專利名稱：一種富鋅酵母及其生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種微生物，具體地說涉及一種富鋅酵母，本發(fā)明 還涉及該菌種的選育方法以及使用這種菌種進(jìn)行工業(yè)生產(chǎn)的方法。
背景技術(shù)：
鋅是人體和動(dòng)物的必需微量元素，在生物體內(nèi)，鋅既是許多酶 的組成成分，又可以影響某些非酶的有機(jī)分子配位體的機(jī)構(gòu)構(gòu)型， 對(duì)維持人體正常的生理機(jī)能起著非常重要的作用。人體缺鋅會(huì)引起 許多疾病，如侏儒癥、糖尿病、高血壓、生殖器及第二性征發(fā)育不 全，男性不育等疾病。人體正常的生理代謝會(huì)損失一部分鋅，而食 物中補(bǔ)充的鋅又不足以滿足人體的正常代謝的鋅，因而導(dǎo)致人們普 遍缺鋅。富鋅酵母作為一種良好的補(bǔ)鋅原料，其生物利用率高，毒 副作用小，而且酵母中含有豐富的氨基酸和維生素，這些都能促進(jìn) 鋅的吸收。
近年來國內(nèi)外對(duì)富鋅酵母研究比較多，但含量都不是很高，主
要的問題是(1)對(duì)富鋅酵母的菌種篩選不夠，篩選出來的菌種對(duì) 鋅的富集能力不強(qiáng)，酵母中的鋅含量不高(2)有機(jī)鋅含量低，有部 分只是酵母和鋅簡單的吸附或混合，未將無機(jī)鋅轉(zhuǎn)化為有機(jī)鋅；(3) 一些方法不適合大生產(chǎn)，重復(fù)性很差，有些能生產(chǎn)，但是產(chǎn)率很低，
生產(chǎn)成本較高；(4)對(duì)鋅的利用率低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)上述不足提供一種鋅含量較高的富鋅酵 母菌種以及利用該菌種進(jìn)行工業(yè)生產(chǎn)的方法。
由于無機(jī)鋅對(duì)酵母的生長有一定的抑制， 一般的酵母很難在含 有高鋅的條件下生長，即使有生長速率但對(duì)鋅的利用率不高。本發(fā)明通過篩選、馴化、誘變，選育出鋅含量高、生長速率快、產(chǎn)率高、 對(duì)鋅的利用率高的富鋅酵母菌種，將其中優(yōu)選的一株命名為Z1.4。
該酵母菌株已經(jīng)于2005年IO月25曰在中國典型培養(yǎng)物保藏中心 (CCTCC,武漢大學(xué)，郵編430072)進(jìn)行了生物保藏，分類命名為 酉良酒酵母(《Sacc/ aram_ycas cemWs/ae人保藏編號(hào)為 CCTCC M 205126。
具體地說，通過如下方法選育菌種
1) 篩選耐高鋅的酵母菌種將不同的酵母菌種接種到不同濃度 的含鋅培養(yǎng)基中，篩選能夠在高鋅培養(yǎng)基中能夠生長的菌種。挑選 出耐鋅的菌種作為馴化的菌種。
2) 將耐鋅的菌種接種到高濃度鋅的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，并逐漸 提高培養(yǎng)基中鋅的濃度，維持鋅在較高的濃度。挑選出耐高鋅而又 穩(wěn)定的菌種作為誘變菌種。
3) 將挑選出來的菌種接種到不同濃度的氯化鋰的培養(yǎng)基中誘變。
4) 將誘變的菌種再進(jìn)行分離篩選，利用搖瓶和小型發(fā)酵罐進(jìn)行 發(fā)酵選出鋅含量高、生長速率快、產(chǎn)率高、對(duì)鋅的利用率高的耐高 鋅的酵母菌種，即為富鋅酵母菌種。
5) 篩選培養(yǎng)基配方
麥芽汁培養(yǎng)基含糖量5~25%,含鋅(氨基酸螯合鋅)濃度為 150 5000pg/ml， pH值為4 6.5。
6) 篩選培養(yǎng)條件
溫度26 35。C,攪拌培養(yǎng)18~48小時(shí)。
另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了生產(chǎn)上述富鋅酵母產(chǎn)品的方法，包 括菌種活化、擴(kuò)大培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)，發(fā)酵罐培養(yǎng)結(jié)束后對(duì)培養(yǎng)物 進(jìn)行分離、干燥、包裝后即得成品。
其中，菌種活化可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)方法進(jìn)行， 如采用斜面菌種培養(yǎng)活化。
5其中，擴(kuò)大培養(yǎng)可包括一級(jí)液體種子培養(yǎng)、二級(jí)液體種子培養(yǎng) 以及發(fā)酵罐種子培養(yǎng)。
其生產(chǎn)流程如下斜面菌種培養(yǎng)^ 一級(jí)液體種子培養(yǎng)4 二級(jí)
液體種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐培養(yǎng)—分離—干燥4包 裝。
具體地說可釆用如下方法
1) 斜面菌種培養(yǎng)將耐高鋅的富鋅酵母菌種接種到含糖量為5~ 25%、鋅濃度為150 5000jig/ml、 pH值為4 ~ 6.5的麥芽汁固體斜面 上，在26~35°(:培養(yǎng)24~48小時(shí)。
2) —級(jí)液體種子培養(yǎng)將斜面的酵母菌種接種1~4環(huán)到裝有 100~500ml的含糖量為5~25%、鋅濃度為150 ~ 5000pg/ml、 pH值 為4~6.5的麥芽汁專用培養(yǎng)瓶中，在26-35。C培養(yǎng)24 48小時(shí)。
3) 二級(jí)液體種子培養(yǎng)；將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種到裝有10~ 40L的含糖(麥芽汁或糖蜜或麥芽汁和糖蜜的混合物)量為5-25 %、鋅濃度為150 5000嗎/ml、 pH值為4 ~ 6.5的卡氏培養(yǎng)瓶中， 接種量為1%~ 10%，在26 35。C培養(yǎng)18~48小時(shí)。
4) 發(fā)酵罐種子培養(yǎng)將二級(jí)種子培養(yǎng)液接種到裝有0.5~15m3 的含糖(麥芽汁或糖蜜或麥芽汁和糖蜜的混合物)量為5~25%、鋅 濃度為150~5000jig/ml、補(bǔ)充適當(dāng)?shù)牡春土自础H值為4-6.5 的種子發(fā)酵罐中，接種量為1%~10%,在26-35。C培養(yǎng)18~48小 時(shí)。
5) 發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到1~300噸的含 糖(淀粉水解糖或糖蜜或淀粉水解糖和糖蜜的混合物)量為5~25 %、鋅)濃度為150~5000|ng/ml、補(bǔ)充適當(dāng)?shù)牡春土自?、pH值為 4 6.5的發(fā)酵罐中，接種量為5%~15%,所用的營養(yǎng)源釆用流加方 式，鋅釆用流加方式加入，在26 35'C培養(yǎng)14~36小時(shí)。
6) 分離采用疊片式分離機(jī)分離再用真空轉(zhuǎn)鼓過濾或者用板框 壓濾。
7) 干燥釆用60~140°。流化態(tài)干燥，干燥的產(chǎn)品具有活性；釆 用100- 180。C噴霧干燥或者用0.3~0.6Mpa的蒸汽壓力滾簡干燥，
6干燥產(chǎn)品沒有活性是粉狀或小片狀；也可以釆用冷凍干燥法干燥。
8)包裝可以釆用多種形式的包裝成為高鋅含量的富鋅酵母。 鋅含量達(dá)到2000 80000mg/kg。
在發(fā)酵罐種子培養(yǎng)和發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)中需要添加適量的氮源和 磷源，氮源選自硫酸氨、碳酸氫銨、氨水、磷酸氨、磷酸氫氨和磷 酸氫二氨，或是這些物質(zhì)的組合。磷源為選自磷酸、磷酸氨、磷酸 氫氨和磷酸氫二氨，或是這些物質(zhì)的組合。優(yōu)選為磷酸氨、磷酸氫 氨和磷酸氫二氨。優(yōu)選氮源和磷源的使用量均為培養(yǎng)基重量的 1~10%。鋅源選自硫酸鋅、氯化鋅、硝酸鋅、葡萄糖酸鋅、氨基酸 鋅等，優(yōu)選氨基酸螯合鋅，使用量為培養(yǎng)基重量的1~10%，從發(fā)酵 開始至發(fā)酵14小時(shí)流加完
如果是連續(xù)的生產(chǎn)可以增加一級(jí)發(fā)酵罐二級(jí)種子發(fā)酵，發(fā)酵條 件是將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到1 -300噸的含糖(淀粉水解糖或 糖蜜或淀粉水解糖和糖蜜的混合物)量為5~25%、鋅(氨基酸螯合 鋅)濃度為150~5000ng/ml、補(bǔ)充適當(dāng)?shù)牡春土自?、pH值為4 6.5的二級(jí)種子發(fā)酵罐中，所用的營養(yǎng)源釆用流加方式，鋅釆用流加 方式加入，在26 35'C培養(yǎng)14~36小時(shí)。然后進(jìn)行離心機(jī)或板框進(jìn) 行分離，在4-l(TC儲(chǔ)罐或冷庫中保存，然后根據(jù)需要接種到發(fā)酵罐 中再進(jìn)行下一級(jí)培養(yǎng)。此時(shí)發(fā)酵罐發(fā)酵的條件優(yōu)選為將發(fā)酵罐種 子培養(yǎng)液接種到1~300噸的含糖量為5~25%、鐵濃度為150 ~ 5000ng/ml、補(bǔ)充適當(dāng)?shù)牡春土自?、pH值為4-6.5的發(fā)酵罐中， 所用的營養(yǎng)源釆用流加方式，鋅采用流加方式加入，在26~35匸培 養(yǎng)14~36小時(shí)。
本發(fā)明使用的耐高鋅的富鋅酵母菌種，耐鋅性能穩(wěn)定，生長速率 快，對(duì)鋅的利用率高，含鋅高可以達(dá)到2000~80000mg/kg。而現(xiàn)有 技術(shù)生產(chǎn)的富鋅酵母鋅含量通常在1000mg/kg以下，最高才到2000 mg/kg。此外，本發(fā)明生產(chǎn)高鋅含量的富鋅酵母可以是酵母活細(xì)胞， 而現(xiàn)有技術(shù)生產(chǎn)的富鋅酵母大多是沒有活性富鋅酵母。并且，本發(fā)明生產(chǎn)的高鋅含量的富鋅酵母生物鋅含量高，可以達(dá)到90 % 。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體的實(shí)施例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明。除非特別指明，本
試劑。應(yīng)當(dāng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不能限制本發(fā) 明的保護(hù)范圍。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不背離本發(fā)明精神和 實(shí)質(zhì)的前提下，對(duì)這些實(shí)施方案中的培養(yǎng)基組分、含量、培養(yǎng)條件、 分離加工條件進(jìn)行的各種改變或改動(dòng)也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
實(shí)施例1:本發(fā)明對(duì)釀酒酵母菌種的篩選
l)篩選耐高鋅的酵母菌種將釀酒酵母(Sacc/zaramycas 接種到不同濃度的含鋅培養(yǎng)基中，篩選能夠在高鋅培養(yǎng)
基中能夠生長的菌種。挑選出耐鋅的菌種作為馴化的菌種。
2) 將耐鋅的菌種接種到高濃度鋅的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，并逐漸 提高培養(yǎng)基中鋅的濃度，維持鋅在較高的濃度。挑選出耐高鋅而又 穩(wěn)定的菌種作為誘變菌種。
3) 將挑選出來的菌種接種到不同濃度的氯化鋰的培養(yǎng)基中誘變。
4) 將誘變的菌種再進(jìn)行分離篩選，利用搖瓶和小型發(fā)酵罐進(jìn)行 發(fā)酵選出鋅含量高、生長速率快、產(chǎn)率高、對(duì)鋅的利用率高的耐高 鋅的酵母菌種，即為富鋅酵母菌種。經(jīng)篩選得到一株鋅含量高、生 長速率快、產(chǎn)率高、對(duì)鋅的利用率高的耐高鋅的酵母菌種，將其命 名為Z1.4,并進(jìn)行保藏。
5) 篩選培養(yǎng)基配方
麥芽汁培養(yǎng)基含糖量10%,含鋅(氨基酸螯合鋅)量150 ~ 5000ng/ml， pH值為5.5。
6) 篩選培養(yǎng)條件 溫度3(TC,攪拌培養(yǎng)24小時(shí)。
實(shí)施例2:富鋅酵母產(chǎn)品的生產(chǎn)
8生產(chǎn)高鋅含量富鋅酵母的生產(chǎn)流程斜面菌種培養(yǎng)— 一級(jí)液體
種子培養(yǎng)4 二級(jí)液體種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐培
養(yǎng)—分離—干燥—包裝。具體工藝如下
1)斜面菌種培養(yǎng)將耐高鋅的富鋅酵母菌種接種到含糖量為 10%、鋅(氨基酸螯合鋅)濃度為150ng/ml、 pH值為5.5的麥芽汁 固體斜面上，在30。C，培養(yǎng)24小時(shí)。
2 ) —級(jí)液體種子培養(yǎng)將斜面的酵母菌種接種3環(huán)到裝有250ml 的含糖(麥芽汁和糖蜜各半)量為10%、鋅(氨基酸螯合鋅)濃度 為150pg/ml、 pH值為5.5的麥芽汁專用培養(yǎng)瓶中，在3(TC培養(yǎng)24 小時(shí)。
3)二級(jí)液體種子培養(yǎng)；將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種到裝有25L 的含糖(麥芽汁和糖蜜各半)量為10%、鋅(氨基酸螯合鋅)濃度 為150pg/ml、 pH值為5.5的卡氏培養(yǎng)瓶中，在3(TC培養(yǎng)24小時(shí)。
4) 發(fā)酵罐種子培養(yǎng)將二級(jí)種子培養(yǎng)液接種到裝有8m3的含糖 (麥芽汁和糖蜜各半)量為20%、鋅(氨基酸螯合鋅)濃度為
150pg/ml，加5%磷酸氫氨、pH值為4.5的種子發(fā)酵罐中，在30°C 培養(yǎng)48小時(shí)。
5) 發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到150噸的含糖 (淀粉水解糖和糖蜜各半)量為20%、鋅(氨基酸螯合鋅)濃度為
150|ag/ml、加5%磷酸氫氨、pH值為5.0的發(fā)酵罐中，所用的營養(yǎng) 源采用流加方式，鋅釆用流加方式加入，在20'C培養(yǎng)36小時(shí)。
6) 分離釆用疊片式分離機(jī)分離再用真空轉(zhuǎn)鼓過濾或者用板框 壓濾。
7) 干燥釆用IO(TC流化態(tài)干燥，干燥的產(chǎn)品具有活性。 8)包裝可以釆用多種形式的包裝成為高鋅含量的富鋅酵母。
鋅含量達(dá)到2000mg/kg。
實(shí)施例3:富鋅酵母產(chǎn)品的生產(chǎn)生產(chǎn)高鋅含量富鋅酵母的生產(chǎn)流程斜面菌種培養(yǎng)— 一級(jí)液體
種子培養(yǎng)—二級(jí)液體種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐培
養(yǎng)—分離—干燥—包裝。具體工藝如下
1)斜面菌種培養(yǎng)將耐高鋅的富鋅酵母菌種接種到含糖量為 10%、鋅(氨基酸螯合鋅)濃度為500|ig/ml、 pH值為5.5的麥芽汁 固體斜面上，在3(TC,培養(yǎng)24小時(shí)。
2 )—級(jí)液體種子培養(yǎng):將斜面的酵母菌種接種4環(huán)到裝有500ml 的含糖(淀粉水解糖)量為10°/。、鋅(氨基酸螯合鋅)濃度為500pg/ml、 pH值為5.5的麥芽汁專用培養(yǎng)瓶中，在3(TC培養(yǎng)24小時(shí)。
3)二級(jí)液體種子培養(yǎng)；將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種到裝有40L 的含糖(麥芽汁和糖蜜的混合物)量為10%、鋅(氨基酸螯合鋅) 濃度為500pg/ml、 pH值為5.5的卡氏培養(yǎng)瓶中，在30'C培養(yǎng)24小 時(shí)。
4)發(fā)酵罐種子培養(yǎng)將二級(jí)種子培養(yǎng)液接種到裝有151113的含糖 (糖蜜)量為15%、鋅(氨基酸螯合鋅)濃度為500pg/ml，加1% 磷酸氫氨、pH值為5.5的種子發(fā)酵罐中，在35。C培養(yǎng)20小時(shí)。
5)發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到1~300噸的 含糖(淀粉水解糖和糖蜜的混合物)量為15%、鋅(氨基酸螯合鋅) 濃度為500ng/ml加3。/。磷酸氫氨、pH值為6.0的發(fā)酵罐中，所用的 營養(yǎng)源釆用流加方式，鋅釆用流加方式加入，在3(TC培養(yǎng)24小時(shí)。
6) 分離釆用疊片式分離機(jī)分離再用真空轉(zhuǎn)鼓過濾或者用板框 壓濾。
7) 干燥釆用60-14(TC流化態(tài)干燥，干燥的產(chǎn)品具有活性；采 用100 18(TC噴粉干燥或者用0.3-0.6Mpa的蒸汽壓力滾簡干燥，
干燥產(chǎn)品沒有活性是粉狀或小片狀；也可以釆用冷凍干燥法干燥。
8) 包裝可以釆用多種形式的包裝成為高鋅含量的富鋅酵母。 鋅含量達(dá)到6700mg/kg。實(shí)施例4:富鋅酵母產(chǎn)品的生產(chǎn)
生產(chǎn)高鋅含量富鋅酵母的生產(chǎn)流程斜面菌種培養(yǎng)— 一級(jí)液體 種子培養(yǎng)—二級(jí)液體種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐培 養(yǎng)—分離—干燥—包裝。具體工藝如下
1) 斜面菌種培養(yǎng)將耐高鋅的富鋅酵母菌種接種到含糖量為 10%、鋅(氨基酸螯合鋅)濃度為1000|ig/ml、 pH值為5.5的麥芽汁 固體斜面上，在30'C,培養(yǎng)24小時(shí)。
2) —級(jí)液體種子培養(yǎng)將斜面的酵母菌種接種1~4環(huán)到裝有 300ml的含糖(麥芽汁和糖蜜各半)量為10%、鋅(氨基酸螯合鋅) 濃度為1000pg/ml、 pH值為5.5的麥芽汁專用培養(yǎng)瓶中，在3(TC培 養(yǎng)24小時(shí)。
3) 二級(jí)液體種子培養(yǎng)；將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種到裝有10-40L的含糖(麥芽汁和糖蜜各半)量為10%、鋅(氨基酸螯合鋅) 濃度為1000pg/ml、 pH值為5.5的卡氏培養(yǎng)瓶中，在30。C培養(yǎng)24 小時(shí)。
4) 發(fā)酵罐種子培養(yǎng)將二級(jí)種子培養(yǎng)液接種到裝有0.5~15m3 的含糖(麥芽汁或糖蜜或麥芽汁和糖蜜的混合物)量為5~25%、鋅
(氨基酸螯合鋅)濃度為1000jug/ml，力口 1~5%磷酸氫氨、pH值為 4~6.5的種子發(fā)酵罐中，在26 35'C培養(yǎng)18~48小時(shí)。
5) 發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到1 -300噸的含 糖(淀粉水解糖或糖蜜或淀粉水解糖和糖蜜的混合物)量為5~25 %、鋅(氨基酸螯合鋅)濃度為100(Hig/ml、力口 1~5%磷酸氫氨、 pH值為4-6.5的發(fā)酵罐中，所用的營養(yǎng)源釆用流加方式，鋅釆用流 加方式加入，在26 35'C培養(yǎng)14~36小時(shí)。
6) 分離采用疊片式分離機(jī)分離再用真空轉(zhuǎn)鼓過濾或者用板框 壓濾。
7) 干燥釆用60 14(TC流化態(tài)干燥，干燥的產(chǎn)品具有活性；采
ii用100 180。C噴粉干燥或者用0.3~0.6Mpa的蒸汽壓力滾簡干燥， 干燥產(chǎn)品沒有活性是粉狀或小片狀；也可以釆用冷凍干燥法干燥。 8)包裝可以采用多種形式的包裝成為高鋅含量的富鋅酵母。 鋅含量達(dá)到13800mg/kg。
實(shí)施例5:富鋅酵母產(chǎn)品的生產(chǎn)
生產(chǎn)高鋅含量富鋅酵母的生產(chǎn)流程斜面菌種培養(yǎng)— 一級(jí)液體 種子培養(yǎng)—二級(jí)液體種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐培 養(yǎng)—分離—干燥—包裝。具體工藝如下.-
1) 斜面菌種培養(yǎng)將耐高鋅的富鋅酵母菌種接種到含糖量為 10%、鋅(氨基酸螯合鋅)濃度為5000ng/ml、 pH值為5.5的麥芽汁 固體斜面上，在3(TC，培養(yǎng)24小時(shí)。
2) —級(jí)液體種子培養(yǎng)將斜面的酵母菌種接種1-4環(huán)到裝有 100~ 500ml的含糖量為10%%、鋅(氨基酸螯合鋅)濃度為 5000pg/ml、 pH值為5.5的麥芽汁專用培養(yǎng)瓶中，在3(TC培養(yǎng)24小 時(shí)。
3) 二級(jí)液體種子培養(yǎng)；將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種到裝有10~ 40L的含糖(麥芽汁或糖蜜或麥芽汁和糖蜜的混合物)量為10%% 、 鋅(氨基酸螯合鋅)濃度為4500pg/ml、 pH值為5.5的卡氏培養(yǎng)瓶 中，在30'C培養(yǎng)24小時(shí)。
4)發(fā)酵罐種子培養(yǎng)將二級(jí)種子培養(yǎng)液接種到裝有0.5~15m3 的含糖(麥芽汁或糖蜜或麥芽汁和糖蜜的混合物)量為5~25%、鋅 (氨基酸螯合鋅)濃度為4500pg/ml，力口1~5%磷酸氫氨、pH值為 4~6.5的種子發(fā)酵罐中，在26 35'C培養(yǎng)18~48小時(shí)。
5 )發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到1 ~ 300噸的含 糖(淀粉水解糖或糖蜜或淀粉水解糖和糖蜜的混合物)量為5~25 %、鋅(氨基酸螯合鋅)濃度為4500pg/ml、力口 1~5%磷酸氫氨、 pH值為4 6.5的發(fā)酵罐中，所用的營養(yǎng)源釆用流加方式，鋅釆用流加方式加入，在26 ~ 35'C培養(yǎng)14-36小時(shí)。
6) 分離釆用疊片式分離機(jī)分離再用真空轉(zhuǎn)鼓過濾或者用板框 壓濾。
7) 干燥釆用60-14(TC流化態(tài)干燥，干燥的產(chǎn)品具有活性；釆 用100~ 18(TC噴粉干燥或者用0.3~0.6Mpa的蒸汽壓力滾簡干燥， 干燥產(chǎn)品沒有活性是粉狀或小片狀；也可以釆用冷凍干燥法干燥。
8)包裝可以釆用多種形式的包裝成為高鋅含量的富鋅酵母。 鋅含量達(dá)到80000mg/kg。
實(shí)施例6:富鋅酵母產(chǎn)品的生產(chǎn)
本實(shí)施例增加一級(jí)發(fā)酵罐種子培養(yǎng)，生產(chǎn)工藝為斜面菌種培養(yǎng) — 一級(jí)液體種子培養(yǎng)—二級(jí)液體種子培養(yǎng)— 一級(jí)發(fā)酵罐種子 培養(yǎng)—二級(jí)發(fā)酵罐種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐培養(yǎng)~>分離■>干燥 —包裝。所增加的一級(jí)發(fā)酵罐種子培養(yǎng)方法和發(fā)酵罐培養(yǎng)大致相 同，其他工藝同實(shí)施例2，只是發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)選擇淀粉水解糖8% 和糖蜜作碳源5%、氨水3%作氮源、磷酸氫氨2%作磷源，培養(yǎng)液 中的鋅含量為2000pg/ml， pH值為5.2，溫度28 ~ 32。C鼓風(fēng)培養(yǎng)26 小時(shí)。
本實(shí)施例生產(chǎn)出來的高鋅含量的富鋅酵母鋅含量達(dá)到 25900mg/kg。
實(shí)施例7:富鋅酵母產(chǎn)品的生產(chǎn)
本實(shí)施例的生產(chǎn)方法同實(shí)施例2，但在干燥過程中釆用流化態(tài)干 燥的方法干燥出具有活性的高鋅含量的富鋅酵母，干燥工藝是進(jìn) 風(fēng)溫度120~140°C，出風(fēng)溫度70- 100。C，干燥20~50分鐘，水分 小于7%。
生產(chǎn)工藝
斜面菌種培養(yǎng)— 一級(jí)液體種子培養(yǎng)—二級(jí)液體種子培養(yǎng)— 發(fā)酵罐種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐培養(yǎng)—分離—干燥—包裝。本實(shí)施例生產(chǎn)出來的高鋅含量的富鋅酵母的活細(xì)胞率達(dá)到80% 以上。
綜上所述，本發(fā)明的充分利用微生物遺傳育種技術(shù)，微生物發(fā)酵
技術(shù)，根據(jù)酵母菌對(duì)鋅耐受的特性進(jìn)行篩選出耐高鋅的酵母菌種，
再進(jìn)行馴化、誘變技術(shù)選育出鋅含量高、生長速率快、產(chǎn)率高、對(duì) 鋅的利用率高的耐高鋅的富鋅酵母菌種。針對(duì)該菌種制定的特定工
藝生產(chǎn)出高鋅含量的富鋅酵母。特點(diǎn)是耐鋅性能穩(wěn)定，生長速率 快，對(duì)鋅的利用率高；生物鋅含量高，可以達(dá)到90%;該高鋅含量 的富鋅酵母可以是活性也可是沒有活性。具有更廣闊的應(yīng)用空間。
權(quán)利要求
1、一種富鋅酵母(Saccharomyces cerevisiae)Z1.4 CCTCC M205126。
2、 權(quán)利要求l所述富鋅酵母的生產(chǎn)方法，其包括菌種活化、 擴(kuò)大培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)。
3、 如權(quán)利要求2所述的方法，其還包括在發(fā)酵培養(yǎng)后對(duì)培養(yǎng)物 進(jìn)行分離、干燥和包裝。
4、 如權(quán)利要求2或3所述的方法，其中菌種活化的方法是將 所述富鋅酵母菌種接種到含糖量為5~25%、鋅濃度為 150 5000pg/ml、 pH值為4-6.5的麥芽汁固體斜面上，在26-35。C 培養(yǎng)24~48小時(shí)。
5、 如權(quán)利要求2或3所述的方法，其中擴(kuò)大培養(yǎng)包括 一級(jí)液體種子培養(yǎng)將活化的菌種接種1~4環(huán)到裝有100-500ml的含糖量為5~25%、鋅濃度為150 ~ 5000pg/ml、 pH值為4~ 6.5的麥芽汁專用培養(yǎng)瓶中，在26 35"C培養(yǎng)24-48小時(shí)。3) 二級(jí)液體種子培養(yǎng)；將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種到裝有10~ 40L的含糖量為5~25%、鋅濃度為150~500(Hig/ml、 pH值為4~ 6.5的卡氏培養(yǎng)瓶中，接種量為1%~10%，在26-35。C培養(yǎng)18~48 小時(shí)。4) 發(fā)酵罐種子培養(yǎng)將二級(jí)種子培養(yǎng)液接種到裝有0.5~15m3 的含糖量為5~25%、鋅濃度為150~5000pg/ml、補(bǔ)充適當(dāng)?shù)牡?和磷源、pH值為4-6.5的種子發(fā)酵罐中，接種量為1%~10%，在 26 35。C培養(yǎng)18~48小時(shí)。
6、如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)的 方法是發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到1~300噸的 含糖量為5~25%、鋅濃度為150~5000ng/ml、補(bǔ)充適當(dāng)?shù)牡春?磷源、pH值為4-6.5的發(fā)酵罐中，接種量為5%~15%，所用的營 養(yǎng)源采用流加方式，鋅釆用流加方式加入，在26 35'C培養(yǎng)14-36 小時(shí)。
7、 如權(quán)利要求5所述的方法，其還包括在二級(jí)發(fā)酵罐種子發(fā)酵 培養(yǎng)，培養(yǎng)方法是將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到1~300噸的含糖量 為5~25%、鋅濃度為150~500(Hig/ml、補(bǔ)充適當(dāng)?shù)牡春土自础?pH值為4~6.5的發(fā)酵罐中，接種量為1%~10%，所用的營養(yǎng)源釆 用流加方式，鋅采用流加方式加入，在26~35°。培養(yǎng)14~36小時(shí)。
8、 如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)的 方法是將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到1 300噸的含糖量為5~25%、 鐵濃度為150~500(Hig/ml、補(bǔ)充適當(dāng)?shù)牡春土自?、pH值為4 6.5 的發(fā)酵罐中，接種量為5%~15%,所用的營養(yǎng)源釆用流加方式，鋅 采用流加方式加入，在26 ~ 35。C培養(yǎng)14-36小時(shí)。
9、 如權(quán)利要求3所述的方法，其中分離采用疊片式分離機(jī)分離， 再用真空轉(zhuǎn)鼓過濾或者用板框壓濾。
10、如權(quán)利要求3所述的方法，其中，干燥a) 釆用60~ 140。C流化態(tài)干燥；或b) 釆用100- 180。C噴霧干燥；或c) 用0.3-0.6Mpa的蒸汽壓力滾簡干燥；或d) 釆用冷凍干燥法干燥。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種富鋅酵母菌株(Saccharomyces cerevisiae)Z1.4CCTCC M 205126。該菌株耐鋅性能穩(wěn)定，生長速率快，對(duì)鋅的利用率高，含鋅高可以達(dá)到80000mg/kg，其中生物鋅含量可達(dá)90％。
文檔編號(hào)C12R1/865GK101575580SQ20081010597
公開日2009年11月11日 申請(qǐng)日期2008年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月6日
發(fā)明者余明華, 俞學(xué)鋒, 娟 姚, 彥 張, 朱婭敏, 李知洪 申請(qǐng)人:安琪酵母股份有限公司