專利名稱：：旋光手性胺的制備方法旋光手性胺的制備方法本發(fā)明涉及一種制備旋光手性胺的方法。手性胺在藥物、農(nóng)業(yè)化學(xué)和化學(xué)工業(yè)中起著重要的作用。它們經(jīng)常被用作各種生理學(xué)例如藥學(xué)活性物質(zhì)如頭孢菌素或吡咯烷衍生物的制備用中間體或合成子(syn仇on)。在手性胺的各種大量應(yīng)用中，只有一種特定的旋光形式，(R)或(S)對(duì)映體具有期望的生理學(xué)活性。因此，迫切需要提供旋光活性形式的手性胺的制備方法。這些需要可通過(guò)加入手性羧酸對(duì)非對(duì)映體鹽進(jìn)行結(jié)晶來(lái)制備手性胺(Breuer等.，AngewandteChemie(2004)116,806-843)*而部分得到滿足。其他化學(xué)方法采用將含有C=N雙鍵的手性前體還原的對(duì)映選擇性合成法。另外，采用各種酶如蛋白酶、酰胺酶或脂肪酶對(duì)外消旋體進(jìn)行立體選捧性拆分，這是已知的(Bornscheuer和Kazlauskas,HydrolasesinOrganicSynthesis(2005)，Wiley-VCHWeinheim)。特定的轉(zhuǎn)氨酶，即包括a-11^酸氨基轉(zhuǎn)氨酶的a-轉(zhuǎn)氨酶適合用于制備光學(xué)純的氨基酸，這也是已知的(Bartsch等.，Appl.Environm.Microbiol.(1996)62,3794-3799,Cho等.，Biotechnol.Bioeng.(2003)83，226-234,JPOll53084A2(1998),JP63304986A2(1988),EP0248357A2和Ziehr等.，Biotechnol.Bioeng.(1987)29,482-487)。但是，現(xiàn)有技術(shù)中的這些方法存在各種缺陷。盡管與傳統(tǒng)方法相比，酶法通常采用有利的溫和條件，并且能獲得適當(dāng)?shù)牧Ⅲw選擇性，但是它們一般都使用酶，而且酶法的底物特異性、對(duì)映體選擇性和/或轉(zhuǎn)化率對(duì)于工業(yè)應(yīng)用來(lái)說(shuō)不夠高。此外，使用轉(zhuǎn)氨酶制備旋光性胺最突出的缺點(diǎn)之一是經(jīng)常發(fā)生底物和產(chǎn)物抑制現(xiàn)象。因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種制備旋光手性胺的改進(jìn)的方法，特別是具有改進(jìn)的底物特異性、改進(jìn)的對(duì)映體選擇性和尤其是能使離析物的轉(zhuǎn)化率高達(dá)100%的方法。本發(fā)明通過(guò)提供旋光手性胺的制備方法解決了本發(fā)明的技術(shù)問(wèn)題，所述方法包括a)提供氨基受體和^給體，b)使JL^受體和JL^g與轉(zhuǎn)氨酶，特別是(R)-或(S)-選擇性轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)，c)獲得所期望的旋光手性胺和oc-酮副產(chǎn)物。按照本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，在隨后的其他任選步驟中，從步驟c)得到的反應(yīng)混合物中分離提純出步驟c)中得到的旋光手性胺。本發(fā)明的反應(yīng)機(jī)理的反應(yīng)路線如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>因此，本發(fā)明提供一種手性胺的不對(duì)稱合成法，所述方法通過(guò)采用至少一種轉(zhuǎn)氨酶從而得到所期望的產(chǎn)物，所述轉(zhuǎn)氨酶用于將JL^由JU^給體轉(zhuǎn)移至氨基受體的轉(zhuǎn)氨作用。取決于所用的具體轉(zhuǎn)氨酶的對(duì)映體優(yōu)先選擇性，可得到具有期望的光學(xué)立構(gòu)的旋光手性胺，即(R)或(S)對(duì)映體。因此，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中釆用用于不對(duì)稱合成的(S)-選擇性轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)生期望的手性胺(S)對(duì)映體；而在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中采用(R)-選擇性轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)生期望的(R)對(duì)映體。除了期望的旋光性胺，所述反應(yīng)還產(chǎn)生酮副產(chǎn)物，特別是oc-酮副產(chǎn)物，所述副產(chǎn)物由所用的M給體，和(可能的話)未轉(zhuǎn)化的氨基受體和^JJH^產(chǎn)生。本發(fā)明的上下文中的轉(zhuǎn)氨酶是催化氨基轉(zhuǎn)移的磷酸吡哆醛依賴性酶。轉(zhuǎn)氨酶以E.C.2.6.1.X分類。在本發(fā)明的特別優(yōu)選實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)氨酶是(R)或(S)選擇性轉(zhuǎn)氨酶，在優(yōu)選的實(shí)施方案中特別為co-轉(zhuǎn)氨酶。本發(fā)明上下文中的oo-轉(zhuǎn)氨酶優(yōu)選為分類號(hào)為E.C.2.6.1.18的酶。這些Jl^轉(zhuǎn)氨酶的特征在于，它們主要以胺作為底物。這些酶的進(jìn)一步的特征在于，具有大于1的(O-轉(zhuǎn)氨酶催化反應(yīng)平衡常數(shù)。根據(jù)本發(fā)明可以使用的co國(guó)轉(zhuǎn)氨酶描述在例如Lwasaki等.，Biotechnol.Lett.(2003)25,1843-1846;Shin等.，Biotechnol.Bioeng.(1997)55,348-358;Shin和Kim,BookofAbstracts,217thACSNationalMeeting,Anaheim,Calif"March21-25,(1999)180;Shin和Kim，Biosc.Biotechnol.Biochem.(2001)65，1782-1788以及Shin和Kim,Biotechnol.Bioeng.(1998)60,534-540。因此，在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)氨酶，特別是本方法中所用的co-轉(zhuǎn)氨酶為特別是由河流弧菌(W^7》_/7"v/fl//s)獲得的co-轉(zhuǎn)氨酶，特別是源自JS17菌林的轉(zhuǎn)氨酶。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)氨酶源自反硝化產(chǎn)堿菌(^/^/^^^^/^|/加7^朋力，特別是源自Y2k-2菌抹。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)氨酶源自肺炎克雷伯氏菌(JT/WW//meM/iiwiiV^)，特別是源自YS2F菌株。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)氨酶源自蘇云金芽孢桿菌(必fl"7/ws幼MnVig/e"s/s:)，特別是源自JS64菌株。菌抹的定義參見(jiàn)上文的Shin和Kim,1998。當(dāng)然，也應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明中的術(shù)語(yǔ)轉(zhuǎn)氨酶、特別是co-轉(zhuǎn)氨酶是含有轉(zhuǎn)氨酶、特別是w-轉(zhuǎn)氨酶的有機(jī)體如微生物或細(xì)胞的提取物；或含有轉(zhuǎn)氨酶、特別是(o-轉(zhuǎn)氨酶的活細(xì)胞或死細(xì)胞或微生物本身。所述微生物或細(xì)胞或提取物或轉(zhuǎn)氨酶可以以固定形式或非固定形式使用。所述轉(zhuǎn)氨酶、特別是co-轉(zhuǎn)氨酶，也可以是天然重組產(chǎn)生或基因修飾的轉(zhuǎn)氨酶，特別是由一種上述有機(jī)體中所含有的核酸序列或其衍生物部分編碼或完全編碼的co-轉(zhuǎn)氨酶或其等同物。本發(fā)明上下中的術(shù)語(yǔ)旋光手性胺所涉及的主題與術(shù)語(yǔ)對(duì)映體活性(enantiomericallyactive)手性胺相同。這些術(shù)語(yǔ)特別是指基本上不含有，在更優(yōu)選的實(shí)施方案中甚至不含有不希望的對(duì)映體的制劑。因此，旋光手性胺實(shí)質(zhì)上含有過(guò)量的一種對(duì)映體或甚至只由一種對(duì)映體組成。特別地，本發(fā)明上下文中的旋光手性胺的光學(xué)純度為至少70%，特別地為大于90%，最好>99%。本發(fā)明中的光學(xué)純度是以一種對(duì)映體相對(duì)于另一種對(duì)映體的過(guò)量。/o表示的。因此，光學(xué)純度("/。是指(R)和(S)對(duì)映體濃度之差與二種對(duì)應(yīng)體濃度之和的商(A的光學(xué)純度(。/。)=([A-[B]):([A]+[B)x100，其中A和B表示(R)和(S)對(duì)映體的濃度，或>^之亦然)。本發(fā)明中，優(yōu)選氨基受體轉(zhuǎn)化為所期望的手性胺的轉(zhuǎn)化率為至少40,50，60，70,80，卯，95，特別地為100%。用于分析光學(xué)純度和轉(zhuǎn)化率的濃度可由例如氣相色鐠法(GC)或光度計(jì)法或熒光計(jì)法測(cè)定。在本發(fā)明上下文中，氨基受體為能夠接受由M給體通過(guò)轉(zhuǎn)氨酶，特別是co-轉(zhuǎn)氨酶轉(zhuǎn)移過(guò)來(lái)的氨基的分子。在本發(fā)明的特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述氨基受體含有酮官能團(tuán)。在本發(fā)明的特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述氨基受體選自苯丙酮酸及其鹽、丙酮酸及其鹽、苯乙酮、2-酮戊二酸(2-ketoglutarate)、3-氧代丁酸(oxobutyrate)、2-丁酮、3-氧代"比咯烷(3-OP)、3-吡咬基甲基酮(3-PMK)、3-氧代丁酸乙酯(3-OBEE)、3-氧代戊酸甲酯(3-OPME)、N-l-boc-3-氧代哌啶酮、N-l-boc-3-氧代吡咯烷(B30P)、3-氧代哌啶、烷基-3-氧代丁酸酯(alkyl-3-oxobutonoate)，曱氡基丙酮和1-氧代四氳萘酮。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，氨基受體為B30P。本發(fā)明上下文中的^^體為在使用轉(zhuǎn)氨酶、特別是co-轉(zhuǎn)氨酶時(shí)，能夠?yàn)榘被荏w提供氨基的分子。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述M*是胺或#^酸。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述^IU^體選自P-丙氨酸，丙氨酸特別是D,L-丙氨酸、L-丙氨酸或D-丙氨酸，oc-甲基千基胺(oc-MBA)，谷氨酸，苯丙氨酸，甘氨酸，3-氨基丁酸，異丙胺，2-氨基丁烷，丁酸和其中任一種的鹽如氯化物。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，得到的酮產(chǎn)物可為苯丙酮酸及其鹽、丙酮酸及其鹽、乙醛酸及其鹽、苯乙酮、2-酮戊二酸、丙酮、3-氧代丁酸、2-丁酮、3-氧代吡咯烷(3-OP)、3-吡^&甲基酮(3-PMK)、3-氧代丁酸乙酯(3-OBEE)、3-氧代戊酸曱酯(3-OPME)、N-l-boc-3-氧代艱咬酮、N-l-boc-3-氧代吡咯烷(B30P)或它們中的任一種的鹽如氯化物。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，JUJ^是丙氨酸，特別是L-丙氨酸。在另外優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種制備旋光手性胺的方法，所述胺選自具有旋光性氨基的胺，特別是具有烷基、支鏈烷基或芳烷基的胺。特別地，這些胺(特別是單或雙環(huán)胺)，特別地為5或6元環(huán)、或S-、O-或N-取代的雜環(huán)烴基或芳香胺，特別地為烷基或烷H^取代的芳香胺。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，得到的手性胺選自苯丙氨酸、丙氨酸、3-M哌咬、烷基-3-^J^-丁酸酯、3-氨基吡咯烷(3-AP)、3-吡^-l-乙胺(3-PEA)、N-l-boc-3-氨基吡咯烷(B3AP)、3-氨基丁酸乙酯(3-ABEE)、3畫(huà)^^戊酸甲酯(3畫(huà)APME)、oc-甲基千基胺(oc畫(huà)MBA)、1醒^J^四氫化萘、oc-甲基-4-(3-吡>^)-丁胺、谷氨酸、P-#^丁酸(P-aminobutyrate)、仲丁胺、甲IL^異丙胺、3-M吡咯烷的衍生物、l-N-Boc-3-^&哌啶、頭孢菌素和頭孢菌素的衍生物。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明因此預(yù)見(jiàn)到使30P與(S)或(R)選擇性轉(zhuǎn)氨酶以及JUJ^反應(yīng)，獲得旋光性(S)或(R)-3AP。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明預(yù)見(jiàn)到4吏3-PMK與(R)或(S)選擇性轉(zhuǎn)氨酶以及JISJH^反應(yīng)，獲得旋光性(R)或(S)3-PEA。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明預(yù)見(jiàn)到使3-OBEE與(R)或(S)選擇性轉(zhuǎn)氨酶以及JUJ^反應(yīng)，獲得旋光性(R)或(S)3-ABEE。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明預(yù)見(jiàn)到使3-OPME與(R)或(S)選擇性轉(zhuǎn)氨酶以及^JJ^反應(yīng)，獲得旋光性(R)或(S)3-APME。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明預(yù)見(jiàn)到將B30P與(R)或(S)選擇性轉(zhuǎn)氨酶以及Jl&給體，尤其是丙氨酸反應(yīng)，獲得旋光性(R)或(S)B3AP。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及B30P與^^給體、特別是丙氨酸，在轉(zhuǎn)氨酶的存在下反應(yīng)以獲得旋光性B3AP和丙酮酸，其中，所述反應(yīng)在pH為5.0~9.5、優(yōu)選為6.0~7.0、特別地為6.0~6.9下反應(yīng)30~70分鐘、特別地4065分鐘、特別地5060分鐘。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)氨酶為(R)選擇性轉(zhuǎn)氨酶。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)氨酶為(S)選擇性轉(zhuǎn)氨酶。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，B30P與^itJJ^體，特別是與丙氨酸的所述反應(yīng)是在至少一種丙酮,羧酶(PDC)存在下進(jìn)行的。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，B30P與^J^^,特別是與丙氨酸在至少一種丙酮,羧酶存在下的所述反應(yīng)在同時(shí)在反應(yīng)混合物中引入氮?dú)獾臈l件下進(jìn)行，以除去通過(guò)PDC的作用由生成的丙酮酸得到的乙醛。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，B30P與^IL^體，特別是與丙氨酸在至少一種丙酮酸脫羧酶的存在下的所述反應(yīng)在至少一種乙醇脫氫酶(ADH)的存在下進(jìn)行，以除去通過(guò)PDC的作用、由生成的丙酮酸得到的乙醛。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述B30P與M給體、特別是丙氨酸，在至少一種丙酮酸脫羧酶的存在下的所述反應(yīng)在同時(shí)向反應(yīng)混合物中引入氮?dú)獾臈l件下進(jìn)行，其中《^應(yīng)介質(zhì)中存在至少一種乙醇脫氫酶以除去通過(guò)PDC的作用、由生成的丙酮酸得到的乙醛。在本發(fā)明另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明預(yù)見(jiàn)到將苯乙酮與(R)或(S)選擇性轉(zhuǎn)氨酶以及^^反應(yīng)，以獲得旋光(R)或(S)oc-MBA。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明預(yù)見(jiàn)到將氨基受體，特別是單或雙環(huán)、含氧橋基(oxogro叩)的5~6元環(huán)或S-、O-或N-取代的雜環(huán)烴基或芳族氨基受體，特別是烷基或烷lL&取代的芳族氨基受體與JtJ^^以及(R)或(S)選擇性轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)，以獲得旋光性胺，特別是單或雙環(huán)胺，特別是5~6元環(huán)或S-、O-或N-取代的雜環(huán)烴基或芳香胺，特別是烷基或烷lt^取代的芳香胺，特別是以(S)或(R)形式獲得旋光性胺。在本發(fā)明的特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，氨基受體和M給體的反應(yīng)使用轉(zhuǎn)氨酶，在水性介質(zhì)，如生理緩沖液中進(jìn)行。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)氨化反應(yīng)在pH為5.0~9.5或5.0~9.0,特別地為7~8.5下進(jìn)行。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明預(yù)見(jiàn)到將氨基受體和M給體在pH為6.0~7.0，優(yōu)選為6.0~6.9下進(jìn)行反應(yīng)。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述反應(yīng)在溫度為10~65n，優(yōu)選為20~50"C,特別地為18~25匸，優(yōu)選為室溫、或34匸39t:，特別地為371C下進(jìn)行。在本發(fā)明另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，氨基受體和JtJJ^以1:50~1:200的摩爾比，特別地為1:50~1:100，特別地為1:100，特別地為1:1~1:5,特別地為1:1~1:2提供。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，酶活性可為1~20.000jimol/min。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述反應(yīng)的及k應(yīng)時(shí)間為3070,優(yōu)選為40~65,特別地為5060分鐘。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種如上所述的制備旋光手性胺的方法，即，在所述第一步驟a)中提供氨基受體和^J^體，在第二步驟b)中將氨基受體和^J^給體與至少一種co-轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)，在第三步驟c)中獲得光學(xué)純手性胺和a-酮副產(chǎn)物，在另一步驟d)中將步驟c)中得到的酮副產(chǎn)物、特別是oc-酮副產(chǎn)物從得到的反應(yīng)混合物中除去，特別是通過(guò)與酶的反應(yīng)除去，也就是說(shuō)通過(guò)酶的分解，特別是采用選自脫羧酶、合酶或脫氳酶的酶進(jìn)行酶分解而除去。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，步驟C)中得到的酮副產(chǎn)物、特別是丙酮酸通過(guò)與丙酮酸脫羧酶(PDC)如得自釀酒酵母(5ViccA^wi^c^cem^wVie)、酵單胞菌(々附o附o"as1附o緣.s)或標(biāo)櫚發(fā)酵細(xì)菌(々附"6fl"er/m/附"e)的丙酮酸脫羧酶的反應(yīng)而除去，從而優(yōu)選產(chǎn)生乙醛和co2。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種方法，其中獲得的酮產(chǎn)物、特別是丙酮酸通過(guò)PDC的作用而被除去，其中由此生成的乙醛通過(guò)例如化學(xué)、酶或物理處理而除去。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種方法，其中獲得的酮產(chǎn)物、特別是丙酮酸通過(guò)PDC的作用而被除去，其中由此生成的乙醛通過(guò)例如向>^應(yīng)混合物中通入氮?dú)舛?，?yōu)選向反應(yīng)混合物中連續(xù)通入所述氮?dú)庖詮姆磻?yīng)混合物中除去乙醛。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種方法，其中獲得的酮產(chǎn)物、特別是丙酮酸通過(guò)PDC的作用而被除去，其中由此生成的乙醛通過(guò)乙醛與至少一種乙醇脫氫酶(ADH)的反應(yīng)而從反應(yīng)混合物中除去，并且所述乙醛轉(zhuǎn)化為乙醇。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種方法，其中獲得的酮產(chǎn)物、特別是丙酮酸通過(guò)與PDC的作用而被除去，其中由此生成的乙醛通^±^>^應(yīng)混合物施加減壓而除去。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種方法，其中獲得的酮產(chǎn)物、特別是丙酮酸通過(guò)PDC的作用而被除去，其中由此生成的乙醛通過(guò)化學(xué)反應(yīng)而除去。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種方法，其中獲得的酮產(chǎn)物、特別是丙酮酸通過(guò)PDC的作用而被除去，其中由此生成的乙醛通過(guò)例如向反應(yīng)混合物中通入氮?dú)?，?yōu)選向反應(yīng)混合物中連續(xù)通入氮?dú)舛?，并且其中另外使乙醛與至少一種乙醇脫氫酶(ADH)反應(yīng)以從反應(yīng)混合物中除去所述乙醛，并且所述乙醛轉(zhuǎn)化為乙醇。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，步驟c)得到的酮產(chǎn)物、特別是丙酮酸通過(guò)與乳酸脫氫酶(LDH)例如得自大腸桿菌(&c/imV^/flco/,)的乳酸脫氳酶反應(yīng)而被除去，從而優(yōu)選得到L-乳酸。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，步驟c)得到的酮產(chǎn)物、特別是丙酮酸通過(guò)與乙酰乳酸^酶反應(yīng)而被除去，從而優(yōu)選得到乙酰乳酸。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，步驟C)得到的酮產(chǎn)物、特別是丙酮酸連續(xù)M反應(yīng)混合物中除去。這些特別優(yōu)選的實(shí)施方案具有能獲得特別高的轉(zhuǎn)化率的優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)樗龇椒◤钠胶?gt;^應(yīng)中除去了作為副產(chǎn)物的酮產(chǎn)物。迫^A應(yīng)向產(chǎn)物方向進(jìn)行，因而獲得了對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物的高立體選擇性以及高轉(zhuǎn)化率。本發(fā)明還涉及制備生理活性化合物或用于制備它們的前體和/或中間體的方法，所述生理活性化合物或它們的前體和/或中間體特別地選自3-氛基吡咯烷衍生物、頭孢菌素、頭孢菌素衍生物、雜環(huán)硼酸、L-二羥苯丙氨酸(L-Dopa)、oc-甲基多巴、D-苯基甘氨酸、P-羥基苯基甘氨酸、草銨膦酸(phosphinothricine)、嘧咬并衍生物和吡咯烷酮衍生物，其中可釆用本發(fā)明任何一種上文定義的方法。在本發(fā)明的上下文中，生理活性化合物為對(duì)植物、動(dòng)物、人、酵母或微生物如原生動(dòng)物、細(xì)菌或病毒具有生理活性的化合物，也就是說(shuō)，能與有機(jī)體的新陳代謝相互作用的化合物。本發(fā)明另外的優(yōu)選實(shí)施方案為從屬權(quán)利要求的主題。通過(guò)下文的實(shí)施例和附圖，對(duì)本發(fā)明作更詳細(xì)的說(shuō)明。附圖解釋4兌明本發(fā)明。圖l所示的是薄層色鐠圖。圖2所示的是河流弧菌(0-TA的相對(duì)活性對(duì)pH值的依賴性。圖3所示的是用不同物質(zhì)進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)B3AP濃度的相對(duì)下降。圖4所示的是在存在丙酮酸和乙醛時(shí)B3AP轉(zhuǎn)化率的相對(duì)下降。圖5所示的是不同壓力下B30P到B3AP的轉(zhuǎn)化率與時(shí)間的關(guān)系。圖6所示的是在不同PDC存在下B30P到B3AP的相對(duì)轉(zhuǎn)化率。圖7所示的是丙氨酸濃度的升高以及PDC濃度的升高對(duì)B3AP的不對(duì)稱合成的影響。圖8所示的是在升高的丙氨酸濃度下B30P到B3AP的轉(zhuǎn)化率。圖9所示的是B30P到B3AP的轉(zhuǎn)化率與相對(duì)PLP的依賴性。圖10所示的是B30P到B3AP的相對(duì)轉(zhuǎn)化率與N2存在的關(guān)系。圖11所示的是在ADH存在下B30P到B3AP的相對(duì)轉(zhuǎn)化率。實(shí)施例1:B3AP的不對(duì)稱合成B3AP的不對(duì)稱合成是在1.5ml的反應(yīng)管中進(jìn)行的。采用B30P作為氨基受體，其濃度為5mM(7.5jimo1)。所用的絲給體L-丙氨酸的濃度為5mM。所用試劑和所采用的反應(yīng)條件見(jiàn)下表l。表l:采用(S)-w轉(zhuǎn)氨酶將丙氨酸的氨基轉(zhuǎn)移至B30P的(S)-B3AP的不對(duì)稱合成反應(yīng)條件<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>所用緩沖液為50mM的磷酸鈉，pH為7。TA7是指源自河流弧菌的co-轉(zhuǎn)氨酶(JtilichFineChemicals,德國(guó))。TA8是指源自反硝化產(chǎn)堿菌的co-轉(zhuǎn)氨酶(JiilichFineChemicals,德國(guó))。用大腸桿菌提取物作為乳酸脫氫酶。另外，加入NADH直至最終濃度為10mM。丙酮,羧酶的濃JLA變化的。釆用了1.5單位(20pl)和15單位(200jil)釀酒酵母的丙酮,羧酶(PDC1)。采用2單位(3.4nl)和20單位(34nl)酵單胞菌的丙酮軀羧酶(PDC2)。表2:采用TA8進(jìn)行B3AP的不對(duì)稱合成所得到的轉(zhuǎn)化率和光學(xué)純度。計(jì)算結(jié)果基于0(:分析(+/-5%)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>現(xiàn)在參照上表2，顯然，在采用了co-轉(zhuǎn)氨酶TA8的6個(gè)試驗(yàn)的每一個(gè)中，能夠獲得光學(xué)純度非常高的所得(S)-B3AP。還可以觀察到，如果不影響反應(yīng)平衡(試驗(yàn)l),則無(wú)論使用TA7還是TA8，轉(zhuǎn)化率僅僅為中等。采用10-50倍過(guò)量的丙氨酸只能稍微提高轉(zhuǎn)化率。在試驗(yàn)3、4、5和6中，在轉(zhuǎn)氨化反應(yīng)過(guò)程中從反應(yīng)體系中除去了反應(yīng)的酮產(chǎn)物，即丙酮酸。采用TA8和源自大腸桿菌的乳酸脫氫酶(試驗(yàn)6)顯著提高了轉(zhuǎn)化率，同時(shí)保持甚至提高對(duì)映體選擇性。該規(guī)律對(duì)于源自酵單胞菌的丙酮B羧酶實(shí)質(zhì)上也適用(試驗(yàn)35)。但是，PDC1只能稍微提高轉(zhuǎn)化率，PDC2如果反應(yīng)24小時(shí)則能中等程度提高轉(zhuǎn)化率(試驗(yàn)4)，而反應(yīng)72小時(shí)則能顯著提高轉(zhuǎn)化率(試驗(yàn)5)。除了試驗(yàn)5的反應(yīng)時(shí)間為72小時(shí)以外，所有的反應(yīng)都進(jìn)行了24小時(shí)。附圖所示的是按表l進(jìn)行的反應(yīng)的薄層色鐠圖。"A"表示源自反硝化產(chǎn)堿菌的co-轉(zhuǎn)氨酶，而"V"表示源自河流弧菌的co-轉(zhuǎn)氨酶；"K"表示單獨(dú)釆用TA7或TA8的試驗(yàn)l(試驗(yàn)1)。PDC1表示用釀酒酵母丙酮自羧酶進(jìn)行的試驗(yàn)(試驗(yàn)3),LDH表示用源自大腸桿菌的乳酸脫氫酶進(jìn)行的試驗(yàn)(試驗(yàn)6),PDC2表示用酵單胞菌丙酮酸脫羧酶進(jìn)行的試驗(yàn)(24小時(shí)和72小時(shí)后)(試驗(yàn)4和5)。因此，結(jié)果清楚地表明可以以非常高的對(duì)映體選擇性由前手性酮B30P制備(S)-B3AP。但是，采用co-轉(zhuǎn)氨酶作為制備方法中唯一的酶，得到中等的轉(zhuǎn)化率。這種中等的轉(zhuǎn)化率可通iWw平衡反應(yīng)中除去丙酮酸而得到大幅提高，特別是采用乳,氫酶或丙酮自羧酶。尤其是采用丙酮自羧酶，具有不需要輔因子回收(NADH)(co-factorrecycling)的優(yōu)點(diǎn)。另外有利地用PDC酶去除丙酮酸，并由此具有額外的優(yōu)點(diǎn)，即消除或避免產(chǎn)物(產(chǎn)物酮)抑制以及^Jl應(yīng)平衡右移從而獲得較高的轉(zhuǎn)化率(理想情況下為100%)。實(shí)施例2:在(S)-aMBA轉(zhuǎn)化為苯乙酮的轉(zhuǎn)化Jl應(yīng)中co-轉(zhuǎn)氨酶活性的pH值依賴性在石英比色杯中進(jìn)行合成，釆用50nl100mM丙酮酸，4單位/ml的河流弧菌(后文也稱之為，co-TA(12jil)和388jul磷酸鈉緩沖液，50mM，pH值以0.2的梯度由pH6.0向pH7.4變化。以50jli1100mM(S)-ocMBA作為^JJ^開(kāi)始進(jìn)行反應(yīng)，測(cè)量在250~260nm處的吸光度增大。所述吸光度增大是由于苯乙酮的生成造成的。其他底物對(duì)吸光度沒(méi)有明顯的影響，因此反應(yīng)速率可以通過(guò)測(cè)量苯乙酮的吸光度而加以確定。將pH值為7.4時(shí)的活性i殳定為100%，計(jì)算其他pH值時(shí)的相對(duì)活性，結(jié)果見(jiàn)圖2。圖2所示的是河流弧菌co-TA的相對(duì)活性與給定pH值的關(guān)系。圖2表明在低pH值如6.0、6.2或6.4時(shí)，還存在相當(dāng)?shù)幕钚裕缭趐H值為6.0時(shí)，活性為11%。這樣，該結(jié)果表明，即使在低pH值時(shí)，也能獲得顯著的轉(zhuǎn)氨酶活性，從而使底物的反應(yīng)能在低pH值下進(jìn)行，進(jìn)而允許通過(guò)采用對(duì)較高pH值敏感的PDC來(lái)提高轉(zhuǎn)化率。實(shí)施例3:不同pH值下B3AP的不對(duì)稱合成在本實(shí)施例中，由丙氨酸和B30P不對(duì)稱合成B3AP，是在存在或不存在丙酮Wt羧酶(PDC)下進(jìn)行的。對(duì)于pH值為6.0、6.4和7.0的每種情況，都進(jìn)行了三次試驗(yàn)。試驗(yàn)1采用酵單胞菌(野生型細(xì)胞提取物)PDC,試驗(yàn)2采用棕櫚發(fā)酵細(xì)菌的PDC(在大腸桿菌中的重組體)，試驗(yàn)3為不采用PDC、僅釆用轉(zhuǎn)氨酶的對(duì)照試驗(yàn)。為獲得比較結(jié)果，兩種PDC的活性都在pH值為6下用乙醇脫氫酶進(jìn)行測(cè)定，在上述試驗(yàn)中采用具有相同活性量的PDC。表3給出了所用的物質(zhì)的體積(ia1)。每種>^應(yīng)試驗(yàn)在pH值為6.0、6.4和7.0下進(jìn)行三次。pH值用B30P底物溶液的緩沖液調(diào)節(jié)。pH值為7.0時(shí)，PDC的活性為約2.5單位/ml。底物和酶的濃度也能從下表3中很明顯地看到。IO分鐘，30分鐘，60分鐘和120分鐘后，提取IOO|i1試樣，并加入100卩11MNaOH中止反應(yīng)。采用CE(毛細(xì)管電泳)對(duì)B3AP的濃度ii行定量分析。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>下表4所示的是對(duì)于不同的PDC,在不同pH值下的轉(zhuǎn)化率。很明顯，PDC的使用提高了轉(zhuǎn)化率。同樣明顯，源自棕櫚發(fā)酵細(xì)菌(Z/;")的PDC的轉(zhuǎn)化率比源自酵單胞菌(Z附o)的PDC的轉(zhuǎn)化率高一些。同樣明顯，在低pH值如6.0或6.4下，觀察到采用PDC的試驗(yàn)的轉(zhuǎn)化率有顯著的提高，而在沒(méi)有PDC的對(duì)照試驗(yàn)中則觀察不到。在所有的反應(yīng)試驗(yàn)中，都能觀察到120分鐘后轉(zhuǎn)化率下降。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>n.d.=沒(méi)有測(cè)定實(shí)施例4:在不對(duì)稱合成反應(yīng)的不同反應(yīng)物存在下B3AP的穩(wěn)定性為了表示在不同反應(yīng)物存在下B3AP的穩(wěn)定性，在反應(yīng)管中，在下表5所列的不同反應(yīng)物的存在下，對(duì)1mMB3AP進(jìn)行3小時(shí)的培養(yǎng)。本實(shí)施例是在pH值6和7(磷酸鈉緩沖液)下進(jìn)行的。反應(yīng)物剛開(kāi)始反應(yīng)即提取第一個(gè)試樣T。，3小時(shí)后提取另一個(gè)試樣1\。萃取后，通過(guò)CE用內(nèi)標(biāo)(ocMBA)法確定胺的濃度。從獲得的濃度差，計(jì)算出B3AP濃度的下降。/。(參見(jiàn)圖3)。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>從圖3可以看出，不同反應(yīng)物對(duì)B3AP濃度沒(méi)有顯著影響(試驗(yàn)1~9)。反應(yīng)試驗(yàn)11~13表明了乙醛的影響。從試驗(yàn)ll可以清楚地看出，在不存在轉(zhuǎn)氨酶時(shí)，B3AP濃度沒(méi)有下降；而當(dāng)存在轉(zhuǎn)氨酶和乙醛時(shí)，可以觀察到B3AP濃度大幅下降。乙醛在轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)中起著氨基受體(如丙酮酸)的作用，明顯導(dǎo)致B3AP濃度的下降。實(shí)施例5:B3AP與氨基受體丙酮酸和乙醛的反應(yīng)本實(shí)施例中表明了用于底物B3AP和丙酮酸以及用于B3AP和乙搭的河流弧菌和反硝化產(chǎn)堿菌co-TA的轉(zhuǎn)氨酶活性。將2mMB3AP與2mM丙酮酸或2mM乙醛反應(yīng)(相對(duì)于每0.5ji1反應(yīng)體積的36pl>^硝化產(chǎn)堿菌04^)或6pl河流弧菌(，的轉(zhuǎn)氨酶，對(duì)應(yīng)于2單位/n1轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)30分鐘)。圖4所示的是結(jié)果。B3AP通過(guò)這兩種酶轉(zhuǎn)化為B30P，其中這兩種酶中的每一種與丙酮酸和與乙醛一^^吏用時(shí)沒(méi)有明顯的差異。實(shí)施例6:B3AP在減壓、pH6條件下的不對(duì)稱合成在本實(shí)施例中，對(duì)反應(yīng)混合物施加減壓，以進(jìn)行不對(duì)稱合成反應(yīng)來(lái)生成B3AP。作為對(duì)照試驗(yàn)，在常壓、沒(méi)有PDC的糾下進(jìn)行同樣的反應(yīng)。反應(yīng)終最^L積1.5ml50mM磷酸鈉緩沖液，pH6300fil河流弧菌轉(zhuǎn)氨酶60jUZ/wi-PDC(相應(yīng)于pH7時(shí)8單位/ml)5mMB30P10mMD,L-丙氨酸0.1mMTPP,PLP5mMMgCl2減壓是用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器施加的(150毫巴)。用CE進(jìn)行測(cè)量。圖5所示的;l—在不同壓力下，B30P到B3AP的轉(zhuǎn)化率與時(shí)間的關(guān)系。顯然，轉(zhuǎn)化率與施加的壓力幾乎無(wú)關(guān)。關(guān)于所達(dá)到的最大轉(zhuǎn)化率，在150亳巴壓力下的轉(zhuǎn)化率與在1000亳巴壓力下的轉(zhuǎn)化率相似。實(shí)施例7:不同丙酮B羧酶的比較在本實(shí)施例中，釆用了三種不同的丙酮酸脫羧酶用于不對(duì)稱合成B3AP。除了pH值為7之外，反應(yīng)條件與實(shí)施例6相同。采用了源自酵單胞菌、棕櫚發(fā)酵細(xì)菌的PDC和得自Biocatalytics的PDC(目錄號(hào)PDC-101)。所述PDC由ADH檢測(cè)得到的活性相同(1.6單位/ml)。圖6表明所有三種PDC得到了基本上相等的轉(zhuǎn)化率。實(shí)施例8:酶和輔助底物濃度對(duì)B30P到B3AP的轉(zhuǎn)化率的影響在本實(shí)施例中，表明了PDC的濃度對(duì)采用丙氨酸作為M給體將B30P轉(zhuǎn)化為B3AP的轉(zhuǎn)化率的影響。而且，也表明了丙氨酸濃度對(duì)B30P轉(zhuǎn)化為B3AP的轉(zhuǎn)化率的影響。反應(yīng)條件見(jiàn)實(shí)施例6，除了pH值為7和除非另外聲明，使用棕櫚發(fā)酵細(xì)菌TA之外。由圖7可見(jiàn)，在沒(méi)有PDC的反應(yīng)中，丙氨酸的濃度升高至5倍(由5mM升至25mM)導(dǎo)致轉(zhuǎn)化率翻倍(2小時(shí)后，12%對(duì)5.3%)。在存在PDC時(shí)，在5倍丙氨酸過(guò)量下轉(zhuǎn)化率翻倍(卯分鐘后，30%對(duì)17%)。在通常的丙氨酸濃度下，PDC的用量由1.6單位/ml升至50單位/ml時(shí)，轉(zhuǎn)化率也隨之升高，但是，升高系數(shù)〈2(40分鐘后，29%對(duì)17%)。在另外的試驗(yàn)中表明了丙氨酸和PDC同時(shí)過(guò)量(pH為6和7的兩種情況下)的影響。pH值為6時(shí)，反應(yīng)較快，盡管在轉(zhuǎn)化率達(dá)到49%后，B3AP的濃度下降也較快。在pH值為7時(shí)，轉(zhuǎn)化率升至56%。實(shí)施例9:丙氨酸濃度對(duì)B3AP的不對(duì)稱合成的影響在四組v^應(yīng)中，采用了5mM，25mM，110mM,300mM和500mM的丙氨酸濃度。對(duì)于每組試驗(yàn)，都進(jìn)行了一次不含PDC的對(duì)照試驗(yàn)和一次含PDC的試驗(yàn)。pH值被調(diào)節(jié)為7.0。在3個(gè)小時(shí)的反應(yīng)時(shí)間內(nèi)，每半小時(shí)取樣一次。對(duì)應(yīng)于圖8給出的轉(zhuǎn)化率的>^應(yīng)時(shí)間為5mM:40分鐘，25mM:60分鐘，110至500mM:卯分鐘。圖8示出了當(dāng)丙氨酸濃度增大時(shí)，B3AP的不對(duì)稱合成的轉(zhuǎn)化率。圖8清楚地表明，轉(zhuǎn)化率可達(dá)60~70%。顯然，丙氨酸濃度由25mM升至110mM對(duì)B30P到B3AP的轉(zhuǎn)化率有顯著的影響，而當(dāng)進(jìn)一步升高至500mM時(shí)，對(duì)轉(zhuǎn)化率只有輕微的影響。PDC對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響隨著丙氨酸濃度的升高而減弱。可根據(jù)對(duì)照反應(yīng)的數(shù)據(jù)，按照如下方法計(jì)算出B3AP合成的平衡常數(shù)B3AP=[Pyr[B30P=C((,B30P-[B3AP和Ala=c0，Ala-[B3AP]因此，采用測(cè)得的B3AP的濃度，可以計(jì)算出平衡常數(shù)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>c0,[Alal[B3APK-10'3553,225123,1110243,5300353,2500402,8K的平均值3,1表6所示的是計(jì)算值。由此得到，B3AP反應(yīng)的平衡常數(shù)為3.1x10-3。因而，與其他酮相比，底物B30P是用于不對(duì)稱合成的合適的底物。實(shí)施例10:PLP對(duì)B3AP的不對(duì)稱合成的影響本實(shí)施例中表明了PLP(吡哆搭-5，-磷酸)對(duì)B30P到B3AP的轉(zhuǎn)化率的影響。研究了如下三個(gè)反應(yīng)試驗(yàn)。a)試驗(yàn)1采用0.1mMPLP，而不再加入另外的PLP。b)在試驗(yàn)2中，在反應(yīng)過(guò)程中，一旦由于反應(yīng)介質(zhì)中PLP的存在而產(chǎn)生的黃色褪去，就加入PLP。為此，加入l2pl的飽和PLP溶液，從而重新獲得深黃色。據(jù)認(rèn)為，這種體積的微小增加對(duì)胺的濃度的影響低于1%,因而可以忽略不計(jì)。c)不存在PLP，也不加入PLP。反應(yīng)^fr:1ml的最^f^積，37li1的P^7-轉(zhuǎn)氨酶，5mM的B30P，pH7.0的磷酸鹽緩沖液。L-丙氨酸的濃度為110mM。采用CE測(cè)定，以ot-MBA作為內(nèi)標(biāo)。圖9所示的是轉(zhuǎn)化率隨時(shí)間的關(guān)系。將加入PLP的試驗(yàn)b)與試驗(yàn)a)比較，可以看出PLP的添加對(duì)最大轉(zhuǎn)化率沒(méi)有顯著影響。沒(méi)有PLP的反應(yīng)速率較慢，盡管其能達(dá)到與其他反應(yīng)相同的轉(zhuǎn)化率。與對(duì)照試驗(yàn)相比，在試驗(yàn)b)中加入PLP使胺的濃度的降低稍大一些。實(shí)施例ll:通過(guò)通入氮?dú)獬ヒ胰┑腂3AP的不對(duì)稱合成以下實(shí)施例詳細(xì)描述了一種通過(guò)除去乙醛提高B3AP的不對(duì)稱合成的轉(zhuǎn)化率的方法。反應(yīng)糾底物5mMB30P500mML-丙氨酸32U/mlZ戸-PDC37fil/ml^/7-轉(zhuǎn)氨酶0.1mMPLP和TPP(二磷酸硫胺素(thiaminediphosphate))5mMMgCl2由于反應(yīng)溶液含有大量的蛋白質(zhì)，因而有形成泡沫的強(qiáng)烈的趨勢(shì)。為了抑制這種起泡，在Jl應(yīng)試驗(yàn)中加入0，6p1的消泡劑A濃縮物(Sigma，硅氧烷聚合物)。所述濃縮物能在很大程度上抑制泡沫的產(chǎn)生，但是不能完全抑制。為了排除所述消泡劑濃縮物對(duì)酶具有抑制作用，補(bǔ)充l故了不通入氮?dú)獾尤胂輨〢的對(duì)照試驗(yàn)。由于千燥氮?dú)獾耐ㄈ霑?huì)導(dǎo)致7K從反應(yīng)溶液中蒸發(fā)，因而對(duì)氮?dú)饧訚?。圖10所示的是計(jì)算得到的B3AP相對(duì)轉(zhuǎn)化率。使用消泡劑A但不通入氮?dú)獾膶?duì)照試驗(yàn)(Nr對(duì)照P^7-TA,Z/fl-PDC，消泡劑，無(wú)N2)與不使用消泡劑A的反應(yīng)試驗(yàn)(^/7-TA，Z/m-PDC)精確吻合。由此可見(jiàn)，酶沒(méi)有受到消泡劑濃縮物加入的影響。用氮?dú)馓幚淼脑囼?yàn)(N2試驗(yàn)P^-TA，Z/m-PDC，消泡劑，N2)顯示在60、卯和l抑分鐘后轉(zhuǎn)化率提高。實(shí)施例12:在不同條件下的B3AP的不對(duì)稱合成反應(yīng)她最終體積imi37fil限轉(zhuǎn)氨酶32單位/mlZ/m-PDC或BiocatalyticsPDC或3.2單位/mlZ附oPDC5mMB30P500mML-丙氨酸輔因子0.1mMPLP和TPP，5mMMgCl2圖10所示的是在上述同時(shí)采用P^7-轉(zhuǎn)氨酶和每種PDC的反應(yīng)試驗(yàn)中，B30P到B3AP的轉(zhuǎn)化率。在圖10中，以N2表示的試驗(yàn)是含有J^7-轉(zhuǎn)氨酶和Z/w-PDC并用氮?dú)夂拖輨〢處理的試驗(yàn)。N2對(duì)照試驗(yàn)是含有P^f-轉(zhuǎn)氨酶、Z/m-PDC和消泡劑A但不用氮?dú)馓幚淼脑嚇印ｏ@然，由于通入到>^應(yīng)溶液中的氮?dú)獾拇嬖?，由N2對(duì)照試驗(yàn)到N2試樣，轉(zhuǎn)化率顯著升高。由此可見(jiàn)，向反應(yīng)介質(zhì)中通入氮?dú)饽茱@著提高B30P到B3AP的轉(zhuǎn)化率。實(shí)施例13:在乙醇脫氫酶(ADH)存在下B3AP的不對(duì)稱合成為了從反應(yīng)混合物中除去由PDC反應(yīng)產(chǎn)生的乙醛，可用ADH將乙醛轉(zhuǎn)化為乙醇。反應(yīng)條件110mML-丙氨酸5mMB30P37nl/ml^-轉(zhuǎn)氨酶32單位/mlZ戸畫(huà)PDC0.1mMPLP和TPP5mMMgCl2進(jìn)行了如下反應(yīng)試驗(yàn)反應(yīng)試驗(yàn)1:使用PDC和轉(zhuǎn)氨酶的反應(yīng)反應(yīng)試驗(yàn)2:使用PDC和轉(zhuǎn)氨酶并添加5mM乙醇(最終濃度)和NADH的反應(yīng)反應(yīng)試驗(yàn)3:4吏用PDC、ADH和NADH的反應(yīng)所用的ADH為源自釀酒酵母的ADH，其活性為50~100單位/ml。PDC的活性為32單位/ml。在反應(yīng)開(kāi)始時(shí)，在反應(yīng)試驗(yàn)2中加入無(wú)水乙醇，使其最終濃度為5mM。在反應(yīng)開(kāi)始時(shí)，在反應(yīng)試驗(yàn)2和3中加入5nmolNADH，對(duì)應(yīng)于最終濃度為5mMNADH。在每10分鐘后，再加入2.4jimo1NADH(4jd在50mM磷酸鹽緩沖液中的0.6MNADH溶液，pH8.5)。NADH溶液儲(chǔ)藏在水中，并且在即將4吏用之前配制。結(jié)果見(jiàn)圖11和表5。ADH的影響是非常明顯的。轉(zhuǎn)化率升至約卯％。不加ADH但加入5mM乙醇的對(duì)照試驗(yàn)2僅僅稍微偏離對(duì)照試驗(yàn)1。由此可見(jiàn)，加入ADH能顯著提高由B30P不對(duì)稱合成B3AP的轉(zhuǎn)化率。權(quán)利要求1.一種制備旋光手性胺的方法，包括:a)提供氨基受體和氨基給體，b)使所述氨基受體和所述氨基給體與轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)，和c)獲得期望的旋光手性胺和酮副產(chǎn)物。2.權(quán)利要求l所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)氨酶是(R)-或(S)-選擇性轉(zhuǎn)氨酶。3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述氨基受體選自苯丙酮酸及其鹽、丙酮酸及其鹽、苯乙酮、2-酮戊二酸、3-氧代丁酸、2-丁酮、3-氧代吡咯烷(3-OP)、3-吡啶基甲基酮(3-PMK)、3-氧代丁酸乙酯(3-OBEE)、3-氧代戊酸甲酯(3-OPME)、N-l-boc-3-氧代哌咬酮、N-l-boc-3-氧代吡咯烷(B30P)、3-氧代哌啶、烷基-3-氧代丁酸酯、曱氧基丙酮和1-氧代四氫萘酮。4.如權(quán)利要求1~3任一項(xiàng)所述的方法，其中所述氨基給體選自胺或氨基酸，特別是選自P-丙氨酸，丙氨酸，a-甲基千基胺(oc-MBA)，谷氨酸，苯丙氨酸和Y-氨基丁酸，甘氨酸，3-氨基丁酸，異丙胺，2-氨基丁烷，和其中任一種的鹽如氯化物。5.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其中得到的胺為特別是單或雙環(huán)胺的胺，特別是5或6元環(huán)的胺，或者是S-、O-或N-取代的雜環(huán)烴基或芳香胺的胺，特別是烷基或垸氧基取代的芳香胺。6.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其中得到的胺選自苯丙氨酸、丙氨酸、3-氨基哌啶、烷基-3-氨基-丁酸酯、3-氨基吡咯烷(3-AP)、3-吡啶基-l-乙胺(3-PEA)、N-l-boc-3-氨基吡咯烷(B3AP)、3-氨基丁酸乙酯(3-ABEE)、3-氨基戊酸甲酯(3-APME)、ot-甲基千基胺(a-MBA)、1-氨基四氫化萘、a-甲基-4-(3-吡咬基)-丁胺、谷氨酸、P-氨基丁酸、仲丁胺、甲氧基異丙胺、3-氨基吡咯烷的衍生物、l-N-boc-3-氨基哌啶、頭孢菌素和頭孢菌素的衍生物。7.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其中所述co-轉(zhuǎn)氨酶源自河流弧菌(柳n》y7謂'fl嗣、反灘化產(chǎn)械菌(/4/cfl/,》ew^sflfew/加yoiws)、肺炎克雷伯氏菌(A/eAwW/tf/mew附OM/fle)或蘇云金芽抱軒菌(5鎖7/"s18.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其中步驟c)中獲得的酮副產(chǎn)物是丙酮酸。9.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其中步驟c)中獲得的酮副產(chǎn)物在另外的步驟d)中，通過(guò)與至少一種酶的反應(yīng)，從反應(yīng)混合物中除去。10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中步驟d)所用的酶為脫羧酶。11.如權(quán)利要求9所述的方法，其中步驟d)所用的酶為合成酶。12.如權(quán)利要求9所述的方法，其中步驟d)所用的酶為脫氫酶。13.如權(quán)利要求9或IO任一項(xiàng)所述的方法，其中所述酶為丙酮酸脫羧酶(PDC)。14.如權(quán)利要求9或12任一項(xiàng)所述的方法，其中所述酶為乳酸脫氳酶(LDH)。15.如權(quán)利要求9或ll任一項(xiàng)所述的方法，其中所述酶為乙酰乳酸合酶。16.如權(quán)利要求13所述的方法，其中將通過(guò)所述PDC的作用生成的乙醛除去。17.如權(quán)利要求16所述的方法，其中通過(guò)與至少一種酶反應(yīng)除去所述乙醛。18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述酶是乙醇脫氫酶。19.如權(quán)利要求16所述的方法，其中通過(guò)向所述反應(yīng)混合物中通入氮?dú)獬ニ鲆胰?0.如權(quán)利要求16所述的方法，其中通過(guò)向所述反應(yīng)混合物施加減壓除去所述乙醛。21.如權(quán)利要求16所述的方法，其中通過(guò)化學(xué)方法除去所述乙醛。22.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其中從步驟c)或d)中獲得的反應(yīng)混合物中除去步驟c)或d)中獲得的旋光手性胺。23.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其中所述方法是在pH值為5.0~9.5、優(yōu)選為6.0~7.0、優(yōu)選為6.0~6.9的反應(yīng)混合物+實(shí)施的。24.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其中所述方法的反應(yīng)時(shí)間為40~70分鐘。25.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其中所述氨基受體是B30P。26.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其中所述氨基給體是丙氨酸。27.如前述權(quán)利要求13、25或26任一項(xiàng)所述的方法，其中通過(guò)向反應(yīng)混合物中通入氮?dú)?N2)除去通過(guò)PDC的反應(yīng)生成的乙醛。28.如前述權(quán)利要求13、25或26任一項(xiàng)所述的方法，其中所述反應(yīng)是在至少一種丙酮酸脫羧酶和至少一種乙醇脫氫酶的存在下進(jìn)行的。29.如前述權(quán)利要求13、25或26任一項(xiàng)所述的方法，其中所述反應(yīng)是在至少一種丙酮酸脫羧酶、至少一種乙醇脫氫酶和另外在氮?dú)?N2)的存在下進(jìn)行的。30.—種制備生理活性化合物的方法，所述化合物選自3-氨基吡咯烷酮衍生物、頭孢菌素、頭孢菌素衍生物、雜環(huán)硼酸、L-二羥基苯丙氨酸(L-Dopa)、a-曱基多巴、D-苯基甘氨酸、P-羥基苯基甘氨酸、草銨膦酸、嘧啶并衍生物和吡咯烷酮衍生物，其中采用權(quán)利要求1~29任一項(xiàng)所述的方法。全文摘要本發(fā)明涉及光學(xué)純仲胺的制備，所述仲胺可在例如藥物的合成中用作中間體。文檔編號(hào)C12P13/00GK101384723SQ200780005239公開(kāi)日2009年3月11日申請(qǐng)日期2007年2月13日優(yōu)先權(quán)日2006年2月13日發(fā)明者烏韋·博恩朔伊爾,卡倫·羅賓斯,馬蒂亞斯·赫內(nèi)申請(qǐng)人:羅扎股份公司