專(zhuān)利名稱(chēng)：一種少根根霉真菌及其在普洱茶生產(chǎn)中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種少根根霉真菌及其在普洱茶生產(chǎn)中的應(yīng)用，屬生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
眾所周知，根霉是一類(lèi)重要的工業(yè)用菌，它有許多優(yōu)良特性，其中糖化力強(qiáng)的根霉可用于葡萄糖制造和釀酒工業(yè)，如我國(guó)小曲酒的配制就大多使用根霉，黃酒的釀制也部分使用根霉，即所謂的小曲釀酒法。羅歆等研究表明使用純種根霉、中草藥和甜酒曲母混合制造甜酒曲，既能保持甜酒的傳統(tǒng)風(fēng)味，又有利于控制甜酒生產(chǎn)中的酸度和溫度，防止酸敗和產(chǎn)生異味，提高產(chǎn)品的糖。
根霉具有淀粉酶活力較高，能產(chǎn)生有機(jī)酸，如反丁烯二酸、乳酸、琥珀酸等，還能產(chǎn)生芳香的酯類(lèi)物質(zhì)，也是轉(zhuǎn)化甾醇族化合物的重要菌類(lèi)，分泌果膠酶能力強(qiáng)等特性。普洱茶在渥堆中茶葉軟化也與少根根霉滋生有關(guān)。在渥堆的每個(gè)階段，控制好適當(dāng)?shù)臏囟群蜐穸?，提高少根根霉的比例，有利于普洱茶粘滑和醇厚品質(zhì)的形成。普洱茶品質(zhì)的形成帶來(lái)積極的作用。
在普洱茶研究領(lǐng)域，由于長(zhǎng)期缺乏學(xué)科的研究，尤其是從微生物的角度來(lái)進(jìn)行普洱茶的研究。而如何通過(guò)對(duì)云南普洱茶加工中微生物的研究，并從普洱茶加工中篩選有益優(yōu)勢(shì)微生物菌株應(yīng)用到生產(chǎn)中來(lái)提升普洱茶的品質(zhì)尚未見(jiàn)公開(kāi)的文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是從微生物的角度對(duì)普洱茶進(jìn)行研究，為生產(chǎn)企業(yè)提供高品質(zhì)普洱茶有益菌株來(lái)源。本發(fā)明的另一目的是通過(guò)控制有益菌種在普洱茶生產(chǎn)中的比例，為促進(jìn)云南普洱茶品質(zhì)穩(wěn)定和提高發(fā)揮作用。
本發(fā)明的少根根霉真菌，由生產(chǎn)菌株和輔料經(jīng)初篩、復(fù)篩、天然培養(yǎng)基培養(yǎng)、及根霉純化培養(yǎng)工序后得到，其特征在于生產(chǎn)菌株為少根根霉(Rhizopus arrhizus)Prhi501，保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏單位地址北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號(hào)，保藏日期2007年3月1日，保藏號(hào)CGMCC No.1963。
本發(fā)明的少根根霉(Rhizopus arrhizus)Prhi501的形態(tài)學(xué)特征為少根根霉的菌落疏松或稠密，最初白色后變?yōu)楹诤稚?。少根根霉?duì)溫度的適應(yīng)范圍介于37～40℃之間。匍匐狀菌絲分化不明顯，假根極不發(fā)達(dá)短指狀或沒(méi)有假根。從普洱茶中分離的菌落營(yíng)養(yǎng)體在培養(yǎng)基上呈白色、棉絮狀。孢囊梗直立或彎曲，單生，較少2～3株成束，不分枝或分枝。孢子囊球形或橢圓形、褐色或黑色，直徑約為50～250μm(一般60～130)μm，囊軸球形、卵圓形，直徑約為30～120μm(一般50～90)μm，孢囊孢子球形、擬橢圓形，有棱角。厚坦孢子形狀、大小不一致。接合孢子球形，有粗糙的突起，直徑120～140μm。配囊柄對(duì)生，無(wú)色，無(wú)附屬物，異宗配合。
本發(fā)明經(jīng)公知的初篩、復(fù)篩、天然培養(yǎng)基培養(yǎng)、根霉純化培養(yǎng)等傳統(tǒng)工序后得到。
本發(fā)明有提高普洱茶品質(zhì)的作用，可應(yīng)用于普洱茶的生產(chǎn)工藝中。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于將少根根霉真菌按重量比為0.1-0.8％的比例用于普洱茶的大生產(chǎn)過(guò)程中，其普洱茶中的茶多酚及茶褐素可控制在適當(dāng)?shù)谋壤_(dá)到提高品質(zhì)的作用，并縮短了加工時(shí)間，對(duì)普洱茶品質(zhì)的穩(wěn)定和提高發(fā)揮重要作用。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1Prhi501菌種的純化從采集到的普洱茶樣中，通過(guò)公知的平板分離(培養(yǎng)基用根霉分離純化培養(yǎng)基)得到48株少根根霉菌株。根霉純化培養(yǎng)基為馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、蒸餾水1000ml、pH自然。馬鈴薯去皮，切成塊，煮熟半小時(shí)，然后用紗布過(guò)濾，在加瓊脂和糖，熔化后補(bǔ)足水至1000ml。121℃滅菌20min。
純化方法如下(1)將固體培養(yǎng)基(馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基)熔化，冷卻至45℃，注入無(wú)菌培養(yǎng)皿中，每皿約15～20毫升，稍微搖轉(zhuǎn)，靜置，使成平板備用。
(2)取要分離的茶樣2g，在火焰旁加到裝有98ml無(wú)菌水的研缽中研碎，此時(shí)得到的是10-2的菌懸液。
(3)稀釋按十倍稀釋法把菌懸液稀釋至10-8，十倍法是指下一管的菌懸液要比上一管的稀十倍。
(4)接種事先準(zhǔn)備好的平板9套，分別標(biāo)號(hào)為10-6、10-7、10-8，每個(gè)稀釋度寫(xiě)三套平皿，以便比較。在每個(gè)已標(biāo)號(hào)的平皿中注入1ml相應(yīng)的菌懸液，用涂布棒涂均勻，放入25～28℃培養(yǎng)24小時(shí)觀察。
(5)培養(yǎng)2～5天后，挑取單個(gè)菌落，并移植于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的斜面上培養(yǎng)，根據(jù)菌體形態(tài)和菌落特征鑒別是否是根霉。
(6)最后把選出的菌種接種到天然培養(yǎng)基上(葡萄糖30g、麩皮10g、玉米粉50g、蛋白胨10g、酵母膏1.0g、加蒸餾水至1000，pH自然。放到25±2℃恒溫箱中早晚?yè)u動(dòng)培養(yǎng)5～7天后，在無(wú)菌超作臺(tái)上用無(wú)菌濾紙過(guò)濾，無(wú)菌收獲濾紙上的菌絲和少根根霉的孢子，放到25±2℃恒溫箱中干燥即可用于接種發(fā)酵試驗(yàn)。
實(shí)施例2少根根霉真菌的生產(chǎn)應(yīng)用將毛茶按傳統(tǒng)的方法進(jìn)行濕熱，隨后在毛茶中接種重量比為0.1-0.8％的Prhi501讓其發(fā)酵，當(dāng)堆溫升高到25±3℃時(shí)，Prhi501開(kāi)始進(jìn)行代謝，并且隨著堆溫進(jìn)一步的升高，分泌出大量的糖化酶。這些酶對(duì)茶葉中的內(nèi)含成分進(jìn)行氧化、水解。其中還原糖、可溶性碳水化合物和水化果膠呈現(xiàn)不斷增加的趨勢(shì)，但由于此時(shí)茶葉中除Prhi501外，還有大量的其它微生物開(kāi)始滋生，多糖水解產(chǎn)物被這許多的微生物用于生長(zhǎng)繁殖所消耗，因此可溶性碳水化合物的含量到出堆時(shí)比普洱茶大生產(chǎn)和模擬大生產(chǎn)的都少。同時(shí)在出堆茶樣中粗纖維的含量也較傳統(tǒng)處理的少，這說(shuō)明，接種Prhi501到毛茶原料中讓其發(fā)酵的過(guò)程比起大生產(chǎn)和模擬大生產(chǎn)的發(fā)酵程度都深，Prhi501能加速形成普洱茶品質(zhì)特征和縮短加工時(shí)間。
經(jīng)接種少根根霉真菌后生產(chǎn)的普洱茶，其品質(zhì)有明顯的提高，普洱茶中的茶多酚含量為15～17％、茶褐素含量為10～12％，形成的普洱茶產(chǎn)品，湯色紅濃明亮，滋味甘滑，獨(dú)特陳香。
權(quán)利要求
1.一種少根根霉真菌，由生產(chǎn)菌株和輔料經(jīng)初篩、復(fù)篩、天然培養(yǎng)基培養(yǎng)、及根霉純化培養(yǎng)工序后得到；其特征在于生產(chǎn)菌株為少根根霉(Rhizopus arrhizus)Prhi501，保藏日期2007年3月1日，保藏號(hào)CGMCC No.1963。
2.權(quán)利要求1所述少根根霉真菌的應(yīng)用，其特征在于該少根根霉真菌在普洱茶的生產(chǎn)工藝中應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種少根根霉真菌及其在普洱茶生產(chǎn)中的應(yīng)用，屬生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的少根根霉，由生產(chǎn)菌株和輔料經(jīng)傳統(tǒng)的初篩、復(fù)篩、天然培養(yǎng)基培養(yǎng)、及根霉純化培養(yǎng)工序后得到，生產(chǎn)菌株為少根根霉(Rhizopus arrhizus)Prhi501，保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏單位地址北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號(hào)，保藏日期2007年3月1日，保藏號(hào)CGMCC No.1963。該少根根霉真菌有提高普洱茶品質(zhì)的作用，可應(yīng)用于普洱茶的生產(chǎn)工藝中。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于將少根根霉真菌按重量比為0.1－0.8％的比例用于普洱茶的大生產(chǎn)過(guò)程中，其普洱茶中的茶多酚及茶褐素可控制在適當(dāng)?shù)谋壤_(dá)到提高品質(zhì)的作用，并縮短了加工時(shí)間，對(duì)普洱茶品質(zhì)的穩(wěn)定和提高發(fā)揮重要作用。
文檔編號(hào)C12R1/845GK101054556SQ20071006578
公開(kāi)日2007年10月17日 申請(qǐng)日期2007年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月6日
發(fā)明者周紅杰, 龔家順, 秘鳴, 安文杰, 張春花, 袁文俠, 單治國(guó) 申請(qǐng)人:云南農(nóng)業(yè)大學(xué)