專利名稱：一種提取分離純化龍眼肉多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥材的提取分離純化方法包括超聲波提取法和酶水解去 蛋白純化法，具體涉及龍眼肉多糖的提取分離純化方法。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)多糖的提取方法是用熱水浸提法進(jìn)行提取。熱水浸提要嚴(yán)格控制好溫 度，否則高溫極易引起多糖結(jié)構(gòu)的改變。而且耗時(shí)長(zhǎng)、耗能高、提取率低。
黃壽祺等公開了一種龍眼多糖的提取工藝，包括脫脂、雙酶水解、水浸提、
酒精沉淀和干燥粉碎等步驟(專利申請(qǐng)?zhí)朇N00107538. 1)陳哲超等采用超濾膜 分離提純技術(shù)，使用l萬分子量單位的膜分離器，小于此孔徑的單糖、維生素、 微量元素和無機(jī)鹽等排入到飲料液中，獲得一種透明的營(yíng)養(yǎng)飲料；大于此孔徑 的大分子多糖就被分離出來，獲得龍眼多糖(專利申請(qǐng)?zhí)朇N200410077958.7)。 趙兵等采用超聲強(qiáng)化提取，提取液經(jīng)液 固分離后，再經(jīng)過濃縮、絮凝、過濾、 冷凍干燥后得到龍眼粗多糖(專利申請(qǐng)?zhí)朇N200610011689.3)。
常用的去除蛋白的純化方法有三氯醋酸法及sevag法。兩法相比，三氯醋 酸法有較好的脫蛋白效果，但多糖的損失率較高，因此sevag法是較常用的方 法。但是該法需要大量氯仿，毒性大，環(huán)境污染大，且脫蛋白效率低。
如何經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、低耗能地提高龍眼肉多糖的提取率，綠色環(huán)保地分離純化 龍眼肉多糖，以減少大分子蛋白質(zhì)對(duì)多糖生物活性的影響，最大程度的降低成本、提高效益是人們一直想解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是一種提取分離純化龍眼肉多糖的方法，它可以經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、 低耗能地提高龍眼肉粗多糖的提取率，綠色環(huán)保地分離純化龍眼肉粗多糖，以 減少大分子蛋白質(zhì)對(duì)多糖生物活性的影響，并且能夠?qū)崿F(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，最大程 度的降低生產(chǎn)成本、提高效益。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案
一種提取分離純化龍眼肉多糖的方法，含有下列步驟①將龍眼干果剝殼去 核，得到龍眼果肉；②將龍眼果肉加入乙醇浸泡，過濾，陰干；③將陰干的龍 眼果肉在水溶液中超聲處理，該方法還包括以下步驟
④ 超聲處理后，過濾，液渣分離，濾渣重復(fù)提取，合并濾液，濃縮，得龍 眼肉粗多糖；
⑤ 將所述龍眼肉粗多糖溶于水中，配制成龍眼肉粗多糖溶液，加入蛋白酶， 調(diào)節(jié)pH值，置于水浴鍋中酶解；
酶解完畢后，離心，去除沉淀，合并上清液，減壓濃縮，醇沉，得到的
沉淀物即是去除了蛋白質(zhì)的精制龍眼肉多糖。
所述龍眼果肉加入乙醇浸泡，是加入3. 1 4倍量(體積/重量)的75% 無水(體積/體積)乙醇浸泡7 72小時(shí)后，再過濾，陰干。
所述龍眼果肉在水溶液中用超聲處理，是以龍眼果肉與水之比為1: 20 70 (重量/體積)，除l: 20 50 (重量/體積)夕卜，每次超聲處理60 90分鐘， 重復(fù)2 5次。
所述配制成龍眼肉粗多糖溶液，是將龍眼肉粗多糖配制成濃度為1 10%(重量/體積)的溶液，進(jìn)行酶水解法除蛋白。
所述酶解，是將蛋白酶配制成1 10% (重量/體積)，置于39。C 7(TC的水 浴鍋中酶3 48小時(shí)，終止酶解反應(yīng)。
所述終止酶反應(yīng)是將酶解處理液加熱至90°C 100°C 3 10分鐘。
所述蛋白酶為木瓜蛋白酶或胰蛋白酶。
所述調(diào)節(jié)pH值，是將龍眼肉多糖溶液調(diào)到pH值6 7。
本發(fā)明的有益效果是 采用超聲浸提法進(jìn)行提取結(jié)合蛋白酶水解法純化龍眼肉多糖，龍眼肉多糖提 取率高，龍眼肉多糖含量高，且不需高溫、耗能低、提取時(shí)間短；脫蛋白效率 高，多糖損失率低。采用本發(fā)明提取分離純化后的龍眼肉多糖的得率為7.0%， 龍眼肉多糖含量為64.4%;蛋白去除率達(dá)86.7%，多糖損失率僅為4.9%。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明。
本發(fā)明所述一種提取分離純化龍眼肉多糖的方法，包括以下步驟 1、提取分離
準(zhǔn)確稱取龍眼干燥果實(shí)去皮、核后的果肉15.00克，加60毫升75%乙醇 密閉于室溫下浸潤(rùn)7小時(shí)，過濾，濾渣陰干。準(zhǔn)確稱取濾渣10. 00克，加入510 毫升水，超聲處理60分鐘，過濾，液渣分離，濾渣重復(fù)提取2次。合并濾液， 濾液經(jīng)62。C減壓濃縮，加入5毫升95%乙醇醇沉。采用真空抽濾的方法分離出 龍眼肉多糖，并通過真空干燥得到龍眼肉多糖630毫克。龍眼肉多糖得率為 6. 3%，含量為62. 1%。2、純化
準(zhǔn)確稱取干燥的龍眼肉多糖0. 10克，將其溶于10毫升水中，配制成濃度 為1%的龍眼肉多糖溶液，加入O. IO克木瓜蛋白酶，調(diào)節(jié)pH值為6，置于39"C 的水浴鍋中酶解3小時(shí)。酶解完畢后，將處理液加熱至90°C 3分鐘終止酶反應(yīng)。 于6000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，去除沉淀，合并上清液，62。C減壓濃縮，加入6 毫升95%乙醇醇沉，所得醇沉物即是去除了蛋白質(zhì)的龍眼肉多糖。蛋白去除率 達(dá)80.3%，多糖損失率為5.2%。
實(shí)施例2
1、 提取分離
準(zhǔn)確稱取龍眼干燥果實(shí)去皮、核后的果肉20.00克，加62毫升無水乙醇 密閉于室溫下浸潤(rùn)72小時(shí)，過濾，濾渣陰干。準(zhǔn)確稱取濾渣10.00克，加入 700毫升水，超聲處理90分鐘，過濾，液渣分離，濾渣重復(fù)提取5次。合并濾 液，濾液經(jīng)65。C減壓濃縮，加入6毫升95%乙醇醇沉。采用真空抽濾的方法分 離出龍眼肉多糖，并通過真空干燥得到龍眼肉多糖680毫克。龍眼肉多糖得率 為6. 8%，含量為64. 0%。
2、 純化
準(zhǔn)確稱取干燥的龍眼肉多糖1. 00克，將其溶于10毫升水中，配制成濃度 為10%的龍眼肉多糖溶液，加入1.0克木瓜蛋白酶，調(diào)節(jié)pH值為7，置于7(TC 的水浴鍋中酶解48小時(shí)。酶解完畢后，將處理液加熱至10(TC IO分鐘終止酶 反應(yīng)。于6000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，去除沉淀，合并上清液，62。C減壓濃縮， 加入15毫升95%乙醇醇沉，所得醇沉物即是去除了蛋白質(zhì)的龍眼肉多糖。蛋白 去除率達(dá)83. 5%，多糖損失率為5. 9%。實(shí)施例3
1、 提取分離
準(zhǔn)確稱取龍眼干燥果實(shí)去皮、核后的果肉18.00克，加63毫升95%乙醇 密閉于室溫下浸潤(rùn)48小時(shí)，過濾，濾渣陰干。準(zhǔn)確稱取濾渣10.00克，加入 550毫升水，超聲處理65分鐘，過濾，液渣分離，濾渣重復(fù)提取3次。合并濾 液，濾液經(jīng)65。C減壓濃縮，加入7毫升無水乙醇醇沉。采用真空抽濾的方法分 離出龍眼肉多糖，并通過真空干燥得到龍眼肉多糖700毫克。龍眼肉多糖得率 為7. 0%，含量為64. 4%。
2、 純化
準(zhǔn)確稱取干燥的龍眼肉多糖0.50克，將其溶于10毫升水中，配制成濃度 為5%的龍眼肉多糖溶液，加入0.50克木瓜蛋白酶，調(diào)節(jié)pH值為6.8，置于60 'C的水浴鍋中酶解4小時(shí)。酶解完畢后，將處理液加熱至95"C 7分鐘終止酶反 應(yīng)。于8000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，去除沉淀，合并上清液，62。C減壓濃縮，加 入10毫升95%乙醇醇沉，所得醇沉物即是去除了蛋白質(zhì)的龍眼肉多糖。蛋白去 除率達(dá)86. 7%，多糖損失率為4. 9%。
權(quán)利要求
1、一種提取分離純化龍眼肉多糖的方法，含有下列步驟①將龍眼干果剝殼去核，得到龍眼果肉；②將龍眼果肉加入乙醇浸泡，過濾，陰干；③將陰干的龍眼果肉在水溶液中超聲處理，其特征在于，該方法還包括以下步驟④超聲處理后，過濾，液渣分離，濾渣重復(fù)提取，合并濾液，濃縮，得龍眼肉粗多糖；⑤將所述龍眼肉粗多糖溶于水中，配制成龍眼肉粗多糖溶液，加入蛋白酶，調(diào)節(jié)pH值，置于水浴鍋中酶解；⑥酶解完畢后，離心，去除沉淀，合并上清液，減壓濃縮，醇沉，得到的沉淀物即是去除了蛋白質(zhì)的精制龍眼肉多糖。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述龍眼果肉加入乙醇浸泡，是加入3. 1 4倍量(體積/重量)的75% 無水(體積/體積)乙醇浸泡7 72 小時(shí)后，再過濾，陰干。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述龍眼果肉在水溶液中用超聲處理，是以龍眼果肉與水之比為1: 20 70 (重量/體積)，除1: 20 50 (重量/體積)夕卜，每次超聲處理60 90分鐘，重復(fù)2 5次。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述配制成龍眼肉粗多糖溶液，是將龍眼肉粗多糖配制成濃度為1 10%(重量/體積)的溶液，進(jìn)行酶水解法除蛋白。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述酶解，是將蛋白酶配制成1 10% (重量/體積)，置于39。C 7(TC的水浴鍋中酶3 48小時(shí)，終止酶解反應(yīng)。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述終止酶反應(yīng)是將酶解處理液加熱至9(TC 10(TC 3 10分鐘。
7、 根據(jù)權(quán)利要求l， 4， 5和6所述的方法，其特征在于，所述蛋白酶為木 瓜蛋白酶或胰蛋白酶。
8、 根據(jù)權(quán)利要求l， 4， 5， 6和7所述的方法，其特征在于，所述調(diào)節(jié)pH 值，是將龍眼肉多糖溶液調(diào)到pH值6 7。
全文摘要
一種提取分離純化龍眼肉多糖的方法。是將龍眼干燥果實(shí)去皮、核后的果肉采用超聲浸提結(jié)合酶水解進(jìn)行純化。采用本發(fā)明所述方法，龍眼肉多糖提取率高，且不需高溫、耗能低、提取時(shí)間短；脫蛋白效率高，多糖損失率低，且操作簡(jiǎn)單，減少使用化學(xué)試劑氯仿及正丁醇等有毒試劑，降低提取純化多糖成本。龍眼肉多糖得率為7.0％，龍眼肉多糖含量高達(dá)64.4％，蛋白去除率達(dá)86.7％，多糖損失率僅為4.9％。
文檔編號(hào)C12P19/00GK101440388SQ20081010743
公開日2009年5月27日 申請(qǐng)日期2008年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月30日
發(fā)明者李福森, 李雪華, 慶 肖, 琦 賈, 黃燕軍, 龍盛京 申請(qǐng)人:廣西醫(yī)科大學(xué)