專利名稱：：核酸回收方法及核酸回收裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及從結(jié)合有核酸的固相上洗提核酸，并將核酸回收到溶液中的核酸回收方法及核酸回收裝置。
背景技術(shù)：
：核酸是攜帶遺傳信息的物質(zhì)，在學(xué)術(shù)研究或醫(yī)療等多個(gè)領(lǐng)域中實(shí)施核酸的分析。作為核酸的分析方法，經(jīng)常利用PCR(PolymeraseChainReaction)等為主的核酸擴(kuò)增技術(shù)。在進(jìn)行以PCR等為代表的核酸分析時(shí)，為了達(dá)到不含對分析反應(yīng)有干擾物質(zhì)的狀態(tài)，需要從生物試樣等中提取精制核酸。作為從生物試樣等中提取核酸的方法，有使用苯酚或氯仿等劇毒物，進(jìn)行乙醇沉淀等操作的以往方法，但近年，通常采用的方法是，在離液物質(zhì)的存在下利用核酸結(jié)合在含二氧化硅的固相等上的性質(zhì)的方法。例如，非專利文獻(xiàn)l(J.Clin.Microbiol.,28(3),495-503(1990))中記載的方法，由以下工序構(gòu)成(l)向含有核酸的生物試樣中混合含有離液物質(zhì)的溶解液和含二氧化硅的固相，使核酸結(jié)合在固相的工序；(2)利用含有離液物質(zhì)的洗液來洗滌核酸和固相的復(fù)合體的工序；(3)利用含有乙醇的洗液來洗滌核酸和固相的復(fù)合體的工序；(4)利用含有丙酮的洗液來洗滌核酸和固相的復(fù)合體的工序；(5)加溫核酸和固相的復(fù)合體，來干燥殘留的洗液的工序；(6)從含二氧化硅的固相上洗提核酸的工序。在本方法中，為了洗滌核酸和固相的復(fù)合體，依次使用含有離液物質(zhì)的洗液，接著使用含有乙醇的洗液，然后使用含有丙酮的洗液，之后，加溫核酸和固相的復(fù)合體來干燥除去殘留的洗液(主要是丙酮)。但是，該方法需要多個(gè)用于洗滌核酸和固相的復(fù)合體的洗液，而且也需要加熱干燥這樣的工序，因此存在的問題是，不僅非常麻煩，而且需要很長時(shí)間才能得到精制的核酸。此外，在該方法中，用于促進(jìn)有機(jī)溶劑干燥的加溫操作也存在由于有機(jī)溶劑具有易燃性而存在危險(xiǎn)性這樣的問題。另外，專利文獻(xiàn)1(日本特開平11-146783)中記載了以下方法。該方法由以下工序構(gòu)成(1)向含有核糖核酸的試樣中混合含有離液物質(zhì)的溶解液和含二氧化硅的固相，使核酸結(jié)合在固相的工序；(2)利用含有離液物質(zhì)的洗液來洗滌核酸和固相的復(fù)合體的工序；(3)利用包含水或低鹽濃度緩沖液的洗液來洗滌核酸和固相的復(fù)合體的工序；(4)使包含水或低鹽濃度緩沖液的洗提液與核酸和固相的復(fù)合體接觸并加熱，將核酸從含二氧化硅的固相中洗提的工序。該方法雖然利用不含有乙醇等有機(jī)溶劑的洗液，來實(shí)施洗滌工序，但是，其基于核糖核酸和固相的結(jié)合牢固的特性，存在不適用于脫氧核糖核酸的問題。另外，在該方法中，洗液中所含有的離液物質(zhì)的殘留也是個(gè)問題。此外，專利文獻(xiàn)2(日本特開平11-127854)中記載了以下方法。該方法由以下工序構(gòu)成(l)促進(jìn)核酸從含有核酸的試樣中游離的工序；(2)混合促進(jìn)游離核酸與固相結(jié)合的物質(zhì)的工序；(3)使混合液與含二氧化硅的固相接觸，使核酸結(jié)合于固相的工序；(4)從混合液中分離核酸和固相的復(fù)合體的工序；(5)利用含鹽溶液來洗滌核酸和固相的復(fù)合體的工序；(6)從固相洗提核酸的工序。但是，該方法中記載，在(5)的工序中使用含有乙醇的有機(jī)溶劑的洗液，需要用于除去乙醇的處理。另外，在該方法中，并沒有研究在(5)的工序中使用的洗液所含有的鹽，在精制的核酸溶液中可含有到什么程度。專利文獻(xiàn)1:日本特開平11-146783號公報(bào)專利文獻(xiàn)2:日本特開平11-127854號公報(bào)
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明要解決的問題如上所述，雖然有技術(shù)是以洗滌核酸和固相的復(fù)合體，然后，在實(shí)施從固相洗提核酸的工序時(shí)完全除去洗液的成分來作為課題，但是，完全除去洗液的成分困難，并且是非常費(fèi)功夫的操作。因此，本發(fā)明的目的是提供一種不用完全去除洗液的成分，就能回收精制的核酸的回收方法以及核酸回收裝置。解決問題的手段達(dá)成上述目的的本發(fā)明涉及的核酸回收方法為，使結(jié)合有核酸的固相與洗液接觸來洗滌該固相，所述洗液含有構(gòu)成反應(yīng)液的成分中的至少一種成分，所述反應(yīng)液能夠應(yīng)用于使用核酸的反應(yīng)，從上述固相分離上述洗液，使上述洗液殘留規(guī)定的量，然后，使上述結(jié)合有核酸的固相與洗提液接觸，將核酸回收于該洗提液中。本發(fā)明核酸回收方法中的洗提液與殘留于上述固相的洗液合并，理想情況是形成能夠應(yīng)用于使用上述核酸的反應(yīng)的反應(yīng)液的組成。另外，在本發(fā)明涉及的核酸回收方法中，核酸洗提于上述洗提液中后，與上述殘留于固相的洗液合并，還可以添加成分以使其成為能夠應(yīng)用于使用上述核酸的反應(yīng)的反應(yīng)液。在本發(fā)明涉及的核酸回收方法中，可以進(jìn)一步包含固相與含有核酸的溶液接觸從而使該核酸結(jié)合于固相的處理。作為構(gòu)成上述反應(yīng)液的成分，可以例舉出鹽和/或表面活性劑。在本發(fā)明涉及的核酸回收方法中，使用含有核酸的洗提液進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)時(shí)，形成的洗液含有該核酸擴(kuò)增反應(yīng)的反應(yīng)液中含有的鹽成分或表面活性劑成分的至少一種成分。作為核酸擴(kuò)增反應(yīng)，可以例舉出聚合酶鏈反應(yīng)(PCR:PolymeraseChainReaction)或環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法(LAMP:Loop-mediatedisothermalamplification)。另外，在本發(fā)明涉及的核酸回收方法中，通過調(diào)節(jié)上述洗液的添加量和廢棄量，能夠殘留上述洗液中的規(guī)定量。另外，在本發(fā)明涉及的核酸回收方法中，通過調(diào)節(jié)上述固相的含水量和定位上述固相的固相保持部件的含水量，能夠殘留上述洗液中的規(guī)定量。此外，在本發(fā)明涉及的核酸回收方法中，通過調(diào)節(jié)上述洗液從上述固相分離的排出壓力或離心力，能夠殘留上述洗液中的規(guī)定量。另一方面，達(dá)成上述目的的本發(fā)明涉及的核酸回收裝置具備洗液供給設(shè)備、洗液分離設(shè)備、洗提液供給設(shè)備，所述洗液供給設(shè)備對具有核酸結(jié)合能力的固相供給洗液，所述洗液含有構(gòu)成反應(yīng)液的成分中的至少一種成分，所述反應(yīng)液能夠應(yīng)用于使用核酸的反應(yīng)，所述洗液分離設(shè)備是從上述固相分離上述洗液，以使供給于上述固相的洗液能夠殘留規(guī)定量，所述洗提液供給設(shè)備是在用上述洗液分離設(shè)備除去洗液后，向上述結(jié)合有核酸的固相供給洗提液，將核酸回收到利用上述洗提液供給設(shè)備供給的洗提液內(nèi)。在本發(fā)明涉及的核酸回收裝置中，通過使由洗液供給設(shè)備供給的洗液與結(jié)合有核酸的固相接觸，來洗滌該固相。然后，在本發(fā)明涉及的核酸回收裝置中，利用洗液分離設(shè)備除去洗液，但在固相或其周邊殘存規(guī)定量的洗液。并且，在本發(fā)明涉及的核酸回收裝置中，通過使由洗提液供給設(shè)備供給的洗提液與結(jié)合有核酸的固相接觸，能夠從固相上洗提核酸。就本發(fā)明涉及的核酸回收裝置來說，上述洗提液與殘留在上述固相的洗液混合，能夠形成具有成為反應(yīng)液的組成的混合液，所述反應(yīng)液可以應(yīng)用于使用上述核酸的反應(yīng)中。另外，在本發(fā)明涉及的核酸回收裝置中，可以進(jìn)一步含有成分添加設(shè)備，核酸洗提在上述洗提液中后，與殘留于上述固相的洗液混合，該成分添加設(shè)備添加成分以形成能夠應(yīng)用于使用上述核酸的反應(yīng)的反應(yīng)液。就本發(fā)明涉及的核酸回收裝置來說，上述洗液供給設(shè)備可以例舉出向容納上述固相的容器內(nèi)填充洗液的設(shè)備。作為洗液供給設(shè)備，并無特別限制，可以由填充有洗液的箱和能夠從該箱向上述容器內(nèi)供給規(guī)定量的洗液的分注裝置構(gòu)成。另外，作為洗液供給設(shè)備，并無特別限制，可以由填充有洗液的箱和能夠吸引規(guī)定量的洗液至該容器內(nèi)的吸引裝置構(gòu)成。就本發(fā)明涉及的核酸回收裝置來說，上述洗液分離設(shè)備可以例舉出將填充于容納上述固相的容器內(nèi)的洗液除去的設(shè)備。作為洗液分離設(shè)備，并無特別限制，可以由能夠從供給于上述溶液內(nèi)的洗液中吸引回收Mjt量的洗液的分注裝置構(gòu)成。作為洗液分離設(shè)備，并無特別限制，可以例舉出能夠?qū)⒐┙o于上述溶液內(nèi)的洗液中規(guī)定量的洗液排出的排出裝置。例示的吸引裝置和排出裝置，可以作為能夠通it^"容納上述固相的容器內(nèi)進(jìn)行減壓、加壓來吸引或排出洗液的泵裝置而構(gòu)成一體。即，就本發(fā)明涉及的核酸回收裝置來i兌，上述洗液供^i殳備和上述洗液分離i殳備可以以同一設(shè)備構(gòu)成。另夕卜，就本發(fā)明涉及的核酸回收裝置來說，上述洗提液供給設(shè)備可以例舉出將洗提液填充進(jìn)容納上述固相的容器內(nèi)的設(shè)備。作為洗提液供給設(shè)備，并無特別限制，可以由填充有洗提液的箱和能夠從該箱向上述容器內(nèi)供給規(guī)定量的洗提液的分注裝置來構(gòu)成。或者，作為洗提液供給設(shè)備，并無特別限制，可以由填充有洗提液的箱和能夠?qū)⒁?guī)定量的洗提液吸引進(jìn)該容器內(nèi)的吸引裝置來構(gòu)成。構(gòu)成洗提液供給設(shè)備的吸引裝置，作為能夠通過減壓、加壓容納上述固相的容器內(nèi)來吸引或排出洗提液的泵裝置，上述洗液供給設(shè)備和上述洗液分離設(shè)備可以以同一設(shè)備構(gòu)成。此外，就本發(fā)明涉及的核酸回收裝置來說，上述容器可以例舉出具備定位7該固相的固相保持部件的容器。此時(shí)，在核酸回收裝置中，由上述洗液供給設(shè)備供給的洗液中的身見定量，被保持在該固相保持部件和/或上述固相中。此時(shí)，發(fā)明效果根據(jù)本發(fā)明，通過使結(jié)合有核酸的固相和洗提液接觸，在洗提該核酸時(shí)，能夠?qū)⒑怂峄厥杖胨慕M成液中。因而，根據(jù)本發(fā)明，不用進(jìn)一步精制洗提液，就能夠應(yīng)用于例如核酸擴(kuò)增反應(yīng)等使用核酸的反應(yīng)中。圖1是表示適用本發(fā)明的核酸回收方法的一例的流程圖。圖2是表示適用本發(fā)明的核酸回收方法的其他例的流程圖。圖3是表示適用本發(fā)明的核酸回收方法的其他例的流程圖。圖4是表示構(gòu)成適用本發(fā)明的核酸回收裝置的核酸提取器具的一例的截面圖。圖5是表示構(gòu)成適用本發(fā)明的核酸回收裝置的核酸提取器具的其他例的圖6是表示實(shí)施例1的結(jié)果的特性圖。符號說明40移液管主體部，41一端部，42另一端部，43固相，44固相保持部件，50容器主體部，51—端部，52另一端部，53固相，54固相保持部件，55集液容器具體實(shí)施方式以下，參照附圖來詳細(xì)說明本發(fā)明。在本發(fā)明涉及的核酸回收方法中，首先，將結(jié)合有核酸的固相與洗液接觸，來洗滌該固相，所述洗液含有構(gòu)成反應(yīng)液的成分之中的至少l種成分，所述反應(yīng)液能夠應(yīng)用于使用核酸的反應(yīng)。這里，結(jié)合有核酸的固相并無特別限制，其意味著核酸結(jié)合在具有核酸結(jié)合能力的固相的狀態(tài)。這里，核酸和固相的結(jié)合的意思是包括共價(jià)結(jié)合、離子結(jié)合、分子間作用力結(jié)合等化學(xué)結(jié)合中的任一種方式。作為固相，并無特別限制，可以列舉出例如玻璃、硅石、硅藻土等含二氧化硅的固相，或乙酰纖維素等有機(jī)物等。可以將這些物質(zhì)加工成微粒狀或多孔性膜狀來形成固相。另外，通過利用常用方法對培養(yǎng)細(xì)胞等細(xì)胞、從各種組織采取的組織片、用規(guī)定的培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)菌、真菌、古細(xì)菌等微生物、植物細(xì)胞和組織片、昆蟲細(xì)胞以及昆蟲等生物材料進(jìn)行處理，從而能夠以例如懸濁液的形式來得到核酸以及蛋白質(zhì)成分、脂質(zhì)成分、細(xì)胞壁成分等核酸以外的成分。在核酸結(jié)合在固相上時(shí)，例如，可以釆用利用在離液物質(zhì)的存在下核酸結(jié)合在固相的性質(zhì)的方法。作為離液物質(zhì)，可以使用硪化鈉、碘化鉀、高氯酸鈉、硫氰酸鈉、硫氰酸胍、鹽酸胍等。例如，在使用微粒狀的固相時(shí)，向含有核酸的懸濁液中添加離液物質(zhì)和微粒狀的固相，對其進(jìn)行攪拌。這樣，懸濁液中所含有的核酸可結(jié)合在微粒狀的固相上。另夕卜，使用多孔膜狀的固相時(shí)，采用將多孔膜狀的固相固定在中空狀的配管內(nèi)部中的器具。此時(shí)，多孔膜狀的固相在配管內(nèi)部，可以用一對固相保持部件夾持的方式來固定。此時(shí)，一對固相保持部件例如可以由多孔性聚丙烯粒子燒結(jié)體來形成。使用該器具時(shí)，以配管的一端為開口端，將另一端連接泵裝置，通過驅(qū)動(dòng)該泵裝置，而可以從一端吸引和排出溶液。這樣，能夠使溶液與多孔膜狀的固相接觸。吸引至器具內(nèi)部的溶液也可以利用離心力來排出。在本發(fā)明涉及的核酸回收方法中，將按上述方法調(diào)制的結(jié)合有核酸的固相與洗液接觸。作為洗液，可以規(guī)定洗液含有構(gòu)成反應(yīng)液成分中的至少一種成分，所述反應(yīng)液能夠應(yīng)用于使用核酸的反應(yīng)。這里，使用核酸的反應(yīng)可以例示出核酸擴(kuò)增反應(yīng)、逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)、核酸延伸反應(yīng)、限制性內(nèi)切酶等的酶反應(yīng)以及電泳等。作為更具體的使用核酸的反應(yīng)，可以例示出聚合酶鏈反應(yīng)(PCR，PolymeraseChainReaction)、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR，ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction)、連才妄酶鏈反應(yīng)(LCR，LigaseChainReaction)、鏈置換擴(kuò)增(SDA，StrandDisplacementAmplification)、轉(zhuǎn)錄依賴的擴(kuò)增系統(tǒng)(TAS,TranscriptionAmplificationSystem)、依賴核酸序列的擴(kuò)增(NASBA,NucleicAcidSequence-BasedAmplification)、轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增(TMA,Transcription-MediatedAmplification)、環(huán)介導(dǎo)等溫才廣i曾(LAMP,Loop-mediatedisothermalamplification)、等溫的和嵌合引物起始的核酸擴(kuò)增(ICAN，IsothermalandChimericprimer-initiatedAmplification'ofNucleicacids)等。能夠應(yīng)用于這些反應(yīng)的反應(yīng)液是指含有用于維持規(guī)定pH值的緩沖劑、規(guī)定濃度的無機(jī)鹽、規(guī)定濃度的表面活性劑以及規(guī)定的酶等的溶液。反應(yīng)液根據(jù)上述的各種反應(yīng)而形成不同的組成，對于PCR,可以參照SaikiR.K.etal.(1985)，Science,vol.230，1350-1354的記載;對于PCR和RT-PCR，可以參,哮、MolecularCloning,alaboratorymanual(thirdedition),chapter8.16勺i己載；對于LCR，可以參照LandegrenU.等人(1988)，Science,vol.239,487-491的記載；對于SDA，可以參照WalkerG.T.等人(1992)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，vol.89,392-396的記載；對于TAS,可以參照KwohD.Y.等人(1989),Proc.Natl.Acad.Sci.USA,vol.86,1173-1177的記載；對于NASBA,可以參照ComptonJ.(1991)，Nature,vol.350.91-92的記載；對于TMA，可以參照日本特許3241717的記載；對于LAMP,可以參照NotomiT.等人(2000)，NucleicAcidRes.，vol.28，e63的記載;對于ICAN,可以參照WO2000-56877等的記載，可以明確地確定其組成和組成比。因而，通過參照這些記載，能夠確定含有構(gòu)成反應(yīng)液的成分的至少1種成分的洗液的組成。此時(shí)，作為洗液，可以使用含有構(gòu)成反應(yīng)液的成分的鹽(無機(jī)鹽)或表面活性劑等成分的洗液。這些鹽或表面活性劑的濃度優(yōu)選是可以維持核酸與固相的結(jié)合，并且能夠除去殘留在固相上的雜質(zhì)(例如，離液物質(zhì))的濃度。作為洗液，優(yōu)選含有0.5M以上的鹽，更優(yōu)選含有l(wèi).OM以上的鹽，尤其優(yōu)選含有1.5M以上的鹽。洗液的鹽濃度小于0.5M時(shí)，由于洗滌可能使核酸從固相上被洗提出來，其結(jié)果可能使核酸的回收率降低。另外，在使用洗液洗滌時(shí)，為了維持核酸和固相的結(jié)合，優(yōu)選在低溫下實(shí)施。作為洗滌時(shí)的溫度(與固相混合時(shí)的洗液溫度)，優(yōu)選為4(TC以下，更優(yōu)選為20。C以下，尤其優(yōu)選為10。C以下。洗滌時(shí)的溫度超過40。C時(shí)，由于洗滌可能使核酸從固相上被洗提出來，其結(jié)果可能使核酸的回收率降低。例如，作為反應(yīng)液以PCR用反應(yīng)液為前提時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)液的成分包含10mMTris-HCl(pH8.8)、50mMKC1、1.5mMMgCl2的反應(yīng)緩沖液、0.8mMdNTPmix(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、0.5(oM引物l、0.5fiM引物2、2.5UTaqDNA聚合酶和作為分析對象的DNA,因而，例如可以使用洗液的成分是反應(yīng)緩沖液中所含有的鹽的50倍濃度的溶液，即可以4吏用包含2.5MKC1和75mMMgCl2的溶液。以包含2.5MKC1和75mMMgCl2的溶液作為洗液時(shí)，能夠維持核酸和固相的結(jié)合，并且可以除去殘留在固相上的雜質(zhì)。另外，例如，作為反應(yīng)液以LAMP用反應(yīng)液為前提時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)的LAMP反應(yīng)液的成分包含10mMKC1、20mMTris-HCl(pH8.8)、10mM(NH4)2S04、4mMMgS04、0.1%吹通X-100(TritonX-100)的反應(yīng)緩沖液、1M甜菜堿(Betaine)、1.6mMdNTPmix(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、0.8mM引物FIP、0.8|iM引物BIP、0.2pM引物F3、0.2(iM引物B3、8UBstDNA聚合酶和作為分析對象的DNA，因而，例如可以使用洗液的成分A^應(yīng)緩沖液中所含有的鹽的50倍濃度的溶液，即可以使用包舍500mMKC1、500mM(NH4)2S04和200rnMMgS04的溶液。以包含500mMKCl、500mM(NH4)2SO4和200mMMgSO4的溶液作為洗液時(shí)，能夠維持核酸和固相的結(jié)合，并且可以除去殘留在固相上的雜質(zhì)。此外，例如，作為反應(yīng)液以限制性內(nèi)切酶用反應(yīng)液為前提時(shí)，例如限制性內(nèi)切酶HindIII所產(chǎn)生的限制性內(nèi)切酶反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)的反應(yīng)液的成分包含10mMTris-HCl(pH8.5)、10mMMgCl2、100mMNaCl、10mM2-巰基乙醇的反應(yīng)緩沖液、lUHindIII和作為分析對象的DNA,因此，例如洗液的成分可以使用反應(yīng)緩沖液中所含有的鹽的50倍濃度的溶液，即可以使用包含500mMMgCl2和5MNaCl的溶液。以包含500mMMgCl2和5MNaCl的溶液作為洗液時(shí)，能夠維持核酸和固相的結(jié)合，并且可以除去殘留在固相上的雜質(zhì)。此外，例如，作為反應(yīng)液以電泳用反應(yīng)液為前4是時(shí)，例如，使用標(biāo)準(zhǔn)的MOPS緩沖液(2-(N-嗎啉代)-丙烷磺酸緩沖液)的RNA電泳的試樣溶液的成分包含20mMMOPS、5mMCH3COONa、lmMEDTA、lmMEGTA、5%甘油(Glycerol)和作為分析對象的RNA,因此，例如可以使用洗液的成分是除甘油(Glycerol)之外的成分的50倍濃度的溶液，即可以使用包含1MMOPS、250mMCH3COONa、50mMEDTA、50mMEG丁A的溶液。以包含1MM0PS、250mMCH3COONa、50mMEDTA、50mMEGTA的溶液作為洗液時(shí)，能夠維持核酸和固相的結(jié)合，并且可以除去殘留在固相上的雜質(zhì)。在本發(fā)明涉及的核酸回收方法中，接著，從固相上分離洗液，并使洗液殘留規(guī)定的量。由于在本工序中殘留的洗液含有上述反應(yīng)液的部分成分，因此可以作為反應(yīng)液的一部分來利用。換言之，在本發(fā)明涉及的核酸回收方法中，因?yàn)榭梢詫⒂糜诔埩粲诠滔嗟碾s質(zhì)的洗液直接作為后階段的反應(yīng)液來利用，所以不需要用于完全除去洗液的處理、操作。作為除去洗液的方法，并無特別限制，可以適當(dāng)?shù)厥褂梅肿⒀b置或泵裝置、離心分離裝置。使用^效粒狀的固相時(shí)，通過將上述洗液和結(jié)合有核酸的固相在容器內(nèi)攪拌，進(jìn)行洗滌，然后，利用分注裝置從該容器中除去規(guī)定量的洗液。這樣，能夠從固相中分離洗液，并使洗液殘留規(guī)定的量。另外，用一對固相保持部件夾持方式將多孔膜狀的固相固定在配管內(nèi)時(shí)，通過反復(fù)吸引和排出洗液來洗滌固相，然后，通過排出洗液，能夠使規(guī)定量的洗液殘留在配管內(nèi)。此時(shí)，由于一對固相保持部件也能保持洗液，因此，即使全部除去配管內(nèi)部的液體，也會(huì)殘留保持在固相保持部件的洗液。關(guān)于洗液的殘留量，只要從將殘留的洗液作為反應(yīng)液的一部分來利用的角度考慮來適當(dāng)?shù)卦O(shè)定即可，并無特別的限制。殘留的洗液用在后面詳細(xì)敘述的洗提液稀釋，或者用洗提液和除洗提液之外添加的溶液稀釋，能夠成為適用于使用核酸的反應(yīng)的反應(yīng)液的一部分。因而，洗液的殘留量可以由洗液中含有的成分濃度和洗才是液和/或除洗提液之外添加的溶液的添加量來決定。換言之，為了從洗液中含有的成分濃度和洗提液和/或除洗提液之外添加的溶液的添加量，得到被稀釋成所要的成分濃度的反應(yīng)液，可以規(guī)定洗液的殘留量。作為控制洗液的殘留量的方法，例如可以通過調(diào)節(jié)洗液的添加量和廢棄量來得到規(guī)定的殘留洗液量?；蛘?，以一對固相保持部件夾持多孔膜狀的固相的方式將其固定于配管內(nèi)時(shí)，通過調(diào)節(jié)固相和固相保持部件的含水量也可以控制洗液的殘留量。例如，能夠作為固相使用的玻璃纖維濾紙的含水量，依賴于其體積、材質(zhì)、纖維徑、粒子保持徑等。另外，能夠作為固相使用的玻璃粒子的含水量，依賴于其粒子數(shù)、材質(zhì)、粒徑等。另外，能夠作為固相保持部件使用的多孔性聚丙烯粒子燒結(jié)體的含水量，依賴于其體積、材質(zhì)、粒徑、粒子保持徑等。另外，固相和固相保持部件的含水量依賴于洗液的廢棄方法，例如，依賴于用于廢棄洗液的排出壓力或離心力等的大小。因而，通過調(diào)節(jié)固相和固相保持部件的物理特性以及洗液的廢棄方法，可以控制固相和固相保持部件的洗液的含水量。接著，在本發(fā)明涉及的核酸回收方法中，使結(jié)合核酸的固相與洗提液接觸，將核酸回收進(jìn)該洗提液中。這里，所謂洗提液，只要是具有使結(jié)合于固相的核酸從該固相上脫離，使該核酸存在于洗提液中的作用的物質(zhì)，就沒有特別限制。作為洗提液，可以例舉出如水和Tris緩沖液。另外，作為洗提液，也可以使用這樣的溶液，該溶液不僅含有殘留于固相的洗液中所含有的成分，而且還含有構(gòu)成后階段的反應(yīng)液的組成的成分。即，洗提液的組成只要能從固相上洗提核余成分。作為洗提液，可以是含有除了規(guī)定的反應(yīng)液組成中已被洗液含有的成分之外的全部其余成分的組成，也可以是含有一部分該其余成分的組成。另外，洗提液的量優(yōu)選為如下的量，即，該液量可以將殘留于固相等的洗\，f^vi邵旰風(fēng)餳反勝收Y日^方兄疋》二即，含有構(gòu)成反應(yīng)液的成分的洗液以該反應(yīng)液的規(guī)定濃度的50倍的濃度含有該成分時(shí)，優(yōu)選使用將殘留的洗液的液量稀釋50倍的量的洗提液。這樣，洗之外的全部其余成分的話，就可以將洗液和洗提液合并的溶液直接作為反應(yīng)液外的一部分其余成分的情形中，對洗液和洗4^液合并的溶液，可通過在之后添加反應(yīng)液組成中的不足成分來制備反應(yīng)液。此時(shí)，添加含有反應(yīng)液組成中不足的成分的溶液時(shí)，由于會(huì)稀釋包含洗液和洗提液的溶液，因此要注意洗液和洗提液中所含有的成分的濃度。例如，作為反應(yīng)液以PCR用反應(yīng)液為前提時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)液的成分包含lOmMTris-HCl(pH8.8)、50mMKC1、1.5mMMgCl2的反應(yīng)緩沖液、0.8mMdNTPmix(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、0.5^M引物1、0.5,引物2、2.5UTaqDNA聚合酶和作為分析對象的DNA。使用反應(yīng)液所含有的鹽的50倍濃度的溶液，即，包含2.5MKCl和75mMMgCl2的溶液作為洗液時(shí)，則作為洗提液，就可以使用含有10mMTris-HCl(pH8.8)、0.8mMdNTPmix(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、0.5|iM引物1、0.5mM引物2、2.5UTaqDNA聚合酶的溶液。這些濃度為與洗液合并后的濃度。另外，該洗提液的使用量是將該洗液稀釋50倍的量。這樣，使用洗提液將核酸從固相洗提后的溶液，包含洗提的核酸(作為PCR的模板)和PCR用反應(yīng)液的全部組成，能夠直接供于PCR反應(yīng)。以上述的LAMP用反應(yīng)液、限制性內(nèi)切酶用反應(yīng)液或電泳用反應(yīng)液為前提時(shí)，同樣可以規(guī)定洗提液的組成和量。作為洗提液，為了防止酶由于溫度引起的失活，可以是僅不含酶的構(gòu)成。此時(shí)，通過向合并洗液和洗提液的溶液中，添加作為其余成分的酶，從而可以形成-見定的反應(yīng)液組成。另外，作為洗提時(shí)的溫度，并無特別的限制，但優(yōu)選在2(TC以上，更優(yōu)選在40。C以上，最優(yōu)選在60。C以上。洗提時(shí)的溫度小于2(TC時(shí)，可能產(chǎn)生如下問題核酸不能從固相上完全洗提，或從固相上完全洗提核酸需要很長時(shí)間。以上說明的本發(fā)明涉及的核酸回收方法的具體的流程圖如圖13所示。圖1~3所示的流程圖各自表示本發(fā)明涉及的核酸回收方法的一例，并不是用于限定性地解釋本發(fā)明的技術(shù)范圍。本發(fā)明涉及的核酸回收方法，例如根據(jù)圖1所示的流程圖，包含如下工序(1)將核酸和固相的復(fù)合體與洗液接觸的洗滌工序，所述洗液含有后續(xù)核酸分析反應(yīng)液中所含有的成分；(2)使規(guī)定量的洗提液與復(fù)合體接觸來洗提核酸的工序，所述規(guī)定量是能夠?qū)⒂汕肮ば虻玫降臍埩粝匆核械某煞窒♂屩吝m于后續(xù)的核酸分析反應(yīng)的濃度的量；(3)添加核酸分析反應(yīng)液的其余成分的工序。另外，最終得到的溶液被供于核酸分析。另外，本發(fā)明涉及的核酸回收方法，例如根據(jù)圖2所示的流程圖，包含如下工序(l)將核酸和固相的復(fù)合體與洗液接觸的洗滌工序，所述洗液含有后續(xù)核酸分析反應(yīng)液中所含有的成分；(2)使規(guī)定量的洗提液與復(fù)合體接觸來洗提核酸的工序，所述規(guī)定量是能夠?qū)⒂汕暗拦ば虻玫降臍埩粝匆核械某煞窒♂屩吝m于后續(xù)的核酸分析反應(yīng)的濃度的量，并且所述規(guī)定量的洗提液含有核酸分析反應(yīng)中需要的其他成分的一部分；(3)添加核酸分析反應(yīng)液的其余成分的工序。另外，最終得到的溶液被供于核酸分析中。此外，本發(fā)明涉及的核酸回收方法，例如根據(jù)圖3所示的流程圖，包含如下工序(l)使洗液與核酸和固相的復(fù)合體接觸的洗滌工序，所述洗液含有后續(xù)核酸分析反應(yīng)液中所含有的成分；(2)使規(guī)定量的洗提液與復(fù)合體接觸來洗提核酸的工序，所述M^定量是能夠?qū)⒂汕暗拦ば虻玫降臍埩粝匆核械某煞窒♂屩吝m于后續(xù)的核酸分析反應(yīng)的濃度的量，所述規(guī)定量的洗提液含有核酸分析反應(yīng)中需要的全部其余成分。另外，最終得到的溶液被供于核酸分析。實(shí)施例以下，使用本實(shí)施例對本發(fā)明涉及的核酸回收方法和核酸回收裝置進(jìn)行說明，但本發(fā)明的技術(shù)范圍并不限于這些實(shí)施例。首先，對本實(shí)施例中使用的試樣、試劑、核S爽提取器具、核酸提取方法、核酸定量方法和核酸分析方法依次進(jìn)行說明。1.試樣試樣A:將pBR32質(zhì)粒DNA添加入標(biāo)準(zhǔn)血清的試樣(1|ig/200|il)試樣B:將由HBV(乙肝病毒)陽性樣品精制的DNA添加入標(biāo)準(zhǔn)血清的假陽性樣品(103copy/200nl)。2.試劑溶解液A:4.0M硫氰酸胍lOOmMMES(2-(N-嗎啉)乙磺酸)25mMEDTA.2Na20%(v/v)吹通X-IOO(TritonX-100)第一洗液4.0M硫氰酸胍lOOmMMES(2-(N-嗎啉)乙磺酸)25mMEDTA'2Nal%(v/v)吹通X-IOO(TritonX-100)第二洗液lOmMTris國HCl(pH8.0)80%(v/v)EtOH第三洗液A:1510mMTris-HCl(pH8.0)80%(v/v)EtOH第三洗液B:2.5MKCl75mMMgCl2第三洗液C:2.5MKC175mMMgCl2500mMTris-HCl(pH8.0)第三洗液D:2.5MKCl75mMMgCl2500mMTris-HCl(pH8.0)0.5%吹通X-IOO(TritonX-100)第三洗液E:500mMKCl500mM(NH4)2S04200mMMgS04第三洗液F:500mMKCl500mM(NH4)2S04200mMMgS041MTris-HCl(pH8.0)第三洗液G:500mMKCl500mM(NH4)2S04200mMMgS04lMTris-HCl(pH8.0)5%吹通X-IOO(TritonX-100)洗提液A:lOmMTris-HC1(pH8.8)洗提液B:超純水洗提液C:lOmMTris國HCl(pH8.8)0.8mMdNTPmixUATP、dCTP、dGTP、dTTP)0.5|^M引物10.5^iM引物22.5UTaqDNA聚合酶洗提液D:20mMTris-HCl(pH8.8)1M甜菜堿1.6mMdNTPmix(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)0.8piM引物FIPO.^iM引物BIP0.2pM引物F30.2拜引物B38UBstDNA聚合酶3.核酸提取器具核酸提取器具A:核酸提取器具A的截面圖示于圖4中。核酸提取器具A如圖4所示，是由移液管主體部40、加減壓機(jī)器(未圖示)、固相43、固相保持部件44構(gòu)成的，所述移液管主體部40是成型聚丙烯樹脂得到的，所述加減壓機(jī)器連接在移液管主體部40的開口的一端部41上，所述固相43被配設(shè)在移液管主體部40的開口的另一端部42附近，所述固相保持部件44將固相43定位于移液管主體部40的規(guī)定的位置上。核酸提取器具A通過加減壓機(jī)器產(chǎn)生的壓力差，能夠從另一端部42吸引和排出溶液。通過從另一端部42吸引溶液而被吸引入移液管主體部40內(nèi)的溶液，會(huì)浸潤固相43和固相保持部件44。固相43是玻璃纖維濾紙，固相保持部件44是多孔聚丙烯粒子燒結(jié)體。核酸提取器具B:核酸提取器具B的截面圖示于圖5中。核酸提取器具B如圖5所示，是由容器主體部50、固相53、固相保持部件54、集液容器55構(gòu)成的，所述固相53配置于另一端部52的附近，該另一端部52位于在容器主體部50的上方開口的一端部51的相反側(cè)上，所述固相保持部件54對固相53的位置進(jìn)行定位，集液器55具有插入容器主體部50的開口部。核酸提取器具B中，從容器主體部50的一端部51供給溶液。被供給于容器主體部50的溶液到達(dá)固相53和固相保持部件54并與它們接觸。以此狀態(tài)對核酸提取器具B施加離心力，施加離心力的方向是從容器主體部50的一端部51至集液容器55的底部，從而，使被供給于容器主體部50的溶液從容器主體部50的另一端部52排入到集液容器55內(nèi)。固相53是玻璃纖維濾紙，固相保持部件54是多孔聚丙烯粒子燒結(jié)體。核酸提取器具C:核酸提取器具C未圖示，是平均粒徑為5(am的玻璃粒子。作為固相的玻璃粒子在規(guī)定的容器內(nèi)與溶液混合，利用離心力與液相分離。4.核酸提取方法核酸提取器具A所適用的核酸提取方法如下。以下的核酸提取方法是可以不限于試樣、洗液和洗提液等種類來應(yīng)用的方法。(1)向0.2ml試樣中添加0.8ml溶解液，進(jìn)行混合。(2)將加減壓機(jī)器連接在核酸提取器具A上，將混合液吸引排出5次。(3)廢棄混合液。(4)將1.0ml第一洗液吸引排出3次。(5)廢棄洗液。(6)將1.0ml第二洗液吸引排出3次。(7)廢棄洗液。(8)將0.5ml冰上冷卻后的第三洗液吸引排出1次。(9)廢棄洗液(殘留液量為2pl)。(10)將O.lml加溫至6(TC的洗提液吸引排出10次。(11)回收洗提液。核酸提取器具B所適用的核酸提取方法如下。以下的核酸提取方法是可以不限于試樣、洗液和洗提液等種類來應(yīng)用的方法。(I)向0.2ml試樣中添加0.8ml溶解液，進(jìn)行混合。(2)投入進(jìn)核酸提取器具B中，進(jìn)行離心分離。(3)廢棄集液容器的混合液。(4)投入1.0ml第一洗液，進(jìn)行離心分離。(5)廢棄集液容器的洗液。(6)投入l.Oml第二洗液，進(jìn)行離心分離。(7)廢棄集液容器的洗液。(8)投入0.5ml水上冷卻的第三洗液，進(jìn)行離心分離。(9)設(shè)置新的集液容器(殘留液量為2^1)。(10)投入0.lml加溫至60。C的洗提液，進(jìn)行離心分離。(II)回收洗提液。核酸提取器具C所適用的核酸提取方法如下。以下的核酸提取方法是可以不限于試樣、洗液和洗提液等種類來應(yīng)用的方法。(1)向0.2ml試樣中添加0.8ml溶解液和10mg玻璃粒子。(2)混合IO分鐘。(3)用離心器進(jìn)行B/F分離，廢棄液相。(4)添加l.Oml第一洗液，進(jìn)行混合。(5)用離心器進(jìn)行B/F分離，廢棄液相。(6)添加1.Oml第二洗液，進(jìn)行混合。(7)用離心器進(jìn)行B/F分離，廢棄液相。(8)添加O.5ml在冰上冷卻的第三洗液，進(jìn)行混合。(9)用離心器進(jìn)行B/F分離，廢棄液相(殘留液量為2ial)。(10)添加0.lml洗提液，在60。C加溫5分鐘。(11)用離心器進(jìn)行B/F分離，回收洗提液。5.核酸定量方法洗液中含有的核酸為，用對雙鏈DNA特異的熒光色素對試樣中含有的DNA進(jìn)行染色，通過熒光光度計(jì)測定熒光強(qiáng)度來算出DNA量。作為熒光色素，使用PicoGreen雙鏈DNA定量試劑盒(PicoGreendsDNAQuantitationKit)(分子探針(MolecularProbe)公司)，作為熒光光度計(jì)，使用ARVOsx1420多標(biāo)記計(jì)數(shù)器(ARVOsx1420MultilabelCounter)(華萊克(wallac)公司)。6.核酸分析方法在本實(shí)施例中，作為核酸分析方法的例子按照以下要領(lǐng)進(jìn)行PCR法和LAMP法。利用PCR法和LAMP法得到的擴(kuò)增產(chǎn)物的確認(rèn)，是實(shí)施以0.8%瓊脂糖凝膠為支持體的電泳，用對雙鏈DNA特異的熒光色素進(jìn)行染色，在紫外透射儀所產(chǎn)生的紫外線照射下進(jìn)行確認(rèn)。作為熒光色素，使用SYBR綠色核酸凝月交染液(SYBRGreenInucleicacidgelstain)(分子#罙4十7>司)。PCR:以來源于HBV的DNA為模板DNA的PCR，是以(J.Clin.Microbiol.,29(9),1804-1811(1991))的報(bào)告為基礎(chǔ)，在下述的引物和溫度條件下實(shí)施。引物1:5，-GCGGATCCGAGTTACTCTCGTTTTTGC-3，(序列號1)引物2:5，-GCAAGCTTTCTAACAACAGTAGTTTCCGG-3，(序列號2)溫度條件在94。C維持5分鐘后，以94°C1分鐘、55°C1分鐘和72°C1分鐘為1個(gè)循環(huán)，進(jìn)行30個(gè)循環(huán)，最后在72。C維持10分鐘。LAMP:以來源于HBV的DNA為模板DNA的LAMP,是以(NucleicAcidResearch,28(12),e63(2000))的報(bào)告為基礎(chǔ)，在下述的引物和溫度條件下實(shí)施LAMP。引物FIP:5,-CCTGCTGCTATGCCTCATCTTCTTTGACAAACGGGCAACATACCTT-3，(序列號3)引物BIP:5，國GATAAAACGCCGCAGACACATCCTTCCAACCTCTTGTCCTCCAA-3，(序列號4)引物F3:5，-GGTGGTTGATGTTCCTGGA-3，(序列號5)引物B3:5，-CAAAATTCGCAGTCCCCAAC-3，(序列號6)溫度條件在95。C維持5分鐘后在冰上放置3分鐘，然后，添加BstDNA聚合酶，在65"C反應(yīng)1小時(shí)，最后在80。C維持IO分鐘。[實(shí)施例1]在使用試樣A、溶解試劑A、第一洗滌試劑A、第二洗液A、洗提液A、核酸提取器具A的DNA提取中，將第三洗液制成A、B的稀釋液(溶質(zhì)濃度:100%、80%、60%、40%、20%)和E的稀釋液(溶質(zhì)濃度100%、80。/。、60%、40%、20%)來實(shí)施DNA提取。在各自的第三洗液A的稀釋液、第三洗液B的稀釋液和第三洗液E的稀釋液中，對DNA回收量進(jìn)行定量。并且，算出每個(gè)稀釋液所對應(yīng)的DNA回收率，該回收率是相對于使用第三洗液A的DNA回收量的使用第三洗液B和第三洗液E時(shí)的DNA回收率。結(jié)果示于圖6中。第三洗液B隨著稀釋率的增加，DNA回收率增加，溶質(zhì)濃度在60%以上時(shí)，得到與第三洗液A同等的DNA回收量。另一方面，在第三洗液E中，隨著稀釋率的增加，DNA回收率也增加，但與第三洗液B相比，DNA回收率的值低。認(rèn)為是第三洗液E的鹽濃度比第三洗液B的鹽濃度低，核酸和固相的結(jié)合維持力也低。從以上看出，在洗滌工序中，含有一定濃度以上的PCR反應(yīng)液所需要成分的洗液，可以維持核酸和固相的結(jié)合來洗滌核酸和固相的復(fù)合體。[實(shí)施例2]在使用試樣B、溶解試劑A、第一洗滌試劑A、第二洗液A、核酸提取器具A的DNA提取中，第三洗液、洗提液、核酸分析反應(yīng)液其余成分、核酸分析都按下表所示來實(shí)施，判斷是否有核酸分析反應(yīng)所產(chǎn)生的核酸擴(kuò)增。實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果概括示于表l中。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>從表1所示的結(jié)果可以確認(rèn)出，在全部組合的核酸提取和核酸擴(kuò)增法中，有良好的核酸擴(kuò)增。以上顯示，通過用含有核酸擴(kuò)增反應(yīng)所需要成分的洗液來洗滌，將殘留的洗液和洗提液合并的溶液作為反應(yīng)液，從而可以得到能夠適用于核酸分析反應(yīng)的核酸溶液。[實(shí)施例3]在使用試樣B、溶解試劑A、第一洗滌試劑A、第二洗液A、第三洗液C、洗提液B的DNA回收以及其后的PCR中，采用核酸提取器具A、B、C,判斷是否可以實(shí)現(xiàn)PCR擴(kuò)增。其結(jié)果示于表2中。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>從表2所示的結(jié)果可以確認(rèn)，在全部的核酸提取器具A、B和C中，都能實(shí)現(xiàn)核酸提取和核酸擴(kuò)增。以上顯示，本方法在基于核酸和固相的結(jié)合特性的各種核酸提取方法中都能夠適用。序列表<110>株式會(huì)社日歷高新技術(shù)<120>核酸回收方法及核酸回收裝置<130>P06-1057〈160〉6〈170〉Patentlnversion3.4〈210〉1<211>27<212〉DNA<213>人工序列<220>〈223〉合成DNA<400>1gcggatccgagttactctcgtttttgc<210>2〈211〉29<212>DNA<213〉人工序列<220><223〉合成■〈400〉2gcaagctttctaac犯cagtagtttccgg〈210〉3〈211>46〈212〉DNA<213>人工序列〈220〉〈223〉合成DNA<400>3cctgctgctatgcctcatcttctttgacaaacgggcaacatacctt<210>4〈211〉44<212>DNA〈213〉人工序列〈220〉<223〉合成DNA〈400〉4gataaaacgccgcagacacatccttccaacctcttgtcctccaa44〈210〉5〈211〉19〈212〉薩<213〉人工序列〈220〉<223>合成DNA〈400〉5ggtggttgatgttcctgga〈210〉6<211〉20<212〉DNA<213>人工序列〈220〉〈223〉合成DNA〈400〉6caaaattcgcagtccccaac權(quán)利要求1.一種核酸回收方法，其特征在于，將結(jié)合有核酸的固相與洗液接觸來洗滌該固相，所述洗液含有構(gòu)成反應(yīng)液的成分中的至少一種成分，所述反應(yīng)液能夠應(yīng)用于使用核酸的反應(yīng)，從上述固相中分離洗液，并使上述洗液殘留規(guī)定的量，使上述結(jié)合有核酸的固相與洗提液接觸，將核酸回收到該洗提液中。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸回收方法，其中，上述洗提液與殘留于上述固相的洗液混合，具有形成反應(yīng)液的組成，所述反應(yīng)液能夠應(yīng)用于使用上述核酸的反應(yīng)。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸回收方法，其中，添加成分，使核酸洗提入上述洗提液后，與殘留于上述固相的洗液混合，成為能夠應(yīng)用于使用核酸的反應(yīng)的反應(yīng)液。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸回收方法，其中，上述洗液含有鹽和/或表面活性劑。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸回收方法，其中，通過調(diào)節(jié)上述洗液的添加量和廢棄量，使上述洗液殘留規(guī)定的量。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸回收方法，其中，根據(jù)上述固相的含水量和定位上述固相的固相保持部件的含水量，使上述洗液殘留規(guī)定的量。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸回收方法，其中，通過調(diào)節(jié)上述洗液從上述固相分離時(shí)的排出壓力或離心力，使上述洗液殘留規(guī)定的量。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸回收方法，其中，上述反應(yīng)為聚合酶鏈反應(yīng)。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸回收方法，其中，上述反應(yīng)為環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸回收方法，其中，上述洗液含有從氯化鉀(KC1)、氯化鎂(MgCl2)、硫酸銨((NH4)2S04)、硫酸鎂(MgS04)、Tris-HCl和聚氧乙烯山梨糖醇酐單月桂酸酯中選出的至少一種成分。11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸回收方法，其中，進(jìn)一步包含使固相與含有核酸的溶液接觸，使該核酸結(jié)合于固相的處理。12.—種核酸回收裝置，其特征在于，該核酸回收裝置具備洗液供給設(shè)備、洗液分離設(shè)備、洗提液供給設(shè)備，將核酸回收到用上述洗提液供給設(shè)備供給的洗提液內(nèi)，所述洗液供給設(shè)備對具有核酸結(jié)合能力的固相供給洗液，所述洗液含有構(gòu)成反應(yīng)液的成分中的至少一種成分，所述反應(yīng)液能夠應(yīng)用于使用核酸的反應(yīng)，所述洗液分離設(shè)備由上述固相分離上述溶液，以使供給于上述固相的洗液殘留規(guī)定量，所述洗提液供給設(shè)備在用上述洗液分離設(shè)備除去洗液之后，將洗提液供給于上述結(jié)合有核酸的固相。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的核酸回收裝置，其中，上述洗提液與殘留于上述固相的洗液混合，具有形成反應(yīng)液的組成，所述反應(yīng)液能夠應(yīng)用于上述使用核酸的反應(yīng)。14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的核酸回收裝置，其中，進(jìn)一步具有成分添加設(shè)備，所述成分添加設(shè)備添加成分，使核酸洗提入上述洗提液中后，與殘留于上述固相的洗液混合，形成能夠應(yīng)用于使用上述核酸的反應(yīng)的反應(yīng)液。15.根據(jù)權(quán)利要求12所述的核酸回收裝置，其中，上述洗液供給設(shè)備是將洗液填充進(jìn)收容上述固相的容器內(nèi)的設(shè)備。16.根據(jù)權(quán)利要求12所述的核酸回收裝置，其中，上述洗液分離設(shè)備是將填充于收容上述固相的容器內(nèi)的洗液除去的設(shè)備。17.根據(jù)權(quán)利要求12所述的核酸回收裝置，其中，上述洗提液供給設(shè)備是將洗提液填充進(jìn)收容上述固相的容器內(nèi)的設(shè)備。18.根據(jù)權(quán)利要求12所述的核酸回收裝置，其中，上述固相被保持在容器內(nèi)，利用上述洗液設(shè)備將洗液吸引至該容器內(nèi)，利用洗液分離設(shè)備排出該容器內(nèi)的洗液，利用上述洗提液供給設(shè)備將洗提液吸引至該容器內(nèi)。19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的核酸回收裝置，其中，上述容器具備定位該固相的固相保持部件，該固相保持部件和/或上述固相保持洗液的規(guī)定量。全文摘要本發(fā)明提供一種核酸回收方法及核酸回收裝置，其不完全除去洗液的成分，來回收精制的核酸。本發(fā)明的核酸回收方法是，將結(jié)合有核酸的固相與洗液接觸來洗滌該固相，所述洗液含有構(gòu)成反應(yīng)液的成分中的至少一種成分，所述反應(yīng)液能夠應(yīng)用于使用核酸的反應(yīng)，從上述固相中分離洗液，使得上述洗液殘留規(guī)定量，然后，將上述結(jié)合有核酸的固相與洗提液接觸，使核酸回收到該洗提液中。文檔編號C12M1/00GK101255415SQ20081008093公開日2008年9月3日申請日期2008年2月29日優(yōu)先權(quán)日2007年3月1日發(fā)明者山下善寬,櫻井智也申請人:株式會(huì)社日立高新技術(shù)