專利名稱：一種快速從同一樣品中同時(shí)抽提純化dna/rna的試劑盒以及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種快速從同一樣品中同時(shí)抽提純化 DNA/RNA的試劑盒及方法。
背景技術(shù)：
DNA和RNA是遺傳的基本物質(zhì)，既是遺傳信息的載體，也是蛋白合成的模 板，分離高純度的DNA和RNA是現(xiàn)代分子生物學(xué)研究及相關(guān)領(lǐng)域，包括；農(nóng)業(yè)、 林業(yè)、醫(yī)學(xué)、法醫(yī)鑒定及臨床醫(yī)學(xué)診斷、分子治療等的必要技術(shù)手段，也是不可 逾越的試驗(yàn)過程。DNA和RNA具有易降解，難純化的特點(diǎn)。它易被無處不在D NA s e和RNase.降解，也很容易在抽提過程中被蛋白和D N A和R N A彼此相 互污染；傳統(tǒng)的方法，DNA和RNA的分離純化絕大部分是單獨(dú)進(jìn)行，g卩同 一樣品只抽提RN A或DNA，如堿裂解法，PEG沉淀法、AGPC法或酸性酚 法、氯化銫密度梯度離心法、M i n i p r e p法等。它們都是抽提其中一種 RNA或DNA。現(xiàn)在常用的Trizol法，曾提到可同時(shí)得到DNA，但純度極差， 大多方法都必須用到毒性極強(qiáng)的酚和氯仿等，對(duì)環(huán)境和試驗(yàn)人員易造成危害。現(xiàn) 代分子醫(yī)學(xué)和分子生物學(xué)研究都必須同時(shí)檢測(cè)D N A和R N A ，本發(fā)明摒棄了以 往的單獨(dú)提取法，創(chuàng)造了一種全新的DNA和RNA同時(shí)抽提純化方法，從同一 樣品中同時(shí)分離純化DNA和RNA，對(duì)某些珍貴，不易得到的樣品尤為重要， 因?yàn)樗梢源蟠蟮墓?jié)約樣品，同時(shí)也可縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間，這一方法適合從各種材料 中提純可用于下游各種實(shí)驗(yàn)的高純度DNA和RNA，如PCR、基因芯片、克 隆酶切、Northernblot、 cDNA的轉(zhuǎn)錄、Northern blot、 RNAi等。

發(fā)明內(nèi)容
因此，為了解決上述問題，本發(fā)明的發(fā)明人提出并完成了本發(fā)明。
本發(fā)明采用新型介質(zhì)，包括過濾介質(zhì)和結(jié)合介質(zhì)，全新獨(dú)特溶液配方， 結(jié)合使用特異抑制劑，使提純的時(shí)間大大減少，而純度，穩(wěn)定性大大提高。 其原理如下D N A和RN A快速純化利用強(qiáng)變性劑(GuS CN等)和適當(dāng)?shù)木彌_系統(tǒng)破 碎細(xì)胞，抑制各種Rnase、 DNase，釋放出DNA和RNA,利用特異DN A /RNA吸附介質(zhì)和吸附溶液，分別結(jié)合DNA/RNA，經(jīng)洗脫同時(shí)得到 純化的D N A和RNA。這一發(fā)明將為生物科學(xué)及相關(guān)領(lǐng)域的研究與應(yīng)用， 提供DN A /RNA同時(shí)快速分離純化，無公害實(shí)驗(yàn)方法；也為大規(guī)模臨床診 斷樣品的D N A / RNA分離純化，包括病毒DN A /RNA的分離純化，提 供簡(jiǎn)單、有效、快捷的選擇。
本發(fā)明的目的為提供一種快速從同一樣品中同時(shí)抽提純化DNA/RNA的試 劑盒。
本發(fā)明的另 一 目的為提供一種快速從同一樣品中同時(shí)抽提純化DNA/RNA 的方法。
根據(jù)本發(fā)明的快速從同一樣品中同時(shí)抽提純化DNA/RNA的試劑盒包括
1) 樣品裂解液， 所述裂解液的配方為 3.5-5.5 M GuSCN 2-20 mM MgCl2
10-50 mM MES-NaOH， pH 6.3 10-30 mM擰檬酸鈉 l-10mMEDTApH8.0 0.005-0.3 % TritonX-100 0.05-0.2%NP-40 0.01-0.8% N-月桂酰肌氨酸 1-8%丙醇
5-20 ul/ml卩-巰基乙醇；
2) DNA結(jié)合柱前處理溶液，其配方為 35-4.5 M LiCl
0.005-0.02M HC1 0.05-0.3% TritonX-100;
3) DNA洗滌液I，其配方為-4.5-5.5 M GuHCl 5-20 mM MES， pH5.5 0.5-3 mM MgCl2 0.02-0.06% Triton X-100 45-60%乙醇；
4) RNA結(jié)合溶液，其配方為； 250-750 mM MES-NaOH pH5.0 65-80%乙醇；
5) RNA洗液I，其配方為 50-200mM MES-NaOH， pH5~6， 3.5-4.5 M GuSCN
0.4-1% TritonX-100 35-45%乙醇；
6) DNA/RNA洗液II， 對(duì)于植物材料所述洗液II的配方為 70-85 %乙醇
0.5-1.5%丙酮 0.005-0.05% DEPC
對(duì)于其它材料所述洗液II的配方為
70-85%乙醇和0.005-0.05% DEPC;
7) Rnase-free H2O;
8) DNA洗脫液，其配方為5-15mMTris-HCl, pH8.0
1- 2 mM EDTA
9) DNA結(jié)合柱；
10) RNA結(jié)合柱；以及
11) 過濾柱。
根據(jù)本發(fā)明的試劑盒，所述DNA結(jié)合柱由孔徑為0.5-0.9Wvl的硅膠制成。
根據(jù)本發(fā)明的試劑盒，所述過濾柱的過濾介質(zhì)為5-10WVl孔徑的氧化鋁濾片。
根據(jù)本發(fā)明的試劑盒，所述RNA結(jié)合柱由孔徑為0.3-0.8PM的玻璃纖維材料制成。
根據(jù)本發(fā)明的快速從同一樣品中同時(shí)抽提純化DNA/RNA的方法包括以下步驟
1) 裂解樣品，將樣品研磨，并加入樣品裂解液進(jìn)行裂解，所述裂解液的配方為
3.5-5.5 MGuSCN
2- 20 mM MgCl2
10-50 mM MES-NaOH， pH 6.310-30 mM擰檬酸鈉M0mMEDTApH8.00.005-0.3 % TritonX-1000.05-0.2%NP-400.01-0.8% N-月桂酰肌氨酸1_8%丙醇
5-20 ul/ml p-巰基乙醇；
2) 前處理，將200pL前處理液分別注入DNA結(jié)合柱和RNA結(jié)合柱中，然后離心去除溶液，所述前處理溶液的配方為
3.5-4.5 M LiCl0.005-0.02M HC1
0.05-0.3% TritonX-100;
3) 過濾，將裂解樣品用過濾柱過濾，收集濾液；
4) 特異結(jié)合DNA，將步驟3)中得到的濾液上樣到DNA結(jié)合柱上，并離心收集濾液備用；
5) 清洗提純DNA，力n 500pLDNA洗液I于DNA結(jié)合柱中，并離心去除溶液，然后再加75(HiLDNA/RNA洗液II于DNA結(jié)合柱中，并離心去除溶液，
所述DNA洗滌液I的配方為
4.5-5.5 M GuHCl
5-20 mM MES， pH5.5
0.5-3 mM MgCl2
0.02-0.06% Triton X-10045-60%乙醇；
所述DNA/RNA洗液II ，
對(duì)于植物材料所述洗液II的配方為
70-85 %乙醇
0.5-1.5%丙酮
0.005-0.05% DEPC
對(duì)于其它材料所述洗液II的配方為
70-85%乙醇和0.005-0.05% DEPC6) 洗脫DNA，向經(jīng)步驟5)處理的DNA結(jié)合柱中加入25-70pLDNA洗脫液，靜止，并離心收集溶液，得到高純度的DNA，
所述DNA洗脫液的配方為
5-15 mM Tris-HCl, pH8.0
1-2 mM EDTA
7) 特異結(jié)合RNA，向上述步驟4)收集的濾液中加入等體積的RNA結(jié)合溶液并混勻，然后上樣到RNA結(jié)合柱上，并離心去除溶液，
所述RN A結(jié)合液的配方為250-750 mM MES-NaOH pH5.0
65-80%乙醇；
8) 清洗提純RNA，加500^LRNA洗液I于RNA結(jié)合柱中，并離心去除溶液，然后再加750pLRNA/DNA洗液II于RNA結(jié)合柱中，并離心去除溶液，
RNA洗液I的配方為50-200mM MES-NaOH， pH5~6,3.5-4.5 M GuSCN0.4-1% TritonX-lOO35-45%乙醇；
9) 洗脫RNA，向經(jīng)步驟8)處理的RNA結(jié)合柱中加入Rnase-free的H20，靜止，并離心收集溶液，得到高純度的RNA。
根據(jù)本發(fā)明的方法，所述DNA結(jié)合柱由孔徑為0.5-0.9Wvl的硅膠制成。
根據(jù)本發(fā)明的方法，所述過濾柱的過濾介質(zhì)為5-104M孔徑的氧化鋁濾片。
根據(jù)本發(fā)明的方法，所述RNA結(jié)合柱由孔徑為0.3-0.8W4的玻璃纖維材料制成。綜上，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)
1、 摒棄以往RN A和DN A單獨(dú)提取，浪費(fèi)樣品和時(shí)間的常規(guī)經(jīng)典方法，用同一樣品，同時(shí)提取RNA和DNA。
2、 采用溫和變性劑裂解法，不同于以往商用"Trizol"法、氯化銫密度梯度離心法和酸性酚法所用的酚抽提法，使用對(duì)環(huán)境造成污染的藥品。
3、 不離心沉淀收集收集樣品， 一步直接裂解，兩步分別結(jié)合，特異清洗純化。
4、 采用特殊的全新溶液配方前處理二氧化硅纖維膜，特異結(jié)合DNA或RNA，使蛋白、DNA和RNA不相互污染，其他雜質(zhì)更易清除。
5、 大大縮短抽分離提純時(shí)間，15分鐘即可完成。
6 、此法為DNA和RNA同時(shí)抽提的自動(dòng)化和大規(guī)?；於思夹g(shù)基礎(chǔ)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一 使用本發(fā)明的試劑盒快速抽提純化煙草葉的總RNA/DNA
一、配制溶液配制以下溶液
1) 樣品裂解液，4 M GuSCN
2.5 mM MgCl2
25 mM MES誦NaOH， pH 6.3
20 mM擰檬酸鈉
2mM EDTApH8.0
0.1 % TritonX-100
0.15%MM0
0.5n/。N-月桂酰肌氨酸
5%丙醇
10ul/ml p-巰基乙醇；
2) DNA結(jié)合柱前處理溶液4 M LiCl
0.01MHC10.1% TritonX-100;
3) DNA洗滌液I:4.5 M GuHCl
10 mM MES, pH5.51 mM MgCl20.05% Triton X-100
55%乙醇；
4) RNA結(jié)合溶液
500 mM MES-NaOH pH5.0
70%乙醇；
5) RNA洗液I:
lOOmM MES-NaOH ， pH5~6,4 M GuSCN0.7% TritonX-100
40%乙醇；
6) DNA/RNA洗液II，
對(duì)于植物材料所述洗液II的配方為
78%乙醇
1%丙酮0.01% DEPC，
對(duì)于其它材料所述洗液II的配方為
78%乙醇和0.01% DEPC;7) Rnase-free H2O;
8) DNA洗脫液
10 mM Tris-HCl, pH8.01 mM EDTA。
二、提取煙草的總RNA和DNA
1、 裂解樣品
取樣品(約為50mg)放入液氮輪動(dòng)磨碎，加入裂解液350 W，劇烈震蕩，溫育60° C，靜置5分鐘。
2、 同時(shí)前處理DNA和RNA結(jié)合柱將200 u L DNA前處理溶液加入柱中，11000rpm離心10秒，棄除溶液。
3、 過濾，將裂解樣品用大孔徑過濾柱過濾，收集濾液；
4、 特異結(jié)合DNA，將步驟3中得到的濾液上樣到DNA結(jié)合柱上，并11， 000rpm(8200Xg)離心20秒收集濾液備用；
5、 清洗提純DNA
力口 500 W DNA洗液I于DNA結(jié)合柱，11， 000rpm(8200 X g)離心20秒，棄除溶液。再加750WRNA/DNA洗液II， 11， 000rpm(8200Xg)離心10秒，棄除溶液，再離心1分鐘。
6、 洗脫高純度DNA
將已結(jié)合DNA的干燥柱，加入53WDNA洗脫液，靜置1分鐘，11，000rpm(8200 Xg)離心1分鐘，收集溶液，得高純度DNA約為50 PL
(o.4|jg/|jU。
7、 特異結(jié)合RNA，將步驟4收集的濾液加入等體積的RNA結(jié)合溶液，混勻、將所有樣品(濾液)上樣到RNA結(jié)合柱上，11， 000rpm(8200 x g)離心20秒。
8、 清洗提純RNA力口 500 W RNA洗溶液I于RNA結(jié)合柱，11， 000rpm(8200 x g)離心20秒，棄除溶液。再加750WRNA/DNA洗滌溶液II， 11， 000rpm(8200 x g)離心10秒，棄除溶液，再離心1分鐘。
9、洗脫高純度RNA
將已結(jié)合RNA的干燥柱，加入RNA洗脫液，靜置1分鐘，11，000rpm(8200 x g)離心1分鐘，收集溶液，得高純度RNA約為50 W(0，g/W)。
實(shí)施例二提取酵母細(xì)胞的總RNA和DNA
以與實(shí)施例一相同的方法，提取酵母細(xì)胞的總RNA和DNA。實(shí)施例三使用本發(fā)明的試劑盒快速抽提純化煙草葉的總RNA/DNA
一、配制溶液
配制以下溶液
1) 樣品裂解液，3.5 M GuSCN
2 mM MgCl2
10 mM MES-NaOH， pH 6.3
10 mM檸檬酸鈉
1 mMEDTApH8.0
0.005 %TritonX-100
0.05%NP-40
0.01。/。N-月桂酰肌氨酸
1%丙醇
5ul/ml p-巰基乙醇；
2) DNA結(jié)合柱前處理溶液3.5 M LiCl
0.005M HC10.05% TritonX-100;3) DNA洗滌液I: 4.5 M GuHCI
5 mM MES, pH5.5 0.5 mM MgCl2 0.02% Triton X-100 45%乙醇；
4) RNA結(jié)合溶液
50 mM MES-NaOH pH5.0 65%乙醇；
5) RNA洗液I:
50mM MES-NaOH ， pH5~6， 3.5 M GuSCN 0.4% TritonX-100 35%乙醇；
6) DNA/RNA洗液II，
對(duì)于植物材料所述洗液II的配方為
70%乙醇
0.5%丙酮 0.005% DEPC,
對(duì)于其它材料所述洗液II的配方為:
70%乙醇和0.005% DEPC;
7) Rnase-free H20;8) DNA洗脫液 5mMTris-HCl, pH8.0 1 mM EDTA。
二、提取煙草的總RNA和DNA
1、 裂解樣品
取樣品(約為50mg)放入液氮輪動(dòng)磨碎，加入裂解液350 W，劇烈震蕩， 溫育60° C，靜置5分鐘。
2、 同時(shí)前處理DNA和RNA結(jié)合柱將200 u L DNA前處理溶液加入 柱中，11000rpm離心10秒，棄除溶液。
3、 過濾，將裂解樣品用大孔徑過濾柱過濾，收集濾液；
4、 特異結(jié)合DNA，將步驟3中得到的濾液上樣到DNA結(jié)合柱上，并 11， 000rpm(8200Xg)離心20秒收集濾液備用;
5、 清洗提純DNA
力口 500 WDNA洗液I于DNA結(jié)合柱，11， 000rpm(8200 X g)離心20秒， 棄除溶液。再加750WRNA/DNA洗液II， 11， 000rpm(8200Xg)離心10秒， 棄除溶液，再離心1分鐘。
6、 洗脫高純度DNA
將已結(jié)合DNA的干燥柱，加入53WDNA洗脫液，靜置1分鐘，11， 000rpm(8200 Xg)離心1分鐘，收集溶液，得高純度DNA約為50叱
(0.4ng/|jU。
7、 特異結(jié)合RNA，將步驟4收集的濾液加入等體積的RNA結(jié)合溶液， 混勻、將所有樣品(濾液)上樣到RNA結(jié)合柱上，11， 000rpm(8200 x g)離 心20秒。
8、 清洗提純RNA力口 500 W RNA洗溶液I于RNA結(jié)合柱，11， 000rpm(8200 x g)離心20 秒，棄除溶液。再加750W RNA/DNA洗滌溶液II， 11， 000rptn(8200 x g)離 心10秒，棄除溶液，再離心l分鐘。
9、洗脫高純度RNA
將已結(jié)合RNA的干燥柱，加入RNA洗脫液，靜置1分鐘，11， 000rpm(8200 x g)離心1分鐘，收集溶液，得高純度RNA約為50 W (0.4Pg/W)。
實(shí)施例四使用本發(fā)明的試劑盒快速抽提純化煙草葉的總RNA/DNA
一、配制溶液
配制以下溶液
1) 樣品裂解液， 5.5 M GuSCN 20 mM MgCl2
50 mM MES-NaOH， pH 6.3
30 mM檸檬酸鈉
10mMEDTApH8.0
0.3 %TritonX-100
0.2%NP-40
0.8MN-月桂酰肌氨酸
8%丙醇
20ul/ml p-巰基乙醇；
2) DNA結(jié)合柱前處理溶液 4.5 M LiCl
0.02M HC1 0.3%TritonX-100;
3) DNA洗滌液I: 5.5 M GuHCl20 mM MES, pH5.5 3 mM MgCl2 0.06% Triton X-100 60%乙醇；
4) RNA結(jié)合溶液
750 mM MES-NaOH pH5.0 80%乙醇；
5) RNA洗液I:
200mM MES-NaOH， pH5~6, 4.5 M GuSCN 1% TritonX-100
45%乙醇；
6) DNA/RNA洗液II，
對(duì)于植物材料所述洗液II的配方為:
85%乙醇
1.5%丙酮 0.05% DEPC，
對(duì)于其它材料所述洗液II的配方為:
85%乙醇和0.05% DEPC;
7) Rnase-free H20;
8) DNA洗脫液 15mMTris-HCl, pH8.02mM EDTA。
二、提取煙草的總RNA和DNA
1、 裂解樣品
取樣品(約為50mg)放入液氮輪動(dòng)磨碎，加入裂解液350 W，劇烈震蕩， 溫育60° C，靜置5分鐘。
2、 同時(shí)前處理DNA和RNA結(jié)合柱將200 u L DNA前處理溶液加入 柱中，11000rpm離心IO秒，棄除溶液。
3、 過濾，將裂解樣品用大孔徑過濾柱過濾，收集濾液；
4、 特異結(jié)合DNA，將步驟3中得到的濾液上樣到DNA結(jié)合柱上，并 11， 000rpm(8200Xg)離心20秒收集濾液備用；
5、 清洗提純DNA
力口 500 W DNA洗液I于DNA結(jié)合柱，11， 000rpm(8200X g)離心20秒， 棄除溶液。再加750WRNA/DNA洗液II， 11， 000rpm(8200X g)離心10秒， 棄除溶液，再離心1分鐘。
6、 洗脫高純度DNA
將己結(jié)合DNA的干燥柱，加入53WDNA洗脫液，靜置1分鐘，11， 000rpm(8200Xg)離心1分鐘，收集溶液，得高純度DNA約為50叱 (0.4|jg/|jL:)。
7、 特異結(jié)合RNA，將步驟4收集的濾液加入等體積的RNA結(jié)合溶液， 混勻、將所有樣品(濾液)上樣到RNA結(jié)合柱上，11， 000rpm(8200 x g)離 心20秒。
8、 清洗提純RNA
力口 500 W RNA洗溶液I于RNA結(jié)合柱，11， 000rpm(8200 x g)離心20 秒，棄除溶液。再加750WRNA/DNA洗滌溶液II, 11， 000rpm(8200 x g)離 心10秒，棄除溶液，再離心1分鐘。9、洗脫高純度RNA
將己結(jié)合RNA的干燥柱，加入RNA洗脫液，靜置1分鐘，11， 000rptn(8200 x g)離心1分鐘，收集溶液，得高純度RNA約為50 W (0，g/W)。
權(quán)利要求
1、一種快速從同一樣品中同時(shí)抽提純化DNA/RNA的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括以下組分1)樣品裂解液，所述裂解液的配方為3. 5-5.5M GuSCN2-20mM MgCl210-50mM MES-NaOH，pH6.310-30mM檸檬酸鈉1-10mM EDTA pH8.00. 005-0.3％ TritonX-1000. 05-0.2％NP-400. 01-0.8％N-月桂酰肌氨酸1-8％丙醇5-20ul/ml β-巰基乙醇；2)結(jié)合柱前處理溶液，其配方為3. 5-4.5M LiCl0. 005-0.02M HCl0. 05-0.3％ TritonX-100；3)DNA洗滌液I，其配方為4. 5-5.5M GuHCl5-20mM MES，pH5.50. 5-3mM MgCl20. 02-0.06％ Triton X-10045-60％乙醇；4)RNA結(jié)合溶液，其配方為；250-750mM MES-NaOH pH5.065-80％乙醇；5)RNA洗液I，其配方為50-200mM MES-NaOH，pH5～6，3. 5-4.5M GuSCN0. 4-1％ TritonX-10035-45％乙醇；6)DNA/RNA洗液II，對(duì)于植物材料所述洗液II的配方為70-85％乙醇0. 5-1.5％丙酮0. 005-0.05％ DEPC對(duì)于其它材料所述洗液II的配方為70-85％乙醇和0. 005-0.05％ DEPC；7)Rnase-free H2O；8)DNA洗脫液，其配方為5-15mM Tris-HCl，pH8.01-2mM EDTA；9)DNA結(jié)合柱；10)RNA結(jié)合柱；以及11)過濾柱。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述DNA結(jié)合柱由孔 徑為0.5-0.卯M的硅膠制成。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述過濾柱的過濾介 質(zhì)為5-104M孔徑的氧化鋁濾片。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述RNA結(jié)合柱由孔 徑為0.3-0.8PM的玻璃纖維材料制成。
5、 一種快速從同一樣品中同時(shí)抽提純化DNA/RNA的方法，其特征在于， 所述方法包括以下步驟1) 裂解樣品，將樣品研磨，并加入樣品裂解液進(jìn)行裂解， 所述裂解液的配方為,3.5-5.5 M GuSCN,2-20 mM MgCl2,10-50 mM MES-NaOH， pH 6.3,10-30 mM擰檬酸鈉,l-10mMEDTApH8.0,0.005-0.3 % TritonX-100,0.05-0.2%NP-40,0.01-0.8% N-月桂酰肌氨酸,1-8%丙醇,5-20 ul/ml P-巰基乙醇；2) 前處理，將200pL前處理液分別注入DNA結(jié)合柱和RNA結(jié)合柱中， 然后離心去除溶液，所述前處理溶液的配方為 3.5-4.5 M LiCl 0.005-0.02M HC1,0.05-0.3% TritonX-100;3) 過濾，將裂解樣品用過濾柱過濾，收集濾液；4) 特異結(jié)合DNA，將步驟3)中得到的濾液上樣到DNA結(jié)合柱上， 并離心收集濾液備用；5) 清洗提純DNA,力B 500nLDNA洗液I于DNA結(jié)合柱中，并離心去 除溶液，然后再加750nLDNA/RNA洗液II于DNA結(jié)合柱中，并離心去除 溶液，所述DNA洗滌液I的配方為4.5-5.5 M GuHCl5-20 mM MES, pH5.50.5-3 mM MgCI20.02-0.06% Triton X墨I(xiàn)OO45-60%乙醇；所述DNA/RNA洗液II，對(duì)于植物材料所述洗液II的配方為70-85 %乙醇0.5-1.5%丙酮0.005-0.05% DEPC對(duì)于其它材料所述洗液II的配方為70-85%乙醇和0.005-0.05% DEPC;6) 洗脫DNA，向經(jīng)步驟5)處理的DNA結(jié)合柱中加入53pLDNA洗脫 液，靜止，并離心收集溶液，得到高純度的DNA，所述DNA洗脫液的配方為5-15 mM Tris-HCl, pH8.01-2 mM EDTA;7) 特異結(jié)合RNA，向上述步驟4)收集的濾液中加入等體積的RNA結(jié) 合溶液并混勻，然后上樣到RNA結(jié)合柱上，并離心去除溶液，所述RNA結(jié)合液的配方為250-750 tnM MES-NaOH pH5.0 65-80%乙醇；8) 清洗提純RNA，力H 500pLRNA洗液I于RNA結(jié)合柱中，并離心去 除溶液，然后再加750pLRNA/DNA洗液II于RNA結(jié)合柱中，并離心去除 溶液，RNA洗液I的配方為 50-200mM MES-NaOH， pH5~6, 3.5-4.5 M GuSCN 0.4-1% TritonX-lOO 35-45%乙醇；9) 洗脫RNA，向經(jīng)步驟8)處理的RNA結(jié)合柱中加入Rnase-free的 H20，靜止，并離心收集溶液，得到高純度的RNA。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述DNA結(jié)合柱由孔徑 為0.5-0.9Wvl的硅膠制成。
7、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述過濾柱的過濾介質(zhì) 為5-10PM孔徑的氧化鋁濾片。
8、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述RNA結(jié)合柱由孔徑 為0.3-0.8WVI的玻璃纖維材料制成。
全文摘要
本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種快速從同一樣品中同時(shí)抽提純化DNA/RNA的試劑盒及方法。本發(fā)明的試劑盒包括裂解液、前處理液、RNA結(jié)合液、DNA洗液I、RNA洗液I、DNA/RNA洗液II、DNA洗脫液以及DNA結(jié)合柱、RNA結(jié)合柱和結(jié)合柱。本發(fā)明的方法包括裂解、前處理、過濾、特異結(jié)合DNA、清洗提純DNA、洗脫DNA、特異結(jié)合RNA、清洗提純RNA和洗脫RNA等步驟。本發(fā)明采用新型介質(zhì)，包括過濾介質(zhì)和結(jié)合介質(zhì)，全新獨(dú)特溶液配方，結(jié)合使用特異抑制劑，使提純的時(shí)間大大減少，而純度，穩(wěn)定性大大提高。
文檔編號(hào)C12N15/10GK101532011SQ20081010160
公開日2009年9月16日 申請(qǐng)日期2008年3月10日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月10日
發(fā)明者李樂攻 申請(qǐng)人:首都師范大學(xué)