專利名稱：一種應(yīng)用懸浮芯片技術(shù)檢測嗜肺軍團(tuán)桿菌方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種分子生物學(xué)檢測芯片，具體的是一種應(yīng)用懸浮芯片技術(shù) 對嗜肺軍團(tuán)桿菌進(jìn)行檢測。
背景技術(shù)：
懸浮芯片技術(shù)是將基因芯片技術(shù)與流式細(xì)胞儀技術(shù)結(jié)合產(chǎn)生的一種新技 術(shù)，是一種多重數(shù)據(jù)獲取和分析平臺，全名為"多功能多指標(biāo)同步分析體系"(Flexible Multiple Analyte Profiling, xMap)， 也稱為Multi-Analyte Suspension Array,有機(jī)整合了熒光編碼微球、激光技術(shù)、微流體技術(shù)、快速信號處理和 數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)，即保證了信號質(zhì)量，又提供高通量的新一代分子檢測技術(shù)平 臺。懸浮芯片與傳統(tǒng)的基因芯片最大不同之處在于，傳統(tǒng)的基因芯片點(diǎn)樣在 玻片或尼龍膜上，依靠坐標(biāo)定位進(jìn)行尋址，而懸浮芯片將檢測探針共價交聯(lián) 到不同的色標(biāo)微球上，根據(jù)色標(biāo)微球上所帶的熒光素進(jìn)行區(qū)分。懸浮芯片系統(tǒng)主要由三部分組成1、微球直徑5.6pm左右，由聚苯乙 烯構(gòu)成的，表面帶有約108個羧基位點(diǎn)，可與寡核苷酸探針和蛋白以肽鍵耦聯(lián); 2、熒光素微球中標(biāo)記了紅色和橙色熒光素，每種分成10個濃度梯度，將微 球分成可被識別的100種微球，當(dāng)微球被635nm激光激發(fā)后，能發(fā)射658nm 和712nm的熒光；3、檢測儀因微球直徑5.6pm，并被熒光標(biāo)記，采用流式 細(xì)胞儀技術(shù)原理進(jìn)行檢測。原理每一種色標(biāo)微球可通過羧基，與特定的分析物質(zhì)(寡核苷酸探針、 抗原、抗體等)共價結(jié)合。將標(biāo)記生物探針的微球與待測物進(jìn)行特異性的結(jié)合，再和帶有第三種熒光素的報告分子反應(yīng)，在一個反應(yīng)孔內(nèi)可同時對一個
樣本中的100種不同目的分子進(jìn)行檢測。反應(yīng)后，采用96孔板進(jìn)行進(jìn)樣。檢 測儀自動將反應(yīng)液吸起加入蠕動泵，泵入一個微細(xì)管中，在鞘液的作用下， 單排分布的微球單個通過檢測通道。檢測通道中設(shè)有兩個激光探頭， 一個探 頭可發(fā)射635nm波長的激光，可激發(fā)標(biāo)記微球的兩種熒光素，從而識別不同 的色標(biāo)微球，進(jìn)行定性檢測；另一激光探頭可激發(fā)報告分子的熒光素，通過 測定微球所帶報告分子熒光信號的強(qiáng)度，可進(jìn)行定量檢測。因此，懸浮芯片 可進(jìn)行定性定量檢測目標(biāo)分子。當(dāng)樣本中含有目的分子，目的分子與特定的 微球所帶的探針吸附在一起時，兩道激光所激發(fā)的熒光均可被檢測到；若樣 本中不含目的分子，則僅能檢測到微球所帶的熒光。通過數(shù)字信號處理器與 計算機(jī)自動統(tǒng)計軟件，分析兩道激光所激發(fā)熒光的波長和信號強(qiáng)度，從而判 斷待檢樣本中幾種至數(shù)十種檢測目標(biāo)物，并通過檢測熒光信號強(qiáng)度，對檢測 物進(jìn)行定量分析。自動加樣器依次將不同樣本加入蠕動泵中，樣本之間用一 小段氣柱分隔開，這樣在連續(xù)分析過程中不但可以區(qū)分不同樣本，可還以防 止樣本間的污染。
與其它蛋白質(zhì)和核酸檢測方法相比較，懸浮芯片具獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)
1) 應(yīng)用范圍廣微球表面的羧基可與核酸探針和蛋白分子耦聯(lián)，能對目 的核酸和蛋白分子進(jìn)行定性定量研究；
2) 敏感性高以微球作為反應(yīng)載體，增加了反應(yīng)物接觸面積；每個微球 表面帶有約108個羧基位點(diǎn)，以共價鍵方式耦聯(lián)寡核苷酸探針、抗體 或抗原，探針密度高，產(chǎn)生的信號強(qiáng)；使用熒光檢測，放大了反應(yīng)信 號，敏感性大大提高。
3) 重復(fù)性好所進(jìn)行的生物反應(yīng)是在液相環(huán)境中進(jìn)行的，利于保持核酸、蛋白等生物分子天然構(gòu)象，克服了傳統(tǒng)芯片空間效應(yīng)的影響，也更利 于探針和被檢物質(zhì)的反應(yīng)，提高了檢測的準(zhǔn)確性；4) 信噪比低在微細(xì)管中對單個微球進(jìn)行檢測，不存在本底影響檢測的 問題，無需洗脫去除本底；5) 高通量可以同時對同一樣本中的多重不同目的分子進(jìn)行定性定量分 析，即提高了檢測信息通量，又節(jié)約了樣本用量；6) 快速高效大大提高了反應(yīng)速度和檢測速度。由于所進(jìn)行的生物反應(yīng) 是在液相環(huán)境中進(jìn)行的，雜交僅需15分鐘即可完成，提高了反應(yīng)速度； 在35—60分鐘內(nèi)，可對96個不同樣本分別同時進(jìn)行多達(dá)100種指標(biāo) 的檢測；利用96孔板和自動進(jìn)樣系統(tǒng)，可連續(xù)進(jìn)行nX96個樣品的檢 測。7) 成本低制備過程無需特殊設(shè)備，只進(jìn)行羧基與氨基間的脫水成肽反 應(yīng)即可，簡單易行；由于是液體儲存方式， 一次制備可多次使用，平 均每個指標(biāo)檢測成本僅需2.5 — 5.0元；8) 易于標(biāo)準(zhǔn)化基于上述特點(diǎn)，使得該技術(shù)能夠做到標(biāo)準(zhǔn)化，易于試劑 盒的研制和推廣。目前，懸浮芯片是美國FDA唯一批準(zhǔn)用于臨床診斷(自身免疫病檢測和人類白細(xì)胞抗原分型)的生物芯片。 軍團(tuán)菌是一種急性呼吸道傳染病的病原體，主要存在于水和土壤中，可 通過供水系統(tǒng)、汽溶膠等方式傳播引起肺炎型和非肺炎型感染。軍團(tuán)菌目前 已發(fā)現(xiàn)39種及3個亞種，60個血清型，其中嗜肺軍團(tuán)桿菌是引起肺炎型感染 的重要血清型。1976年，美國費(fèi)城退伍軍人集會爆發(fā)了嗜肺軍團(tuán)桿菌感染， 221人發(fā)病，34人死亡。我國關(guān)于嗜肺軍團(tuán)桿菌感染病例時見報到，并多次 從空調(diào)冷凝水中分離出軍團(tuán)桿菌。軍團(tuán)菌對營養(yǎng)條件要求苛刻，生長緩慢，無明顯特性，因此對軍團(tuán)菌的 鑒定臨床采用綜合生物血分析，包括形態(tài)學(xué)、生化特性、遺傳學(xué)及免疫學(xué)等 信息，所以傳統(tǒng)的鑒定方法至少需要一周甚至更長時間。因此建立一種快速、 特異、敏感的檢測方法對嗜肺軍團(tuán)桿菌防治工作具有重要意義。嗜肺軍團(tuán)桿菌具一特異性保守基因巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)因子(mip) (EnglebergNC, 1989)，對此基因序列進(jìn)行分子生物學(xué)分析，可實(shí)現(xiàn)對嗜肺軍 團(tuán)桿菌在分子水平上的檢測。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的旨在提供一種檢測嗜肺軍團(tuán)桿菌的懸浮芯片。本發(fā)明的懸 浮芯片包括診斷微球和與此微球耦聯(lián)的特異性寡聚核苷酸探針，其中寡核苷 酸探針序列為嗜肺軍團(tuán)桿菌特異性基因mip的一段序列。本發(fā)明還公開了一 段寡核苷酸探針序列，該序列為5'-TCAGGTTTCACAAGTTATCCC-3'，如序 列表中序列3所示，并在5'進(jìn)行NH2-(CH2)u修飾。此外本發(fā)明的懸浮芯片還 包括 一 對特異性引物，上游引物為 mip-F:5'-AAAACTGGTAAGCCAGCAACT-3'(見序列表中序列1 );下游引物為 B-mip-R:5'-GCAAGACCTGAGGGAACATA-3'(見序列表中序列2，進(jìn)行Biotin 標(biāo)記)。本發(fā)明的另一目的在于提供上述懸浮芯片的制備方法，該方法包括以下 步驟1) 制備寡聚核苷酸探針；2) 用純水稀釋氨基修飾的探針；3) 將儲備的微球振蕩，然后轉(zhuǎn)移到棕色EP管中；4) 離心收集微球，加入MES液進(jìn)行振蕩；5) 向懸浮微球中加入上述探針，并振蕩；6) 在微球溶液中加入新配制的10mg/mlEDC，振蕩；然后進(jìn)行溫育；7) 再次向微球溶液中加入新配置的10mg/mlEDC,振蕩，然后進(jìn)行溫育；8) 向微球溶液中加0.02Q/。Tween-20，離心收集微球；9) 用0.1Q/。SDS重懸微球，離心收集微球；用TE懸浮微球；10) 用血球計數(shù)板計算微球的個數(shù)，2—8。C，避光保存。 應(yīng)用本發(fā)明的懸浮芯片檢測嗜肺軍團(tuán)桿菌是通過以下方法進(jìn)行的。 根據(jù)嗜肺軍團(tuán)桿菌巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)因子mip基因設(shè)計并合成用于PCR擴(kuò)增的特異性引物，如序列表中序列1和2所示，并對其中一條引物進(jìn)行Biotin 修飾；按常規(guī)方法制備待檢樣本基因組DNA作為模板，使用上述特異性引物 進(jìn)行PCR擴(kuò)增，同時使PCR產(chǎn)物帶上Biotin修飾；將PCR產(chǎn)物與制備的懸 浮芯片雜交，也就是與耦聯(lián)在微球上的探針進(jìn)行雜交，對雜交懸浮芯片進(jìn)行 鏈霉親和素化藻紅蛋白標(biāo)記，然后通過流式細(xì)胞儀檢測熒光信號。本發(fā)明的另一目的提供一種克服PCR假陽性的方法。本發(fā)明采用的UNG 一Taq酶體系，有效的控制了 PCR假陰性產(chǎn)生。具體方法是PCR反應(yīng)體系中， 將dTTP量減半，由dUTP替代，并加入0.05U的UNG(尿嘧啶DNA糖苷酶)。 PCR產(chǎn)物中被摻入一定量的dUTP， UNG通過打斷核酸鏈上dUTP上的糖苷 鍵，使含dUTP的核酸不能作為模板被識別。在運(yùn)行PCR程序之前先37。C溫 育5min，使UNG充分消化PCR產(chǎn)物，94匸模板變性時，UNG失活，進(jìn)行正 常PCR反應(yīng)。本發(fā)明的懸浮芯片可以對嗜肺軍團(tuán)桿菌進(jìn)行鑒定和檢測，具有高特異性、 高靈敏度、快速、低成本易于推廣等特點(diǎn)。


圖1特異性試驗(yàn)結(jié)果；具體實(shí)施方式
-為進(jìn)一步說明本發(fā)明在嗜肺軍團(tuán)桿菌檢測中的應(yīng)用，特舉以下較佳實(shí)施 例進(jìn)行說明，但本發(fā)明的應(yīng)用并不限于實(shí)施例。實(shí)施例一引物的設(shè)計和合成1) 序列獲得選取嗜肺軍團(tuán)桿特異性基因mip作為耙序列，并從GenBank 公共數(shù)據(jù)庫中獲得此基因序列，編號為Y07786;2) 設(shè)計引物采用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計引物，相關(guān)參數(shù)為Tm 值55.0。C一59.0。C， GC值40.0%—60.0% ， PCR產(chǎn)物大小為100bp— 500bp，引物大小22土3bp;3) 引物選擇將軟件輸出的引物進(jìn)行適當(dāng)?shù)氖謩诱{(diào)節(jié)，增加或減少幾個堿基，然后在GenBank進(jìn)行在線Blast比對，選取特異性高的引物， 并將其中的一條進(jìn)行5'末端Biotin標(biāo)記。上游引物序列為mip-F: 5'-AAAACTGGTAAGCCAGCAACT-3'，下游引物為B-mip-R: 5'-Biotin-GCAAGACCTGAGGGAACATA-3'，擴(kuò)增片段大小為450bp;4) 引物合成上海生工合成上游引物mip-F，大連TakaRa合成Biotin標(biāo) 記的下游引物B-mip-R。實(shí)施例二探針的設(shè)計和合成1) 序列獲得在上述擴(kuò)增片段非引物區(qū)設(shè)計探針；2) 設(shè)計探針釆用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計探針，選定Hybridization Probes命令，在Anti-sense鏈上設(shè)計探針，參數(shù)同實(shí)施例一；3) 探針選擇將軟件輸出的探針進(jìn)行適當(dāng)?shù)氖謩诱{(diào)節(jié)，增加或減少幾個 堿基，然后在GenBank進(jìn)行在線Blast比對，選取特異性高的探針，在5'末端進(jìn)行NH2-(CH2)12修飾，選定的探針序列為mip-Probe: 5'-NH2-(CH2)12-TCAGGTTTCACAAGTTATCCC-3'; 4)探針合成大連TakaRa合成上述探針。實(shí)施例三懸浮芯片的制備方法1. 用純水稀釋氨基修飾的探針到lmM(lnanomole/^il);2. 將儲備的微球振蕩20 sec;3. 取20(^1微球轉(zhuǎn)移到棕色EP管中；4. 收集微球，8000g，離心l-2min;5. 棄上清，力口入50pl 0.1 M MES(2-[N-Morpholino]ethanesulfonic acid， 2-(N-嗎啉代)乙磺酸)液pH《5，振蕩20sec;6. 向懸浮微球中加入2pllmM的探針，振蕩20sec;7. 準(zhǔn)備新鮮的 10mg/ml EDC ( l-ethyl-3-[3dimethylaminopropyl] carbodiimidehydrochloride, l-乙基-3-3-二甲基氨丙基碳化二亞胺)，用 dH20;8. 向微球溶液中加入2.5^1新配置的10mg/mlEDC，振蕩；9. 在室溫黑暗條件下溫育30min;10. 再次準(zhǔn)備新鮮的10mg/mlEDC，用dH20;11. 向微球溶液中加入2.5|11新配置的10mg/mlEDC，振蕩；12. 在室溫黑暗條件下溫育30min;13. 向微球溶液中加1.0mL0.02%Tween-20; 14.8000Xg離心l一2min，收集微球； 15.棄上清，用1.0mL0.1。/。SDS重懸微球； 16.8000Xg離心l一2min，收集微球；17. 用100^ilTE, pH=8.0，懸浮微球，18. 用血球計數(shù)板計算微球的個數(shù)19. 將微球2—8"C，避光保存?zhèn)溆谩?shí)施例四懸浮芯片快速檢測嗜肺軍團(tuán)桿菌方法1) TIANamp Bacteria DNA kit試劑盒提取待檢樣本基因組DNA。2) PCR擴(kuò)增目的片段，反應(yīng)條件如下表格1 PCR反應(yīng)體系組份加入體積10 x PCR Buffer (含MgCl2)2 pidGTP、 dCTP、 dATP (2.5mmol/L)各1.6 nldTTP、 dUTP (2.5mmol/L)各0，mip-F (1 pmol/L)1 piB-mip-R (1 (imol/L)1 pir叫DNA Polymerase (5 U/pl)0.1 piUracil掘A Gly呵lase (lU/pl)0.05所提樣本基因組DNA1 piddH208.45 pTotal20^1PCR反應(yīng)程序?yàn)?4。C變性3min;運(yùn)行35個循環(huán)94。C 30sec，53。C 30sec: 72°C 40sec;最后，72°C延伸3min。3) 雜交雜交液組成33.3^1 1.5 XTMAC(tetramethylammonium chloride, 氯化四甲銨)，5pl上述PCR產(chǎn)物，加入5000個與探針耦聯(lián)的微球，1 XTE將體積補(bǔ)充到50W。將雜交液在95-C變性4min， 52'C雜交15min 以上。4) 檢測將上述雜交后的溶液全部轉(zhuǎn)移到96孔濾板中，真空過濾收集微 球，用2ng/ml S-R-PE(Streptavidin-R-phycoerythrin，鏈霉親和素化藻紅 蛋白)重懸微球，置52t: 10min， Luminex檢測。實(shí)施例五懸浮芯片的特異性驗(yàn)證特異性試驗(yàn)采用實(shí)施例四方法，對45株菌株進(jìn)行特異性驗(yàn)證，結(jié)果顯示兩株嗜肺軍 團(tuán)桿菌呈陽性結(jié)果，其它非嗜肺軍團(tuán)桿菌均為陰性，特異性達(dá)100%。 菌株具體信息如下-表格2試驗(yàn)編號12891011121314151617181920212223名稱埃希氏大腸桿菌 埃希氏大腸桿菌埃希氏大腸桿菌埃希氏大腸桿菌埃希氏大腸桿菌 埃希氏大腸桿菌 沙門氏菌 沙門氏菌 沙門氏菌 沙門氏菌沙門氏菌 副溶血霍亂弧菌 副溶血霍亂弧菌 金黃色葡萄球菌 金黃色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 甲型溶血性鏈球 菌乙型溶血性鏈球 菌丙型溶血性鏈球肺炎克雷伯氏菌 陰溝腸桿菌 產(chǎn)氣腸桿菌枸櫞酸桿菌來源與編號ATCC 25922 ATCC 8739國家CDC分離株國家CDC分離株國家CDC分離株 國家CDC分離株ATCC 14028s 國家CDC分離株 國家CDC分離株 國家CDC分離株國家CDC分離株 ATCC33847ATCC11802ATCC6538CMCC26003CMCC26069CMCC32213CMCC32210CMCC32206CMCC46117 CMCC45301 CMCC45103CMCC48017試驗(yàn)編 號2425262728293031323334353637383940414243444546名稱臘樣芽孢桿菌 甲型副傷寒沙門氏 菌乙型副傷寒沙門氏 菌丙型副傷寒沙門氏 菌痢疾志賀氏菌 痢疾志賀氏菌 福氏志賀氏菌 鮑氏志賀氏菌 宋內(nèi)志賀氏菌 霍亂弧菌01霍亂弧菌0139 嗜肺軍團(tuán)桿菌嗜肺軍團(tuán)桿菌A型肉毒梭菌B型肉毒梭菌E型肉毒梭菌A型產(chǎn)氣莢膜B型產(chǎn)氣莢膜D型產(chǎn)氣莢膜綠膿桿菌 單增李斯特菌 小腸結(jié)腸炎耶爾森 氏菌 PCR Blank來源與編號CMCC63301 CMCC50001CMCC50094CMCC50017CMCC51197本室保 CMCC51062 CMCC51265 CMCC51334 IEM/PLA860084 本院八所贈 廣東CDC贈 廣東CDC贈62A株621株619株本室保本室保 本室保ATCC卯27本室保 CMCC52203序列表<110>中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所<120>—種應(yīng)用懸浮芯片技術(shù)檢測嗜肺軍團(tuán)桿菌方法<140><141><160>3<210> 1 <211>21 <212>DNA <213>人工序列<400> 1AAAACTGGTAAGCCAGCAACT 21<210> 2 <211>20 <212>DNA <213>人工序列<400> 2GCAAGACCTGAGGGAACATA 20<210>3 <211>21 <212> DNA <213>人工序列<400> 3TCAGGTTTC A C AAGTTATCC C 2權(quán)利要求
1.一種用于嗜肺軍團(tuán)桿菌檢測的懸浮芯片，包括診斷微球和與此診斷微球耦聯(lián)的寡聚核苷酸探針，其特征是該寡聚核苷酸探針是嗜肺軍團(tuán)桿菌特異性保守基因mip上的一段序列。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述用于嗜肺軍團(tuán)桿菌檢測的懸浮芯片，其中寡聚核苷 酸探針序列如序列表中序列3所示，并在5'進(jìn)行NH2-(CH2)12修飾。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述嗜肺軍團(tuán)桿菌檢測的懸浮芯片，其特征是該芯 片可鑒定和檢測嗜肺軍團(tuán)桿菌。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述嗜肺軍團(tuán)桿菌檢測的懸浮芯片，其特征是在于 包括一對特異性引物，引物序列如序列表中序列1和2所示，并對序列2進(jìn)行 5'Biotin修飾。
5. 權(quán)利要求1或2所述用于嗜肺軍團(tuán)桿菌檢測的懸浮芯片的制備方法，包括如下步驟制備寡聚核苷酸探針；用純水稀釋氨基修飾的探針；將儲備的微 球振蕩，然后轉(zhuǎn)移到棕色EP管中；離心收集微球，加入MES液進(jìn)行振蕩；向 懸浮微球中加入上述探針，并振蕩；在微球溶液中加入新配制的EDC溶液，振 蕩；然后進(jìn)行溫育；再次向微球溶液中加入新配置的10mg/ml EDC，振蕩，然 后進(jìn)行溫育；向微球溶液中加0.02％Tween-20，離心收集微球；用0.1％SDS重 懸微球，離心收集微球；用TE懸浮微球；用血球計數(shù)板計算微球的個數(shù)，2—8 ℃,避光保存。
6. 權(quán)利要求1或2所述用于嗜肺軍團(tuán)桿菌檢測的懸浮芯片使用方法，包括以下步驟a) 根據(jù)嗜肺軍團(tuán)桿菌mip基因設(shè)計并合成用于PCR擴(kuò)增的特異性引 物，并對其中一條引物進(jìn)行Biotin修飾；b) 按常規(guī)方法制備待檢樣本基因組DNA，并使用步驟a)中的引物對待檢樣本基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，同時使PCR產(chǎn)物帶上Biotin 修飾；c) 將步驟b)中的PCR產(chǎn)物與權(quán)利要求1中所述懸浮芯片雜交；d) 對步驟c)中雜交懸浮芯片進(jìn)行鏈霉親和素化藻紅蛋白標(biāo)記，并對其 檢測熒光信號。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述使用方法方法，其中PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系如下-表格1 PCR反應(yīng)體系組份加入體積10 x PCR Buffer (含MgCl2)2dGTP、 dCTP、 dATP (2.5mmol/L)各1.6^1dTTP、 dUTP (2.5mmol/L)各0単mipF (1 |_imol/L)B-mip-R (1 )Limol/L)1 )ilr叫DNA Polymerase (5 U/pl)0.1 piUracil-DNA GIycosylase (1U/)al)0.05 pi所提樣本基因組DNA1 piddH208.45 (ilTotalPCR反應(yīng)程序?yàn)?7°C溫育5min; 94°C變性3min;運(yùn)行35個循環(huán)94 °C 30sec，53。C 30sec， 72°C 40sec;最后，72°C延伸3min。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述使用方法，其中雜交溫度為52°C，雜交時間為大于 15min。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于嗜肺軍團(tuán)桿菌檢測的懸浮芯片及其檢測方法，該懸浮芯片包括微球載體和固定在載體上的寡聚核苷酸探針，其中該寡聚核苷酸探針是從嗜肺軍團(tuán)桿菌特異性保守基因Mip中的一段DNA序列。利用設(shè)計的引物將待檢樣品基因組DNA擴(kuò)增并標(biāo)記后，利用上述懸浮芯片進(jìn)行雜交，根據(jù)雜交熒光強(qiáng)度，可判斷待檢樣品中是否含有嗜肺軍團(tuán)桿菌。懸浮芯片檢測靈敏度高，可達(dá)到fg級基因組DNA水平，可滿足臨床樣本和環(huán)境樣本檢測需要，并具特異性高、操作簡單、成本低等特點(diǎn)，易于推廣。并采用UNG-Taq酶PCR反應(yīng)體系，大大降低了PCR假陽性結(jié)果。
文檔編號C12Q1/04GK101407840SQ200810181199
公開日2009年4月15日 申請日期2008年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月27日
發(fā)明者劉艷華, 琳 康, 王景林, 趙金銀, 姍 高 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所