專利名稱：噴霧干燥的酶產(chǎn)品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含酶的顆粒、制M酶的顆粒的方法，及含酶的顆粒在 組合物中的用途和此顆粒及組合物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
在許多工業(yè)和應(yīng)用方面，酶產(chǎn)品都是已知和有用的。 已知的提供干燥微粒狀酶產(chǎn)品的技術(shù)包括
-噴霧干燥產(chǎn)品，記栽在Michael S. Showell (編輯)的《粉末 狀去污劑》(Powdered detergents)中；表面活性劑科學(xué)叢書(Surfactant Science Series) ;1998; vol. 71; 140-142頁；Marcel Dekker和GB 1， 360, 969。
-分層產(chǎn)品，如WO 97/23606和US 5， 814， 501記載的。 工業(yè)和應(yīng)用渴求和必需的生物學(xué)化合物例如酶的改良的性質(zhì)，導(dǎo)致 了復(fù)合微粒酶產(chǎn)品的發(fā)展，這是一項(xiàng)有許多挑戰(zhàn)性難題的任務(wù)。產(chǎn)品的 制備過程和加工所用組分及化學(xué)藥品應(yīng)是價廉的，但也應(yīng)為酶產(chǎn)品提供 理想的性能，如改進(jìn)的酶儲存穩(wěn)定性、低起塵特性、改良的顆粒機(jī)械強(qiáng) 度、理想的顏色、形狀和大小。
發(fā)明概述
本發(fā)明第一方面涉及制備一種顆粒的方法，包括使含有酶和生物質(zhì) 的發(fā)酵肉湯原料噴霧干燥，以得到含有酶和生物質(zhì)的固體顆粒。
第二方面，本發(fā)明涉及一種制備含有酶的顆粒的方法，包括使含有 酶的水性液體原料噴霧干燥，得到噴霧干燥的第一含酶顆粒，隨后使此第一干燥顆粒經(jīng)過選自制粒、包衣和二者的組合的工藝，得到第二干燥 的含酶顆粒。
在其它方面，本發(fā)明也提供了含有酶和生物質(zhì)的顆粒、含有這些顆 粒的組合物及使用這些顆粒和組合物的方法。
本發(fā)明提供了制備性質(zhì)優(yōu)良的干燥酶顆粒的簡單而廉價的方法。
定義
本發(fā)明上下文使用的術(shù)語"發(fā)酵肉湯"應(yīng)理解為水性組合物，含有 酶和微生物細(xì)胞和/或其細(xì)胞碎片，這些細(xì)胞在發(fā)酵過程中產(chǎn)生了酶。
本發(fā)明上下文使用的術(shù)語"細(xì)胞碎片"應(yīng)理解為發(fā)酵過的微生物細(xì) 胞的不溶解部分，包括從細(xì)胞擴(kuò)展的結(jié)構(gòu)，如從真菌細(xì)胞擴(kuò)展的菌絲體。
本發(fā)明上下文使用的術(shù)語"生物質(zhì)(biomass)"應(yīng)理解為微生物細(xì)胞、 細(xì)胞碎片或其組合的同義詞。
本發(fā)明上下文使用的術(shù)語"發(fā)酵濾液"應(yīng)理解為除去了微生物細(xì)胞 和細(xì)胞碎片的發(fā)酵肉湯。
本發(fā)明上下文使用的術(shù)語"酶濃縮物"應(yīng)理解為已經(jīng)過加工提高了 酶濃度的發(fā)酵濾液。
本發(fā)明上下文使用的術(shù)語"SPAN"(跨度)應(yīng)理解為顆粒大小分布 (PSD)的寬度，表示為
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PSD可以用各顆粒的質(zhì)量平均直徑表示。D50表示的平均直徑是50°/。 重量的顆粒具有小于此值的直徑，50%重量的顆粒具有大于此值的直徑。 值DIO和D90表示的直徑值指分別有10%和90%重量的顆粒，具有比
所述的值小的直徑。
術(shù)語"Rayleigh霧化器"應(yīng)理解為能產(chǎn)生有低SPAN值的液滴的霧 化器(通?？梢缘玫降腟PAN值低于1.5，例如在O. 9-1.3之間)，所述的 霧化器其特征是包含噴霧部分和表面部分，表面部分包括至少一個孔洞。 在一個優(yōu)選實(shí)施方案中，Rayleigh霧化器是旋轉(zhuǎn)霧化裝置，在其中將液 體分散到旋轉(zhuǎn)的有孔洞的空圓柱體的內(nèi)表面，從而將液體霧化，液體從孔洞穿過圓柱體，形成液滴。W0 94/21383的權(quán)利要求9-30和

圖1 - 18 記載了此霧化器，權(quán)利要求l-8記載了霧化的方法，將所有的內(nèi)容引入 本文作為參考。
發(fā)明詳述 微生物
可以是任何適于發(fā)酵的微生物。
微生物包括單細(xì)胞微生物，例如原核生物，或非單細(xì)胞微生物，例 如真核生物。
有用的單細(xì)胞類的細(xì)胞是細(xì)菌細(xì)胞，例如革蘭氏陽性細(xì)菌，包括擔(dān) 不局限于芽孢桿菌屬(Bacillus)細(xì)胞，例如，Bacillus alkalophilus, 解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens )、短芽孢桿菌(Bacillus brevis)、環(huán)狀芽孢桿菌(Bacillus circulans ) 、 Bacillus clausii、 凝結(jié)芽孢桿菌(Bacillus coagulans )、杣爛芽孢桿菌(Bacillus lautus )、 遲緩芽孢桿菌(Bacillus lentus )、地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis )、巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)、嗜熱月旨肪 芽孢桿菌(Bacillus stearothermophilus )、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)和蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis );或鏈霉菌 屬(Streptomyces )細(xì)胞，如淺青紫鏈霉菌(Str印tomyces lividans) 或鼠灰鏈霉菌(Streptomyces murinus);或革蘭氏陰性細(xì)菌，如大腸 桿菌或假單胞菌屬(Pseudomonas)細(xì)菌。在一優(yōu)選實(shí)施方案中，細(xì)菌 類的微生物是遲緩芽孢桿菌(Baci 1 lus lentus )、地衣芽孢桿菌(Baci 1 lus licheniformis) 、 Bacillus clausii、嗜熱月旨肪芽孢桿菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)細(xì)胞。在 另一優(yōu)選實(shí)施方案中，芽孢桿菌屬(Bacillus)細(xì)胞是一種嗜堿性芽孢 桿菌細(xì)胞。
」微生物也可以是真核生物，如哺乳動物、昆蟲、植物、或真菌細(xì)胞。 在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，微生物是真菌細(xì)胞。此處用"真菌"包括phylaAscomycota, Basidiomycota, Chytridiomycota和Zygomycota (其定義 見Hawksworth等，Ainsworth and Bisby， s Dictionary of The Fungi, 第8版，1995, CAB International, University Press, Cabridge, UK) 以及Oomycota(見Hawksworth等，1995，同上，第171頁)和所有有絲分 裂孢子真菌(Hawksworth等，1995，見上)。
在一個更優(yōu)選的實(shí)施方案中，該真菌微生物是酵母細(xì)胞。這里所用 "酵母"包括產(chǎn)子嚢酵母(內(nèi)孢霉目(Endomycetales))、產(chǎn)擔(dān)孢子 (basidiosporogenous )酵母和屬于半知菌類(Fungi I邁perfecti)(芽 孢綱(Blastomycetes))的酵母。因?yàn)榻湍傅姆诸悓砜赡芨淖儯瑸榱?本發(fā)明的目的，酵母應(yīng)按《酵母的生物學(xué)和活性》(Biology and Activities of Yeast) ( Skinner, F. A. , Passmore， S. M.，和Davenport, R.R.編著，Soc. App. Bacteriol. Symposium Series No. 9， 1980 )中的 描述來定義。
在一個甚至更優(yōu)選的實(shí)施方案中，該酵母微生物是假絲酵母屬 (Candida)、漢遜酵母屬(Hansenula)、克魯維酵母屬(Kluyveromyces)、 畢赤酵母屬(PichU)、酵母屬(Saccharomyces)、裂殖酵母屬 (Schizosaccharomyces)或Yarrowia細(xì)胞。
在一個最優(yōu)選實(shí)施方案中，該酵母微生物是卡爾酵母 (Saccharomyces carlsbergernsis)、釀酒酵母(S. cerevisiae)、糖化 酵母(S. diastaticus) 、 Saccharomyces douglasii、克魯弗酵母(S. kluyveri)、諾地酵母(S. norbensis)或Saccharomyces oviformis細(xì)胞。 在另一個最優(yōu)選的實(shí)施方案中，該酵母微生物是乳酸克魯維酵母 (Kluyveromyces lactis)細(xì)胞。在另一個最優(yōu)選的實(shí)施方案中，該酵 母微生物是Yarrowia lipolytica細(xì)胞。
在另一個更優(yōu)選的實(shí)施方案中，該真菌微生物是絲狀真菌細(xì)胞。"絲 狀真菌，，包括真菌門(Eumycota)和Oomycota的所有絲狀類型(正如 Hawksworth等，1995,見上，所定義的)。絲狀真菌的特征在于由幾丁 質(zhì)、纖維素、葡聚糖、脫乙酰殼多糖、甘露聚糖和其它復(fù)合多糖構(gòu)成的 菌絲體壁。營養(yǎng)生長是通過菌絲延長來進(jìn)行的，碳代謝為專性需氧的。相反，酵母如釀酒酵母的營養(yǎng)生長是通過單細(xì)胞菌體的出芽來進(jìn)行的，
而且碳代謝可以通itjt酵進(jìn)行。
在一個甚至更優(yōu)選的實(shí)施方案中，該絲狀真菌微生物是但不限于支 頂孢(Acremonium)、曲霉屬(Aspergillus)、鐮孢屬(Fusarium)、腐質(zhì) 霉屬(Humicola)、毛霉屬(Mucor)、毀絲霉屬(Myceliophthora)、脈孢菌 屬(Neurospora)、 青霉屬(Penicillium)、 梭孢殼屬(Thielavia)、 Tolypocladium或木霉屬(Trichode簡)的種的細(xì)胞。
在一個最優(yōu)選的實(shí)施方案中，該絲狀真菌微生物是泡盛曲霉 (Aspergillus awamori)、 臭曲霉(A. foetidus)、日本曲霉(A. japonicus)、構(gòu)巢曲霉(A. nidulans)、黑曲霉(A. niger)或米曲霉(A. oryzae)細(xì)胞。在另一個最優(yōu)選的實(shí)施方案中，該絲狀真菌微生物是桿孢 狀鐮孢(Fusarium bactridioides) 、 Fusarium cerealis 、 Fusarium crookwellense、大刀鐮孢(F. culmorum)、禾本^H^孢(F. graminearum)、 禾赤鐮孢(F. graminum)、異孢鐮孢(F. heterospor咖)、合歡木鐮孢(F. negundi)、尖鐮孢(F. oxysporum)、多枝鐮孢(F. reticulatum)、粉紅 鐮孢(F. roseum)、接骨木鐮孢(F. sambucin咖)、膚色鐮孢(F, sarcochrom)、擬分枝孢鐮孢(F. sporotrichioides)、硫色鐮孢(Fusarium sulphureum) 、 Fusarium torulosum、 Fusarium trichothecioides或 Fusarium venenatum細(xì)胞。
在另一個最優(yōu)選的實(shí)施方案中，該絲狀真菌微生物是Humicola insolens 、 Humicola lanuginosa 、 米黑毛霉(Mucor miehei)、 Myceliophthora thermophila、粗糙脈孢菌(Neurospora crassa)、產(chǎn)紫 青霉(Penicillium purpurogenum) 、 Thielavia terrestris、 Trichoderma harzianum 、 康寧木霉(Trichoderma koningii) 、 Trichoderma longibrachiatum 、 Trichoderma reesei 或綠色木霉(Trichode醒 viride)細(xì)胞。
本發(fā)明也包含上述微生物的變種，其是用常規(guī)的基因操作方法通過 改變所述微生物遺傳物質(zhì)而獲得的，這樣將編碼酶的外來核苷酸序列插 入到所述微生物中。本申請上下文使用的酶可以是能夠通過發(fā)酵得到的任何酶或不同酶 的組合。相應(yīng)地，當(dāng)提到"酶"時，通常應(yīng)理解為包括單一的酶和一種 以上的酶的組合。應(yīng)理解的是術(shù)語"酶"包括酶的變體(例如用重組技術(shù)制備的)。 這些酶的變體的例子記載于以下文獻(xiàn)中例如EP 251，446 (Genencor), W0 91/00345 (Novo Nordisk) ， EP 525，610 (Solvay) 和 W0 94/02618 (Gist-Brocades NV)。本說明書和權(quán)利要求書中使用的酶的分 類法與學(xué)術(shù)出版公司1992年出版的《生物化學(xué)和分子生物學(xué)國際聯(lián)合會 命名委員會的建議(1992 )》 一致(Recommendations (1992) of the Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology, Academic Press, Inc., 1992)。相應(yīng)地，適用于本發(fā)明的酶產(chǎn)品中的酶的種類包括氧化還原酶(EC l.-.-，-)、轉(zhuǎn)移酶(EC 2.-.-.-)、水解酶(EC 3.-.-.-)、裂解酶(EC 4. -.-)、異構(gòu)酶(EC 5.-.-.-)和連接酶(EC 6.-.-.-)。本申請上下文中的優(yōu)選的氧化還原酶是過氧化物酶(EC 1. 11. 1)， 例如haloperoxidase、漆酶(EC 1.10. 3. 2)和葡萄糖氧化酶(EC 1.1. 3. 4)， 而優(yōu)選的轉(zhuǎn)移酶是以下任何亞類中的轉(zhuǎn)移酶a) 轉(zhuǎn)移一碳基團(tuán)的轉(zhuǎn)移酶(EC 2.1);b) 轉(zhuǎn)移醛或酮?dú)埢霓D(zhuǎn)移酶(EC 2. 2);?；D(zhuǎn)移酶(EC 2. 3);c) 糖基轉(zhuǎn)移酶(EC 2.4);d) 轉(zhuǎn)移烷基或芳香基而不包括非甲基的轉(zhuǎn)移酶，(EC2.5);和e) 轉(zhuǎn)移含氮基團(tuán)的轉(zhuǎn)移酶(EC 2. 6)。本發(fā)明的最優(yōu)選類型的轉(zhuǎn)移酶是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(蛋白質(zhì)-谷酰胺Y-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶;EC 2. 3.2.13)。適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)谷氨酰胺酶的進(jìn)一步的例子記載于WO 96/06931 (Novo Nordisk A/S)。本發(fā)明的優(yōu)選的水解酶是:羧基酯水解酶(EC 3. 1. 1.-)例如脂肪酶(EC 3.1.1.3);植酸酶(EC 3.1.3.-)，例如3-植酸酶(EC 3.1.3.8)和 6-植酸酶(EC 3.1.3.26);糖苷酶(EC 3.2，它歸為本文稱為"糖酶"的 組的范圍中)，例如oc淀粉酶(EC 3.2.1.1);肽酶(EC 3.4，也稱為蛋白 酶)；和其他的g水解酶。在本文中，用術(shù)語"糖酶"不^l^示能使尤其是五元環(huán)和六元環(huán)結(jié) 構(gòu)的碳水化合物鏈(例如淀粉)斷開的酶(即糖苷酶，EC 3.2)，也包括 能使糖產(chǎn)生異構(gòu)的酶，例如，六元環(huán)結(jié)構(gòu)如D-葡萄糖轉(zhuǎn)化成五元環(huán)結(jié)構(gòu) 如D-果糖。相關(guān)的糖酶包括以下各種(EC號在括號內(nèi))a-淀粉酶(3. 2.1.1)、 p-淀粉酶(3. 2.1. 2)、葡聚糖l，4-a-葡糖苷酶(3.2.1. 3)、纖維素酶 (3.2.1.4)、內(nèi)切-l，3(4)-p-葡聚糖酶(12.1.6)、內(nèi)切-1， 4-j3-木聚糖酶 (3.2.1.8)、葡聚糖酶(3.2. 1. 11)、殼多糖酶(3.2.1.14)、多聚半乳糖醛 酸酶(3. 2. 1. 15)、溶菌酶(3.2.1. 17)、 p-葡糖苷酶(3.2. 1.21)、 a-半乳 糖苷酶(3.2.1.22)、 p-半乳糖苷酶(3.2.1.23)、淀粉-1，6-葡萄糖苷酶 (3. 2. 1. 33)、木聚糖1， 4-p-城苷酶(3. 2. 1. 37)、葡聚糖內(nèi)切-l， 3-p-D-葡萄糖苷酶(3. 2.1. 39) 、 a-糊精內(nèi)切-l， 6-a-葡萄糖苷酶(3. 2.1. 41)、蔗 糖a-葡萄糖苷酶(3.2. 1.48)、葡聚糖內(nèi)切-l，3-a-葡萄糖苷酶 (3. 2.1. 59)、葡聚糖1, 4-p-葡萄糖苷酶(3. 2.1. 74)、葡聚糖內(nèi)切-1， 6-(3-葡萄糖苷酶(3.2. 1. 75)、阿拉伯聚糖內(nèi)切-l，5-a-L-阿拉伯糖苷酶 (arabinosidases) (3. 2.1.99)、乳糖酶(3. 2. 1. 108)、脫乙酰殼多糖酶 (chitosanases) (3. 2.1.132)和木糖異構(gòu)酶(5. 3.1. 5)。市售可獲得的氧化還原酶(EC l.-.-.-)的例子包括GluzymeTM(可以 從Novo Nordisk A/S得到的酶)。市售可獲得的蛋白酶(肽酶)包括KannaseTM、 Everlase 、 Esperase 、 Alcalase 、 Neutrase 、 Durazym 、 Savinase 、 Pyrase 、 Pancreatic Trypsin NOVO (PTN) 、 Bio-Feed Pro和Clear-Lens Pro(所有都可以 從Novo Nordisk A/S, Bagsvaerd， Denmark獲得)。其他商業(yè)可獲得的蛋白酶包括Maxatase 、 Maxacal 、 Maxapem 、 Opticlean 和Purafect，(能夠從Genencor International公司或Gist-Brocades得到)。市售可獲得的脂酶的例子包括LipoprimeTM、 Lipolase 、 Lipolase Ultra、 Lipozyme 、 Palatase 、 Novozym 435和Lecitase (所有都可 以從Novo NordiskA/S得到)。其他市售可荻得的脂酶包括Lumaf ast (從 Genencor International Inc.獲得的門多薩假單胞菌(Pseudomonas mendocina)月旨酶)；LipomaxTMCMw Gist Brocades/Genencor Int. Inc.獲得 的類產(chǎn)堿假單胞菌(Ps. pseudoalcaligenes )月旨酶；和從Solvay enzymes 得到的芽胞桿菌屬(Bacillus sp.)脂酶)。市售可獲得的糖酶的例子包括Alpha-Gal 、 Bio-Feed Alpha、 Bio-Feed Beta、 Bio Feed Plus、 Bio-Feed Plus、 Novozyme 188、 Celluclast 、 Cellusoft 、 Ceremyl 、 Citrozym 、 Denimax 、 Dezyme 、 Dextrozyme 、 Finizym 、 Fungamyl 、 Gamanase 、 Glucanex 、 Lactozym 、 Maltogenase 、 Pentopan 、 Pectinex 、 Promozyme 、 Pulpzyme 、 Novamyl 、 Termamyl 、 AMG (Amyloglucosidase Novo) 、 Maltogenase 、 SweetzymeTM和Aquazym (所有都可以從Novo Nordisk A/S得到)。可以通it^同一發(fā)酵肉湯中同時發(fā)酵2種或多種酶并在本發(fā)明的方 法中使用此液體或其加工過的液體作為原料而得到酶的組合?；蛘呖梢?通過分別發(fā)酵各種酶并使用不同發(fā)酵肉湯和/或其加工過的液體的混合 物作為本發(fā)明方法的原料，得到酶的組合。發(fā)酵肉湯和含有酶的液體本發(fā)明所述方法根據(jù)該方法的步驟采用發(fā)酵肉湯或含有酶的液體作 為原料。如上所述，本發(fā)明的第一方面，原料是發(fā)酵肉湯并且此方法包括將 所述的發(fā)酵肉湯噴霧干燥的步驟。依照本發(fā)明，此處定義的發(fā)酵肉湯含 有微生物細(xì)胞和/或其細(xì)胞碎片(生物質(zhì))。可以在噴霧干燥前除去一些生 物質(zhì)以優(yōu)化肉湯的性質(zhì)和對噴霧干燥的適應(yīng)性，例如調(diào)整粘稠度。然而， 除去的生物質(zhì)越多，方法將越昂貴。相應(yīng)地，在一個優(yōu)選實(shí)施方案中， 發(fā)酵肉湯含有至少10%生物質(zhì)，更優(yōu)選至少50°/。，甚至更優(yōu)選至少75%，2最優(yōu)選至少90%或至少95%從發(fā)酵得到的生物質(zhì)。在另一優(yōu)選實(shí)施方案 中，肉湯含有0-31 U/w的干物質(zhì)，優(yōu)選0-20。yU/w,更優(yōu)選0-15 4w/w， 例如10-15% w/w干物質(zhì)，而此范圍應(yīng)排除0%干物質(zhì)。生物質(zhì)可以構(gòu)成 不超過90% w/w的干物質(zhì)，優(yōu)選不超過75% w/w，更優(yōu)選不超過50°/。 w/w 干物質(zhì)，而酶可以構(gòu)成不超過50% w/w的干物質(zhì)，優(yōu)選不超過25% w/w, 更優(yōu)選不超過10% w/w干物質(zhì)。在本發(fā)明第一方面的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，噴霧干燥前除去發(fā)酵肉 湯原料中的粗顆粒或物體如稻草、碎石、大豆碎粒和其它不能溶解的非 生物質(zhì)。這些粗顆?；蛭矬w可以來源于添加物，例如發(fā)酵中加入的營養(yǎng) 物。可以通過過濾、沉降、離心和/或傾析肉湯而除去粗顆粒或物體。此 過程稱為除渣。在本發(fā)明的第二方面，原料是含有酶的液體，此方法包括將所述的 含有酶的液體噴霧干燥以得到第 一干燥的含酶顆粒，隨后使此第 一干燥 顆粒經(jīng)過第二加工步驟得到第二干燥的含酶顆粒。將要根據(jù)本發(fā)明的第二方面進(jìn)行干燥的原料，優(yōu)選為水性液體，例 如一或多種酶的水性溶液或a體。在本發(fā)明的第二方面的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，原料是發(fā)酵肉湯，或 已經(jīng)過一或多個加工步驟的發(fā)酵肉湯，例如上述定義的發(fā)酵濾液或所酶 濃縮物。可以用已知方法，例如過濾、離心、絮凝和這些方法的結(jié)合從發(fā)酵 肉湯中除去生物質(zhì)得到發(fā)酵濾液。可以加工發(fā)酵濾液得到酶濃縮物。此加工包括蒸發(fā)溶劑(如水)、 超濾以降低水和低分子組分的含量，將發(fā)酵濾液中的酶提取到第二溶液 中。也可以通過柱層析進(jìn)行純化，例如將發(fā)酵濾液泵過一個含有樹脂的 柱，^JI以比濾液中的水、鹽或其他組分^t或快的速度通過。在本發(fā)明的第一和第二方面，噴霧千燥前，在本發(fā)明的原料中可以 加入改善由此得到的含酶的干燥粉末或產(chǎn)品的性質(zhì)的材料。有用的添加 劑包括選自鹽、無機(jī)礦物質(zhì)或粘土、碳水化物、著色劑、纖維素或其衍 生物、殺蟲劑、分散劑、防泡劑、粘度調(diào)節(jié)劑、酸性試劑、堿性試劑、酶穩(wěn)定劑、酶抑制劑、粘合劑、其他的酶及其組合的材料。加入無機(jī)鹽 如堿和堿土的氯化物鹽、硫酸鹽、硝酸鹽和碳酸鹽，例如鉤鹽，可以活 化酶。可以用其他鹽，尤其是石充酸鈉或氯化鈉作為填充材料?？梢约尤?碳7jC化合物，如蔗糖和/或淀粉，增加顆粒的強(qiáng)度和改善酶的穩(wěn)定性。加 入著色劑如二氧化鈦可以為肉湯和最終微粒狀的酶產(chǎn)品提供所需的顏色。加入纖維素可以為酶顆粒提供強(qiáng)度和彈性。加入穩(wěn)定劑如曱硫氨酸 或硫代硫酸鹽可以保護(hù)酶，因而所得酶產(chǎn)品在本發(fā)明的加工和儲存過程中不會失活。加入無機(jī)物和粘土，如沸石、高嶺土、膨潤土、滑石和/或 硅酸鹽可以為干燥的酶顆粒和形成的顆粒劑提供增加的緊密度。加入抑 制劑，如硼酸蛋白酶抑制劑，可以降低酶的蛋白酶消化作用或自身消化作用而提高產(chǎn)量。加入殺蟲劑，如Rodalor^能控制微生物穩(wěn)定性并可以 減少最終產(chǎn)品的不良?xì)馕?。加入酸或堿可以將pH控制在所需的水平。在本發(fā)明的第一方面和第二方面，在噴霧干燥前，原料也可以經(jīng)過 物理處理，如加熱和/或冷卻和/或輻射肉湯及混合、通氣或超聲處理。在本發(fā)明的一個重要的實(shí)施方案中，在噴霧干燥前，優(yōu)選處理原料DNA (基因或質(zhì)體)或其他多核苷酸水解或分解。在本發(fā)明的第一方面，可以加入殺蟲劑如Rodalon (氯化苯甲烴 銨)、加熱(巴氏滅菌法)或輻射以使肉湯消毒。在本發(fā)明的第二方面， 對發(fā)酵濾液或酶濃縮物肉湯消毒，可以釆用處理肉湯的同樣的方法，或 也可以通過除菌過濾達(dá)到。在所有情況下，可以用已知方法，如多核苷 酸的酶消化達(dá)到遺傳物質(zhì)的分解。對于許多應(yīng)用，有用的含有酶的顆粒需要顆粒含有某一最小量的活 性酶。相應(yīng)地，在一優(yōu)選實(shí)施方案中，原料應(yīng)含有某一最小的液體中的 酶濃度和/或酶應(yīng)構(gòu)成液體中固體(即，不揮發(fā)組分)的某一最小百分比， 以通過本發(fā)明的方法產(chǎn)生有有用酶濃度的顆粒。我們意外地發(fā)現(xiàn)能提供 直接產(chǎn)生有足夠高的酶含量的發(fā)酵肉湯的發(fā)酵作用，以致可以直接將肉 湯干燥，或通過除去生物質(zhì)、滅菌及加入添加劑，僅最小程度進(jìn)行精制 得到酶含量足夠高的干燥粉末，從而得到在大多數(shù)應(yīng)用中有用的酶產(chǎn)品。進(jìn)行任何進(jìn)一步的精制過程前，本發(fā)明的發(fā)酵肉湯或發(fā)酵濾液中優(yōu)選的酶含量為至少每升發(fā)酵肉湯液相中有3 mg活性酶蛋白，更優(yōu)選至少20 mg/L，更優(yōu)選至少50mg/L，最優(yōu)選至少75 mg/L，例如80mg/L或更多。用于本發(fā)明方法的原料還應(yīng)具有適于泵送液體的粘度，優(yōu)選在 5-5000 cps范圍。干燥方法本發(fā)明通過噴霧干燥方法干燥肉湯、濾液或濃縮物，該方法包括將 肉湯、濾液或濃縮物通過霧化裝置傳送到干燥室中，其中霧化肉湯、濾 液或濃縮物的液滴與空氣氣流混合，蒸發(fā)并除去液滴的揮發(fā)性部分，剩 下干燥的含有酶的顆粒。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，通過一個泵送裝置輸送肉湯、濾 液或濃縮物，并優(yōu)選預(yù)熱至5-150匸，優(yōu)選50-120X:，更優(yōu)選90-110匸。霧化裝置可以適當(dāng)?shù)剡x自高速轉(zhuǎn)盤式霧化器(high speed rotating disk atomizers)、壓力噴嘴霧化器(pressure nozzle atomizers)、氣 動噴嘴霧化器(pneumat ic nozzle atomizers )或聲波噴嘴霧化器(sonic nozzle atomizers )，如1990年5月9日至ll日由職業(yè)進(jìn)步中心(Center for professional advancement)在阿姆斯特丹進(jìn)行的微嚢化專題討論 會^H義材料(Course Material from the Microencapsulation Seminar)所提及的。然而，能用其提供優(yōu)等干燥的含酶顆粒的一種優(yōu)選的特殊霧化器是 Rayleigh霧化器，用它可得到顆粒的改進(jìn)的性質(zhì)，例如得到增強(qiáng)的機(jī)械 強(qiáng)度、低起塵性(lower dusting)、窄的顆粒大小分布，即低的SPAN 值和改良的球形體積。W094/21383記載了一種這樣的霧化器，將該文獻(xiàn)合并于此作為參考。噴霧千燥粉末通常具有10-15%重量的水含量，優(yōu)選進(jìn)一步干燥到更低的水含量，例如低于約5% w/w，其方法是通過將噴霧干燥顆粒輸送到流化床干燥設(shè)備中，在其中由向上的氣流使噴霧干燥顆粒保持流體化蒸發(fā)除去其中過量的水分，此氣流優(yōu)選加熱并干燥的空氣。所得的噴霧干燥的固體含酶顆粒的性質(zhì)取決于噴霧干燥條件和加入 原料中的添加劑。在一些噴霧干燥方法中，在干燥步驟開始形成非常小 的顆粒，隨后在噴霧干燥結(jié)束時聚結(jié)或粘合在一起形成大的有些易碎的團(tuán)塊。這些聚結(jié)成塊的顆粒優(yōu)選有150 - 2000拜的平均直徑或大小。在 其他噴霧千燥方法中，例如使用W0 94/21383的霧化設(shè)備，會由于霧化 器的特別的設(shè)計制備出更小的不聚結(jié)的更均勻的顆粒。這些顆粒一般有 更好的起塵、強(qiáng)度和SPAN性質(zhì)且平均大小優(yōu)選落在50-300拜的范圍內(nèi)， 更優(yōu)選在100-200 nm范圍內(nèi)。優(yōu)選的噴霧干燥方法產(chǎn)生窄的大小分布，即窄的SPAN值。優(yōu)選地， SPAN值低于約2. 5，更優(yōu)選低于約2. 0,更優(yōu)選低于約1.5，最優(yōu)選低于 約1. 0。干燥顆粒的加工本發(fā)明第二方面的(上述)方法需要第一噴霧干燥顆粒隨后經(jīng)過選 自制粒、包衣及其組合的工藝得到第二干燥的含酶顆粒。制粒工藝包括 混合制粒、造粒、擠出、流化床和壓緊工藝。然而本發(fā)明也包括這樣的方法，其中由噴霧干燥發(fā)酵肉湯得到的顆 粒隨后經(jīng)過選自制粒、包衣及其組合的工藝。此進(jìn)一步的加工改進(jìn)含酶顆粒的性質(zhì)。混合制?；旌现屏?mixer granulation)工藝包括將噴霧干燥的含有酶的顆 粒與水及選自粘合劑、纖維、鹽、水不溶性礦物質(zhì)、色素、酶穩(wěn)定劑或 其組合的組分混合。加入足量的水使固體組分聚結(jié)成有所需的平均大小 的顆粒。粘合劑包括有高熔點(diǎn)或無熔點(diǎn)和具有非蠟性質(zhì)的粘合劑，例如聚乙 烯吡咯烷酮、糊精、聚乙烯醇、纖維素衍生物，例如羥丙基纖維素、甲 基纖維素或CMC。 一種適宜的粘合劑是碳水化合物類粘合劑，如能從法國Roquette Freres得到的Glucidex 21D。纖維包括纖維形式的純和/或不純的纖維素，例如鋸屑、純纖維性纖 維素、棉或其他形式的純或不純的纖維性纖維素。也可以使用以纖維性 纖維素為基質(zhì)的助濾劑。市場上有一些纖維形式的纖維素的商標(biāo)例如 CEP0和ARB0CELL。在一個Svenska Tramjolsfabrikerna AB的出版物 "C印o纖維素粉末"中，對于C印o S/20纖維素，聲稱大致最大纖維長 度是500罔，大致平均纖維長度是160罔，大致最大纖維寬度是50^m， 大致平均纖維寬度是30 nm。它還聲稱CEPO SS/200纖維素的大致最大纖 維長度150 大致平均纖維長度50拜，大致最大纖維寬度45薩， 大致平均纖維寬度25 pm。有這些尺寸的纖維素纖維非常適于本發(fā)明的目 的。詞"Cepo"和"Arbocel"是商標(biāo)。優(yōu)選的纖維性纖維素是Arbocel BFC200。也可以使用EP 304331 Bl記載的合成纖維，典型的纖維可以用 聚乙烯、聚丙烯、聚酯，尤其是尼龍、聚曱酸乙烯酯、聚甲基丙烯酸化 合物制成。鹽包括水溶性和/或不溶性鹽，例如堿金屬和/或堿土金屬的硫酸鹽、 鹽酸鹽、碳酸鹽和磷酸鹽。水不溶性礦物質(zhì)包括沸石、粘土如高呤土和膨潤土、滑石和/或硅酸鹽。色素包括二氧化鈦。酶穩(wěn)定劑包括堿性或中性材料、還原劑、抗氧化劑和/或第一過渡系 列金屬離子的鹽。它們各自可以與其它同類或不同類的保護(hù)劑聯(lián)合使用。 堿性穩(wěn)定劑的例子是通過活躍地中和例如氧化劑提供化學(xué)清除效果的堿 金屬硅酸鹽、碳酸鹽或碳酸氫鹽。還原性保護(hù)劑的例子是亞硫酸鹽、硫 代亞硫酸鹽或硫代硫酸鹽，抗氧化劑的例子是甲硫氨酸、丁基化羥基曱 苯(BHT)或丁基化羥基苯曱醚(BHA)。最優(yōu)選的穩(wěn)定劑是硫代硫酸鹽，例 如硫代硫酸鈉。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以從例如US 4， 106， 991 (NOVO N0RDISK) 和相關(guān)的文獻(xiàn)EP 170360 Bl (NOVO N0RDISK) 、 EP 304332 Bl (NOVO N0RDISK)、 EP 304331 (NOVO NORDISK) 、 WO 90/09440 (NOVO腿DISK) 和W0 90/09428 (NOVO N0RDISK)得知混合制粒方法，在這些文獻(xiàn)中，向噴霧干燥的含酶顆粒加入水代替了加入本發(fā)明的液體酶濃縮物?；旌现屏＿^程也包括US 4， 661, 452記載的所謂"球形造粒"(marumerizer)法， 將該文獻(xiàn)合并于此作為參考。在一個優(yōu)選實(shí)施方案中，將要在混合制粒法處理的含酶的混合物也 可以含有孩i粒組分，其直徑小于最終顆粒的直徑。通過在該工藝中加入 這樣的微粒組分，會更易于控制大小和/或大小分布，如丹麥專利申請PA 1999 01000(在本申請的申請日未>^開)所述，將其結(jié)合于此作為參考。 微粒組分可以是由可以保持微粒完整性(即在混合制粒過程中不碎裂)的 無機(jī)或有機(jī)原料制成的團(tuán)塊。無機(jī)微粒組分可以是例如聚結(jié)的二氧化硅 和/或鹽。有機(jī)孩W立復(fù)合物可以是天然化合物如聚結(jié)的碳7jc化合物，例如 糖、淀粉糊精或可以是聚結(jié)的人造化合物或聚合物。然而優(yōu)選的微粒復(fù) 合物是植物粉。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，術(shù)語"植物粉"包括所有天然來源 的(粉的來源)固體植物原料通過減小大小(研磨)而獲得的粉狀的產(chǎn) 品。本發(fā)明的方法使用研磨谷粒、豆類和/或錦葵科(Malvaceae)果實(shí)(如 棉籽)得到的植物粉末是方便的。本發(fā)明的范圍內(nèi)可以作為粉末來源的 谷類尤其是小麥或黑麥，還可以使用大麥、燕麥、稻和玉米及高粱和其他類的粟。雖然蕎麥不是一種谷類(是一種軟花屬植物)，但其山毛櫸果 實(shí)樣產(chǎn)生粉末的部分也可以同樣作為本發(fā)明范圍內(nèi)的粉末來源。在本發(fā)明的一種特定的變化中，豆類可以作為粉末的來源。此處豆類應(yīng)理解為 屬于果實(shí)和蔬菜的植物類食物來源(豆類)。豆類如豌豆屬(豌豆)、木 豆屬(Ca jamus )(木豆)，鷹嘴豆屬(鷹嘴豆)、兵豆屬(兵豆)、菜豆屬(草 豆)、fi:豆屬(ai豆)、Dolchius (lablab bean) 、 Cassavalia (刀豆)、野 豌豆屬(蠶豆或野豌豆)、Peluschken (紫花豌豆(maple pea))、落花生屬(花生)、羽扇豆屬、苜蓿、大豆及利馬豆的果實(shí)，和如果適用，其他 豆類和其他錦葵科果實(shí)(例如棉屬的果實(shí)，棉)、馬鈴薯或山藥作為粉末的來源，也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。尤其優(yōu)選的是豌豆特別是大豆。本發(fā)明 的微粒復(fù)合物也可以是上述粉末和/或團(tuán)塊的組合。優(yōu)選的微粒復(fù)合物是 小麥制成的粉末，如商業(yè)可獲得的產(chǎn)品Farigel (Farigel de Ble FllOO， WestHove，法國)。本發(fā)明的植物粉優(yōu)選經(jīng)過蒸汽處理，如用溫度約100'C-約110"C的干燥過熱蒸汽在接近常壓至低it^(例如0.8-1.2巴的 過壓)經(jīng)過高達(dá)約1小時的處理時間(在下述過熱蒸汽處理裝置中的駐留 時間)處理。干燥過熱蒸汽是過熱的不飽和蒸汽，可以用常規(guī)方法過熱和 除去可能的水凝物或從高壓膨脹蒸汽而獲得。本發(fā)明的微粒組分的特點(diǎn) 是在研磨植物來源的粉末后經(jīng)過蒸汽處理，即對準(zhǔn)備用于混合制粒過程 的制備好的微粒組分進(jìn)行處理。用蒸汽處理的微粒組分的優(yōu)點(diǎn)是會降低 微粒組分中可能會引起產(chǎn)品中微生物生長的細(xì)菌或真菌的數(shù)量，但更重 要的是微粒組分將完全或部分膠凝化。膠凝化提高顆粒的完整性使其不 會在制粒過程中碎裂、溶解或分散，而保持其微粒特性。微粒組分的優(yōu)選的平均顆粒大小至少為40 pm，更優(yōu)選至少60 nm， 例如至少80 nm，例如至少100 pnu —些有用的微^立組分可以更大，有 至少140 ^m或至少200 nm的平均顆粒大小?；旌涎b置可以是批式混合器或連續(xù)混合器，例如對流式混合器[見， 例如Harnby等，工業(yè)過程中的混合，pp， 39-53 (ISBN 0-408-115742)]。 也可以使用非對流式混合裝置，如轉(zhuǎn)鼓式混合器或所謂的造粒鍋 (pan-granulators)。造粒工藝在造粒工藝(prilling process)中，噴霧干燥的酶顆粒懸浮在熔融 的蠟中，懸浮液噴霧冷卻，例如通過霧化裝置，^冷卻室，含有酶顆 粒的蠟的液滴在其中固化。可以從MichaelS. Showell(編輯)；《粉末狀 去污劑》(powdered detergents);表面活性劑科學(xué)叢書(Surfactant Science Series ) ; 1998; 71巻；140-142頁；Marcel Dekker和DK-PA 1999 01358得知此工藝，將二者引入本文作為參考。造粒工藝使用的霧化器適 當(dāng)?shù)嘏c上述噴霧干燥過程記載的相同，優(yōu)選Rayleigh霧化器?？梢灾瞥捎兴璧钠骄笮『徒y(tǒng)一的密度的造粒顆粒，進(jìn)一步將酶保護(hù)在蠟基質(zhì)中。此處使用的術(shù)語"蠟"，應(yīng)理解為熔點(diǎn)在"-isoic范圍內(nèi)的化合物。優(yōu)選的蠟是熔點(diǎn)在所述范圍內(nèi)的有機(jī)物或有機(jī)化合物的 鹽或其混合物。使用不同蠟的混合物時，可選地與重/或輕的固體聯(lián)合，可以得到有所需真密度的酶顆粒。并且，蠟或蠟的混合物的一個重要的 特點(diǎn)是蠟(優(yōu)選在堿性或中性溶液中)應(yīng)是水溶性或水可分散的，因而 酶顆粒的蠟基質(zhì)可以分散和/或溶解在水性溶液中。水溶性蠟的例子是聚乙二醇(PEG， s)。相應(yīng)地，在水溶性蠟當(dāng)中，蠟在水中的溶解度應(yīng)優(yōu)選 高達(dá)75份蠟/25份水，例如對于PEG 1000。在水不溶性蠟中，可g在 水性溶液中的是甘油三酯和油類。另外， 一種有用的蠟不溶解或分散在 基本非水性的液相中。本文使用的術(shù)語"基本非水性"可以定義為液相 含有少量(例如低于5% w/w或低于3% w/w)水或無水(非水性)。蠟也應(yīng) 與酶相容，即它不應(yīng)使酶失活，例如通過與酶jl應(yīng)或永久性地改變結(jié)構(gòu)， 例如折疊、螺旋部分、片層部分、輔基和此類對酶保持活性必需的結(jié)構(gòu)。 另夕卜，蠟應(yīng)與酶混合，即酶可以溶解在(熔融的)蠟中和/或酶可以以無定 形的或結(jié)晶形的酶蛋白顆粒的形式分散在(熔融的)蠟中。適宜的蠟是在 室溫(25X:)為固態(tài)的蠟，因此有高于此溫度的熔點(diǎn)或熔融范圍(聚合物蠟 趨向于在一個溫度范圍內(nèi)熔融)。優(yōu)選的蠟有在約35'C-約120'C范圍內(nèi) 的熔點(diǎn)或熔融范圍。低限優(yōu)選在蠟熔融的溫度至含有酶顆粒的液體去污 劑通常儲存的溫度(20-30t:)之間設(shè)一合理的距離。并且，在酶顆粒的制 備中當(dāng)蠟的熔點(diǎn)低于35匸時預(yù)期有困難。溫度高限設(shè)在通常適用于酶而 不引起酶活性由于加熱變性顯著喪失的最高溫度。更優(yōu)選的熔點(diǎn)或范圍在約4ox:-約ioo'c，例如在約50t;-約sor。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，蠟的分子量在約150道爾頓-10， 000道爾頓。蠟可以是化學(xué)合成的或它同樣可以是從天然來源分離出的蠟或其衍生物。相應(yīng)地，本發(fā)明的蠟優(yōu)選 選自以下蠟的非限定性的列表。-聚乙二醇，縮寫為PEG，蠟類。商業(yè)可獲得的不同的PEG蠟有不 同的分子大小，其中有低分子大小的PEG，也有最低的熔點(diǎn)。適宜的PEG 類蠟的例子是PEG 1500、 PEG 3000、 PEG 4000、 PEG 6000、 PEG 9000， 例如從德國BASF公司獲得的。為滿足對于蠟和/或酶顆粒真密度和熔點(diǎn) 所需的性質(zhì)，也考慮到有低熔點(diǎn)的蠟與有高熔點(diǎn)的蠟的混合物是本發(fā)明 非常有用的實(shí)施方案。-聚丙烯或聚乙烯或其混合物。-在室溫為固體的非離子表面活性劑，例如有高水平乙氧基基團(tuán)的乙氧基化脂肪醇，例如BASF的Lutensol AT80，每分子有80單位環(huán)氧乙 烷?；蛘攮h(huán)氧乙烷、環(huán)氧丙烷的聚合物或其共聚物是有用的，例如嵌段 共聚物，如德國BASF的Pluronic PE 6800。-從天然來源分離出的蠟，例如巴西棕櫚蠟(熔點(diǎn)在80-88X:之間)， 小燭樹蠟(熔點(diǎn)在68-70lC之間)和蜂蠟。其他天然來源的蠟或其衍生物是 從動物或植物衍生得到的蠟，例如來源于海洋的。這樣的蠟的例子是氬 化牛脂、氫化棕櫚油、氫化棉籽油和/或氫化大豆油，其中此處使用的術(shù) 語"氫化"應(yīng)解釋為使不飽和碳水化物鏈飽和，例如在甘油三酯中，其 中C=C雙鍵轉(zhuǎn)化成C-C單鍵。氬化棕櫚油的一個例子是商業(yè)可獲得的， 例如從Hobum Oele und Fette GmbH -Germany或Deutche Cargill GmbH - Germany得到的。-脂肪酸醇，例如從Condea Chemie GMBH Germany得到的線形 長鏈脂肪酸醇NAFOL 1822 (C18,2。>22)，有處于55-60 t)之間的熔點(diǎn)和約 0.96g/cm3的真密度。-單酸甘油酯和/或二酸甘油酯是有用的蠟，例如硬脂酸甘油酯，其 中硬脂酸酯是硬脂酸和棕櫚酸的混合物。 一個這樣的例子是得自于丹麥 Danisco Ingredients的Dimodan PM,它有約lg/cm3的溶點(diǎn)。-脂肪酸，例如氫化線性長鏈脂肪酸。-石蠟，即固態(tài)烴。-微晶堵0在另外的實(shí)施方案中，可以在C.M.McTaggart等，Int. J. Pharm. 19， 139 (1984)或Flanders等，Drug Dev. Ind. Pharm. 13， 1001 (1987)找到在 本發(fā)明中有用的蠟，將二者合并于此作為參考。擠出工藝在擠出(extrusion)或制丸(pelletizing)工藝中，單獨(dú)或與添加劑 如混合制粒工藝所述的添加劑混合向噴霧干燥的含酶顆粒加入水分，產(chǎn) 生一種含酶的糊狀物。然后擠壓此糊狀物成丸或在壓力下通過小孔擠出并切成大顆粒，隨后干燥。從Michael S. Showell (編輯)；《粉末狀去污 劑》；表面活性劑科學(xué)叢書(Surfactant Science Series) ; 1998; 71 巻；140-142頁；Marcel Dekker和US 4， 661， 452可以得知擠壓過程，將 二者合并于此作為參考。流化床工藝本發(fā)明上下文的流化床工藝包括使噴霧千燥的含酶顆粒在流化床中 流體化，并將含有粘合劑的溶液噴霧到流體化的粉末上，以使含有酶的 粉末顆粒結(jié)合形成更大更硬的顆粒。噴霧干燥的含酶顆粒不大適于制備分層顆粒的方法，該方法此處定 義為這樣的方法，其中酶作為包圍惰性微粒核材料的一層而使用，例如 在一流化床設(shè)備中，將惰性核流體化，在核上噴霧含有酶的溶液而加上 酶層。此方法需要干燥的含酶粉末再溶解或再懸浮在液體中以將含酶層 包圍在惰性核周圍，因而引入一個比上述方法更耗能的步驟。相應(yīng)地， 在一優(yōu)選實(shí)施方案中，干燥的含酶顆粒的隨后步驟不是分層的過程。包衣工藝由此得到的噴霧千燥的顆?；蛄┛梢詢?yōu)選用一或多個包衣層包 衣，以為顆粒提供進(jìn)一步改良的性質(zhì)。可以適當(dāng)?shù)厥褂帽绢I(lǐng)域已知的包 衣層和方法，例如WO 89/08694、 WO 89/08695、 270 608 Bl和/或WO 00/01793記載的包衣層?？梢詮腢S 4， 106， 991、 EP 170360、 EP 304332、 EP 304331、 EP 458849、 EP 458845、 WO 97/39116、 WO 92/12645A、 WO 89/08695、 WO 89/08694、 WO 87/07292、 WO 91/06638、 WO 92/13030、 WO 93/07260、 WO 93/07263、 WO 96/38527、 WO 96/16151、 WO 97/23606、 US 5,324,649、 US 4,689,297、 EP 206417、 EP 193829、 DE 4344215、 DE 4322229 A、 DD 263790、 JP 61162185 A和/或JP 58179492找到常規(guī)包衣材料的其他例子。包衣可以包含選自上述混合制粒部分記載的粘合劑、纖維、鹽、水 不溶性無機(jī)物、色素、酶穩(wěn)定劑或這些物質(zhì)的組合的材料。在一個特別的實(shí)施方案中，包衣含有較少數(shù)量的能與從周圍介質(zhì)進(jìn) 入顆?；蛄┲卸姑甘Щ?對酶有害)的組分反應(yīng)的保護(hù)劑，即在此組分與酶接觸并使酶失活之前與其反應(yīng)。此保護(hù)劑可以例如能中和、還 原此對酶有害的組分或以其它方式與此組分反應(yīng)。能使酶失活的典型的 組分是氧化劑例如過硼酸鹽、過碳酸鹽、有機(jī)過酸及類似物。保護(hù)劑可以分為幾類堿性或中性材料、還原劑、抗氧化劑和/或第 一過渡系列金屬離子的鹽。它們各自可以與其它同類或不同類的保護(hù)劑 聯(lián)合使用。堿性保護(hù)劑的例子是通過活躍地中和例如氧化劑提供化學(xué)清 除效果的堿金屬硅酸鹽、碳酸鹽或碳酸氫鹽。還原性保護(hù)劑的例子是亞 硫酸鹽、硫代亞硫酸鹽或硫代硫酸鹽，抗氧化劑的例子是曱硫氨酸、丁 基化羥基甲苯(BHT)或丁基化羥基苯甲醚(BHA)。最優(yōu)選的保護(hù)劑是硫代 硫酸鹽，例如硫代硫酸鈉。包衣中保護(hù)劑的數(shù)量可以是包衣的5-40% w/w， 優(yōu)選5-30%，例如10-20%。包衣層應(yīng)形成基本連續(xù)的均質(zhì)層而將含有酶的顆?；蛄┌饋怼０聦涌梢圆鹏迵?jù)所需的用途在顆?；蛄┲邪l(fā)揮任何一項(xiàng)功能。例 如，包衣層可以達(dá)到一或多種以下功能(i) 進(jìn)一步降低酶顆?；蛄┑钠饓m趨勢；(ii) 進(jìn)一步保護(hù)酶顆?；蛄┲械拿覆槐黄孜镔|(zhì)/系統(tǒng)氧化(例 如過硼酸鹽、過碳酸鹽、有機(jī)過酸及類似物)；(ni)顆粒/粒劑進(jìn)入液體介質(zhì)(例如水性介質(zhì))時能以理想的速率溶(iv)為酶顆粒/粒劑提供更好的物理強(qiáng)度。包衣層可以還含有一或多種以下物質(zhì)抗氧化劑、氯清除劑、增塑劑、 色素、潤滑劑(例如表面活性劑或抗靜電劑)、另外的酶和芬芳劑。在本發(fā)明的上下文中用于包衣層的增塑劑包括例如多元醇，例如 糖、糖醇或分子量小于1000的聚乙二醇(PEGs);尿素，鄰苯二曱酸酯例 如鄰苯二甲酸二丁基或二曱基酯；和水。適宜的色素包括但不限于精細(xì)分歉的增白劑，例如二氧化鈦或高嶺土，著色的色素，水溶性著色劑，及一或多種色素和水溶性著色劑的組 合。用于本文中時，術(shù)語"潤滑劑"指任何降低表面摩擦力、使顆粒表 面潤滑、減少形成靜電的趨勢和/或降低顆粒脆碎性的添加劑。潤滑劑通 過降低包衣層中粘合劑的粘結(jié)性，在促進(jìn)包衣過程方面也可以起到相關(guān) 作用。因此潤滑劑可以作為抗聚結(jié)劑和潤濕劑。適宜的潤滑劑的例子是聚乙二醇(PEGs)和乙IL^化脂肪醇。 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明噴霧千燥的顆粒或隨后加 工的粒劑用有高恒定濕度的保護(hù)性包衣層包衣，例如在本申請的申請日 未7>開的丹麥專利申請WO 00/01793的5-9頁和所給實(shí)施例中記載的， 將其合并于此作為參考。粉碎/研磨和篩選能夠理解的是上述方法可以在任何階段適當(dāng)?shù)匮a(bǔ)充以粉碎/研磨和/ 或篩選過程。例如在隨后的加工步驟之前將噴霧干燥的含酶顆粒研磨， 及篩分最終的產(chǎn)品以得到所需大小的部分將是理想的。含有酶和生物質(zhì)的顆粒本發(fā)明包括含有酶和生物質(zhì)的顆粒，例如由本發(fā)明的第二方面獲得 的顆粒，即從選自噴霧干;^酵肉湯、將噴霧干燥的發(fā)酵肉湯制粒、將 噴霧干燥的發(fā)酵肉湯包衣及將噴霧干燥的發(fā)酵肉湯制粒和包衣的工藝得 到的顆粒。應(yīng)用本發(fā)明的顆粒用于廣泛的組合物和應(yīng)用領(lǐng)域。有用的組合物的例子 是清潔組合物、紡織品加工組合物、皮革加工組合物、紙漿或紙加工組 合物、食品和々欠料組合物、動物飼料組合物和個人護(hù)理(personal care) 組合物。清潔組合物包括例如去污劑和抗微生物組合物。紡織品加工組 合物包括用于紡織品例如牛仔布的酶漂白和/或砂、洗(stone washing)的組合物。食品和飲料組合物包括用于酒、油和脂肪、柑橘和果汁產(chǎn)品、 淀粉和糖制品、酒和/或酉ilit產(chǎn)品、豆制品和烘焙面粉或面團(tuán)等制造業(yè)的酶組合物。相應(yīng)地，本發(fā)明包括含有顆粒的組合物，顆粒是優(yōu)選從選自發(fā)酵肉 湯噴霧干燥、將噴霧干燥的發(fā)酵肉湯制粒、將噴霧干燥的發(fā)酵肉湯包衣 和將噴霧干燥的發(fā)酵肉湯制粒和包衣的工藝得到的含酶和生物質(zhì)的顆 粒。本發(fā)明也包括含有酶和生物質(zhì)的顆粒和含有這些顆粒的組合物的用 途。尤其是用于處理紡織品、皮革、紙漿、紙、食品、飲料、硬表面和 人或動物體的用途。含有酶和生物質(zhì)的顆粒和含有這些顆粒的組合物也 可以用于制造治療人體或動物的藥品。去污劑組合物一種優(yōu)選的組合物是去污劑組合物，其中含有表面活性劑和從噴霧 干燥發(fā)酵肉湯得到的含酶及生物質(zhì)的顆?；驈倪@些噴霧干燥顆粒得到的 粒劑。例如，可以將本發(fā)明的去污劑組合物配成手洗或機(jī)洗去污劑組合物， 其中包括適用于污染纖維預(yù)處理的去污添加劑成分和添加了織物軟化劑 的漂洗成分，或配制成用于一般家庭硬表面清潔操作的去污劑組合物， 或配制成用于餐具的手洗或機(jī)洗操作的去污劑組合物。在一個具體方面，本發(fā)明提供含有本發(fā)明含酶和生物質(zhì)的噴霧干燥顆氺立或粒劑的去污添加劑。該去污添加劑以及該去污劑組合物可以含有 一或多種其它酶例如蛋白酶、脂肪酶、角質(zhì)酶、淀粉酶、糖酶、纖維素酶、果膠酶、甘露聚糖酶、阿拉伯聚糖酶(arabinase)、半乳聚糖酶 (galactanase)、木聚糖酶、氧化酶例如漆酶和/或過氧化物酶。通常，所選酶的性質(zhì)應(yīng)與所選的去污劑相適應(yīng)，(即最適pH、與其 它的酶和非酶成分的兼容性，等等)，并且該一種或多種酶應(yīng)當(dāng)以有效 的量存在。蛋白酶:合適的蛋白酶包括動物、植物或微生物來源的蛋白酶。優(yōu)選微生物來源的蛋白酶?；瘜W(xué)修飾突變體或蛋白質(zhì)工程突變體也包括 在內(nèi)。該蛋白酶可以是絲氨酸蛋白酶或金屬蛋白酶，優(yōu)選微生物的堿性蛋白酶，或胰蛋白酶樣蛋白酶。堿性蛋白酶的例子是枯草桿菌蛋白酶；尤其 是來自芽胞桿菌屬的枯草桿菌蛋白酶,例如枯草桿菌蛋白酶Novo,枯草桿 菌蛋白酶Carlsberg，枯草桿菌蛋白酶309，枯草桿菌蛋白酶147和枯草桿 菌蛋白酶168 (描述于W0 89/06279)。胰蛋白酶樣蛋白酶的例子是胰蛋白 酶(例如豬或牛來源的胰蛋白酶)和描述于W0 89/06270和WO 94/25583 中的鐮孢屬蛋白酶。有用的蛋白酶的例子是描述于WO 92/19729、 WO 98/20115 、 WO 98/20116和WO 98/34946中的變體，尤其是在一個或多個下列位置發(fā)生 了替代的變體27、 36、 57、 76、 87、 97、 101、 104、 120、 123、 167、 170、 194、 206、 218、 222、 224、 235和274。優(yōu)選的商業(yè)上可獲得的蛋白酶包括Alcalase 、 Savinase 、 Primase 、 Duralase 、 EsperaseTM、和Kannase (Novo Nordisk A/S)、 Maxatase 、 Maxacal 、 Maxapem 、 Properase 、 Purafect 、 Purafect OxP 、 FN2TM和FN3TM(Genencor International Inc.),脂肪酶:合適的脂肪酶包括細(xì)菌或真菌來源的脂肪酶?；瘜W(xué)修飾突變 體或蛋白質(zhì)工程突變體也包括在內(nèi)。有用的脂肪酶的例子包括來自腐質(zhì) 霉屬(同義詞7Sei7Z/咖7ce力的脂肪酶，例如EP 258 068和EP 305 216 中描述的來自A /a/7塔/力ow (T. /a/7塔/z2ow^的脂肪酶、或WO 96/13580 中描述的來自A//7So/e/^的脂肪酶；假單胞菌屬(i^e"d咖o/2w)的脂 肪酶例如來自產(chǎn)堿假單胞菌(P.a/ca/^e/zes)或類產(chǎn)堿假單胞菌 (尸./7^z/^7s7"7^e/7W) (EP 218 272)，洋蔥假單胞菌(戶.ce，"'a) (EP 331 376)、司徒茨氏假單胞菌CP. ""&eri) (GB 1， 372， 034)、熒 光假單胞菌(P./7i/ore"ew)、假單胞菌屬的菌林SD 705 (WO 95/06720 和WO 96/27002)、戶.fri"o/^/加/^/;s(W0 96/12012)的脂肪酶；芽胞桿 菌屬脂肪酶例如來自枯草芽孢桿菌(Dartois等(1993), Biochemica et Biophysica Acta, 1131， 253-360)，嗜熱脂肪芽孢桿菌(JP 64/744992) 或短小芽孢桿菌(及(WO 91/16422)的脂肪酶。其它例子包括例如記載于WO 92/05249、 WO 94/01541、 EP407 225、 EP 260 105、 WO 95/35381、 WO 96/00292、 WO 95/30744、 WO 94/25578、 WO 95/14783、 WO 95/22615、 WO 97/04079和WO 97/07202中的脂肪酶變 體。優(yōu)選的商業(yè)上可獲得的脂肪酶包括LipolaseTM和Lipolase Ultra (Novo Nordisk A/S)。淀粉酶:適合的(oc和/或P)淀粉酶包括細(xì)菌或真菌來源的淀粉酶。 化學(xué){務(wù)飾的突變體或蛋白質(zhì)工程突變體也包括在內(nèi)。淀粉酶包括，例如， 從芽胞桿菌屬例如地衣芽孢桿菌的特定菌抹中獲得的a-淀粉酶，更詳細(xì) 的描述在GB 1， 296， 839中。有用的淀粉酶的例子是描述于WO 94/02597 、 W094/18314 、 WO 96/23873和WO 97/43424中的變體，尤其是在一個或多個下列位置發(fā)生 了替代的變體15、 23、 105、 106、 124、 128、 133、 154、 156、 181、 188、 190、 197、 202、 208、 209、 243、 264、 304、 305、 391、 408和444。商業(yè)上可獲得的淀粉酶是Duraaiyl 、 Termamyl , Fungamyl 和 BAN (Novo Nordisk A/s) 、 Rapidase 和Purastar ^自Genencor International Inc.)。纖維素酶:適合的纖維素酶包括細(xì)菌或真菌來源的纖維素酶。化學(xué) 修飾突變體或蛋白質(zhì)工程突變體也包括在內(nèi)。適合的纖維素酶包括來自 芽孢桿菌屬、假單胞菌屬、腐質(zhì)霉屬、鐮孢霉屬、梭孢殼屬、枝頂孢霹 屬(Acremonium)的纖維素酶，例如由 Humicola insolens 、 Myceliophthora thermophila和尖鐮孢產(chǎn)生的真菌纖維素酶，它們/>開 于US4， 435, 307、 US 5, 648， 263、 US 5, 691， 178、 US 5， 776， 757 和WO 89/09259。特別適合的纖維素酶是具有護(hù)色功能的堿性或中性纖維素酶。這樣 的纖維素酶的例子是描述于EP 0 495 257、 EP 0 531 372、 WO 96/11262、 WO 96/29397、 WO 98/08940中的纖維素酶。其它例子有例如描述于WO 94/07998、 EP 0 531 315、 US 5， 457， 046、 US 5， 686， 593、 US 5， 763， 254、 WO 95/24471、 WO 98/12307和PCT/DK98/00299中的纖維素商業(yè)上可獲得的纖維素酶包括CelluzymeTM和Carezyme (Novo Nordisk A/S) ， Clazinase 和Puradax HA (Genencor International Inc.),以及KAC-500 (Br(Kao公司)。過氧化物酶/氧化酶適合的過氣化物酶/氧化酶包括植物、細(xì)菌或真 菌來源的過氧化物酶/氧化酶?；瘜W(xué)^務(wù)飾突變體或蛋白質(zhì)工程突變體也包括在內(nèi)。有用的過氧化物酶的例子包括來自鬼傘菌屬(C0/7W'/H^)的過氧化物酶，例如來自灰蓋鬼傘(C. C7力ere^)的過氧化物酶，和W0 93/24618、 W0 95/10602和WO 98/15257中所描述的它的變體。商業(yè)上可獲得的過氧化物酶包括GuardzymeTM(Novo Nordisk A/S)?？梢酝ㄟ^加入含有一或多種酶的獨(dú)立添加劑，或通過加入含有所有 這些酶的組合添加劑，將所述的一種或多種去污劑酶包含在去污劑組合 物中。本發(fā)明的去污劑添加劑即獨(dú)立添加劑或組合添加劑，可以配制成 含有一或多種本發(fā)明的酶顆粒。本發(fā)明的去污劑組合物可以是任何方便的形式例如條形、片劑、粉 劑、顆粒、糊劑或液體。液體去污劑可以是水性的，典型地含有高達(dá)70% 的水和0-30 °/。的有機(jī)溶劑，或非水性的。該去污劑組合物含有一或多種表面活性劑，該表面活性劑可以是非 離子包括半極性表面活性劑，和/或陰離子和/或陽離子和/或兩性離子表 面活性劑。這些表面活性劑典型地按重量計以0.1%到60。/。的水平存在。當(dāng)被包括在內(nèi)時，該去污劑通常含有大約1%到大約40%的陰離子表 面活性劑，例如直鏈烷基苯磺酸鹽、ot-烯基磺酸鹽、烷基硫酸鹽(脂肪 醇硫酸酯)、醇乙氧基硫酸鹽、仲烷基磺酸鹽、oc-磺基脂肪酸曱基酯， 烷基-或烯基丁二酸或肥皂。當(dāng)3皮包括在內(nèi)時，該去污劑通常含有大約0.2%到大約40%的非離子 表面活性劑例如脂肪醇乙ltj^化物、壬基酚乙M化物、烷基多葡糖苷、 烷基二曱胺氧化物、乙氧基化脂肪酸單乙醇酰胺、脂肪酸單乙醇酰胺、 聚羥基烷基脂肪酸酰胺，或氨基葡糖("葡糖酰胺，，)的N-?；鵑-烷基 衍生物。該去污劑可以含有0-65%的去污助劑或^^劑例如沸石，二磷酸鹽，三磷酸鹽，膦酸酯，碳酸鹽，檸檬酸鹽，次氮基三乙酸，乙二胺四乙酸， 二亞乙基三胺五乙酸、烷基-或鏈烯基丁二酸、可溶性硅酸鹽或分層的硅酸鹽(例如來自Hoechst的SKS-6)。該去污劑可以包含一或多種聚合物。例子有羧曱基纖維素，聚(乙烯 基吡咯烷酮)，聚(乙二醇)，聚(乙烯醇)，聚(乙烯吡咬-N-氧化物)，聚(乙 烯基咪唑)、聚羧酸酯例如聚丙烯酸酯，馬來酸/丙烯酸共聚物和十二烷 基異丁烯酸/丙烯酸共聚物。該去污劑可以含有漂白體系，該漂白體系可以包括&02來源物質(zhì)例 如過硼酸鹽或過碳酸鹽，并且可以與形成過酸的漂白活化劑例如四乙酰 乙二胺或壬酰羥笨璜酸鹽結(jié)合。或者，該漂白體系可以舍有例如酰胺、 酰亞胺或砜類的過氧酸。本發(fā)明去污劑組合物中的酶可以通過使用常規(guī)穩(wěn)定劑來穩(wěn)定，例如 多元醇例如丙二醇或丙三醇，糖或糖醇，乳酸，硼酸，或硼酸衍生物例 如芳香族硼酸酯、或苯基硼酸衍生物如4-曱?；交鹚?，并且該組合 物可以按例如W0 92/19709和W0 92/19708所述的方法配制。該去污劑還可以含有其它常規(guī)去污成分，例如包括粘土在內(nèi)的織物 調(diào)理劑、發(fā)泡增效劑、泡沫抑制劑、抗腐蝕劑、污垢懸浮劑、抗污垢再 沉積劑、染料、殺菌劑、光漂白劑、增溶劑、晦暗抑制劑或香料。目前正在設(shè)想，在該去污劑組合物中可以加入任何酶，尤其是本發(fā) 明的酶，其加入量相當(dāng)于每升洗滌液中加入0. 01-100mg酶蛋白，優(yōu)選每 升洗滌液中加入0. 05-5mg酶蛋白，尤其是每升洗滌液中加入0. l-lmg酶 蛋白。此外還可以將本發(fā)明的酶加入WO 97/07202中所^Hf的去污劑制品 中，其中WO 97/07202在此以參考文獻(xiàn)方式并入。材料和方法本文使用的蛋白酶活性單位是plo Movo protease (蛋白酶)。樣 品的KNPU是在標(biāo)準(zhǔn)測定中相對于Savinase⑧標(biāo)準(zhǔn)而確定的，方法是測 定一給定數(shù)量樣品溶液中由酶消化二-甲基-酪蛋白(DMC)釋放出的游離 氨基的形成速度(^mol/分鐘)。記錄在形成的游離氨基和加入的2，4，6-三-硝基-苯-磺酸(TNBS)反應(yīng)的同時在420 nm處光吸收的線性增長監(jiān)測形成速率。在"X:、 pH8. 3的硼酸緩沖液中，進(jìn)行DMC的消化和顏色反 應(yīng)，反應(yīng)時間9分鐘，其后有3分鐘的測定時間。實(shí)施例1高產(chǎn)品效價的蛋白酶發(fā)酵肉湯的噴霧干燥將成批量生產(chǎn)規(guī)模的干物質(zhì)含量為13% w/w的含有蛋白酶的發(fā)酵肉 湯通過旋轉(zhuǎn)刷濾過器過濾以除去大的固體顆粒。在保持?jǐn)嚢璧臈l件下向 肉湯中加入0.5% Rodalon(5(W苯扎氯銨)殺死發(fā)酵過的微生物。然后加 入甲酸將pH降低到5.5，并將肉湯放置l小時或更長使Rodalon產(chǎn)生效 果。將肉湯加熱到投料口溫度1401C并通過一旋轉(zhuǎn)噴霧噴口導(dǎo)入一干燥 腔室(Niro Atomizer, SD200-R噴霧干燥塔)。出口溫度為55X:。產(chǎn)生的 噴霧干燥粉末的活性為41 KNPU/g，水分含量為4. 86%。實(shí)施例2高產(chǎn)品效價的纖維素酶發(fā)酵肉湯的生產(chǎn),的噴霧干燥 將成批量生產(chǎn)規(guī)模的含有纖維素酶的發(fā)酵肉湯通過旋轉(zhuǎn)刷濾過器 過濾以除去大的固體顆粒。在保持充分?jǐn)噭拥臈l件下向肉湯中加入 0.5yaRodalon(50。/i^L氨銨)殺死生產(chǎn)菌林，并將肉湯放置至少1小時使 Rodalon產(chǎn)生效果。在入口溫度為140C時通過旋轉(zhuǎn)噴霧噴口將肉湯輸入 噴霧塔(Niro Atomizer, SD200-R)。出口溫度為55X:。產(chǎn)生的噴霧干燥 粉末的預(yù)估活性為2000Q ECU/g，預(yù)計水分含量低于5. 0%。實(shí)施例3高產(chǎn)品效價的淀粉酶發(fā)酵肉湯的生產(chǎn)規(guī)模的噴霧干燥 將成批量生產(chǎn)恥漠的含有淀粉酶的發(fā)酵肉湯通過旋轉(zhuǎn)刷濾過器過濾 以除去大的固體顆粒。在保持充分?jǐn)噭拥臈l件下向肉湯中加入 0. 5。/。Rodalon(50y。^4L氯銨)殺死生產(chǎn)菌林，并將肉湯放置至少1小時使 Rodalon產(chǎn)生效果。在入口溫度為140X3時通過旋轉(zhuǎn)噴霧噴口將肉湯輸入 噴霧塔(Niro Atomizer, SD200-R)。出口溫度為55。C。產(chǎn)生的噴霧干燥 粉末的預(yù)估活性為960 KNU/g，預(yù)計水分含量低于5. 0%。
權(quán)利要求
1.一種制備含有酶的顆粒的方法，包括將含有酶和生物質(zhì)的發(fā)酵肉湯原料噴霧干燥，得到含有酶和生物質(zhì)的固體顆粒，其中該生物質(zhì)構(gòu)成從發(fā)酵得到的生物質(zhì)的至少10％，且該酶選自過氧化物酶(EC 1.11.1.-)、漆酶(EC 1.10.3.2)、葡萄糖氧化酶(EC 1.1.3.4)、轉(zhuǎn)移酶(EC 2.-.-.-)、羧酸酯水解酶(EC 3.1.1.-)、糖苷酶(EC 3.2.-.-)、肽酶(EC 3.4.-.-)、異構(gòu)酶(EC 5.-.-.-)或連接酶(EC 6.-.-.-)。
2. 權(quán)利要求1的方法，其中生物質(zhì)中發(fā)酵的微生物是選自芽孢桿菌 屬、假絲酵母屬、漢遜酵母屬、克魯維酵母屬、畢赤酵母屬、酵母屬、 裂殖酵母屬、Yarrowia、支頂孢屬、曲霉屬、鐮孢屬、腐質(zhì)霉屬、毛霉 屬、毀絲霉屬、脈孢菌屬、青霉屬、梭孢殼屬、Tolypocladium和木霉屬 的菌林。
3. 權(quán)利要求1的方法，其中生物質(zhì)構(gòu)成從發(fā)酵得到的生物質(zhì)的至少50%。
4. 權(quán)利要求3的方法，其中生物質(zhì)構(gòu)成從發(fā)酵得到的生物質(zhì)的至少75%。
5. 權(quán)利要求4的方法，其中生物質(zhì)構(gòu)成從發(fā)酵得到的生物質(zhì)的至少90%。
6. 權(quán)利要求1的方法，其中肉湯含有0-30% w/w干物質(zhì)。
7. 權(quán)利要求1的方法，其中生物質(zhì)構(gòu)成不超過90% w/w的干物質(zhì)。
8. 權(quán)利要求1的方法，其中酶構(gòu)成不超過50% w/w的干物質(zhì)。
9. 權(quán)利要求1的方法，還包括在噴霧干燥前肉湯的除渣。
10. —種制備含有酶的顆粒的方法，包括將含有酶的水性液體原料噴 霧干燥，得到噴霧干燥的第一含酶顆粒，并隨后使此第一干燥顆粒經(jīng)過 選自制粒、包衣和其組合的工藝，得到含酶的第二干燥顆粒。
11. 權(quán)利要求10的方法，其中含酶的水性液體是發(fā)酵肉湯、酶濾液 或酶濃縮物。
12. 權(quán)利要求1的方法，其中已向原料中加入了選自無機(jī)鹽、無機(jī)礦物質(zhì)或粘土、碳水化合物、著色劑、纖維素或其衍生物、殺蟲劑、分散 劑、防泡劑、粘度調(diào)節(jié)劑、酸性試劑、堿性試劑、酶穩(wěn)定劑、酶抑制劑、 粘合劑、其它酶及其組合的添加劑。
13. 權(quán)利要求1的方法，其中原料經(jīng)過了選自加熱、冷卻、輻射、混 合、通氣和超聲處理等物理處理。
14. 權(quán)利要求13的方法，其中原料已被加熱或冷卻到5-150X:。
15. 權(quán)利要求1的方法，其中已將原料滅菌。
16. 權(quán)利要求1的方法，其中已處理原料以水解原料中存在的多核苷酸。
17. 權(quán)利要求1的方法，其中原料是發(fā)酵肉湯或發(fā)酵濾液濃縮物， 每升液相中含有至少3 mg活性酶。
18. 權(quán)利要求1的方法，其中原料具有5-5000 cps的粘度。
19. 權(quán)利要求1的方法，其中噴霧干燥包括通過選自高速轉(zhuǎn)盤式霧化 器、壓力噴嘴霧化器、氣動噴嘴霧化器或聲波噴嘴霧化器和Rayleigh霧 化器的霧化裝置將原料霧化的步驟。
20.權(quán)利要求19的方法，其中霧化裝置是Ray 1 e i gh霧化器。
21. 權(quán)利要求1的方法，還包括使噴霧干燥的顆粒在流化床干燥設(shè)備 中進(jìn)一步干燥。
22. 權(quán)利要求1的方法，其中噴霧干燥顆粒的SPAN值小于約2. 5。
23. 含有酶和生物質(zhì)的顆粒，其中該生物質(zhì)構(gòu)成從發(fā)酵得到的生物質(zhì) 的至少10%,且該酶選自過氧化物酶(ECl.ll. l.-)、漆酶(EC 1.10. 3. 2)、 葡萄糖氧化酶(EC 1.1.3.4)、轉(zhuǎn)移酶(EC 2.- -.-)、羧酸酯水解酶(EC 3. 1.1.-)、糖苷酶(EC 3. 2. -.-)、肽酶(EC 3. 4. 一.-)、異構(gòu)酶(EC 5. -. -) 或連接酶(EC 6.-.-.-)。
24. 權(quán)利要求23的顆粒，從選自噴霧干:^C酵肉湯、將噴霧干燥的 發(fā)酵肉湯制粒、將噴霧干燥的發(fā)酵肉湯包衣和將噴霧干燥的發(fā)酵肉湯制 粒和包衣的工藝得到。
25. —種組合物，含有權(quán)利要求23和24的顆粒。
26. 權(quán)利要求25的組合物，其中組合物選自清潔組合物、紡織品加工組合物、皮革加工組合物、紙漿或紙加工組合物、食物和飲料組合物、 動物伺料組合物和個人護(hù)理組合物。
27. 權(quán)利要求26的清潔組合物，其中清潔組合物是還含有表面活性 劑的去污劑組合物。
28. 權(quán)利要求23 - 27的顆粒和組合物在處理選自紡織品、皮革、紙 漿、紙、食物、飲料、硬表面和人或動物體的對象中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含有酶和生物質(zhì)的顆粒；及一種制備顆粒的方法，包括將含有酶和生物質(zhì)的發(fā)酵肉湯原料噴霧干燥，得到含有酶和生物質(zhì)的固體顆粒；還涉及一種制備含有酶的顆粒的方法，包括將含有酶的水性液體原料噴霧干燥，得到噴霧干燥的第一含酶顆粒，隨后使此第一干燥顆粒經(jīng)過選自制粒、包衣和其組合的過程得到第二干燥的含酶顆粒。
文檔編號C12R1/72GK101230341SQ20081000572
公開日2008年7月30日 申請日期2000年9月29日 優(yōu)先權(quán)日1999年10月1日
發(fā)明者A·喬根森, C·雅各布森, D·奧夫特倫德, G·B·桑德嘉德, J·托普-喬根森, K·U·漢森, P·巴克 申請人:諾沃奇梅茲有限公司