專利名稱：采用密碼子優(yōu)化的il-15的疫苗和免疫治療劑及其使用方法
采用密碼子優(yōu)化的IL-15的疫苗和免疫治療劑及其使用方法 發(fā)明領域
本發(fā)明涉及包含編碼IL-15及其片段的密碼子優(yōu)化的核酸序列的核酸分 子、改良的疫苗、預防性和/或治療性免疫接種個體抵御免疫原的改良方法，和 改良的免疫治療組合物及改良的免疫治療方法。
背景技術：
免疫治療指調(diào)節(jié)人的免疫應答反應從而賦予所需的療效。免疫治療劑指給 予個體后能調(diào)節(jié)個體的免疫系統(tǒng)，足以最終減輕不良免疫應答反應相關癥狀， 或通過增強所需的免疫應答而最終減輕癥狀的那些組合物。在一些情況中，所 述免疫治療是疫苗接種方案的一部分，給予個體疫苗使個體與免疫原接觸，進 而使該個體產(chǎn)生針對該免疫原的免疫應答，在這些情況中，免疫治療劑可增強 免疫應答和/或選擇性增強免疫應答的某一部分(例如細胞應答或體液應答)，這 是治療或預防具體病癥、感染或疾病所需的。
可采用針對靶抗原，例如過敏原、病原體抗原或與參與人體疾病的細胞相 關的抗原疫苗免疫接種個體。與參與人體疾病的細胞相關抗原包括癌癥相關腫 瘤抗原和參與自身免疫疾病細胞相關的抗原。
設計這些疫苗時，業(yè)已知曉接種的疫苗必須在個體的細胞中產(chǎn)生靶抗原方 能有效誘導免疫系統(tǒng)的細胞免疫應答。具體地說，減毒活疫苗、采用無毒性 載體的重組疫苗和DNA疫苗各自能在接種疫苗的個體細胞內(nèi)產(chǎn)生抗原，從 而誘導免疫系統(tǒng)的細胞免疫應答。另一方面，只包含蛋白質(zhì)的殺死或滅活 疫苗和亞單位疫苗不能誘導良好的細胞免疫應答，雖然它們能誘導體液應答。
細胞免疫應答反應通常是提供抵御病原體感染的保護力和提供治療病 原體感染、癌癥或自身免疫疾病的有效免疫治療所必須。因此，常優(yōu)選能 在接種疫苗個體的細胞內(nèi)產(chǎn)生靶抗原的疫苗，例如減毒活疫苗、采用無毒性載體的重組疫苗和DNA疫苗。
雖然這些疫苗常能有效地預防性或治療性免疫接種個體而抵御病原體 感染或人體疾病，但需要改良的疫苗。需要能產(chǎn)生增強免疫應答的組合物 和方法。
同樣，雖然一些免疫治療劑可用于調(diào)節(jié)患者的免疫應答反應，但仍需要改 良的免疫治療組合物和方法。
發(fā)明概述
本發(fā)明涉及包含編碼IL-15蛋白質(zhì)的核酸序列的核酸分子，所述核酸序列 包含編碼IL-15功能片段的SEQ IDN0:1或其片段。
本發(fā)明涉及包含編碼IL-15功能片段的SEQ ID N0:1或其片段的核酸分 子，所述核酸分子不含IL-15信號序列的編碼序列和/或不含IL-15的Kozak區(qū) 和/或IL-15的5'非翻譯區(qū)和/或IL-15的3'非翻譯區(qū)和/或包含非-IL-15信號序 列的編碼序列。
本發(fā)明涉及包含編碼IL-15蛋白質(zhì)的核酸序列和包含某免疫原編碼序列的 核酸分子，所述核酸序列包含編碼IL-15功能片段的SEQIDNO:l或其片段。
本發(fā)明涉及包含以下核酸分子的組合物含有SEQ ID NO:l或其片段的 核酸序列的核酸分子和含有編碼某免疫原的核酸序列的核酸分子，所述SEQ IDN0:1或其片段編碼IL-15的功能片段。
本發(fā)明還涉及調(diào)節(jié)個體免疫應答反應的方法，所述方法包括給予所述個體 包含編碼IL-15功能片段的SEQ ID N0:1或其片段的核酸分子。
本發(fā)明還涉及包含含有編碼IL-15功能片段的SEQ ID N0:1或其片段的核 酸分子的重組疫苗。
本發(fā)明涉及在個體中誘導抗某免疫原的免疫應答反應的方法，所述方法包 括單獨給予所述個體包含編碼IL-15功能片段的SEQ IDN0:1或其片段的核酸 分子，或與編碼某免疫原的核酸分子聯(lián)合給予或與某免疫原聯(lián)合給予。
附圖簡述


圖1顯示了 SEQIDNO:l。優(yōu)選實施方式詳述 定義
本文所用的術語"靶蛋白質(zhì)"指由本發(fā)明的基因構建物編碼的肽和蛋白質(zhì)， 它們在免疫應答反應中起著靶蛋白質(zhì)作用。術語"靶蛋白質(zhì)"和"免疫原"可 互換使用，指引起免疫應答的蛋白質(zhì)。靶蛋白質(zhì)是免疫原性蛋白質(zhì)，應與病原 體的蛋白質(zhì)或有害類型細胞(如癌細胞)或參與自身免疫疾病的細胞(免疫應 答需要抵御)的蛋白質(zhì)共有至少一個表位。針對靶蛋白質(zhì)的免疫應答反應可保 護個體抵御和/或治療該個體的與該靶蛋白質(zhì)相關的特定感染或疾病。
本文所用的術語"基因構建物"指DNA或RNA分子，這些分子含有編 碼靶蛋白質(zhì)或免疫調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的核苷酸序列。該編碼序列包括操作性連接于調(diào) 節(jié)元件的起始和終止信號，包括能指導給予該核酸分子的個體細胞表達的啟動 子和聚腺苷酸化信號。
本文所用的術語"可表達形式"指基因構建物，其含有操作性連接于編碼 靶蛋白質(zhì)或免疫調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的編碼序列的必需調(diào)節(jié)元件，從而當該編碼序列存 在于個體的細胞中時可被表達。
本文所用的術語"共有一個表位"指蛋白質(zhì)含有與另一蛋白質(zhì)某表位相同 或基本上相似的至少一個表位。
本文所用的術語"基本上相似的表位"指結構上雖與某蛋白質(zhì)的表位不同， 但能引起與該蛋白質(zhì)交叉反應的細胞或體液免疫應答的表位。
本文所用的術語"胞內(nèi)病原體"指病毒或病原生物體，它們的復制周期或 生命周期的至少一部分發(fā)生在宿主細胞中，并能在宿主細胞中產(chǎn)生病原蛋白質(zhì) 或導致病原蛋白質(zhì)產(chǎn)生。
本文所用的術語"過度增殖性疾病"指細胞過度增殖的那些疾病和病癥。
本文所用的術語"過度增殖相關蛋白質(zhì)"指與過度增殖性疾病相關的蛋白質(zhì)。
本文所用的術語"免疫調(diào)節(jié)蛋白"指能調(diào)節(jié)遞送了該免疫調(diào)節(jié)蛋白的 人的免疫系統(tǒng)的蛋白質(zhì)。示范性的免疫調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)包括IL-15、 CD40L、 TRAIL 、 TRAILrecDRC5 、 TRAIL-R2、 TRAIL - R3 、 TRAIL-R4、 RANK、RANK配體(RANK LIGAND)、 Ox40、 Ox40配體(Ox40 LIGAND)、 NKG2D、 F461811或MICA、 MICB、 NKG2A、 NKG2B、 NKG2C、 NKG2E、 NKG2F、 CD30、 CD153 (CD30L)、 Fos、 c如、Sp-l、 Apl、 Ap-2、 p38、 p65Rel、 My膽、IRAK、 TRAF6、 IkB、NIK、 SAP K、 SAP1、 JNK2、 JNK1B2、 JNK1B1、 JNK2B2、 JNK2B1、 JNK1A2、 JNK2A1、 JNK3A1、 JNK3A2、 NF-k-B2、 p49 剪接形式、NF-k-B2、 p100剪接形式、NF-k-B2、 p105剪接形式、NF-k-B 50K 鏈前體、NFkB p50、人IL-la、人IL-2、人IL陽4、鼠IL-4、人IL畫5、人IL-IO、 人IL-15、人IL-18、人TNF- a、人TNF-(3、人白介素12、 MadCAM-l、 NGF IL墨7、 VEGF、 TNF-R、 Fas、 CD40L、 IL-4、 CSF、 G-CSF、 GM-CSF、 M-CSF、 LFA-3、 ICAM-3、 ICAM-2、 ICAM-1、 PECAM、 Pl50.95、 Mac-l、 LFA-1、 CD34、 RANTES、 IL-8、 MIP-Ia、 E-選擇蛋白(selecton)、 CD2、 MCP-I、 L-選擇蛋白、P-選擇蛋白、FLT、 Apo-l、 Fas、 TNFR-1、 p55、 WSL-1、 DR3、 TRAMP 、 Apo-3、 AIR、 LARD、 NGRF、 DR4(TRAIL)、 DR5、 KILLER、 TRAIL陽R2、 TRICK2、 DR6、 ICE、 VLA國1和CD86 (B7.2)。
發(fā)明概述
本發(fā)明提供編碼IL-15的核酸序列，與天然序列相比，所述核酸序列能提 供改良的蛋白質(zhì)表達?？陕?lián)用改良的IL-15編碼序列與引用納入本文的以下專 利申請2004年6月14日提交的PCT申請PCT/US04/18962; 2003年6月 13日提交的美國臨時申請?zhí)?0/478,210和2003年6月13日提交的美國臨 時申請?zhí)?0/478,205中公開的，特別是提供與非IL-15信號肽，尤其是IgE信 號肽(編碼序列)相連的IL-15蛋白質(zhì)編碼序列的那些序列，以及這些構建物在 疫苗中的應用和在遞送IL-15蛋白質(zhì)作為免疫調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的構建物中的應用。 在一些優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明提供包含含有編碼IL-15功能片段SEQ ID NO:l或其片段的核苷酸序列的核酸分子的載體、疫苗和免疫調(diào)節(jié)組合物及方 法。在一些優(yōu)選實施方式中，提供的這些核酸分子不含IL-15信號序列的編碼 序列，更優(yōu)選不含IL-15的Kozak區(qū)和非翻譯區(qū)。在一些優(yōu)選的實施方式中， 本發(fā)明提供包含含有與人IgE信號序列的編碼序列相連的編碼IL-15功能片段 SEQIDNO:l或其片段的核苷酸序列的核酸分子的載體、疫苗和免疫調(diào)節(jié)組合物及方法。
業(yè)已修飾了編碼IL-15的天然序列以提高其表達。在早期改進中，刪除了
例如IL-15 (信號肽)序列的編碼序列和非翻譯區(qū)等元件以提高其表達。可摻 入這些早期改進，和與SEQIDN0:1所示成熟IL-15蛋白質(zhì)的改良編碼序列聯(lián) 用。在優(yōu)選的實施方式中，包含SEQ IDN0:1的核酸分子不含IL-15信號肽的 編碼序列，優(yōu)選用另一種信號蛋白，例如IgE信號蛋白替代其位置。此外，還 可除去IL-15的Kozak區(qū)和非翻譯區(qū)以消除抑制元件。構建物優(yōu)選包含的唯一 IL-15序列是編碼不含IL-5信號肽的成熟IL-15蛋白質(zhì)氨基酸序列的IL-15序 列。
按照一些實施方式，提供的組合物包含分離的核酸分子，所述核酸分子包 含編碼一種融合蛋白的核酸序列，所述融合蛋白包含與編碼IL-15功能片段 SEQ ID NO:l或其片段編碼的IL-15蛋白質(zhì)相連的非IL-15信號序列。在一些 優(yōu)選實施方式中，所述分子不含IL-15信號序列的編碼序列。在一些優(yōu)選的實 施方式中，所述融合蛋白在人中不具免疫原性。
按照一些實施方式，提供的一些組合物包含某核酸構建物，該核酸構建物 包含編碼IL-15功能片段的SEQIDNO:l或其片段，和在同一核酸分子或不同 核酸分子(編碼免疫原的核酸序列)上任選包含上述其它早期改進。下述免疫原 一般可以是任何免疫原性蛋白質(zhì)，包括過敏原、病原體抗原、癌癥相關抗原或 與自身免疫疾病相關細胞相連的抗原。在優(yōu)選的實施方式中，所述免疫原是病 原體抗原，最優(yōu)選選自HIV、 HSV、 HCV和WNV病原體。
在一些優(yōu)選的實施方式中，所述核酸構建物是質(zhì)粒。在一些優(yōu)選的實施方 式中，將所述核酸分子摻入到病毒載體，例如牛痘病毒、腺病毒、腺伴隨病毒、 逆轉錄病毒、RSV、 VSV、痘病毒或可用作疫苗或基因治療載體的任何其它可 接受的病毒載體中。
按照本發(fā)明的某些方面內(nèi)容，可將包含編碼IL-15功能片段SEQIDNO:l 或其片段的基因構建物直接摻入到減毒的活病原體中?？捎米饕呙绲倪@些病原 體的例子如下所示。在優(yōu)選的實施方式中，將人IL-15(優(yōu)選不含IL-15信號序 列)與人IgE信號序列相連。
包含免疫原編碼序列的組合物可用作疫苗。不含免疫原編碼序列的組合物可用作免疫調(diào)節(jié)組合物。在一些實施方式中還提供蛋白質(zhì)免疫原作為受IL-15 表達而增強免疫應答反應的靶蛋白質(zhì)。
在一些優(yōu)選的實施方式中，所述核酸構建物是質(zhì)粒。在一些優(yōu)選的實施方 式中，將所述核酸分子摻入到病毒載體，例如牛痘病毒、腺病毒、腺伴隨病毒、 逆轉錄病毒或可用作疫苗或基因治療載體的任何其它可接受的病毒載體中。
按照本發(fā)明的某些方面內(nèi)容，可將包含編碼IL-15功能片段的SEQ ID N0:1或其片段的基因構建物直接摻入到減毒的活病原體中?？捎米饕呙绲倪@ 些病原體的例子如下所示。在優(yōu)選的實施方式中，將人IL-15(優(yōu)選不含IL-15 信號序列)與人IgE信號序列相連。
按照本發(fā)明的一些實施方式，本發(fā)明組合物包含含有免疫原和/或免疫原 性蛋白質(zhì)編碼序列的基因構建物。可將這些組合物遞送給個體以調(diào)節(jié)該個體免 疫系統(tǒng)的活性，從而增強抵御該免疫原的免疫應答。個體的細胞攝入編碼免疫 調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的核酸分子后，編碼免疫調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的核酸序列在細胞中表達而將 此種蛋白質(zhì)遞送給該個體。本發(fā)明的各方面提供在包含不同核酸分子的組合物 中，將一個核酸分子上的蛋白質(zhì)編碼序列作為重組疫苗部分和作為減毒疫苗部 分遞送的方法，所述不同核酸分子編碼各種轉錄因子或中間體因子的一種或多 種。
本發(fā)明一些方面提供的組合物和方法能預防性和/或治療性免疫接種個體 以抵御病原體或異常的疾病相關細胞。所述疫苗可以是任何類型的疫苗，例如 減毒活疫苗、細胞疫苗、重組疫苗或核酸或DNA疫苗。
本發(fā)明涉及用于遞送免疫調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的組合物和這些組合物的使用方法。
可采用幾種熟知的技術，包括DNA注射(也稱為DNA疫苗接種)、重組載 體，如重組腺病毒、重組腺相關病毒和重組牛痘病毒來遞送所述核酸分子。
在引用而納入本文的美國專利號5,593,972， 5,739,118， 5,817,637， 5,830,876， 5,962,428, 5,981,505， 5,580,859， 5,703,055， 5,676,594及其引 用的優(yōu)先權申請中描述了 DNA疫苗。除了那些申請中所述的遞送方案外，美 國專利號4,945,050和5，036，006描述的遞送DNA的其它方法也引用納入本文。
給藥途徑包括但不限于肌肉內(nèi)、鼻內(nèi)、腹膜內(nèi)、真皮內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)、 動脈內(nèi)、眼內(nèi)和口服以及局部、透皮、吸入或栓劑或遞送給粘膜組織，例如通過灌洗遞送至陰道、直腸、尿道、口腔和舌下組織。優(yōu)選的給藥途徑包括給予 粘膜組織、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、真皮內(nèi)和皮下注射?？赏ㄟ^以下方式，包括但不 限于常規(guī)注射器、無針注射裝置或"微粒轟擊基因槍"給予所述基因構建物。 當所述基因構建物被細胞攝取時，可作為功能性染色體外分子維持存在于
細胞中或整合入細胞的染色體DNA中?？蓪NA以一種或多種質(zhì)粒形式引
入細胞，作為分離的遺傳物質(zhì)而維持在細胞中?；蛘撸蓪⒛苷先肴旧w的
線性DNA引入細胞。當將DNA引入細胞時，可加入試劑以促進DNA整合入 染色體。還可在DNA分子內(nèi)包含用于促進整合的DNA序歹lj?；蛘撸蓪NA 引入細胞。也考慮了提供的基因構建物為含有著絲粒、端粒和復制起點的線性 小染色體?；驑嫿ㄎ锟杀Ａ魷p毒活微生物或重組微生物載體在細胞內(nèi)存活 (所需)的遺傳物質(zhì)部分?；驑嫿ㄎ锟梢允侵亟M病毒疫苗的基因組部分，此 時所述遺傳物質(zhì)或整合入細胞染色體中，或維持存在于染色體外。基因構建物 包含核酸分子基因表達所需的調(diào)控元件。這些元件包括啟動子、起始密碼子、 終止密碼子和聚腺苷酸化信號。此外，為了基因表達編碼靶蛋白或免疫調(diào)節(jié)蛋 白的序列，常需要增強子。這些元件必須與所需蛋白的編碼序列操作性相連， 而且這些調(diào)控元件必須能在所給予的個體內(nèi)可操作。
起始密碼子和終止密碼子一般認為是所需蛋白質(zhì)的編碼核苷酸序列的 一部分。但是，這些元件在給予此基因構建物的個體內(nèi)必須具有功能。起 始密碼子和終止密碼子必須與編碼序列同在框內(nèi)。
所用的啟動子和聚腺苷酸化信號在個體的細胞內(nèi)必須具有功能。 用于實施本發(fā)明，尤其是用于產(chǎn)生人用基因疫苗的啟動子例子包括但 不限于猿病毒40(SV40)的啟動子、小鼠乳腺瘤病毒(MMTV)啟動子、人 免疫缺陷病毒(HIV)的啟動子如HIV長末端重復序列(LTR)啟動子、莫洛尼 病毒啟動子、ALV啟動子、巨細胞病毒(CMV)的啟動子例如CMV立即早 期啟動子、EB病毒啟動子、羅斯肉瘤病毒(RSV)啟動子以及例如人肌動蛋 白、人肌球蛋白、人血紅蛋白、人肌肉肌酸和人金屬硫蛋白等人基因的啟 動子。
用于實施本發(fā)明，尤其是用于產(chǎn)生人用基因疫苗的聚腺苷酸化信號的 例子包括但不限于SV40聚腺苷酸化信號和LTR聚腺苷酸化信號。具體地說，可采用加利福尼亞州圣迭戈市英杰公司(Invitrogen， San Diego， CA) 的pCEP4質(zhì)粒中的SV40聚腺苷酸化信號，稱為SV40聚腺苷酸化信號。 除了 DNA表達所需的調(diào)控元件外，DNA分子中還可包含其它元件。 這些其它元件包括增強子。增強子可選自但不限于人肌動蛋白、人肌球 蛋白、人血紅蛋白、人肌肉肌酸和諸如CMV、 RSV和EBV等病毒的增強 子。
為了使所述構建物維持存在于染色體外并在細胞內(nèi)產(chǎn)生該構建物的多 個拷貝，可提供含哺乳動物復制起點的基因構建物。加利福尼亞州圣迭戈 市英杰公司的質(zhì)粒pVAXl、 pCEP4和pREP4含有EB病毒復制起點和核抗 原EBNA-1編碼區(qū)，它們能產(chǎn)生高拷貝附加型復制產(chǎn)物而不整合。
在涉及免疫接種應用的一些優(yōu)選實施方式中，遞送的核酸分子包含編 碼耙蛋白、免疫調(diào)節(jié)蛋白的核苷酸序列，還包含能進一步增強對這些靶蛋 白的免疫應答反應的蛋白質(zhì)(編碼)基因。這些基因的例子是編碼其它細 胞因子和淋巴因子，例如a干擾素、Y干擾素、血小板衍生生長因子(PDGF)、 TNF、 GM-CSF、上皮生長因子(EGF)、 IL-1、 IL-2、 IL-4、 IL-6、 IL-IO、 IL-12 和IL-15，包括刪除了信號序列而任選包含IgE信號序列的IL-15的基因。
如果因為任何原因需要清除接受了所述基因構建物的細胞，可以加入 用作細胞摧毀靶標的其它元件?？稍诖嘶驑嫿ㄎ镏屑尤肟杀磉_形式的皰 疹(病毒)胸苷激酶(tk)基因?？山o予個體藥物甘昔洛韋(gangcyclovir)，該 藥物可選擇性殺傷產(chǎn)生tk的任何細胞，從而提供了選擇性破壞含該基因構 建物細胞的工具。
為了最大程度產(chǎn)生蛋白質(zhì)，可選擇調(diào)控序列使其充分適合于在給予該 構建物的細胞內(nèi)表達基因。此外，可選擇能在細胞內(nèi)最有效轉錄的密碼子。 本領域普通技術人員能夠制備在細胞內(nèi)具有功能的DNA構建物。
在一些實施方式中，可提供基因構建物以產(chǎn)生連接有IgE信號肽的本文所 述免疫調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的編碼序列。
本發(fā)明的一種方法包括通過以下途徑給予核酸分子的步驟肌肉內(nèi)、鼻內(nèi)、 腹膜內(nèi)、皮下、真皮內(nèi)或局部給予，或通過灌洗給予選自呼吸道、陰道、直腸、 尿道、口腔和舌下的粘膜組織。在一些實施方式中，將所述核酸分子與多核苷酸功能增強劑或基因疫 苗促進劑一起遞送給細胞。多核苷酸功能增強劑的描述可參見1994年1月
26日提交的美國系列號5,593,972 ， 5,962,428和國際申請系列號 PCT/US94/00899，以上申請均通過引用納入本文?；蛞呙绱龠M劑的描述 可參見引用納入本文的1994年4月1日提交的美國系列號021,579。與核 酸分子聯(lián)合給予的輔助劑可以與該核酸分子混合給予，或者在給予核酸分 子的同時分別給予，或在此之前或之后給予。此外，功能為轉染劑和/或復 制劑和/或促炎劑并能與GVF共同給予的其它制劑包括生長因子、細胞因子 和淋巴因子，例如a干擾素、y干擾素、血小板衍生生長因子(PDGF)、 TNF、 上皮生長因子(EGF)、 IL-1、 IL-2、 IL-4、 IL-6、 IL-IO、 IL-12和IL-15以及 成纖維細胞生長因子；表面活性劑，如免疫刺激性復合物(ISCOMS)，弗氏 不完全佐劑，LPS類似物，包括單磷酰脂質(zhì)A(MPL);胞壁酰肽，醌類似物 和諸如角鯊烯和角鯊烯類囊泡，和透明質(zhì)酸，也可以與該基因構建物聯(lián)合 給予。在一些實施方式中，免疫調(diào)節(jié)蛋白可用作GVF。在一些實施方式中， 所述核酸分子與PLG聯(lián)合提供以增強遞送/攝取。
本發(fā)明的藥物組合物含有約1納克至約2000微克的DNA。在一些優(yōu) 選實施方式中，本發(fā)明的藥物組合物含有約5納克至約IOOO微克的DNA。 在一些優(yōu)選實施方式中，該藥物組合物含有約10納克至約800微克的DNA。 在一些優(yōu)選實施方式中，該藥物組合物含有約0.1至約500微克的DNA。 在一些優(yōu)選實施方式中，該藥物組合物含有約1至約350微克的DNA。在 一些優(yōu)選實施方式中，該藥物組合物含有約25至約250微克的DNA。在 一些優(yōu)選實施方式中，該藥物組合物含有約100至約200微克的DNA。
可根據(jù)所采用的給藥方式配制本發(fā)明的藥物組合物。如果藥物組合物 是可注射的藥物組合物，它們是無菌、無熱原和不含顆粒的。優(yōu)選采用等 滲制劑。等滲添加劑一般包括氯化鈉、葡萄糖、甘露糖、山梨糖和乳糖。 在一些情況下，優(yōu)選等滲溶液，如磷酸緩沖鹽水。穩(wěn)定劑包括明膠和白蛋 白。在一些實施方式中，在所述制劑中加入血管收縮劑。
按照本發(fā)明的一些實施方式，誘導抵御某免疫原的免疫應答反應的方法是 將本發(fā)明組合物給予個體。所述疫苗可以是減毒活疫苗、細胞疫苗、重組疫苗或核酸或DNA疫苗。
除了采用可表達形式的免疫調(diào)節(jié)蛋白編碼序列來增強基因疫苗外，本發(fā)明 涉及改良的減毒活疫苗和采用重組載體遞送編碼抗原外來基因的改良疫苗。減 毒活疫苗和采用重組載體遞送外來抗原的疫苗的例子描述可參見以下美國專
利號4,722,848; 5,017,487; 5,077,044; 5,110,587; 5,112,749; 5,174,993; 5,223,424; 10 5,225,336; 5,240,703; 5,242,829; 5,294,441; 5,294,548; 5,310,668; 5,387,744; 5,389,368; 5,424,065; 5,451,499; 5,453,364; 5,462,734; 5,470，734;和5,482,713，這些專利通過引用納入本文。提供的基因構建物 包含與調(diào)控元件操作性連接的免疫調(diào)節(jié)蛋白的編碼核苷酸序列，所述調(diào)控 序列在疫苗中的功能是有效表達?？蓪⑦@些基因構建物摻入到減毒活疫苗 和重組疫苗中以產(chǎn)生本發(fā)明的改良疫苗。
本發(fā)明提供免疫接種個體的改良方法，該方法包括將基因構建物作為疫苗 組合物的一部分遞送給個體細胞的步驟，所述疫苗組合物包括DNA疫苗、減 毒活疫苗和重組疫苗。這些基因構建物包含編碼免疫調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)和與調(diào)控序列 操作性連接的核苷酸序列，所述調(diào)控序列在疫苗中的功能是有效表達。所述改 良的疫苗可導致細胞免疫應答增強。
可釆用本發(fā)明來引發(fā)抵抗靶蛋白(即與病原體、變應原或個體自身的"異 常"細胞特異相關的蛋白質(zhì))的增強免疫應答反應。本發(fā)明可用于免疫接種 個體以抵御病原因子和生物，因此，針對某病原體蛋白的免疫應答反應提 供了抵御該病原體的保護性免疫力。通過采用本發(fā)明引發(fā)抵御過度增殖細 胞特異性相關靶蛋白的免疫應答反應，可戰(zhàn)勝過度增殖性疾病和病癥，例 如癌癥。通過采用本發(fā)明引發(fā)抵御與參與自身免疫疾病的細胞特異性相關 靶蛋白的免疫應答反應可戰(zhàn)勝自身免疫疾病和病癥。
根據(jù)本發(fā)明的一些方面內(nèi)容，將編碼靶蛋白和免疫調(diào)節(jié)蛋白的DNA或 RNA導入個體組織的細胞中表達從而產(chǎn)生其編碼蛋白?？蓪⒕幋a耙蛋白和 一種或兩種免疫調(diào)節(jié)蛋白的DNA或RNA序列與在個體細胞內(nèi)表達所需的 調(diào)控元件相連接。DNA表達的調(diào)控元件包括啟動子和聚腺苷酸化信號。此 外，所述基因構建物中還可包含諸如Kozak區(qū)等其它元件。
在一些實施方式中，編碼靶蛋白質(zhì)的可表達形式序列和編碼兩種免疫調(diào)節(jié)蛋白的可表達形式序列位于同一核酸分子上而遞送給個體。
在一些實施方式中，編碼靶蛋白質(zhì)的可表達形式序列位于與含有編碼一種 或多種免疫調(diào)節(jié)蛋白的可表達形式序列的核酸分子不同的核酸分子上。在一些 實施方式中，編碼靶蛋白質(zhì)的可表達形式序列與編碼一種或多種免疫調(diào)節(jié)蛋白 的可表達形式序列位于與含有編碼一種或多種免疫調(diào)節(jié)蛋白的可表達形式序 列的核酸分子不同的一個核酸分子上。根據(jù)本發(fā)明可產(chǎn)生多種不同的核酸分子 并遞送給個體。例如，在一些實施方式中，編碼靶蛋白質(zhì)的可表達形式序列位 于與含有編碼兩種免疫調(diào)節(jié)蛋白之一種或多種的可表達形式序列的核酸分子 不同的核酸分子上，而后一種可表達形式序列位于與含有編碼一種或多種免疫 調(diào)節(jié)蛋白的可表達形式序列的核酸分子不同的核酸分子上。在這些情況中，所 有三種分子都被遞送給個體。
可以質(zhì)粒DNA、重組載體核酸分子(形式)或者作為減毒疫苗或細胞疫 苗中提供的遺傳物質(zhì)部分提供這些核酸分子。或者，在一些實施方式中，除了 編碼蛋白的核酸分子外，還可將靶蛋白質(zhì)和/或與一種或兩種免疫調(diào)節(jié)蛋白一起 作為蛋白質(zhì)遞送，或者代之以編碼它們的核酸分子遞送。
所述基因構建物可含有操作性連接于基因表達所需調(diào)節(jié)元件的編碼靶蛋 白質(zhì)或免疫調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的核苷酸序列。根據(jù)本發(fā)明，提供的基因構建物組合包 括含有編碼靶蛋白質(zhì)的可表達形式核苷酸序列的構建物和含有編碼免疫調(diào)節(jié)
蛋白的可表達形式核苷酸序列的構建物。將含有基因構建物組合的DNA或 RNA分子摻入活細胞中可導致該DNA或RNA表達，而產(chǎn)生耙蛋白質(zhì)及一種 或多種免疫調(diào)節(jié)蛋白。結果增強了抵御該靶蛋白質(zhì)的免疫應答反應。
可采用本發(fā)明來免疫接種個體以抵御所有的病原體，例如病毒、原核生物 和致病性真核生物，如單細胞致病生物或多細胞寄生蟲(的感染)。本發(fā)明特 別可用于免疫接種個體以抵御能感染細胞和無衣殼的那些病原體，例如病毒和 原核微生物，例如淋球菌、李斯特菌屬和志賀菌屬那些原核病原體。此外，本 發(fā)明還可用于免疫接種個體以抵御原生動物病原體，這類病原體在其生活周期 中的某一階段為胞內(nèi)病原體。表1提供了可用于制備本發(fā)明疫苗的一些病毒家. 族和種屬的名單。疫苗中可采用含有編碼各肽的DNA序列的DNA構建物， 所述肽含有至少一個與例如表中所列那些病原體抗原所展示表位相同的或基本上相似的表位。此外，本發(fā)明還可用于免疫接種個體以抵御其他病原體，包 括原核病原體和真核原生動物病原體以及多細胞寄生蟲，如表2所列。
為制備基因疫苗以提供保護力免遭病原體感染，必須在基因構建物中包括 編碼免疫原性蛋白質(zhì)的基因物質(zhì)，例如靶蛋白的編碼序列，以引發(fā)對其的保護 性免疫應答反應。不論病原體是胞內(nèi)感染(本發(fā)明尤其適用)或胞外感染病原體，
不是所有的病原體抗原能都引發(fā)保護性應答反應。因為DNA和RNA均較小， 而制備比較容易，本發(fā)明還提供了采用多種病原體抗原進行疫苗接種的額外優(yōu) 點。用于基因疫苗的基因構建物可包含編碼多種病原體抗原的基因物質(zhì)。例如， 一個構建物中可包含數(shù)種病毒基因，從而提供多種靶抗原。
表1和表2包括一些致病因子和生物的名單，可以制備它們的基因疫苗以 保護個體免遭其感染。在一些優(yōu)選的實施方式中，免疫接種個體抵御病原體的 方法針對HIV、 HTLV或HBV。
本發(fā)明另一方面，提供了賦予抵御過度增殖性疾病特征性的過度增殖性細 胞的保護性免疫應答反應的方法，以及治療患過度增殖性疾病個體的方法。過 度增殖性疾病的例子包括所有形式的癌癥和銀屑病。
業(yè)已發(fā)現(xiàn)，將包含編碼免疫原性"過度增殖細胞"相關蛋白的核苷酸序列 的基因構建物引入個體細胞中能導致在個體的疫苗接種細胞內(nèi)產(chǎn)生這些蛋白 質(zhì)。為了免疫接種以抵御過度增殖性疾病，可給予個體包含編碼過度增殖性疾 病相關蛋白的核苷酸序列的基因構建物。
為使過度增殖相關蛋白成為有效的靶免疫原，其必須是只產(chǎn)生在過度增殖 細胞內(nèi)，或在過度增殖細胞內(nèi)產(chǎn)生的水平高于正常細胞。靶抗原包括這樣的蛋 白質(zhì)、其片段和肽，它們包含在上述蛋白中發(fā)現(xiàn)的至少一個表位。在一些情況
中，過度增殖相關蛋白質(zhì)是編碼某蛋白的基團發(fā)生突變的產(chǎn)物。突變基因編碼 的蛋白質(zhì)與正常蛋白幾乎相同，除了其氨基酸序列略有不同因而產(chǎn)生了正常蛋 白質(zhì)上沒有的不同表位。這類靶蛋白包括由例如輝6、 ，c、 Am等原癌基因和 轉座基因kr/fl6/、 ras、 wc、 P53、 "ew、 和EGRF編碼的那些蛋白質(zhì)。除了 作為靶抗原的原癌基因產(chǎn)物外，用于抗癌治療和保護性方案的耙蛋白還包括B 細胞淋巴瘤所產(chǎn)生抗體的可變區(qū)和T細胞淋巴瘤的T細胞受體可變區(qū)，在一些 實施方案中，它們也可用作自身免疫疾病的靶抗原。還可采用其它腫瘤相關蛋白作為靶蛋白，例如發(fā)現(xiàn)的腫瘤細胞內(nèi)含量較高的蛋白質(zhì)，包括單克隆抗體 17-IA所識別的蛋白質(zhì)和葉酸結合蛋白質(zhì)或PSA。
雖然可采用本發(fā)明來免疫接種個體以抵御幾種癌癥形式中的一種或多種， 但本發(fā)明尤其適用于預防性免疫接種易患某種特定癌癥或曾患癌癥因而易復
發(fā)的個體。遺傳學和技術以及流行病學的發(fā)展已能測定和評估個體發(fā)生癌癥的 幾率和風險?？衫没蚝Y檢和/或家族健康史來預測某特定個體患幾種癌癥中
任何一種的可能性。
類似地，那些曾患癌癥和已接受治療切除癌瘤或處于緩解中的個體尤其易 復發(fā)。作為治療方案的一部分，可以針對己診斷(明確)的癌癥給予這種個體 免疫接種以抵御復發(fā)。因此， 一旦得知某個體曾患有某類癌癥并有復發(fā)危險時， 可免疫接種他們，使其免疫系統(tǒng)作好準備以抵御任何將出現(xiàn)的癌癥。
本發(fā)明提供治療患過度增殖性疾病個體的方法。在這些方法中，引入的基 因構建物用作免疫治療劑，以指導和促進個體的免疫系統(tǒng)抵御產(chǎn)生耙蛋白的過 度增殖細胞。
本發(fā)明提供了治療自身免疫疾病和病癥個體患者的方法，該方法可賦 予對抗自身免疫相關靶抗原，包括細胞受體和能產(chǎn)生針對"自身抗原"的 抗體細胞的廣泛保護性基礎免疫應答反應。
T細胞介導的自身免疫疾病包括類風濕關節(jié)炎(RA)、多發(fā)性硬化癥 (MS)、斯耶格倫綜合征(Sjogren syndrome)、肉樣瘤病、胰島素依賴性糖尿 病(IDDM)、自身免疫甲狀腺炎、反應性關節(jié)炎、強直性脊柱炎、硬皮病、 多肌炎、皮肌炎、銀屑病、脈管炎、韋格納氏肉芽腫病、克羅恩病和潰瘍 性結腸炎。上述各種疾病的特征是T細胞受體結合內(nèi)源性抗原，進而引發(fā) 自身免疫疾病相關的炎性級聯(lián)反應。針對T細胞(受體)可變區(qū)的疫苗接 種將引發(fā)包括CTL在內(nèi)的免疫應答而消除那些T細胞。
在RA中，已特征鑒定到參與該疾病的T細胞受體(TCR)的幾個特異性 可變區(qū)。這些TCR包括V(3-3、 V(3-14、 20 V(3-17和Va-17。因此，可用編 碼這些蛋白質(zhì)中至少一種的DNA構建物作為疫苗接種，以引發(fā)耙向參與 RA的T細胞的免疫應答。參見Howell, M. D.等，1991 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:10921-10925; Paliard， X.等，1991 Science 253, 325-329; Williams. W.C.等，1992. J. Clin. Invest. 90:326-333;以上各篇文獻通過引用納入本文。
在多發(fā)性硬化癥(MS)中，已特征鑒定到參與該疾病的TCR的幾個 特異性可變區(qū)。這些TCR包括Vfp和Va-lO。因此可用編碼這些蛋白中至 少一種的DNA構建物作為疫苗接種，以引發(fā)靶向參與MS的T細胞的免疫 應答。參見:Wucherpfennig,K.W.,等，1990 Science248:1016-1019; Oksenberg， J.R等，1990 Nature 345:344-346;以上各篇文獻通過引用納入本文。
在硬皮病中，已特征鑒定到參與該疾病的TCR的幾個特異性可變區(qū)。 這些TCR包括V(3-6、 V卩-8、 V(3-14和Va-16、 Va-3C、 Va-7、 Va-14、 Va-15、 Va-16、 Va-28和Va-12。因此，可用編碼這些蛋白中至少一種的 DNA構建物作為疫苗接種，以引發(fā)靶向參與硬皮病的T細胞的免疫應答。
為治療T細胞介導的自身免疫疾病患者，尤其是TCR可變區(qū)尚未特征 鑒定的患者，可以進行滑膜活檢?？商崛『琓細胞的樣品，用標準技術鑒 定那些TCR的可變區(qū)。利用這些信息制備基因疫苗。
B細胞介導的自身免疫疾病包括狼瘡(SLE)、格雷夫斯病、重癥肌無力、 自身免疫溶血性貧血、自身免疫血小板減少癥、哮喘、冷球蛋白血癥、原 發(fā)性膽管纖維硬化(primary biliary sclerosis)和惡性貧血。這些疾病各自的特 征是抗體結合內(nèi)源性抗原，進而引發(fā)自身免疫疾病相關的炎性級聯(lián)反應。 針對抗體的這種可變區(qū)的疫苗接種，可引發(fā)包括CTL在內(nèi)的免疫應答以消 除產(chǎn)生這種抗體的B細胞。
為治療B細胞介導的自身免疫疾病患者，必須鑒定參與自身免疫活動 的抗體的可變區(qū)?？蛇M行活檢，提取炎癥部位存在的抗體樣品。用標準技 術鑒定那些抗體的可變區(qū)。利用該信息制備基因疫苗。
在SLE病例中，認為一種抗原是DNA。因此，可以篩檢待免疫接種以 抵御SLE的患者血清中的抗DAN抗體，制備包含編碼在其血清中發(fā)現(xiàn)的 抗DNA抗體可變區(qū)的DNA構建物的疫苗。
TCR和抗體可變區(qū)的共同結構特征是熟知的。通?？捎靡韵率熘姆?法發(fā)現(xiàn)編碼特定TCR或抗體的DNA序列，例如Kabat等(1987，"免疫學 感興趣蛋白質(zhì)的序列"，"美國衛(wèi)生與人類服務部"(U.S. Department of Health and Human Services),貝塞斯達市(Bethesda)，馬里蘭州)所述的方法，該篇文獻通過引用納入本文。此外，克隆抗體的功能性可變區(qū)的通用方法
可參見引用納入本文的Chaudhary, V.K.等，1990， Proc. Natl. Acad, Sci. USA 87:1066。 表l
小RNA病毒科
屬 鼻病毒屬(醫(yī)學)引起50%普通感冒病例。
腸病毒(Etheroviruses):(醫(yī)學)包括脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯 薩奇病毒、艾柯病毒、人腸道病毒如甲肝病毒。 口瘡病毒(Apthoviruses):(獸醫(yī)學)這些是口蹄疫病毒。 革巴抗原VP1， VP2， VP3， VP4， VPG
杯狀病毒科
屬 諾瓦克群病毒屬(醫(yī)學)這些病毒是流行性胃腸炎的重
要病原體。
披膜病毒科
屬 Ct病毒屬(醫(yī)學和獸醫(yī)學)例子包括Senilis病毒、羅斯
河病毒(RossRiver virus)和東方和西方馬腦炎病毒。 呼腸孤病毒屬(醫(yī)學)風疹病毒。
黃病毒科
例子包括(醫(yī)學)登革熱病毒、黃熱病毒、日本腦炎病 毒、圣路易斯腦炎病毒和虱傳腦炎病毒。
西尼羅病毒(GenbankNC001563、 AF533540、 AF404757 、 AF404756 、 AF404755 、 AF404754 、 AF404753 、 AF481864、 M12294、 AF317203、 AF196835、 AF260969、 AF260968、 AF260967、 AF206518和AF202541)
代表性靶抗原E
NS5 C丙肝病毒(醫(yī)學)這些病毒不屬于任何科，但據(jù)信是披膜病毒或黃病毒。大 部分類似于披膜病毒科。
冠狀病毒科(醫(yī)學和獸醫(yī)學)
傳染性支氣管炎病毒(禽類)
豬可傳播性胃腸炎病毒(豬)
豬凝血性腦脊髓炎病毒(豬)
貓傳染性腹膜炎病毒(貓)
貓小腸冠狀病毒(貓)
狗冠狀病毒(狗)
SARS相關冠狀病毒
人呼吸道冠狀病毒引起約40例普通感冒。 EX.224E, 0C43。
注意一冠狀病毒可引起非甲、非乙和非丙型肝炎。
靶抗原
E1-也稱為M蛋白或基質(zhì)蛋白 E2-也稱為S蛋白或刺突蛋白
E3-也稱為HE或血凝素-elterose糖蛋白(并不存在于所有
冠狀病毒中)
N-核衣殼
彈狀病毒科
靶抗原
tK皰病毒(Vesiliovirus)
狂犬病病毒(醫(yī)學和獸醫(yī)學)狂犬病
G蛋白
N蛋白
線狀病毒科(醫(yī)學)
出血熱病毒，例如馬堡病毒和埃博拉病毒
雖'j禾占病毒禾斗屬 副粘病毒屬(醫(yī)學和獸醫(yī)學)
腮腺炎病毒，新城疫病毒(重要的雞致病原) 麻疹病毒屬(醫(yī)學和獸醫(yī)學) 麻疹病毒、狗瘟熱 肺病毒(醫(yī)學或獸醫(yī)學) 呼吸道合胞病毒
正粘液病毒科(醫(yī)學)
流感病毒
布尼亞病毒禾斗(B ungavirus)
屬 布尼亞病毒屬(醫(yī)學)加利福尼亞腦炎，LA Crosse
白蛉熱病毒屬(醫(yī)學)里夫特山谷熱病 漢坦病毒屬Puremala是 一 禾中hemahagin熱病毒 內(nèi)羅畢病毒屬(獸醫(yī)學)內(nèi)羅畢綿羊病 還有許多未分類的布尼亞病毒屬
沙粒病毒科(醫(yī)學)
LCM，拉沙熱病毒
呼腸孤病毒科
屬 呼腸孤病毒屬可能是一種人病原體
輪狀病毒兒童急性胃腸道炎 環(huán)狀病毒屬(醫(yī)學和獸醫(yī)學)
科羅拉多虱傳熱病毒、Lebombo(人)馬腦炎病毒、藍舌
病毒
逆轉錄病毒科
亞科
致癌病毒亞科(Oncorivirinal):(獸醫(yī)學)(醫(yī)學)貓白血病 病毒、HTLVI和HTLVII
20慢病毒亞科(醫(yī)學和獸醫(yī)學)mv，貓免疫缺陷病毒、馬
傳染性貧血病毒 泡沫病毒亞科
孚L多空病毒科
亞科 亞科
多瘤病毒亞科(醫(yī)學)BKU和JCU病毒
乳頭瘤病毒亞科(醫(yī)學)與癌癥或乳頭瘤的惡性進展有 關的許多種病毒
腺病毒(醫(yī)學)
EXAD7， ARD.， O.B.-引起呼吸道疾病-一些腺病毒，例 如275，引起腸炎
細小病毒科(獸醫(yī)學)
貓細小病毒引起貓腸炎
狗細小病毒 豬細小病毒
皰疹病毒科 亞科
a皰疹病毒亞科
單純皰疹病毒屬(醫(yī)學)
HSVI(GenbankX14112、 NC001806)， HSVII(NC001798)
水痘病毒屬(醫(yī)學和獸醫(yī)學)假狂犬病-水痘-帶狀皰疹病
亞科-
卩皰疹病毒亞科 巨細胞病毒屬(醫(yī)學)
HCMV
鼠巨細胞病毒(Muromegalovirus)亞科: 屬
Y皰疹病毒亞科 淋巴隱病毒屬(醫(yī)學)
EBV-(伯基特淋巴瘤(Burkitts lympho))
細長病毒屬
痘病毒科
亞科:
屬
帶狀痘病毒亞科(醫(yī)學-獸醫(yī)學)
天花病毒屬(天花病毒)
牛痘屬(牛痘病毒) 副痘病毒屬-獸醫(yī)學
禽痘病毒(Auipoxvirus)-獸醫(yī)學
山羊痘病毒屬
兔痘病毒屬
豬痘病毒屬
肝DNA病毒科
乙型肝炎病毒 未分類的 S肝炎病毒
表2
細菌病原體
病原性革蘭陽性球菌包括肺炎球菌；葡萄球菌；和鏈球菌。病原性 革蘭陰性球菌包括腦膜炎球菌和淋球菌。
病原性革蘭陰性腸道桿菌包括腸桿菌、假單胞菌、不動細菌和艾肯 菌、類鼻疽、沙門菌、志賀菌、嗜血桿菌、軟性下疳、布魯菌、土拉菌、 耶爾森(巴斯德)菌、念珠狀鏈桿菌和螺菌、單核細胞增生李斯特菌、豬紅斑 丹毒絲菌、白喉桿菌、霍亂桿菌、炭疽桿菌、杜諾萬菌(性病性肉芽腫)和巴 爾通氏體。
亞科:病原性厭氧菌包括破傷風桿菌；肉毒菌和其它羧菌；結核桿菌；麻 風桿菌和其它分枝桿菌。病原性螺旋體病包括梅毒；密螺旋體?。粺釒?肉芽腫；品它病和地方流行性梅毒；和鉤端螺旋體病。
由較高級病原菌和病原性真菌引起的其它感染包括放線菌??；諾卡 菌病；隱球菌病，酵母病，組織胞漿菌病和球孢子菌??；念珠菌病，曲霉 病，和毛霉菌?。绘咦咏z菌病，巴西芽生菌病，霉樣真菌病(petriemdosis)， 球擬酵母菌病，足分枝菌病和著色芽生菌?。缓推つw真菌病。
立克次體感染包括立克次體的(感染)和立克次體病。
支原體和衣原體感染的病例包括支原體肺炎；性病性淋巴肉芽腫； 鸚鵡熱；和產(chǎn)期衣原體感染。
病原性真核細胞
由病原性原蟲和蠕蟲引起的感染包括阿米巴?。化懠?；利什曼??； 錐蟲??；弓形體病；卡氏肺囊蟲??；巴貝蟲病；賈第鞭毛蟲病；旋毛蟲病; 絲蟲??；血吸蟲?。痪€蟲??；吸蟲病；和絳蟲感染。
權利要求
1. 一種包含編碼IL-15功能片段的SEQ ID NO1或其片段的核酸分子。
2. 如權利要求1所述的核酸分子，其特征在于，該分子包含SEQIDNO:l。
3. 如權利要求1或2所述的核酸分子，其特征在于，該分子不含IL-15 信號序列的編碼序列。
4. 如權利要求1-3所述的核酸分子，其特征在于，該分子不含IL-15的 Kozak區(qū)和/或IL-15的5，非翻譯區(qū)和/或IL-15的3'非翻譯區(qū)。
5. 如權利要求l-4所述的核酸分子，其特征在于，該分子包含非-IL-15信 號序列的編碼序列。
6. 如權利要求l-5所述的核酸分子，其特征在于，該分子包含IgE信號序 列的編碼序列。
7. 如權利要求l-6所述的核酸分子，其特征在于，該分子還包含免疫原的 編碼序列。
8. 如權利要求7所述的核酸分子，其特征在于，所述免疫原是病原體抗 原、癌癥相關抗原或與自身免疫疾病相關細胞相連的抗原。
9. 如權利要求8所述的分離的核酸分子，其特征在于，所述免疫原是選 自HIV、 HSV、 HCV和WNV構成之組的病原體的病原體抗原。
10. 如權利要求l-9所述的核酸分子，其特征在于，所述分離的核酸分子 是質(zhì)粒。
11. 如權利要求l-9所述的核酸分子，其特征在于，所述分子摻入在病毒 載體中。
12. 如權利要求l-9所述的核酸分子，其特征在于，所述分子摻入在減毒 活病原體中。
13. —種包含權利要求1-12所述核酸分子和含有免疫原編碼核酸序列的 核酸分子的組合物。
14. 如權利要求13所述的組合物，其特征在于，所述免疫原是病原體抗 原、癌癥相關抗原或與自身免疫疾病相關細胞相連的抗原。
15. 如權利要求14所述的組合物，其特征在于，所述免疫原是選自HIV、HSV、 HCV和WNV構成之組的病原體的病原體抗原。
16. 如權利要求13-15所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子是質(zhì)粒。
17. —種可注射的藥物組合物，其包含權利要求l-12所述的核酸分子或權 利要求13-15所述的組合物。
18. —種調(diào)節(jié)個體的免疫應答反應的方法，該方法包括給予所述個體權利 要求l-6所述的核酸分子。
19. 一種重組疫苗，其包含編碼免疫原的核酸序列和權利要求l-6所述的 核酸序列。
20. 如權利要求19所述的重組疫苗，其特征在于，所述免疫原是病原體 抗原、癌癥相關抗原或與自身免疫疾病相關細胞相連的抗原。
21. 如權利要求20所述的重組疫苗，其特征在于，所述免疫原是選自HIV、 HSV、 HCV和WNV構成之組的病原體的病原體抗原。
22. 如權利要求19-21所述的重組疫苗，其特征在于，所述重組疫苗是重 組牛痘疫苗。
23. —種誘導個體抵御免疫原的免疫應答反應的方法，該方法包括給予所 述個體權利要求7-12所述的核酸分子或權利要求13-16所述的組合物或權利要 求19-22所述的重組疫苗。
全文摘要
本發(fā)明揭示了編碼IL-15或其片段的核酸分子，此核酸分子表達的蛋白質(zhì)水平高于含天然IL-15編碼序列的核酸分子。還揭示了含有其它修飾，例如缺乏IL-15信號序列的編碼序列和/或缺乏IL-15非翻譯序列和/或包含非-IL-15信號序列的核酸分子。揭示了包含這種核酸分子的載體，包括質(zhì)粒和病毒載體，以及單用這種核酸分子或與編碼免疫原的核酸序列聯(lián)用的方法，所述序列是所述核酸分子的一部分和/或不同核酸分子的一部分。揭示了編碼融合蛋白的重組疫苗和減毒活病原體以及它們的使用方法。
文檔編號C12Q1/68GK101432300SQ200780005940
公開日2009年5月13日 申請日期2007年1月12日 優(yōu)先權日2006年1月13日
發(fā)明者D·B·韋納, M·庫茲勒 申請人:賓夕法尼亞州立大學托管會