中，每50ml的三角瓶中放入1粒種子，置于培養(yǎng)室培養(yǎng)，經過16～20d，長出完整的烏桕植株；在無菌條件下，沿烏桕種子苗的縱向一分為二分割獲得子葉塊、含未展開真葉的頂芽以及橫向分割獲得下胚軸切段和根切段，將它們分別接種于子葉、頂芽、下胚軸以及根不定芽誘導培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)室培養(yǎng)，20d后獲得嫩綠色不定芽叢；將嫩綠色不定芽叢移入不定芽伸長培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)室生長20～25d后，長出2～3cm高的具展開3～5片真葉的健壯幼苗；再轉入幼苗擴繁培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室進行擴大繁殖，14～21d后將經擴繁的幼苗轉接于生根培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室，12～15d長成根系發(fā)達的健壯試管植株，最后移栽到菜園土經濕熱高壓滅菌的營養(yǎng)缽中在室外自然光照條件下練苗，得到烏桕的健壯苗；培養(yǎng)室的溫度為26℃～28℃，每天由散射光照14～16h。
2.根據權利要求1所述的烏桕組培不定芽高頻率植株再生的方法，其特征在于所述的表面消毒是指用75％的乙醇表面消毒1min，再用10％的H2O2雙氧水消毒30min，然后用無菌水沖洗三遍；所述的下胚軸和根切段的長度為5mm；所述的培養(yǎng)室的散射光的光強為2000lux。
3.根據權利要求1所述的烏桕組培不定芽高頻率植株再生的方法，其特征在于所述的烏桕種子為中國原產的烏桕種子；基本培養(yǎng)基為含有質量比3％的蔗糖和質量比0.8％的瓊脂條的WPM；所述的種子發(fā)芽培養(yǎng)基采用基本培養(yǎng)基WPM；所述的不定芽誘導培養(yǎng)基、不定芽伸長培養(yǎng)基、幼苗擴繁培養(yǎng)基均以基本培養(yǎng)基WPM為基礎；不定芽誘導培養(yǎng)基的WPM中包括添加量為0.2～3.0mg/L的6-BA，其中，子葉、頂芽、下胚軸的不定芽誘導培養(yǎng)基還包括添加量為0.1～0.5mg/L的IBA，根不定芽誘導培養(yǎng)基中還包括添加量為0.1～0.5mg/L的IBA或包括添加量為0.5mg/L的NAA；不定芽伸長培養(yǎng)基為WPM+0.1mg/LIBA+0.2mg/L 6-BA；幼苗擴繁培養(yǎng)基為WPM+0.1mg/L IBA+0.1mg/L IAA+0.2mg/L 6-BA+5.0mg/L Vc+5.0mg/L AgNO3；所述的生根培養(yǎng)基為含有質量比3％的蔗糖和質量比0.8％的瓊脂條的1/2MS，并附加0.5mg/L IBA；上述各種培養(yǎng)基均需要在高壓滅菌前用氫氧化鉀調整pH值至5.8。
4.根據權利要求3所述的烏桕組培不定芽高頻率植株再生的方法，其特征在于所述的子葉不定芽誘導培養(yǎng)基WPM+0.2mg/L IBA+1.0mg/LKT+2.0mg/L 6-BA；所述的頂芽不定芽誘導培養(yǎng)基WPM+0.1mg/L IBA+0.1mg/L IAA+0.2mg/L 6-BA；所述的下胚軸不定芽誘導培養(yǎng)基WPM+0.2～0.5mg/L IBA+0.5～2.0mg/L KT+2.0～3.0mg/L 6-BA，或WPM+0.1mg/L IBA+0.1mg/L IAA+0.2mg/L 6-BA；所述的根不定芽誘導培養(yǎng)基WPM+0.5mg/L NAA+3.0mg/L 6-BA，或WPM+0.1mg/L IBA+0.1mg/L IAA+0.2mg/L 6-BA，或WPM+0.5mg/L IBA+0.5mg/L KT+3.0mg/L 6-BA。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種烏桕組培不定芽高頻率植株再生的方法，其特征在于取烏桕種子去除種皮，雙氧水表面消毒后接種到種子發(fā)芽培養(yǎng)基中，長出完整的烏桕種子苗植株；將烏桕種子苗的縱向一分為二的子葉塊、含未展開真葉的頂芽以及下胚軸和根切段，分別接種在適合頂芽、下胚軸和根等不定芽誘導培養(yǎng)基上，通過直接誘導不定芽或經過愈傷組織誘導獲得嫩綠色不定芽叢；然后移入不定芽伸長培養(yǎng)基，獲得伸長不定芽幼苗；再轉入幼苗擴繁培養(yǎng)基進行擴大繁殖，將經擴繁的幼苗轉接于生根培養(yǎng)基上，長成真葉展開且根系發(fā)達的健壯烏桕試管植株，最后移栽到室外在自然條件生長成活，得到烏桕的健壯苗。
文檔編號C12N5/04GK101057556SQ20071002282
公開日2007年10月24日 申請日期2007年5月23日 優(yōu)先權日2007年5月23日
發(fā)明者李霞, 何小蘭, 周月蘭, 劉桂華 申請人:江蘇省農業(yè)科學院