專利名稱：甲基潑尼松龍脫氫物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種甲基潑尼松龍脫氫物的制備方法，屬于藥物化學(xué)及生物制藥 技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
甲基潑尼松龍是一種皮質(zhì)激素藥物，它具有抗炎，抗內(nèi)毒素，抑制免疫，抗 休克等藥理作用，可以制成臨床用針劑，在臨床上具有非常重要的作用。由于甲基潑尼松龍 藥物的生產(chǎn)工藝技術(shù)非常復(fù)雜，生產(chǎn)周期長，屬于技術(shù)密集型產(chǎn)品。其中，甲基潑尼松龍l 位脫氫工序是甲基潑尼松龍生產(chǎn)過程中的一個關(guān)鍵步驟，直接影響到甲基潑尼松龍的質(zhì)量和 收率。原有脫氫工藝一般用Se02脫氫，Se02是劇毒物質(zhì)，污染大，且反應(yīng)收率低， 一般只有 55%，產(chǎn)物質(zhì)量差，產(chǎn)物中殘留的微量Se02很難消除。經(jīng)檢索，目前甲基潑尼松龍的合成方法有10多種，均為上世紀五六十年代開發(fā)，共同缺 點是收率低，成本高。1959年發(fā)表于美國化學(xué)文摘(見CA59P14074)上的合成方法，共有10步 化學(xué)反應(yīng)，但其中的脫氫和置換兩步反應(yīng)效果都很差，脫氫反應(yīng)收率只有55%，導(dǎo)致成本太 高，無法實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。因此申請人經(jīng)過試驗研究對其中的脫氫反應(yīng)進行了優(yōu)化。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種甲基潑尼松龍脫氫物的制備方法。本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的 不足，采用甲基潑尼松龍中間體為發(fā)酵底物，用生物脫氫代替化學(xué)脫氫，其收率達到70 85%，產(chǎn)品純度達到97%以上，工藝環(huán)保。本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的 一種甲基潑尼松龍脫氫物的制備方法以甲基潑尼松龍中間體為發(fā)酵底物，用節(jié)桿菌進行生物脫氫而得。具體的說，將甲基潑尼松龍中間體以二氧六環(huán)作溶劑溶解或用氣流粉碎，投入已培養(yǎng)好節(jié)桿菌的發(fā)酵罐中進行生物轉(zhuǎn)化，然后離心、干燥得粗品，再用甲醇、冰醋酸、T試劑和活性碳提取并精制，干燥后即得甲基潑尼松龍脫氫物。所述的甲基潑尼松龍中間體為以下5種之一①6a-甲基-lie， 17a-二羥基-孕甾-4-稀-3， 20-二酮；②6a-甲基-17a-羥基-孕甾-4-稀-3， 11， 20-三酮-21-醋酸酯；③6a-甲 基-lie， 17 a-二羥基-孕甾-4-稀-3， 20-二酮-21-醋酸酯；④6 a -甲基-17 a-羥基-孕甾 -4-稀-3， 11， 20-三酮； 6 a-甲基-lie， 17 a ， 21-三羥基-孕留-4-稀-3， 20-二酮。甲基潑尼松龍中間體的投料濃度為0.5 2% (相對于發(fā)酵液容積)；在發(fā)酵罐中的氧化 溫度為30 34°C ，氧化時間為42 55小時。溶解投料時溶劑二氧六環(huán)的用量為底物重量的7 15倍。 干粉投料時底物用氣流粉碎至細度10um以下的占90%以上。 本發(fā)明制備甲基潑尼松龍脫氫物的工藝流程如下節(jié)桿菌斜面培養(yǎng)-^ 一級種子培養(yǎng)-^二級種子培養(yǎng)-^三級種子培養(yǎng)-^投料-^加熱7(TC以上放罐-^離心、干燥-^提取并精制-^產(chǎn)物與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用甲基潑尼松龍中間體為發(fā)酵底物，用節(jié)桿菌生物脫氫代替 傳統(tǒng)的化學(xué)脫氫工藝，收率從55%提高到70 85%，成本大大較低，產(chǎn)品純度達到97%以上， 從而使甲基潑尼松龍的合成得以實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)；且完全避免了劇毒物質(zhì)Se02的殘留，工藝 環(huán)保。
具體實施例方式本發(fā)明的實施例l:節(jié)桿菌依次進行斜面培養(yǎng)、 一級種子培養(yǎng)、二級種子培養(yǎng)和三級種子培養(yǎng)；將6a-甲基-11{3， 17a-二羥基-孕甾-4-稀-3， 20-二酮用氣流粉碎至細度10um以 下的占90%以上，投入已培養(yǎng)好節(jié)桿菌的發(fā)酵罐中，投料濃度1.5%，氧化溫度3(TC，氧化時間 47小時，加熱7(TC以上放罐，然后離心、干燥得粗品，轉(zhuǎn)化率88.66%，底物7. 23%，主雜質(zhì) 2.79%;再用甲醇、冰醋酸、T試劑和活性碳提取并精制，干燥后得甲基潑尼松龍脫氫物，含 量96. 29%，最大雜質(zhì)含量l. 10%，收率71. 18%。本發(fā)明的實施例2:節(jié)桿菌依次進行斜面培養(yǎng)、 一級種子培養(yǎng)、二級種子培養(yǎng)和三級種 子培養(yǎng)；將6a-甲基-17a-羥基-孕甾-4-稀-3， 11， 20-三酮-21-醋酸酯用氣流粉碎至細度 10um以下的占90。/。以上，投入已培養(yǎng)好節(jié)桿菌的發(fā)酵罐中，投料濃度0.5%，氧化溫度31。C，氧 化時間42小時，加熱7(TC以上放罐，然后離心、干燥得粗品，轉(zhuǎn)化率92. 16%，底物l. 56%，主 雜質(zhì)4.54%;再用甲醇、冰醋酸、T試劑和活性碳提取并精制，干燥后得甲基潑尼松龍脫氫物 ，含量96. 30%，最大雜質(zhì)含量l. 23%，收率78. 75%。本發(fā)明的實施例3:節(jié)桿菌置于發(fā)酵罐中進行培養(yǎng)；將6a-甲基-lie， 17a-二羥基-孕 甾-4-稀-3， 20-二酮-21-醋酸酯用15倍重量的二氧六環(huán)溶解，投入已培養(yǎng)好節(jié)桿菌的發(fā)酵罐 中，投料濃度1.0%，氧化溫度30。C，氧化時間55小時，加熱70。C以上放罐，然后離心、干燥 得粗品，轉(zhuǎn)化率89. 17%，底物6. 46%，主雜質(zhì)2. 67%;再用甲醇、冰醋酸、T試劑和活性碳提取 并精制，干燥后得甲基潑尼松龍脫氫物，含量96. 99%，最大雜質(zhì)含量O. 85%，收率82. 36%。本發(fā)明的實施例4:節(jié)桿菌依次進行斜面培養(yǎng)、 一級種子培養(yǎng)、二級種子培養(yǎng)和三級種
子培養(yǎng)；將6a-甲基-17a-羥基-孕甾-4-稀-3， 11， 20-三酮用7倍重量的二氧六環(huán)溶解，投 入已培養(yǎng)好節(jié)桿菌的發(fā)酵罐中，投料濃度1.1%，氧化溫度34。C，氧化時間49小時，加熱7(TC 以上放罐，然后離心、干燥得粗品，轉(zhuǎn)化率87. 7%，底物8.26%，主雜質(zhì)2. 17%;再用甲醇、冰 醋酸、T試劑和活性碳提取并精制，干燥后得甲基潑尼松龍脫氫物，含量97. 05%，最大雜質(zhì)含 量O. 86%，收率79. 53%。本發(fā)明的實施例5:節(jié)桿菌置于發(fā)酵罐中進行培養(yǎng)；將6a-甲基-lie， 17a，21-三羥基 -孕甾-4-稀-3， 20-二酮用10倍重量的二氧六環(huán)溶解，投入已培養(yǎng)好節(jié)桿菌的發(fā)酵罐中，投 料濃度2%，氧化溫度3rC，氧化時間55小時，加熱7(TC以上放罐，然后離心、干燥得粗品， 轉(zhuǎn)化率87. 7%，底物8.26%，主雜質(zhì)2. 17%;再用甲醇、冰醋酸、T試劑和活性碳提取并精制， 干燥后得甲基潑尼松龍脫氫物，含量97. 05%，最大雜質(zhì)含量O. 86%，收率70. 58%。
權(quán)利要求
1.一種甲基潑尼松龍脫氫物的制備方法，其特征在于它是以甲基潑尼松龍中間體為發(fā)酵底物，用節(jié)桿菌進行生物脫氫而得。
2.按照權(quán)利要求l所述甲基潑尼松龍脫氫物的制備方法，其特征在于 :將甲基潑尼松龍中間體以二氧六環(huán)作溶劑溶解或用氣流粉碎，投入已培養(yǎng)好節(jié)桿菌的發(fā)酵 罐中進行生物轉(zhuǎn)化，然后離心、干燥，提取并精制，即得甲基潑尼松龍脫氫物。
3.按照權(quán)利要求1或2所述甲基潑尼松龍脫氫物的制備方法，其特征在于所述的甲基潑尼松龍中間體為以下5種之一①6a-甲基-lie， 17a-二羥基-孕甾 -4-稀-3， 20-二酮;②6a-甲基-17 a-羥基-孕甾-4-稀-3， 11， 20-三酮-21-醋酸酯；③6 a -甲基-lip, 17 a-二羥基-孕甾-4-稀-3， 20-二酮-21-醋酸酯；④6 a -甲基-17 a -羥基-孕 甾-4-稀-3， 11， 20-三酮；⑤6a-甲基-11{3， 17 a ， 21-三羥基-孕甾-4-稀-3， 20-二酮。
4.按照權(quán)利要求2所述甲基潑尼松龍脫氫物的制備方法，其特征在于 :甲基潑尼松龍中間體的投料濃度為0.5 2%;在發(fā)酵罐中的氧化溫度為30 34'C，氧化時 間為42 55小時。
5.按照權(quán)利要求2所述甲基潑尼松龍脫氫物的制備方法，其特征在于 :溶解投料時溶劑二氧六環(huán)的用量為底物重量的7 15倍。
6.按照權(quán)利要求2所述甲基潑尼松龍脫氫物的制備方法，其特征在于 :干粉投料時底物用氣流粉碎至細度1 Oum以下的占90%以上。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種甲基潑尼松龍脫氫物的制備方法，該方法是以甲基潑尼松龍中間體為發(fā)酵底物，用節(jié)桿菌進行生物脫氫而得。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用甲基潑尼松龍中間體為發(fā)酵底物，用節(jié)桿菌生物脫氫代替?zhèn)鹘y(tǒng)的化學(xué)脫氫工藝，收率從55％提高到70～85％，成本大大較低，產(chǎn)品純度達到97％以上，使甲基潑尼松龍的合成得以實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)；且完全避免了劇毒物質(zhì)SeO₂的殘留，工藝環(huán)保。
文檔編號C12P33/00GK101153313SQ20071020163
公開日2008年4月2日 申請日期2007年9月10日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月10日
發(fā)明者應(yīng)明華, 張直慶, 偉 林 申請人:浙江仙琚制藥股份有限公司