專利名稱：一種提高乳酸乳球菌抵御酸脅迫的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種提高乳酸乳球菌抵御酸脅迫的方法。本發(fā)明為一種通過外源添加谷胱 甘肽從而提高乳酸乳球菌酸脅迫抗性的方法，主要包括外源谷胱甘肽的添加和 乳酸乳球菌的培養(yǎng)，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
乳酸乳球菌是一類使用廣泛的益生菌，在食品發(fā)酵行業(yè)被廣泛應(yīng)用。由于 乳酸乳球菌自身產(chǎn)乳酸，在實(shí)際發(fā)酵過程中，其產(chǎn)生的酸脅迫環(huán)境對(duì)菌體生長(zhǎng) 產(chǎn)生抑制作用。同時(shí)，在酸奶制品的貨架保存期，以及作為益生菌被食用后所
經(jīng)歷的胃液消化過程，都將使乳酸乳球菌要經(jīng)歷遠(yuǎn)低于最適生長(zhǎng)pH的酸環(huán)境， 從而影響其生命力。
研究發(fā)現(xiàn)，乳酸乳球菌胞內(nèi)谷胱甘肽含量的增加能顯著提高其對(duì)于酸脅迫 的耐受能力，但部分乳酸乳球菌本身不具備合成谷胱甘肽的能力，或合成谷胱 甘肽的能力較弱。通過在培養(yǎng)液中外源添加一定量的谷胱甘肽，提高乳酸乳球 菌胞內(nèi)谷胱甘肽濃度，從而提高乳酸乳球菌對(duì)于酸脅迫條件的適應(yīng)能力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種提高乳酸乳球菌抵御酸脅迫的方法，從而提高乳 酸乳球菌對(duì)于酸脅迫條件的適應(yīng)能力。
本發(fā)明的技術(shù)方案的詳細(xì)描述 一種提高乳酸乳球菌抵御酸脅迫的方法， 通過乳酸乳球菌的前處理過程和乳酸乳球菌的培養(yǎng)過程，在乳酸乳球菌的培養(yǎng)
過程之前在培養(yǎng)液中添加3.2 mmol/L的谷胱甘肽，從而顯著提高乳酸乳球菌菌 體在發(fā)酵過程、傳統(tǒng)保藏條件以及體內(nèi)酸環(huán)境的存活率。 所述的提高乳酸乳球菌抵御酸脅迫的方法
(1) 乳酸乳球菌的前處理過程
a) 挑乳酸乳球菌單菌落接種到LM17培養(yǎng)液中，30°C靜置培養(yǎng)過夜；
b) 將步驟a)所得培養(yǎng)液按1% v/v接種至20 mL的LM17培養(yǎng)液中，在培養(yǎng) 零時(shí)刻添加谷胱甘肽至終濃度3.2 mmol/L;
(2) 乳酸乳球菌的培養(yǎng)過程-
c) 將步驟b)所得培養(yǎng)液置于30°C靜置培養(yǎng)19 h至穩(wěn)定中后期，10000 rpm 離心5min收集菌體。
相關(guān)培養(yǎng)基-LM17培養(yǎng)基5g/L胰蛋白胨，5g/L大豆胨，5g/L牛肉膏，2.5 g/L酵母 膏，0.5g/L抗壞血酸，0.25 g/LMgS(V7H20, lg/L蔗糖，15g/L乳糖，19 g/L 磷酸甘油二鈉，pH調(diào)節(jié)至6.9。
本發(fā)明的有益效果 一種提高乳酸乳球菌抵御酸脅迫的方法，主要包括外 源谷胱甘肽的添加和乳酸乳球菌的培養(yǎng)。通過整套方法，可以在2-4天內(nèi)快速的 得到具有酸脅迫耐受能力的目的菌。谷胱甘肽的外源添加，有效提高了乳酸乳 球菌在酸脅迫條件下的生存力，減少了乳酸乳球菌在傳統(tǒng)保藏條件下的死亡率。 此外，由于谷胱甘肽對(duì)人畜安全無害并具有保健作用，這一思路可以用于奶制 品工業(yè)發(fā)酵劑的制作過程。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1
按照上文所述方法，在添加3.2 mmol/L谷胱甘肽的LM17培養(yǎng)液中，按1% (v/v)接種量接入活化的乳酸乳球菌乳脂亞種SK1生物加工過程，第2巻第2 期，2004.5，30。C靜置培養(yǎng)至穩(wěn)定中后期(19h)， 10000 rpm離心5 min收集菌 體。在pH4.0下脅迫10h后考察細(xì)胞存活率。與未添加谷胱甘肽的對(duì)照組相比， 細(xì)胞在pH4.0下的存活率由0.71%提高至11.13%，存活率提高15.7倍。
實(shí)施例2
按照上文所述方法，在添加3.2 mmol/L谷胱甘肽的LM17培養(yǎng)液中，按1% (v/v)接種量接入活化的乳酸乳球菌乳脂亞種SKll， 30°C靜置培養(yǎng)至穩(wěn)定中后期 (19 h)， 10000rpm離心5min收集菌體。在pH2.5下脅迫30 min后考察細(xì)胞存 活率。與未添加谷胱甘肽的對(duì)照組相比，細(xì)胞在pH2.5下的存活率提高至對(duì)照 組的17.5倍。
權(quán)利要求
1、一種提高乳酸乳球菌抵御酸脅迫的方法，其特征是通過乳酸乳球菌的前處理過程和乳酸乳球菌的培養(yǎng)過程，在乳酸乳球菌的培養(yǎng)過程之前在培養(yǎng)液中添加3.2mmol/L的谷胱甘肽，從而顯著提高乳酸乳球菌菌體在發(fā)酵過程、傳統(tǒng)保藏條件以及體內(nèi)酸環(huán)境的存活率。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高乳酸乳球菌抵御酸脅迫的方法，其特征是(1) 乳酸乳球菌的前處理過程a) 挑乳酸乳球菌單菌落接種到LM17培養(yǎng)液中，30。C靜置培養(yǎng)過夜；b) 將步驟a)所得培養(yǎng)液按1% Wv接種至20 mL的LM17培養(yǎng)液中，在培養(yǎng) 零時(shí)刻添加谷胱甘肽至終濃度3.2 mmol/L;(2) 乳酸乳球菌的培養(yǎng)過程c) 將步驟b)所得培養(yǎng)液置于30°C靜置培養(yǎng)19 h至穩(wěn)定中后期，10000 rpm 離心5min收集菌體。
全文摘要
一種提高乳酸乳球菌抵御酸脅迫的方法，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明為一種通過外源添加谷胱甘肽從而提高乳酸乳球菌酸脅迫抗性的方法。主要包括外源谷胱甘肽的添加和乳酸乳球菌的培養(yǎng)。通過整套方法，可以在2-4天內(nèi)快速的得到具有酸耐受能力的目的菌。谷胱甘肽的外源添加，有效提高了乳酸乳球菌在酸脅迫條件下的存活率，減少了乳酸乳球菌在發(fā)酵過程、傳統(tǒng)保藏條件以及體內(nèi)酸環(huán)境下的死亡率。此外，由于谷胱甘肽對(duì)人畜安全無害并具有保健作用，這一思路可以用于奶制品工業(yè)發(fā)酵劑的制作過程。
文檔編號(hào)C12N1/36GK101451117SQ20081024270
公開日2009年6月10日 申請(qǐng)日期2008年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月15日
發(fā)明者堵國(guó)成, 廖鮮艷, 娟 張, 峰 薛, 堅(jiān) 陳 申請(qǐng)人:江南大學(xué)