專利名稱：包含突變?；?acp硫酯酶等位基因的蕓苔屬植物的制作方法
專利說明包含突變?；?ACP硫酯酶等位基因的蕓苔屬植物 發(fā)明領(lǐng)域 本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)產(chǎn)物的領(lǐng)域，特別是包含新型種子脂類組合物的作物植物。還提供了編碼蕓苔屬脂肪酰-?；d體蛋白(ACP)硫酯酶B蛋白(FATB)的野生型和突變核酸分子，及其蛋白質(zhì)。還提供了在其基因組中包含至少三種突變fatB等位基因(在至少三個(gè)編碼不同的FATB蛋白的蕓苔屬基因中)的蕓苔屬植物、組織和種子，從而顯著的改變了種子油脂肪酸組成和譜。此外，本文還提供了用于產(chǎn)生蕓苔屬植物的方法，所述植物產(chǎn)生的種子包含具有降低水平的飽和脂肪酸的種子油，當(dāng)可以從此類種子中獲得種子油時(shí)。此類種子油不需要進(jìn)一步混合或修飾，就可以根據(jù)美國(guó)健康和人類服務(wù)部(HHS)的食品和藥品監(jiān)管局(FDA)標(biāo)注“低飽和”或含有“無飽和”。還提供了用于在蕓苔屬植物、組織或種子中，檢測(cè)一種或多種突變fatB和/或野生型FATB等位基因存在的檢測(cè)工具(試劑盒)和方法，以及用于將一種或多種突變fatB和/或野生型FATB等位基因轉(zhuǎn)移至其它蕓苔屬植物中的方法，和用于組合植物中不同的fatB和/或FATB等位基因的方法。特別地，用于組合適合數(shù)量的突變fatB等位基因的方法，所述基因編碼非功能性FATB蛋白和/或具有顯著降低的體內(nèi)活性的FATB蛋白，所述組合的方法以顯著降低了蕓苔屬種子油中積累的總飽和脂肪酸和/或特定飽和脂肪酸的相對(duì)量的方式。此外還提供了植物、或其部分、和/或其后代、種子和種子油以及本發(fā)明的方法和/或試劑盒的用途。

背景技術(shù)：
由于在人類和動(dòng)物飲食中，以及多種工業(yè)用途中廣泛使用，植物油具有日益重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。然而，這類油的脂肪酸組成通常對(duì)于多種上述用途都不是優(yōu)化的。因?yàn)槌鲇跔I(yíng)養(yǎng)和工業(yè)目的，都需要具有特定脂肪酸組成的特種油，因此，對(duì)于通過植物育種和/或通過植物生物技術(shù)的新分子工具來修飾油組成存在極大的興趣(參見例如，Scarth和Tang，2006，CropScience 461225-1236，關(guān)于蕓苔屬油的修飾作用)。
食用油的特性和健康屬性大部分取決于它們的脂肪酸組成。大多數(shù)源自經(jīng)濟(jì)植物變種的植物油主要由棕櫚酸(16:0)、硬脂酸(18:0)、油酸(18:1)、亞油酸(18:2)和亞麻酸(18:3)組成。棕櫚酸和硬脂酸分別是16和18碳長(zhǎng)的飽和脂肪酸。油酸、亞油酸和亞麻酸是18碳長(zhǎng)的不飽和脂肪酸，分別含有1、2和3個(gè)雙鍵。油酸稱為單不飽和脂肪酸，而亞油酸和亞麻酸稱為多不飽和脂肪酸。
蕓苔屬油料種，如歐洲油菜(Brassica.Napus，B.napus)和芥菜(Brassica.Juncea，Brassica.juncea)，通常稱為油菜籽油菜(rapeseed)和芥子(mustard)，是目前除大豆以外的第二大油料種子作物(FAO，2005；Raymer(2002)In J.Janick和A.Whipkey(編著)Trends in new crops andnew uses.ASHS Press，Alexandria，VA Raymer，第122-126頁)。油菜籽油通過傳統(tǒng)的蕓苔屬油料種子栽培品種(歐洲油菜、蕪菁(B.rapa)和芥菜)產(chǎn)生(Shahidi(1990)In Shahidi(編著)卡諾拉油菜and rapeseedProduction，chemistry，nutrition，and processing technology.Van NostrandReinhold，New York，第3-13頁；Sovero(1993)In J.Janick和J.E.Simon(編著)New crops.John Wiley&Sons，New York，第302-307頁)，通常具有脂肪酸組成為5％棕櫚酸(C16:0)、1％硬脂酸(C18:0)、15％油酸(C18:1)、14％亞油酸(C18:2)、9％亞麻酸(C18:3)和45％芥酸(C22:1)，以基于總脂肪酸含量的重量計(jì)(本文的后文中稱為wt％)(Ackman(1990)In Shahidi(編著)卡諾拉油菜and rapeseedProduction，chemistry，nutrition，and processing technology.Van Nostrand Reinhold，New York，第81-98頁)。芥酸是營(yíng)養(yǎng)上不理想的脂肪酸，出于食用用途已經(jīng)在蕓苔屬油中降低至非常低的水平。在種子油中，基于總脂肪酸的飽和脂肪酸的典型相對(duì)量是在約6.5％和7.5％之間，其中大部分是棕櫚酸和硬脂酸。
在加拿大，植物科學(xué)家的工作集中在創(chuàng)造所謂的“雙低”變種上，所述變種的種子油中的芥酸低，以及油提取后剩余的固體粗粉中的芥子油苷低(即，低于2wt％的芥酸含量，和每克無油粗粉中低于30微摩爾的芥子油苷含量)。這些在加拿大開發(fā)的較高質(zhì)量形態(tài)的油菜被稱為卡諾拉油菜(canola)?？ㄖZ拉油菜油的特征是相對(duì)低水平的飽和脂肪酸(平均約7wt％)，相對(duì)高水平的單不飽和脂肪酸(約61wt％)和中間水平的多不飽和脂肪酸(約32wt％)，在亞油酸(即，ω-6脂肪酸)(約21wt％)和α-亞麻酸(即，ω-3脂肪酸)(約11wt％)之間具有良好的平衡。
目前對(duì)膳食脂肪的興趣的主要原因涉及這樣的證據(jù)，所述證據(jù)將高脂肪攝入(特別是飽和脂肪)與冠心病之間相聯(lián)系。高水平的血膽固醇，特別是“壞”(低密度脂蛋白或LDL)膽固醇，構(gòu)成了冠心病的主要風(fēng)險(xiǎn)因子。一些研究提示，高單不飽和脂肪和低飽和脂肪的飲食可以降低“壞”(低密度脂蛋白或LDL)膽固醇，同時(shí)維持“好”(高密度脂蛋白或HDL)膽固醇(Nicolosi和Rogers，1997，Med.Sci.Sports Exerc.291422-1428)。
北美和歐洲的營(yíng)養(yǎng)推薦需要總脂肪攝入降低至30％或更少，以及飽和脂肪攝入降低至少于10％的總能量(21C.F.R.101.75(b)(3))(相比大多數(shù)工業(yè)國(guó)家，飽和脂肪攝入占總卡路里消耗的約15％至20％)。為了促進(jìn)消費(fèi)者覺悟，由美國(guó)健康和人類服務(wù)部(HHS)的食品和藥品監(jiān)管局(FDA)出版的現(xiàn)行標(biāo)簽指導(dǎo)條例目前要求，在每習(xí)慣消費(fèi)的基準(zhǔn)量中總飽和脂肪酸水平占1g或更少，并且不超過15％的卡路里來自飽和脂肪酸，可以獲得“低飽和脂肪”或“低飽和”標(biāo)簽(21C.F.R.101.62(c)(2))；在每習(xí)慣消費(fèi)的基準(zhǔn)量和每標(biāo)記的服務(wù)中少于0.5g飽和脂肪和少于0.5g反式脂肪酸(由植物油的(部分)氫化作用產(chǎn)生的一類不飽和脂肪酸，由于其增加冠心病的風(fēng)險(xiǎn)而認(rèn)為是不健康的，盡管是不飽和的)，可以獲得“無(或零)飽和脂肪”或“無(或零)飽和(sat)”的標(biāo)簽(21C.F.R.101.62(c)(1))。這意味著植物油的總飽和脂肪酸含量(基于油中的脂肪酸總量的飽和脂肪酸重量百分比)，即月桂酸(C12:0；十二碳酸)、肉豆蔻酸(C14:0；十四烷酸)、棕櫚酸(C16:0；十六烷酸)、硬脂酸(C18:0；十八烷酸)、花生酸(C20:0；二十烷酸)、山萮酸(C22:0；二十二烷酸)和木蠟酸(C24:0；二十四烷酸)的含量的總量，需要低于7wt％，來獲得“低飽和”標(biāo)簽和低于“3.5wt％”來獲得“無飽和”標(biāo)簽(基于15ml或14g油的基準(zhǔn)量-21C.F.R.101.12)。
與其它普遍使用的可食用植物油(例如，向日葵油(8wt％)、亞麻籽油(9wt％)、紅花油(12wt％)、玉米油(13wt％)、橄欖油(15wt％)、大豆油(15wt％)、花生油(19wt％)、棉籽油(27wt％)、棕櫚油(51wt％)和椰子油(91wt％))中的飽和脂肪酸的水平相比(來源POS PilotPlant Corporation)，卡諾拉油菜油僅含有約7wt％飽和脂肪酸。嘗試使用不同的方法進(jìn)一步降低該飽和脂肪酸的水平。
可以化學(xué)的影響植物油的修飾作用美國(guó)專利號(hào)4,948,811描述了通過化學(xué)反應(yīng)或通過物理分離飽和脂肪酸獲得的甘油三酯沙拉/烹飪油組合物，其中油的甘油三酯的脂肪酸含量包括低于約3wt％飽和脂肪酸。然而，植物油的化學(xué)修飾來降低飽和脂肪酸水平不僅比從目前公開的修飾的蕓苔屬油料種子植物(或任何其它油料種子植物)(所述植物被修飾用于提高改善的可食用內(nèi)源性植物油)中提取植物油更昂貴，而且由于潛在非故意的存在來自所使用的化學(xué)產(chǎn)品和假定的副產(chǎn)物的殘余物，還不是改善用于人類消費(fèi)的油的健康性的理想方式。
另一種修飾脂肪酸組合物的可能性是通過使用遺傳改造。例如，美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?004/0132189描述了與非轉(zhuǎn)化的對(duì)照品系中約6.0wt％的飽和脂肪酸水平相比，在共表達(dá)披針葉萼距花(Cuphea pullcherima)β-酮脂酰-?；d體蛋白合成酶I和IV序列以及紅花δ-9去飽和酶的蕓苔屬品系中，飽和脂肪酸水平的降低至約3wt％和低于3.4wt％。WO06/042049描述了在表達(dá)δ-9去飽和酶基因的種子中，具有“無飽和脂肪酸”或降低飽和水平的脂肪酸的蕓苔屬植物。然而，商業(yè)化的轉(zhuǎn)基因方法的缺點(diǎn)是需要法規(guī)批準(zhǔn)，和在世界不同區(qū)域不同的接受程度。
植物油的脂肪酸組成還可以通過傳統(tǒng)的育種技術(shù)來修飾。這些技術(shù)利用現(xiàn)有的種質(zhì)作為影響脂肪酸組成的天然發(fā)生突變的來源。例如，Raney等人(1999，In Proc.10th Int.Rapeseed Cong.New horizons for an oldcrop，Canberra，Australia)描述了從歐洲油菜、芫菁和芥菜的種間雜交來源的育種群體，其中表達(dá)為肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、花生酸、山萮酸和木蠟酸的總量的飽和脂肪酸的水平降低至低于6wt％，且其中表達(dá)為肉豆蔻酸、棕櫚酸和硬脂酸的總量的飽和脂肪酸的水平降低至低于5wt％。
已經(jīng)嘗試增加可利用的突變庫，從所述庫中通過使用誘變劑來選擇理想的特征。例如，WO 91/15578描述了基于自花授粉的油菜植物能夠形成產(chǎn)油的油菜籽油菜，所述油菜籽油菜油具有以棕櫚酸和硬脂酸的形式，不超過4wt％的飽和脂肪酸含量，所述油菜籽油菜通過化學(xué)誘變?nèi)缓笸ㄟ^選擇形成。
在植物中，脂肪酸從頭合成專一的分布于質(zhì)體的基質(zhì)中，其中在延伸循環(huán)的過程中，?；溑c可溶性的?；d體蛋白(ACP)共價(jià)結(jié)合?？梢酝ㄟ^將酰基轉(zhuǎn)移至甘油-3-磷酸上終止碳鏈延長(zhǎng)，從而將其保留在質(zhì)體的、“原核的”脂類生物合成通路中?？蛇x的，通過水解新形成的酰基-ACP成為游離脂肪酸和ACP，特定的硫酯酶可以攔擊原核的(質(zhì)體的)通路。然后，游離的脂肪酸存在于質(zhì)體中，供應(yīng)細(xì)胞質(zhì)的“真核”脂類生物合成通路。后者位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，負(fù)責(zé)磷脂、甘油三酯和其它中性脂類的形成。因此，通過水解酰基-ACP和釋放脂肪酸，酰基-ACP硫酯酶催化了植物細(xì)胞中真核脂類生物合成通路中的第一個(gè)限速步驟，在兩條通路之間從頭合成脂?；姆植贾邪l(fā)揮關(guān)鍵作用(

和Frentzen，1988，Planta176506-512；Browse和Somerville，1991，Annu Rev Plant Physiol PlantMol Biol 42467-506；Gibson等人，1994，Plant Cell Environ 17627-637)。
Jones等人(1995，Plant cell 7359-371)和Voelker等人(1997，PlantPhysiology 114，669-677)描述了高等植物中的兩種不同但相關(guān)的硫酯酶基因族，名為FATA和FATB?？梢酝ㄟ^序列比較和/或通過其底物特異性/偏愛來區(qū)分這兩類硫酯酶族。FATA硫酯酶(也稱為I類硫酯酶)表現(xiàn)出對(duì)C18:1?；?或油酰基-ACP明確的偏愛，對(duì)C18:0酰基-或C16:0?；?ACP只有極小活性(即，?；珢坌允?8:1＞＞18:0＞＞16:0)。相反，F(xiàn)ATB成員(也稱為II類硫酯酶)偏愛飽和的?；?ACP基作為底物，底物鏈長(zhǎng)度從C8至C18?；?ACP之間急劇的變化(Mayer和Shanklin，2005，J.Biol.Chem.280(5)3621-3627)。此外，F(xiàn)ATB成員還可以進(jìn)一步分為兩種功能群。一些FATB酶對(duì)在C8至C14范圍內(nèi)的飽和酰基-ACP特異(中等-鏈?；?ACP偏愛的硫酯酶)，發(fā)現(xiàn)存在于生產(chǎn)中等鏈的物種中，表達(dá)限于生產(chǎn)中等鏈的組織中。第二種FATB群的酶偏愛C14至C18?；?ACP(主要是棕櫚酰-ACP，例如具有偏愛性為C16:0＞C18:1＞C18:0的酶；長(zhǎng)鏈酰基-ACP偏愛性的硫酯酶)，可能存在于所有主要的植物部分中，不限于生產(chǎn)中等鏈的物種(Jones等人，1995，Plant cell 7359-371)。為何植物具有這些不同類型的硫酯酶，及其各自的作用，仍然大部分不清楚。
FATA基因分離自多種植物物種中，包括蕓苔屬物種。例如，美國(guó)專利號(hào)5,530,186、5,530,186和5,945,585描述了來自大豆的FATA基因；Hellyer等人，(1992，Plant Mol.Biol.20763-780)描述了來自歐洲油菜的FATA酶；Loader等人，(1993，Plant Mol.Biol.23(4)769-778)描述了利用源自歐洲油菜油?；?ACP硫酯酶蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)的寡核苷酸，從歐洲油菜的胚cDNA文庫中，對(duì)兩種酰基-ACP硫酯酶克隆的分離和表征；以及Mandal等人，(2000，Bioch.Soc.Transactions 28(6)967-968)描述了從芥菜中克隆?；?ACP硫酯酶基因序列，所述序列顯示出與來自不同物種的FATA基因具有同源性。
如以下參考文獻(xiàn)所述，從多種生產(chǎn)中等鏈的植物物種中分離FATB基因，所述基因編碼對(duì)C8至C14范圍的飽和?；?ACP特異性的FATB酶(中等鏈?；?ACP偏愛性硫酯酶) WO91/16421描述了從加州月桂(Umbellularia californica)中分離月桂酰(C12:0)-ACP-偏愛的硫酯酶，從樟腦(萼距花(Cuphea hookeriana))中分離C10:0酰基-ACP-偏愛的硫酯酶，和從紅花(Carthamus tinctorius)中分離硬脂酰(C18:0)-ACP-偏愛的硫酯酶，以及在蕓苔屬種子中表達(dá)加州月桂硫酯酶，這導(dǎo)致與非轉(zhuǎn)基因蕓苔屬種子中的水平相比，獲得升高水平的月桂酸(laurate)。
WO92/20236描述了C8:0至C14:0?；?ACP-偏愛的硫酯酶的分離，以及在擬南芥屬(Arabidopsis)和蕓苔(Brassica campestris)中表達(dá)來自加州月桂的月桂酰(C12:0)-ACP-偏愛的硫酯酶，獲得升高水平的月桂酸。
Voelker等人(1992，Science 25772-74)描述了在通常不積累月桂酸的擬南芥的種子中表達(dá)編碼來自加州月桂的月桂酰(C12:0)-ACP硫酯酶的FATB cDNA(Uc FATB1)，所述加州月桂是在種子油中積累癸酸(C10:0)和月桂酸(C12:0)的物種，所述表達(dá)導(dǎo)致在所述擬南芥的成熟種子中積累月桂酸。Voelker等人(1996，Plant J.9229-241)描述了將相同的FATB轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)化到歐洲油菜中，獲得月桂酸的積累至接近60mol％的甘油三酯?；?。
Eccleston和Ohlrogge(1998，Plant cell 10613-621)描述了在歐洲油菜種子中表達(dá)來自加州月桂的C12:0?；?ACP硫酯酶，獲得含有1.8mol％至59.6mol％月桂酸(C12:0)的種子油。
WO94/10288描述了分離C8:0至C10:0?；?ACP-偏愛的硫酯酶。
Martini等人(1995，In Proc.9th Int.Rapeseed Cong，Cambridge，UK，第461-463頁)描述了將來自披針葉萼距花的兩種FATB基因，分別轉(zhuǎn)化歐洲油菜，獲得了在蕓苔屬種子油中低水平積累辛酸(C8:0)和癸酸(C10:0)。
Dehesh等人(1996，Plant J.9(2)167-172)描述了在轉(zhuǎn)基因卡諾拉油菜的種子中表達(dá)來自墨西哥灌木萼距花(Cuphea hookeriana)的FATB cDNA(Ch FATB2)，所述墨西哥灌木萼距花在其種子油中積累達(dá)75mol％辛酸(C8:0)和癸酸(C10:0)，所述卡諾拉油菜通常不積累這些脂肪酸，所述表達(dá)獲得了辛酸(C8:0)、癸酸(C10:0)和月桂酸(C12:0)分別積累至11、27和2mol％。
從多種植物物種中分離了FATB基因，所述基因編碼特異性針對(duì)/偏愛在C14至C18范圍內(nèi)的飽和?；?ACP(長(zhǎng)鏈?；?ACP偏愛性的硫酯酶)的FATB酶 WO95/13390描述了從韭蔥、芒果、榆樹和樟腦中分離棕櫚酰(C16:0)-ACP硫酯酶序列，及其通過遺傳轉(zhuǎn)化在大豆和卡諾拉油菜中增加和降低飽和脂肪酸的水平的用途。
Jones等人(1995，Plant cell 7259-371)描述了在轉(zhuǎn)基因歐洲油菜植物中表達(dá)來自樟腦的棕櫚酰(C16:0)-ACP硫酯酶cDNA(Ch FATB1)，導(dǎo)致棕櫚酸(C16:0)水平從6mol％增加至35mol％。
Voelker等人(1997，Plant Physiol.114669-677)描述了在歐洲油菜種子中表達(dá)來自肉豆蔻(Myristica fragrans)的C14:0至C18:0?；?ACP硫酯酶，導(dǎo)致種子油富集C14至C18飽和脂肪酸，所述肉豆蔻主要積累含有肉豆蔻酸(14:0)的油。
Voelker等人(1997，Plant Physiol.114669-677)還描述了在歐洲油菜種子中表達(dá)來自榆樹(美洲榆(Ulmus americana))的C10:0至C16:0?；?ACP硫酯酶，導(dǎo)致種子油富集C10至C18飽和物，主要是棕櫚酸酯(C16:0)、肉豆蔻酸酯(C14:0)和癸酸酯(C10:0)，所述榆樹主要積累含有癸酸酯(10:0)的油。
WO96/23892描述了來自Cuphea palustris、樟腦和肉豆蔻的肉豆蔻酰(C14:0)-ACP硫酯酶序列，及其在植物細(xì)胞中生產(chǎn)肉豆蔻酸的用途。
WO96/06936描述了大豆和卡諾拉油菜棕櫚酰(C16:0)-ACP硫酯酶cDNA及其通過遺傳轉(zhuǎn)化在增加和降低大豆和卡諾拉油菜的飽和脂肪酸水平中的用途。


等人(2000，Plant Physiol 123637-643)描述了擬南芥的長(zhǎng)鏈酰基-ACP硫酯酶cDNA(AtFATB1)在種子特異性啟動(dòng)子控制下，在擬南芥中的過表達(dá)，導(dǎo)致在種子中大量棕櫚酸(C16:0)的積累(從野生型對(duì)照中10mol％至38.6mol％)。擬南芥FATB1 cDNA在花椰菜花葉病毒35S啟動(dòng)子控制下的反義表達(dá)導(dǎo)致種子棕櫚酸含量(從野生型對(duì)照的11mol％至6mol％)和花棕櫚酸含量的強(qiáng)烈降低，在葉和根脂肪酸中僅有細(xì)微的改變。
Bonaventure等人(2003，Plant Cell 151020-1033)描述了在FATB基因中具有T-DNA插入的擬南芥突變體的甘油脂的棕櫚酸酯(C16:0)含量(在擬南芥中存在兩種FATA基因，但是僅有一個(gè)FATB基因；參見Mekhedov等人2000，Plant Physiol.122389-402；和Beisson等人2003，Plant Physiol.132681-697)在葉中降低了42％，在花中降低了56％，在根中降低了48％，在種子中降低了56％。此外，硬脂酸(C18:0)在葉中降低了50％，在種子中降低了30％。在突變體中，生長(zhǎng)速率顯著降低，突變植物產(chǎn)生具有低活力、降低的發(fā)芽和改變的種子形態(tài)的種子，表示FATB對(duì)植物生長(zhǎng)和種子發(fā)育是關(guān)鍵的。
Bonaventure等人(2004，Plant Physiol 1351269-1279)描述了在轉(zhuǎn)基因FATB敲除的突變擬南芥植物的葉中，脂肪酸合成的速率增加了40％，導(dǎo)致從質(zhì)體中輸出與野生型幾乎相同量的棕櫚酸，但是油酸輸出增加約55％。
Pandian等人(2004，poster abstract，4th Int.Crop Sci.Cong.)報(bào)道了從歐洲油菜(GenBank登錄號(hào)DQ847275)和芥菜(GenBank登錄號(hào)DQ856315)中分離全長(zhǎng)FATB基因序列，構(gòu)建逆向重復(fù)基因沉默構(gòu)建體(在種子特異性啟動(dòng)子的控制下)(所述構(gòu)建體具有部分歐洲油菜序列的740bp保守片段，所述片段與芥菜和擬南芥的FATB序列享有超過90％序列同源性，而與這三個(gè)物種的FATA基因的同源性少于40％)，以及轉(zhuǎn)化擬南芥、歐洲油菜和芥菜。目標(biāo)是創(chuàng)造在種子油中具有降低的棕櫚酸含量的轉(zhuǎn)基因植物。關(guān)于該基因沉默構(gòu)建體對(duì)最終的種子油組成的影響(未公開任何結(jié)果)，或關(guān)于產(chǎn)生具有低飽和種子油的蕓苔屬植物的替代方法，公開文本未作任何教導(dǎo)。
Mayer和Shanklin(2005，J.Biol.Chem.280(5)3621-3627)描述了擬南芥FATB蛋白的結(jié)構(gòu)模型，其中N-末端結(jié)構(gòu)域含有影響特異性的殘基(還參見Mayer和Shanklin，2007，BMC Plant Biology 7(1)1-11)，C-末端結(jié)構(gòu)域含有催化殘基。
盡管事實(shí)是本領(lǐng)域可獲得一些FATB基因的序列，但是仍然需要全面的理解在種子油中飽和脂肪酸生產(chǎn)和積累中以及在開發(fā)的方法(特別是非轉(zhuǎn)基因方法)中所涉及的基因和酶，所述方法在對(duì)植物生長(zhǎng)和發(fā)育不具有負(fù)面影響的條件下，用于降低種子中總飽和脂肪酸和/或特定飽和脂肪酸的相對(duì)量。到目前為止，本領(lǐng)域沒有獲得(非轉(zhuǎn)基因的)蕓苔屬作物植物，所述植物產(chǎn)生的種子油含有顯著低于7％飽和脂肪酸。因此，仍然需要用于開發(fā)此類植物和油的工具和方法，如后文中在詳細(xì)描述、附圖、實(shí)施例和權(quán)利要求中所述。
發(fā)明概述 發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，歐洲油菜植物包含6種不同的FATB基因，通過控制在種子中“功能性表達(dá)的”FATB基因/等位基因(即，獲得功能性(生物學(xué)活性)FATB蛋白)的數(shù)量和/或類型，可以控制蕓苔屬植物，特別是在所述蕓苔屬植物的種子油中的飽和脂肪酸水平。通過組合6個(gè)FATB基因(“fatB等位基因”)的突變等位基因中的最少數(shù)量，同時(shí)維持最低數(shù)量的野生型FATB等位基因，獲得最低水平的功能性FATB蛋白，可以修飾種子油中的飽和脂肪酸的水平，特別是顯著降低飽和脂肪酸(特別是棕櫚酸的量)的相對(duì)量。認(rèn)為需要最低數(shù)量的野生型FATB等位基因，來維持特定組織中最低量的飽和脂肪酸和/或特定飽和脂肪酸的生產(chǎn)，從而確保正常的植物生長(zhǎng)和種子發(fā)育。
因此，在第一個(gè)方面，本發(fā)明在一個(gè)實(shí)施方案中提供了在其基因組中包含至少三個(gè)突變FATB等位基因的蕓苔屬植物(及其部分，例如種子)，其中突變FATB等位基因是至少三個(gè)不同的FATB基因的等位基因，所述FATB基因選自FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3，且其中所述植物的種子產(chǎn)生這樣的種子油，所述種子油具有等于或少于6wt％、5wt％、4wt％或3.5wt％(例如少于或等于3wt％、2wt％或1wt％)飽和脂肪酸，這是基于種子油中脂肪酸的總量。
在另一個(gè)方面，發(fā)明提供了編碼野生型和/或突變FATB蛋白質(zhì)，及其片段的(分離的)核酸序列，以及利用這些核酸序列來改善蕓苔屬種子油組成的方法。還提供了蛋白質(zhì)本身及其用途。
本發(fā)明還涉及復(fù)數(shù)形式的蕓苔屬種子，涉及蕓苔屬植物和植物部分，其包含至少三個(gè)(突變)fatB等位基因，從而與包含編碼相應(yīng)的功能蛋白的FATB等位基因的種子、植物和組織相比，具有顯著降低量的功能性FATB蛋白。多種種子包含種子油，所述種子油具有修飾的相對(duì)量和/或組成的飽和脂肪酸。在一個(gè)方面，與源自缺少(至少3個(gè))突變fatB等位基因(即，相反包含野生型FATB等位基因)的種子的種子油相比，特別是棕櫚酸(C16:0)的量是顯著降低的。
在其它方面，發(fā)明涉及這樣的種子油，以及種子油的用途，所述種子油具有修飾的相對(duì)量和/或組成的飽和脂肪酸，所述種子油可以通過從根據(jù)本發(fā)明的蕓苔屬植物收獲種子，并從種子提取油來獲得，或者通過從復(fù)數(shù)形式的根據(jù)本發(fā)明的蕓苔屬種子中提取來獲得。
在發(fā)明的其它方面，提供了用于產(chǎn)生和選擇植物、植物部分和種子的方法，所述植物、植物部分和種子含有至少三個(gè)此類突變fatB等位基因，所述等位基因存在于基因組的至少3個(gè)不同的基因座上(即，在來自至少3個(gè)不同F(xiàn)A TB基因的至少3個(gè)不同基因座上，所述基因選自FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3)，并且所述方法用于在植物或植物部分中區(qū)分突變fatB等位基因和野生型FATB等位基因的存在。因此，提供的方法(例如，誘變和/或標(biāo)記物輔助選擇)用于產(chǎn)生和/或鑒別fatB等位基因，或包含此類等位基因的植物或植物部分，并且用于在單株植物中組合合適數(shù)量的fatB等位基因和/或不同類型的fatB等位基因，從而顯著降低該植物的種子油的飽和脂肪酸水平。
還提供使用發(fā)明的植物、眾多種子、植物部分等的方法，用于從壓碎的蕓苔屬種子中獲得“低飽和”或“無飽和”種子油。如本文中使用的，“植物產(chǎn)物”包括源自發(fā)明的植物的任何對(duì)象，包括植物部分，例如種子、種子粗粉、種子餅、種子脂肪或油。



圖1顯示了實(shí)施例3的半定量RT-PCR的結(jié)果的圖。顯示了種子(基于10ng RNA)中每種FATB基因的時(shí)間分布(開花后11、21和34天)(X軸)和表示為基因組DNA的量(以ng)的表達(dá)水平(Y軸)，所述基因組DNA的量產(chǎn)生與FATB基因特異性RT-PCR產(chǎn)物的條帶密度可比較的條帶密度。
圖2FATB-A1基因(含有內(nèi)含子)的示意圖，所述基因編碼來自春油菜(S)歐洲油菜的野生型FATB-A1蛋白(SEQ ID NO13) 圖3FATB-A2基因(含有內(nèi)含子)的示意圖，所述基因編碼來自春油菜(S)歐洲油菜的野生型FATB-A1蛋白(SEQ ID NO15) 圖4FATB-A3基因(含有內(nèi)含子)的示意圖，所述基因編碼來自春油菜(S)歐洲油菜的野生型FATB-A1蛋白(SEQ ID NO17) 圖5FATB-C1基因(含有內(nèi)含子)的示意圖，所述基因編碼來自春油菜(S)歐洲油菜的野生型FATB-A1蛋白(SEQ ID NO19) 圖6FATB-C2基因(含有內(nèi)含子)的示意圖，所述基因編碼來自春油菜(S)歐洲油菜的野生型FATB-A1蛋白(SEQ ID NO21) 圖7FATB-C3基因(含有內(nèi)含子)的示意圖，所述基因編碼來自春油菜(S)歐洲油菜的野生型FATB-A1蛋白(SEQ ID NO23) 在圖2-7中，用灰色框表示外顯子，內(nèi)含子是位于外顯子之間的水平線；用垂直線表示在實(shí)施例(如實(shí)施例所述，根據(jù)其分別的“FATB-Xx-EMSxx”名稱，命名為“EMSxx”)中描述的突變的位置；用FATB基因示意圖下方的垂直線表示具有SEQ ID NO25和28的FATB特異性探針的長(zhǎng)度和位置；通過箭頭表示FATB特異性引物(根據(jù)它們各自的SEQ ID NOxx，命名為“ID xx”)的位置；刻度線表示各FATB基因的長(zhǎng)度。
圖8圖顯示了在蕓苔屬植物的純合狀態(tài)下，不存在至存在4個(gè)突變FATB等位基因，與蕓苔屬植物的種子油中總飽和脂肪酸(即，C14:0、C16:0、C18:0、C20:0、C22:0和C24:0脂肪酸)的水平(基于脂肪酸總量的重量百分比)之間的相關(guān)性。分析的蕓苔屬植物是包含3或4個(gè)突變FA TB等位基因的蕓苔屬植物的后代植物，所述突變等位基因即表23中顯示的FATB-AX-EMSY或FATB-CX-EMSY等位基因，表示為雜合子狀態(tài)。突變FATB等位基因被稱為“aX-Y”和“cX-Y”或稱為“aX”和“cX”；野生型FATB等位基因被稱為“AX”和“CX”。
常規(guī)定義 “飽和低(Low in saturates)”或“低飽和(low sats)”油在本文中指基于油中的總wt％脂肪酸，種子來源的油含有(平均)低于7wt％的總飽和脂肪酸。低飽和種子油的wt％飽和脂肪酸可以等于或少于6wt％、5wt％、4wt％，但高于3.5wt％(例如3.6wt％)。
“無飽和(no saturates)”或“無飽和(no sats)”油在本文中指基于油中的總wt％脂肪酸，種子來源的油含有(平均)低于3.6wt％的總飽和脂肪酸。無飽和種子油的wt％飽和脂肪酸可以等于或少于3.5wt％、3.0wt％、2.5wt％、2.0wt％、1.5wt％或1wt％。
“作物植物”指作為作物栽培的植物物種，例如歐洲油菜(AACC，2n＝38)、芥菜(AABB，2n＝36)、埃塞俄比亞芥(Brassica carinata)(BBCC，2n＝34)、蕪青(Brassica rapa)(同義詞，蕓苔(Brassica campestris))(AA，2n＝20)、甘藍(lán)(Brassica oleracea)(CC，2n＝18)或黑芥(Brassica nigra)(BB，2n＝16)。定義沒有涵蓋草，例如擬南芥(Arabidopsis thaliana)。
術(shù)語“核酸序列”(或核酸分子)指單鏈或雙鏈形式的DNA或RNA分子，特別是編碼根據(jù)發(fā)明的蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)片段的DNA?！皟?nèi)源性核酸序列”指在植物細(xì)胞內(nèi)的核酸序列，例如存在于蕓苔屬細(xì)胞的核基因組中的FA TB基因的內(nèi)源性等位基因。
術(shù)語“基因”意指包含在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄成RNA分子(例如，前mRNA，包含內(nèi)含子序列，然后被剪接成成熟的mRNA)的區(qū)域(被轉(zhuǎn)錄區(qū))的DNA序列，其與調(diào)控區(qū)(例如啟動(dòng)子)有效的連接。因此，基因可以包含一些有效的連接的序列，例如啟動(dòng)子、包含例如翻譯起始涉及的序列的5’前導(dǎo)序列，(蛋白質(zhì))編碼區(qū)(cDNA或基因組DNA)和包含例如轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)的3’非翻譯序列。“內(nèi)源性基因”用于與“外來基因”、“轉(zhuǎn)基因”或“嵌合基因”區(qū)分，指來自特定植物屬、物種或變種的植物的基因，不是通過轉(zhuǎn)化引入植物的(即，不是“轉(zhuǎn)基因”)，而是通常存在于所述植物屬、物種或變種的植物中的，或者是從其通常存在的另一種植物屬、物種或變種的植物中，通過普通的育種技術(shù)或通過體細(xì)胞雜交(例如，通過原生質(zhì)體融合)，引入到植物中的。相似的，基因的“內(nèi)源性等位基因”不是通過植物轉(zhuǎn)化引入到植物或植物組織中的，而是例如通過植物誘變和/或選擇產(chǎn)生的，或通過篩選天然的植物群體獲得的。
“表達(dá)基因”或“基因表達(dá)”指這樣的過程，其中與合適的調(diào)控區(qū)(特別是啟動(dòng)子)有效連接的DNA區(qū)域，轉(zhuǎn)錄成RNA分子。然后，RNA分子在細(xì)胞內(nèi)繼續(xù)加工(通過轉(zhuǎn)錄后過程)，例如，通過RNA剪接和翻譯起始，翻譯成氨基酸鏈(多肽)，并且通過翻譯終止密碼子結(jié)束翻譯。術(shù)語“功能性表達(dá)”在本文中用于表示生產(chǎn)了功能性蛋白質(zhì)，術(shù)語“非功能性表達(dá)”表示生產(chǎn)的蛋白質(zhì)具有降低的或沒有功能(生物學(xué)活性)，或者未生產(chǎn)蛋白質(zhì)(也參見下文)。
術(shù)語“蛋白質(zhì)”或“多肽”可互換的使用，指由氨基酸鏈構(gòu)成的分子，不涉及特殊的作用模式、大小、3維結(jié)構(gòu)或起源。因此，F(xiàn)ATB蛋白的“片段”或“部分”也可以稱為“蛋白質(zhì)”?！胺蛛x的蛋白質(zhì)”用于指不再位于其天然環(huán)境中的蛋白質(zhì)，例如在體外或在重組的細(xì)菌或植物宿主細(xì)胞中?！懊浮笔前复倩钚缘牡鞍踪|(zhì)，例如功能性FATB蛋白，其能夠水解底物脂肪酰-ACP成為游離脂肪酸和ACP(EC號(hào)3.1.2.)。
術(shù)語“靶向肽”或“轉(zhuǎn)運(yùn)肽”指將蛋白質(zhì)靶向到胞內(nèi)細(xì)胞器例如質(zhì)體的氨基酸序列。野生型FATB蛋白質(zhì)在其N-末端包含質(zhì)體靶向肽(或質(zhì)體轉(zhuǎn)運(yùn)肽)。
“成熟蛋白”或“成熟FATB蛋白”指沒有質(zhì)體轉(zhuǎn)運(yùn)肽的功能性FATB酶?！扒绑w蛋白”指具有其轉(zhuǎn)運(yùn)肽的成熟蛋白。
“FATB基因”在本文中指編碼脂肪酰-ACP硫脂酶II型蛋白(即，F(xiàn)ATB蛋白)的核酸序列。功能性“FATB蛋白“具有脂肪酰ACP硫酯酶活性，即，它能夠水解脂肪酰-ACP底物，優(yōu)選的飽和脂肪酰-ACP底物(例如，棕櫚酰-ACP；C16:0-ACP)，成為游離脂肪酸(例如，C16:0)和ACP，這可以是由生物學(xué)測(cè)定來測(cè)試。為了確定特定FATB基因/蛋白質(zhì)的功能和/或官能性，可以使用例如Salas和Ohlrogge(2002，Archives ofBiochemistry and Biophysics 40325-34)中描述的細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)或Mayer和Shanklin(2007，BMC Plant Biology 7(1)1-11)中描述的基于瓊脂平板的比色篩選硫酯酶活性。為了確定植物或植物組織中的整體FATB活性，可以對(duì)植物提取物實(shí)施脂肪酰-ACP水解測(cè)定，如Bonaventure等人(2003，Plant Cell 151020-1033)以及Eccleston和Ohlrogge(1998，Plant Cell 10613-622)中描述的。
如本文中使用的，術(shù)語“等位基因”意指特定基因座的基因的任何一種或多種替換形式。在生物體的二倍體(雙二倍體)細(xì)胞中，給定基因的等位基因位于染色體的特定位置或基因座(基因座的復(fù)數(shù))上。一對(duì)等位基因存在于成對(duì)同源染色體的每條染色體上。
如本文中使用的，術(shù)語“同源染色體”意指這樣的染色體，所述染色體含有相同生物學(xué)特征的信息，在相同基因座上含有相同的基因，但可能是這些基因的不同等位基因。同源染色體是在減數(shù)分裂過程中成對(duì)的染色體?！胺峭慈旧w”代表了生物體的所有生物學(xué)特征，形成一組，而細(xì)胞內(nèi)的組數(shù)被稱為倍性。二倍體生物含有兩組非同源染色體，其中每組同源染色體繼承自不同的親本。在雙二倍體物種中，實(shí)質(zhì)上存在兩組二倍體基因組，從而將兩組基因組的染色體稱為部分同源染色體(相似的，兩組基因組的基因座或基因被稱為部分同源基因座或基因)。二倍體或雙二倍體的植物品種在特定的基因座可以包含大量的不同等位基因。
如本文中使用的，術(shù)語“雜合”意指當(dāng)分別位于細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的成對(duì)同源染色體上的特定基因座中存在兩個(gè)不同的等位基因時(shí)所存在的遺傳條件。相反的，如本文中使用的，術(shù)語“純合”意指當(dāng)分別位于細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的成對(duì)同源染色體上的特定基因座中存在兩個(gè)相同的等位基因時(shí)所存在的遺傳條件。
如本文中使用的，術(shù)語“基因座(復(fù)數(shù)基因座)”意指染色體上的一個(gè)或多個(gè)特定位置，或位點(diǎn)，其中發(fā)現(xiàn)了例如基因或遺傳標(biāo)記。例如“FATB-A1基因座”指在A基因組的染色體上發(fā)現(xiàn)FATB-A1基因(和兩個(gè)FATB-A1等位基因)的位置。
無論何時(shí)，當(dāng)涉及發(fā)明的“植物”或“多種植物”時(shí)，可以理解除非另外指明，本文還涵蓋了植物部分(細(xì)胞、組織或器官、種子、已分離的部分如根、葉、花、花粉等)，保留了親本的區(qū)別特征(特別是種子油組成)的植物后代，例如通過自交或雜交獲得的種子(如，雜交種子(通過雜交兩株近交親本系獲得的))，從其衍生的雜交植物和植物部分。
“分子測(cè)定”(或測(cè)試)指(直接或間接)表示在一個(gè)或多個(gè)FATB基因座(即，在基因座FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和/或FATB-C3中的一個(gè)或多個(gè))上一種或多種特定FATB等位基因的存在或缺失的測(cè)定。在一個(gè)實(shí)施方案中，允許測(cè)定特定的(野生型或突變)等位基因在任何單個(gè)植物的基因座上是純合還是雜合。
如本文中使用的，術(shù)語“野生型FATB”(例如，野生型FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2或FATB-C3)意指，在蕓苔屬植物中發(fā)現(xiàn)的天然發(fā)生的等位基因，其編碼功能性FATB蛋白(例如，分別是功能性FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2或FATB-C3)。相反，“突變FATB”(例如，突變FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2或FATB-C3)指不編碼功能性FATB蛋白的FATB等位基因，即編碼非功能性FATB蛋白(例如，分別是非功能性FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2或FATB-C3)或不編碼FATB蛋白的FATB等位基因。此類“突變FATB等位基因”是在其核酸序列中包含一個(gè)或多個(gè)突變的野生型FATB等位基因，從而突變優(yōu)選的導(dǎo)致體內(nèi)細(xì)胞內(nèi)功能性FATB蛋白的(絕對(duì)或相對(duì))量顯著降低。FATB-蛋白-編碼核酸序列的突變等位基因在本文中命名為“fatB”(例如，分別是fatB-a1、fatB-a2、fatB-a3、fatB-c1、fatB-c2或fatB-c3)。突變等位基因可以是“天然突變”等位基因，其是在自然界中發(fā)現(xiàn)的突變等位基因(例如，在沒有人為應(yīng)用誘變劑的條件下自發(fā)產(chǎn)生的)，或通過人類干涉誘導(dǎo)的“誘導(dǎo)的突變”等位基因，例如，通過誘變。
“顯著降低量的功能性FATB蛋白”(例如，功能性FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和/或FATB-C3蛋白)指與不包含突變FATB等位基因的細(xì)胞產(chǎn)生的功能性FATB蛋白的量相比，通過含有突變FATB等位基因的細(xì)胞產(chǎn)生的功能性FATB蛋白的量降低至少30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％(即，細(xì)胞不產(chǎn)生功能性蛋白)。因此，該定義涵蓋了在體內(nèi)不具有生物學(xué)活性的“非功能性”蛋白(例如，截短的蛋白質(zhì))的生產(chǎn)，功能性蛋白的絕對(duì)量的降低(例如，由于基因突變產(chǎn)生的無功能蛋白)，和/或與野生型、功能性蛋白的活性相比，具有降低的生物學(xué)活性的蛋白質(zhì)(即，“功能失?！钡鞍踪|(zhì)(例如通過可變mRNA剪接產(chǎn)生的截短的蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)))的生產(chǎn)。同樣地，術(shù)語“突變FATB蛋白”涵蓋了突變核酸序列(“fatB等位基因”)編碼的蛋白質(zhì)，從而與非突變、野生型序列(“FA TB等位基因”)編碼的蛋白質(zhì)活性相比，所述突變導(dǎo)致顯著降低的和/或沒有體內(nèi)FATB酶活性。
如本文中使用的，“誘變”指這樣的過程，其中植物細(xì)胞(例如，蕓苔屬種子或組織，如花粉等)與誘變劑或電離輻射(中子(如快中子誘變等)、γ射線(如鈷60源提供的)、X射線等)或前述的組合接觸一次或多次，所述誘變劑例如化學(xué)物質(zhì)(例如，乙基甲基磺酸鹽(EMS)、乙基亞硝基脲(ENU)等)。輻射造成的突變通常是大段缺失或其它的嚴(yán)重?fù)p傷，例如易位或復(fù)雜的重排，而化學(xué)誘變劑造成的突變通常是更分散的損傷，例如點(diǎn)突變。例如，EMS烷基化鳥嘌呤堿基導(dǎo)致堿基錯(cuò)配烷基化的鳥嘌呤將與胸腺嘧啶堿基配對(duì)，主要導(dǎo)致G/C向A/T轉(zhuǎn)變。在誘變后，利用已知的技術(shù)從處理的細(xì)胞再生蕓苔屬植物。例如，可以根據(jù)常規(guī)的生長(zhǎng)程序種植所獲得的蕓苔屬種子，然后在植物上形成自花授粉的種子?？蛇x的，可以提取雙重單倍體小植物，立即形成純合植物?？梢允斋@作為此類自花授粉的結(jié)果，在這一代或下一代形成的其它種子，并就存在的突變FATB等位基因進(jìn)行篩選。篩選特定突變等位基因的一些技術(shù)是已知的，例如DeleteageneTM(Delete-a-gene；Li等人，2001，Plant J 27235-242)使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)測(cè)定，來篩選通過快中子誘變產(chǎn)生的缺失突變，TILLING(基因組的靶向誘導(dǎo)局部缺失；McCallum等人，2000，NatBiotechnol 18455-457)鑒別了EMS-誘導(dǎo)的點(diǎn)突變等。篩選特定突變FATB等位基因存在的其它技術(shù)描述在下文的實(shí)施例中。
術(shù)語基因或蛋白質(zhì)的“直向同源物”在本文中指在另一個(gè)物種中發(fā)現(xiàn)的同源基因或蛋白質(zhì)，其具有與基因或蛋白質(zhì)相同的功能，但(通常)從物種具有偏離的基因(即，通過物種形成從共同的祖先進(jìn)化的基因)的時(shí)間點(diǎn)開始，其序列偏離。因此，可以基于序列比較(例如，基于整個(gè)序列或特定結(jié)構(gòu)域的百分比序列同一性)和/或功能分析，在其它的植物物種(例如，芥菜等)中鑒定歐洲油菜FATB基因的直向同源物。
本文中使用的“變種”與UPOV規(guī)范一致，指在單個(gè)已知最低級(jí)別的植物分類單位中的植物分組，所述分組可以通過由給定基因型或基因型的組合所導(dǎo)致的特征的表達(dá)來定義，可以通過至少一種所述特征的表達(dá)來與任何其它植物分組進(jìn)行區(qū)分，并且在關(guān)于它進(jìn)行無變化(穩(wěn)定)繁殖的適合性方面可認(rèn)為是一個(gè)單位。
術(shù)語“包含”理解為具體說明了所陳述部分、步驟或組分的存在，但不排除存在一種或多種其它的部分、步驟或組分。因此，包含一些性狀的植物可以包含其它的性狀。
可以理解，當(dāng)以單數(shù)形式(例如，植物或根)指代詞時(shí)，復(fù)數(shù)形式(例如，復(fù)數(shù)的植物，復(fù)數(shù)的根)也包括在內(nèi)。因此，通過不定冠詞但屬性是(“a”或“an”)指代元件時(shí)，不排除存在一個(gè)以上的元件的可能性，除非上下文明確的要求有且僅有一個(gè)元件。因此，不定冠詞單數(shù)形式(“a”或“an”)通常意指“至少一個(gè)”。
出于本發(fā)明的目的，兩個(gè)相關(guān)核苷酸或氨基酸序列的“序列同一性”表示為百分比，指兩條最優(yōu)比對(duì)的序列中具有相同殘基的位置數(shù)(x 100)除以比較的位置數(shù)。將空位視為具有不相同殘基的位置，所述空位是比對(duì)中這樣的位置，所述位置上的殘基存在于一條序列中，而不存在于另一條序列中。根據(jù)European Molecular Biology Open Software Suite(EMBOSS，Rice等人，2000，Trends in Genetics 16(6)276-277；參見例如http://www.ebi.ac.uk/emboss/align/index.html)中的Needleman和Wunsch總體對(duì)比算法(Needleman和Wunsch，1970，J Mol Biol 48(3)443-53)，使用缺省設(shè)置(空位開放罰分＝10(對(duì)于核苷酸)/10(對(duì)于蛋白質(zhì))和空位延伸罰分＝0.5(對(duì)于核苷酸)/0.5(對(duì)于蛋白質(zhì)))，通過在全長(zhǎng)比對(duì)兩條序列來發(fā)現(xiàn)兩條序列的“最優(yōu)比對(duì)”。對(duì)于核苷酸，使用的缺省評(píng)分矩陣是EDNAFULL，而對(duì)于蛋白質(zhì)，缺省的評(píng)分矩陣是EBLOSUM62。
如本文中使用的，“基本相同(subtantially identical)”或“實(shí)質(zhì)相似(essentially similar)”指，當(dāng)如上述進(jìn)行最優(yōu)比對(duì)時(shí)，至少具有某一最小百分比的序列同一性(如下文進(jìn)一步定義)的序列。
可以使用“嚴(yán)格雜交條件”來鑒定與給定的核苷酸序列基本相同的核苷酸序列。嚴(yán)格條件是序列依賴性的，在不同環(huán)境中可以不同。通常，選擇的嚴(yán)格條件是比特定的序列在定義的離子強(qiáng)度和pH下的熱解鏈點(diǎn)(Tm)低約5℃。Tm是(在定義的離子強(qiáng)度和pH下)50％的靶序列與完全匹配的探針雜交的溫度。通常，所選擇的嚴(yán)格條件是在pH7和至少60℃的溫度下，鹽濃度為約0.02摩爾。降低鹽濃度和/或增加溫度，可增加嚴(yán)格性。用于RNA-DNA雜交的嚴(yán)格條件(Northern印跡，使用探針例如100nt)是，例如包括至少一次在63℃下，在0.2X SSC中洗滌20min的條件，或等價(jià)的條件。
“高嚴(yán)格條件”可以例如通過如下提供在65℃的水溶液中雜交，所述溶液含有6x SSC(20x SSC含有3.0M NaCl，0.3M Na-檸檬酸，pH 7.0)，5x Denhardt′s(100X Denhardt’s含有2％Ficoll，2％聚乙烯吡咯烷酮，2％牛血清白蛋白)，0.5％十二烷基硫酸鈉(SDS)，和作為非特異性競(jìng)爭(zhēng)物的20μg/ml變性的載體DNA(單鏈魚精子DNA，具有平均長(zhǎng)度為120-3000核苷酸)。在雜交后，可以在若干步驟中進(jìn)行高嚴(yán)格洗滌，最終洗滌(約30分鐘)是在雜交溫度下，0.2-0.1X SSC，0.1％SDS中進(jìn)行。
“中嚴(yán)格條件”指與上述溶液雜交等價(jià)的條件，但是在約60-62℃。中等嚴(yán)格洗滌可以在雜交溫度下，1X SSC，0.1％SDS中進(jìn)行。
“低嚴(yán)格性”指與上述溶液雜交等價(jià)的條件，但是在約50-52℃。低嚴(yán)格洗滌可以在雜交溫度下，2X SSC，0.1％SDS中進(jìn)行。還參見Sambrook等人，(1989)以及Sambrook和Russell(2001)。
詳細(xì)描述 本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，歐洲油菜(基因組AACC，2n＝4x＝38)是異源四倍體(雙二倍體)物種，由于它來源于二倍體祖先，實(shí)質(zhì)上含有兩個(gè)二倍體基因組(A和C基因組)，所述歐洲油菜在它的基因組中包括共計(jì)6個(gè)FATB基因座和FATB基因，3個(gè)基因在A基因組(本文中稱為“FATB-A1”、“FATB-A2”和“FATB-A3”)中，3個(gè)基因在C基因組中(本文中稱為“FATB-C1”、“FATB-C2”和“FATB-C3”)。認(rèn)為FATB-A1基因與FATB-C1基因是“部分同源的”，F(xiàn)ATB-A2與FATB-C2是部分同源的，且FATB-A3與FATB-C3是部分同源的，即，“A基因”發(fā)現(xiàn)在A基因組中，且源自二倍體祖先蕪菁(AA)，同時(shí)，“C基因”發(fā)現(xiàn)在歐洲油菜的C基因組中，且源自二倍體祖先甘藍(lán)(CC)。
如任何二倍體基因組中，每個(gè)FATB基因在基因組的每個(gè)FATB基因座上可以存在2個(gè)“等位基因”(一個(gè)等位基因是在一條染色體上發(fā)現(xiàn)的基因序列，另一個(gè)位于同源染色體上)。在任何給定的植物中，這2個(gè)等位基因的核苷酸序列可以是相同(純合)或不同的(雜合)，雖然在物種中，整體看來每個(gè)FATB基因存在的不同潛在等位基因的數(shù)量可以遠(yuǎn)大于2。
此外發(fā)現(xiàn)，在上述6個(gè)FA TB基因中的僅1或2個(gè)中包含突變的植物，不足以顯著降低植物種子油中的飽和脂肪酸的百分比(wt％)，所述突變導(dǎo)致突變fatB等位基因的野生型等價(jià)體編碼的功能性FATB蛋白量的顯著降低。認(rèn)為，為了獲得生產(chǎn)低飽和或無飽和的種子油的植物，植物中需要包含在3個(gè)不同的FA TB基因(選自FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3)中的至少3個(gè)突變fatB等位基因。
因此，在發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供的植物至少包含3個(gè)不同F(xiàn)A TB基因的3個(gè)突變fatB等位基因，從而突變fatB等位基因?qū)е逻@些突變等位基因的野生型等價(jià)體編碼的功能性FATB蛋白類型的量顯著降低，因此，導(dǎo)致在體內(nèi)在植物細(xì)胞，特別是發(fā)育的種子中，產(chǎn)生的功能性FATB蛋白的量整體顯著降低。
通過在一株植物中組合足夠拷貝的特定突變fatB等位基因與足夠拷貝的特定野生型FATB等位基因，能夠精細(xì)調(diào)整產(chǎn)生的功能性FATB蛋白的量和/或類型，這依次影響從質(zhì)體中的游離飽和脂肪酸(的量和/或類型)輸出，從而影響產(chǎn)生的種子油的脂肪酸組成。因此，可以以下述方式調(diào)整6種FATB蛋白中每一種的絕對(duì)和相對(duì)量，所述方式提供這樣的植物，所述植物產(chǎn)生對(duì)植物生長(zhǎng)和發(fā)育足量的FATB蛋白，同時(shí)在這些植物的種子油中產(chǎn)生和儲(chǔ)存理想的脂肪酸的量和/或類型。因此，在發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供的植物和植物部分包括至少一種功能性表達(dá)的FATB等位基因，其選自FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3，其編碼完全功能性的FATB蛋白，同時(shí)剩余的等位基因可以是突變fatB等位基因。
因此，在發(fā)明的一個(gè)方面，提供了包括(6個(gè)FA TB基因的)n-重?cái)?shù)(tuple)的突變fatB等位基因的植物或植物部分，其中n≤12，優(yōu)選的n≤11(例如，n＝10、9或8)，從而至少一個(gè)等位基因產(chǎn)生功能性FATB蛋白。
在發(fā)明的其它方面，提供了純合FATB三突變(n＝6，即對(duì)于選自6個(gè)FATB基因的3個(gè)基因的突變等位基因而言是純合)，純合FA TB四突變(n＝8)和/或純合FATB五突變(n＝10)的植物或植物部分，其中，突變等位基因選自基因FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3。
因此，在發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了純合的FATB三突變植物，其中植物的基因型可以描述為 -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB/A3/FATB-A3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -FATB-A1/FATB-A1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，or -FATB-A1/FATB-A1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3. 在發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了純合的FATB四突變植物，其中植物的基因型可以描述為 -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，or -FATB-A1/FATB-A1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3. 在發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了純合的FATB五突變植物，其中植物的基因型可以描述為 -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，or -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3. 在發(fā)明的其它方面，純合的FA TB三突變(n＝6)，四突變(n＝8)和/或五突變(n＝10)的植物或植物部分還包括其它的突變等位基因，其中對(duì)于所述其它的突變FA TB等位基因而言，所述突變植物或植物部分是雜合的(即分別是n＝7、n＝9、和n＝11)，且其中突變等位基因選自剩余的野生型FATB基因(即FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2或FATB-C3基因)。
因此，在發(fā)明的其它實(shí)施方案中，本文提供了還包括一個(gè)其它突變FATB等位基因的純合FATB三突變植物，其中植物的基因型可以描述為 -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/FATB-C2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/FATB-C1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-A2/FATB-A2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/FATB-A3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FA TB-C2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/FATB-C3， -fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3， -fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3， -fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/FATB-A1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -FATB-A1/FATB-A1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3， -fatB-a1/FATB-A1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/FATB-A1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/FATB-A1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/FATB-A2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，or -FATB-A1/FATB-A1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3. 在發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了還包括一個(gè)其它突變FATB等位基因的純合FATB四突變植物，其中植物的基因型可以描述為 -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FA TB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/FATB-C3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3， -fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，F(xiàn)ATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，F(xiàn)ATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，F(xiàn)ATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/FATB-A1，F(xiàn)ATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，or -FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3. 在發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了包括一個(gè)其它突變FATB等位基因的純合FATB五突變植物，其中植物的基因型可以描述為 -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，F(xiàn)ATB-C3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3， -fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，or -fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3. 本文還提供了來自蕓苔屬物種的野生型和突變FATB基因/等位基因的核酸序列，以及野生型和突變FATB蛋白。還提供了在蕓苔屬植物中產(chǎn)生和組合突變和野生型FATB等位基因的方法，以及在其基因組中包含野生型和突變FATB等位基因的特定組合的蕓苔屬植物和植物部分，其中，這些植物產(chǎn)生具有低飽和或無飽和的種子油，且植物優(yōu)選的生長(zhǎng)正常并具有正常的表型。這些植物用于向其它植物轉(zhuǎn)移突變FATB等位基因的用途也是發(fā)明的實(shí)施方案，以及還有所述任何植物的植物產(chǎn)物。此外，提供了用于組合或檢測(cè)FATB基因和/或等位基因的標(biāo)志物輔助選擇(MAS)的試劑盒和方法。下文將詳細(xì)描述發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案。
根據(jù)本發(fā)明的核酸序列 提供了編碼功能性FATB蛋白的野生型(FATB)核酸序列，和來自蕓苔屬物種，特別是歐洲油菜的FATB基因的突變(fatB)核酸序列(包括一個(gè)或多個(gè)突變，優(yōu)選的是導(dǎo)致所編碼的FATB蛋白的生物學(xué)活性顯著降低的突變，或不產(chǎn)生FATB蛋白的突變)，但所述突變也可以來自其它蕓苔屬作物物種。例如，包含A和/或C基因組的蕓苔屬物種可以包括不同的FATB-A或FATB-C基因的等位基因，根據(jù)發(fā)明所述基因可以在單株植物中鑒別和組合。此外，可以使用誘變方法在野生型FATB等位基因中產(chǎn)生突變，從而產(chǎn)生根據(jù)發(fā)明使用的突變等位基因。由于特定的FATB等位基因優(yōu)選的通過雜交和選擇在歐洲油菜中組合，因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了在蕓苔屬植物中(即，內(nèi)源性)的FATB和/或fatB核酸序列，所述植物可以與歐洲油菜雜交，或者可用于產(chǎn)生“合成的”歐洲油菜植物。本領(lǐng)域中描述了在不同蕓苔屬物種之間的雜交，例如Snowdon(2007，Chromosome research 1585-95)中所述?？梢允褂梅N間雜交來例如從歐洲油菜(AACC)的C基因組向埃塞俄比亞芥(BBCC)的C基因組中轉(zhuǎn)移基因，或者甚至從例如歐洲油菜(AACC)的C基因組向芥菜(AABB)的B基因組中轉(zhuǎn)移基因(通過它們的C和B基因組之間非常規(guī)重組的偶發(fā)事件)。通過雜交原始祖先，甘藍(lán)(CC)和蕪菁(AA)，可以產(chǎn)生“重新合成的”或“合成的”歐洲油菜品系。在蕓苔屬作物物種及其親屬之間的雜交，可以成功的克服種間還有屬間的不相容屏障，例如通過胚胎拯救技術(shù)或原生質(zhì)體融合(參見例如，Snowdon，見上文)。
然而，本文還提供了分離的FATB和fatB核酸序列(例如，通過克隆從植物分離，或通過DNA合成合成地制造)，及任意上述序列的變體和片段，這些可用于確定植物或植物部分中內(nèi)源的存在哪些序列，不論所述序列是否編碼功能性蛋白或具有顯著降低功能的或無功能的蛋白(例如，通過在重組宿主細(xì)胞和酶測(cè)定中表達(dá))，以及為了產(chǎn)生具有理想組合的功能和突變等位基因的植物，所述這些用于選擇和從一種蕓苔屬植物向另一種轉(zhuǎn)移特定的等位基因。
已經(jīng)從歐洲油菜的冬油菜(winter oilseed rape)(WOSR)和春油菜(oilseed rape)(SOSR)中分離出FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3的核酸序列，如序列表中所述。關(guān)于野生型FATB序列，描述了野生型FATB序列，而下文和實(shí)施例中描述了這些序列的突變fatB序列，和與其實(shí)質(zhì)相似的序列。基因組FATB蛋白-編碼DNA，和相應(yīng)的前mRNA，包含被4個(gè)內(nèi)含子(從5’端開始編號(hào)內(nèi)含子1-4)中斷的5個(gè)外顯子(從5’端開始編號(hào)外顯子1-5)。在cDNA和相應(yīng)的加工的mRNA(即，剪接RNA)中，去除了內(nèi)含子并且外顯子是相連接的，如序列表所示。外顯子序列是更加進(jìn)化保守的，因此比內(nèi)含子序列更少變化。
根據(jù)發(fā)明的“FATB-A1核酸序列”或“FATB-A1變體核酸序列”是編碼這樣的氨基酸序列的核酸序列或下述核酸序列，當(dāng)所述氨基酸序列與SEQ ID NO2(WOSR FATB-A1)(在具有或不具有轉(zhuǎn)運(yùn)肽的條件下比對(duì)時(shí))和/或SEQ ID NO14(SOSR FATB-A1)(在具有或不具有轉(zhuǎn)運(yùn)肽的條件下比對(duì)時(shí)，)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、98％、99％或100％序列同一性；或者所述核酸序列與SEQ ID NO1(WOSRFATB-A1)(當(dāng)在具有或不具有內(nèi)含子1-4的條件下比對(duì)時(shí))和/或SEQ IDNO13(SOSR FATB-A1)(當(dāng)在具有或不具有內(nèi)含子1-4的條件下比對(duì)時(shí))具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。這些核酸序列還可以被稱為與序列表中提供的FATB序列“實(shí)質(zhì)相似”或“實(shí)質(zhì)相同”。
根據(jù)發(fā)明的“FATB-A2核酸序列”或“FATB-A2變體核酸序列”是編碼這樣的氨基酸序列的核酸序列或下述核酸序列，當(dāng)所述氨基酸序列在具有或不具有轉(zhuǎn)運(yùn)肽的條件下比對(duì)時(shí)，與SEQ ID NO4(WOSR FATB-A2)和/或SEQ ID NO16(SOSR FATB-A2)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、98％、99％或100％序列同一性；或者所述核酸序列當(dāng)在具有或不具有內(nèi)含子1-4的條件下比對(duì)時(shí)，與SEQ ID NO3(WOSRFATB-A2)和/或SEQ ID NO15(SOSR FATB-A2)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。這些核酸序列還可以被稱為與序列表中提供的FATB序列“實(shí)質(zhì)相似”或“實(shí)質(zhì)相同”。
根據(jù)發(fā)明的“FATB-A3核酸序列”或“FATB-A3變體核酸序列”是編碼這樣的氨基酸序列的核酸序列或下述核酸序列，當(dāng)所述氨基酸序列在具有或不具有轉(zhuǎn)運(yùn)肽的條件下比對(duì)時(shí)，與SEQ ID NO6(WOSR FATB-A3)和/或SEQ ID NO18(SOSR FATB-A3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、98％、99％或100％序列同一性；或者所述核酸序列當(dāng)在具有或不具有內(nèi)含子1-4的條件下比對(duì)時(shí)，與SEQ ID NO5(WOSRFATB-A3)和/或SEQ ID NO17(SOSR FATB-A3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。這些核酸序列還可以被稱為與序列表中提供的FATB序列“實(shí)質(zhì)相似”或“實(shí)質(zhì)相同”。
根據(jù)發(fā)明的“FATB-C1核酸序列”或“FATB-C1變體核酸序列”是編碼這樣的氨基酸序列的核酸序列或下述核酸序列，當(dāng)所述氨基酸序列在具有或不具有轉(zhuǎn)運(yùn)肽的條件下比對(duì)時(shí)，與SEQ ID NO8(WOSR FATB-C1)和/或SEQ ID NO20(SOSR FATB-C1)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、98％、99％或100％序列同一性；或者所述核酸序列當(dāng)在具有或不具有內(nèi)含子1-4的條件下比對(duì)時(shí)，與SEQ ID NO7(WOSRFATB-C1)和/或SEQ ID NO19(SOSR FATB-C1)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。這些核酸序列還可以被稱為與序列表中提供的FATB序列“實(shí)質(zhì)相似”或“實(shí)質(zhì)相同”。
根據(jù)發(fā)明的“FATB-C2核酸序列”或“FATB-C2變體核酸序列”是編碼這樣的氨基酸序列的核酸序列或下述核酸序列，當(dāng)所述氨基酸序列在具有或不具有轉(zhuǎn)運(yùn)肽的條件下比對(duì)時(shí)，與SEQ ID NO10(WOSRFATB-C2)和/或SEQ ID NO22(SOSR FATB-C2)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、98％、99％或100％序列同一性；或者所述核酸序列當(dāng)在具有或不具有內(nèi)含子1-4的條件下比對(duì)時(shí)，與SEQ ID NO9(WOSR FATB-C2)和/或SEQ ID NO21(SOSR FATB-C2)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。這些核酸序列還可以被稱為與序列表中提供的FATB序列“實(shí)質(zhì)相似”或“實(shí)質(zhì)相同”。
根據(jù)發(fā)明的“FATB-C3核酸序列”或“FATB-C3變體核酸序列”是編碼這樣的氨基酸序列的核酸序列或下述核酸序列，當(dāng)所述氨基酸序列在具有或不具有轉(zhuǎn)運(yùn)肽的條件下比對(duì)時(shí)，與SEQ ID NO12(WOSRFATB-C3)和/或SEQ ID NO24(SOSR FATB-C3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、98％、99％或100％序列同一性；或者所述核酸序列當(dāng)在具有或不具有內(nèi)含子1-4的條件下比對(duì)時(shí)，與SEQ ID NO11(WOSR FATB-C3)和/或SEQ ID NO23(SOSR FATB-C3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。這些核酸序列還可以被稱為與序列表中提供的FATB序列“實(shí)質(zhì)相似”或“實(shí)質(zhì)相同”。
因此，發(fā)明提供了編碼野生型、功能性FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3蛋白的核酸序列，包括其變體和片段(如下文進(jìn)一步定義的)，還提供了任意上述序列的突變核酸序列，與野生型蛋白相比，所述核酸序列中的突變優(yōu)選的導(dǎo)致一個(gè)或多個(gè)氨基酸插入、缺失或取代。優(yōu)選的，核酸序列中的突變導(dǎo)致一個(gè)或多個(gè)氨基酸改變(即，相對(duì)于野生型氨基酸序列，插入、缺失和/或取代了一個(gè)或多個(gè)氨基酸)，從而顯著的降低了FATB蛋白的生物學(xué)活性。突變FATB蛋白的生物學(xué)活性的顯著降低指，與野生型蛋白的活性相比，酶活性(即，?；鵄CP-硫酯酶活性)降低至少30％、至少40％、50％或更多，至少90％或100％(無生物學(xué)活性)。
本文提供了內(nèi)源性和分離的核酸序列。還提供了上文定義的FATB序列和FA TB變體核酸序列的片段，用作引物或探針，以及作為根據(jù)發(fā)明的另一方面(見下文)的試劑盒的組分。FATB或fatB核酸序列或其變體的“片段”(如定義)可以是多種長(zhǎng)度，例如FATB或fatB序列(或其變體序列)的至少10、12、15、18、20、50、100、200、500、1000個(gè)連續(xù)的核苷酸。
編碼功能性FATB蛋白的核酸序列 序列表中描述的核酸序列編碼來自歐洲油菜的野生型、功能性FATB蛋白。因此，這些序列對(duì)分離它們的WOSR和SOSR植物是內(nèi)源性的?？梢栽谄渌氖|苔屬作物物種、變種、育種品系或野生登記物中篩選其它的FA TB等位基因，所述基因編碼相同的FATB蛋白或其變體。例如，可以使用核酸雜交技術(shù)(例如，使用嚴(yán)格雜交條件的Southern印跡)或基于PCR技術(shù)來鑒別其它蕓苔屬植物(例如不同的歐洲油菜變種、品系或登記物)的內(nèi)源性FA TB等位基因，而且也可以在芥菜(特別是A基因組的FATB等位基因)、埃塞俄比亞芥(特別是C基因組的FATB等位基因)和蕪菁(A基因組)和甘藍(lán)(C基因組)植物和組織中篩選其它的野生型FATB等位基因。為了在此類植物或植物組織中篩選FATB等位基因的存在，可以使用序列表中提供的FATB核酸序列，或任意這些序列的變體或片段。例如，可以使用完整序列或片段作為探針或引物。例如可以使用特異性或簡(jiǎn)并引物來從植物或植物組織的基因組DNA中擴(kuò)增編碼FATB蛋白的核酸序列。可以使用標(biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)技術(shù)分離和測(cè)序這些FA TB核酸序列。然后，可以使用生物信息學(xué)分析來表征等位基因，例如為了確定序列對(duì)應(yīng)哪些FA TB等位基因，以及序列編碼哪些FATB蛋白或蛋白變體。
可以通過本領(lǐng)域已知的重組DNA技術(shù)分析核酸序列是否編碼功能性FATB蛋白，例如在宿主細(xì)胞(例如，細(xì)菌如大腸桿菌(E.coli))中表達(dá)核酸分子，分析酰基-ACP硫酯酶活性和/或所獲得的蛋白或細(xì)胞的底物特異性。例如，在大腸桿菌中重組表達(dá)后的脂肪酰-ACP水解描述在Doermann等人，2000(Plant Physiology 123637-643)和Doermann等人，1995(Arch Biochem Biophys 316612-618)，Yuan等人，(1995，PNAS Vol9210639-10643)，Salas和Ohlrogge(2002，Archives of Biochemistry andBiophysics 40325-34)以及Mayer和Shanklin(2007，BMC Plant Biology7(1)1-11)中。此外，Eccleston和Ohlrogge(關(guān)于C12:0-和C18:1-ACP水解；1998，Plant Cell 10613-622)，Salas和Ohlrogge(2002，Archives ofBiochemistry and Biophysics 40325-34)以及Bonaventure等人(關(guān)于C16:0-ACP和C18:1-ACP水解；2003，Plant Cell 151020-1033)已經(jīng)描述了利用植物組織粗均漿物進(jìn)行脂肪酰-ACP水解測(cè)定。
此外，可以理解，通過在核酸數(shù)據(jù)庫中篩選實(shí)質(zhì)相似的序列，可以以計(jì)算機(jī)(in silico)鑒別FATB核酸序列及其變體(或任意所述序列的片段)。類似的，可以化學(xué)合成核酸序列。還提供了根據(jù)發(fā)明的核酸分子的片段，其將在下文進(jìn)一步描述。片段包括只編碼成熟蛋白質(zhì)的核酸序列，或者包括所有或部分外顯子和/或內(nèi)含子序列的更小片段，等。
編碼突變FATB蛋白的核酸序列 相對(duì)于野生型核酸序列，包含一個(gè)或多個(gè)核苷酸缺失、插入或取代的核酸序列是發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，同樣地此類突變核酸分子的片段也是。如下文進(jìn)一步描述的，可以利用多種已知的方法產(chǎn)生和/或鑒別此類突變核酸序列(稱為fatB序列)。此外，以內(nèi)源性形式和以分離的形式提供了此類核酸分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，突變導(dǎo)致所編碼的FATB蛋白的氨基酸序列中的一個(gè)或多個(gè)改變(缺失、插入和/或取代)(即，不是“沉默突變”)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，核酸序列中的突變導(dǎo)致相對(duì)于野生型蛋白，所編碼的FATB蛋白的生物學(xué)活性顯著降低或完全消失。
因此，核酸分子可以包含一個(gè)或多個(gè)突變，例如 (a)“錯(cuò)義突變”，所述突變是核酸序列中的改變，其導(dǎo)致氨基酸取代另一個(gè)氨基酸； (b)“無義突變”或“STOP密碼子突變”，所述突變是核酸序列中的改變，其導(dǎo)致引入過早的STOP密碼子，從而終止翻譯(導(dǎo)致截短的蛋白質(zhì))；植物基因包含翻譯終止密碼子“TGA”(RNA中的UGA)、“TAA”(RNA中的UAA)和“TAG”(RNA中的UAG)；因此，在待翻譯的成熟mRNA中(在閱讀框中)導(dǎo)致上述密碼子之一的任何核苷酸取代、插入、缺失將終止翻譯。
(c)一個(gè)或多個(gè)氨基酸的“插入突變”，原因是在核酸的編碼序列中添加一個(gè)或多個(gè)密碼子； (d)一個(gè)或多個(gè)氨基酸的“缺失突變”，原因是在核酸的編碼序列中缺失一個(gè)或多個(gè)密碼子； (e)“移碼突變”，導(dǎo)致在突變下游以不同的框翻譯核酸序列。移碼突變可以具有各種原因，例如一個(gè)或多個(gè)核苷酸的插入、缺失或重復(fù)，但是影響前-mRNA剪接的突變(剪接位點(diǎn)突變)也可以導(dǎo)致移碼； (f)“剪接位點(diǎn)突變”，其改變或消除了前-mRNA序列的正確剪接，導(dǎo)致與野生型不同氨基酸序列的蛋白質(zhì)。例如，在RNA剪接過程中可以跳過一個(gè)或多個(gè)外顯子，導(dǎo)致蛋白質(zhì)缺失由跳過的外顯子編碼的氨基酸。可選的，可以通過錯(cuò)誤剪接，或者可以保留一個(gè)或多個(gè)內(nèi)含子，或者可以產(chǎn)生替代的剪接供體或受體，或者可以在替代位置(例如在內(nèi)含子內(nèi))起始剪接，或者可以產(chǎn)生替代的多腺苷酸化信號(hào)，來改變閱讀框。正確的前-mRNA剪接是復(fù)雜的過程，可以受到FATB-編碼基因的核苷酸序列中不同突變的影響。在高等真核生物(例如植物)中，主要的剪接體剪接內(nèi)含子，所述內(nèi)含子在5’剪接位點(diǎn)(供體位點(diǎn))含有GU，在3’剪接位點(diǎn)(受體位點(diǎn))含有AG。核真核基因的約99％的剪接位點(diǎn)遵循該GU-AG法則(或GT-AG法則；參見Lewin，Genes VI，Oxford University Press 1998，第885-920頁，ISBN 0198577788)，同時(shí)，內(nèi)含子在5’和3’剪接位點(diǎn)含有其他的二核苷酸，例如GC-AG和AU-AC，分別僅占約1％和0.1％。
如上明確所述，理想的是，核酸序列中的一個(gè)或多個(gè)突變優(yōu)選的導(dǎo)致突變蛋白，所述蛋白在體內(nèi)含有顯著降低的酶活性或沒有酶活性。根本而言，相對(duì)于野生型蛋白，導(dǎo)致蛋白質(zhì)包含至少一個(gè)氨基酸插入、缺失和/或取代的任何突變都可以導(dǎo)致顯著降低的酶活性或沒有酶活性。然而，可以理解，在蛋白質(zhì)一些部分的突變更容易導(dǎo)致突變FATB蛋白降低的功能，例如導(dǎo)致截短的蛋白質(zhì)的突變，其中缺失了功能結(jié)構(gòu)域(例如，催化結(jié)構(gòu)域)的重要部分。
本文描述的蕓苔屬的FATB蛋白是長(zhǎng)度約412-424個(gè)氨基酸，包括多個(gè)結(jié)構(gòu)(和功能)結(jié)構(gòu)域。所述結(jié)構(gòu)域包括以下約60個(gè)氨基酸的N-端質(zhì)體靶向肽，后接約18個(gè)氨基酸的疏水區(qū)(假設(shè)形成了螺旋跨膜錨形體)。共計(jì)約90個(gè)氨基酸的該N端部分后接構(gòu)成成熟FATB蛋白的部分(從N-端氨基酸LPDWSM開始)。它含有通過接頭結(jié)構(gòu)域分隔的螺旋/4鏈片層結(jié)構(gòu)域(“HEEEE”或“4HBT”結(jié)構(gòu)域，以及“熱狗基序(hot dog motif)”)的隨串聯(lián)重復(fù)(Mayer和Shanklin，2005，J.Biol.Chem.280(5)3621-3627)。第一個(gè)(N-端)螺旋/4鏈片層結(jié)構(gòu)域(其是由部分外顯子1、完整的外顯子2和3，以及部分外顯子4編碼的)包含認(rèn)為影響底物特異性的氨基酸殘基，特別是兩個(gè)保守的甲硫氨酸(Met或M)，保守的賴氨酸(Lys或K)，保守的纈氨酸(Val或V)，和保守的絲氨酸(Ser或S)(Mayer和Shanklin，2007，BMC Plant Biology 7(1)1-11)；其第二個(gè)(C-端)螺旋/4鏈片層結(jié)構(gòu)域(大部分由外顯子5編碼)包含催化氨基酸殘基，特別是下述的木瓜蛋白酶樣催化三聯(lián)體保守的天冬酰胺(Asn或N)，保守的組氨酸(His或H)殘基和保守的半胱氨酸(Cys或C)。催化三聯(lián)體位于第二個(gè)螺旋/4鏈片層結(jié)構(gòu)域中，由蛋白質(zhì)的外顯子5編碼。第二個(gè)HEEEE結(jié)構(gòu)域還包含認(rèn)為影響底物特異性的氨基酸殘基，特別是保守的色氨酸(Trp或W)(Mayer和Shanklin，2007，見上文)。
表1aWOSR FATB蛋白質(zhì)——氨基酸(aa)區(qū)域和位置 表1bSOSR FATB蛋白質(zhì)——氨基酸(aa)區(qū)域和位置 因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了包含一個(gè)或多個(gè)上述任意類型突變的核酸序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了包含一個(gè)或多個(gè)缺失突變，一個(gè)或多個(gè)終止密碼子(無義)突變和/或一個(gè)或多個(gè)剪接位點(diǎn)突變的fatB序列。本質(zhì)上(以分離的形式)提供了任何上述突變核酸序列，以及內(nèi)源性的包含此類序列的植物和植物部分。
如本文所使用的，F(xiàn)ATB等位基因中的缺失突變是FATB等位基因中這樣的突變，其中從相應(yīng)的野生型FATB等位基因中缺失了至少1、至少2、3、4、5、10、20、30、50、100、200、500、1000或更多個(gè)堿基，從而所述缺失導(dǎo)致突變FATB等位基因轉(zhuǎn)錄和翻譯成在體內(nèi)具有顯著降低或無活性的突變蛋白。缺失可以導(dǎo)致移碼和/或可以引入過早的終止密碼子，或者可以導(dǎo)致去除編碼序列的一個(gè)氨基酸或多個(gè)(例如，大部分)氨基酸，等。缺失導(dǎo)致具有顯著降低的生物學(xué)活性的突變蛋白的確切潛在分子機(jī)制是不重要的。本文還提供了植物和植物部分，其中完全刪除了特定的FATB等位基因，即缺少一個(gè)或多個(gè)FATB等位基因的植物和植物部分。
如本文中使用的，F(xiàn)ATB等位基因中的無義突變是FATB等位基因中這樣的突變，其中相應(yīng)野生型FATB等位基因的編碼DNA和相應(yīng)mRNA序列中引入了一個(gè)或多個(gè)翻譯終止密碼子。翻譯終止密碼子是TGA(mRNA中的UGA)、TAA(UAA)和TAG(UAG)。因此，在編碼序列(外顯子序列)中導(dǎo)致產(chǎn)生框內(nèi)終止密碼子的任何突變(缺失、插入或取代)，都可以導(dǎo)致翻譯的終止和氨基酸鏈的截短。在一個(gè)實(shí)施方案中，包含無義突變的突變FATB等位基因是這樣的FATB等位基因，其中通過單核苷酸取代在FA TB密碼子序列中引入了框內(nèi)終止密碼子，例如CAG向TAG，TGG向TAG，TGG向TGA，或CGA向TGA的突變。在另一個(gè)實(shí)施方案中，包含無義突變的突變FATB等位基因是這樣的FATB等位基因，其中通過雙核苷酸取代在FATB密碼子序列中引入了框內(nèi)終止密碼子，例如CAG向TAA，TGG向TAA，CGG向TAG或TGA，CGA向TAA的突變。在另一個(gè)實(shí)施方案中，包含無義突變的突變FATB等位基因是這樣的FATB等位基因，其中通過三核苷酸取代在FATB密碼子序列中引入了框內(nèi)終止密碼子，例如CGG向TAA的突變。截短的蛋白質(zhì)缺少由突變的下游編碼DNA所編碼的氨基酸(即，F(xiàn)ATB蛋白的C-端部分)，保留了由突變的上游編碼DNA所編碼的氨基酸(即，F(xiàn)ATB蛋白的N-端部分)。在一個(gè)實(shí)施方案中，無義突變存在于催化三聯(lián)體的保守性Cys殘基之前的任何位置，從而至少缺失了保守性Cys殘基，導(dǎo)致截短蛋白質(zhì)的活性顯著降低。與野生型蛋白相比，突變蛋白質(zhì)截得越短，越易于缺失任何酶活性。因此，在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了以下包含無義突變的突變FATB等位基因，所述無義突變導(dǎo)致截短的蛋白質(zhì)具有少于350個(gè)氨基酸(缺少保守性Cys)，少于315個(gè)氨基酸(缺少木瓜蛋白酶樣催化三聯(lián)體的所有三個(gè)保守性氨基酸)，少于300個(gè)氨基酸(缺少第二個(gè)4HBT結(jié)構(gòu)域)，少于262個(gè)氨基酸(缺少保守性Ser)，少于229個(gè)氨基酸(缺少第二個(gè)保守性Met)，少于198個(gè)氨基酸(缺少保守性Val)，少于174個(gè)氨基酸(缺少保守性Lys)，至少于162個(gè)氨基酸(缺少第一個(gè)保守性Met)，或者甚至長(zhǎng)度更短的氨基酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，無義突變導(dǎo)致一個(gè)或多個(gè)外顯子未翻譯成蛋白質(zhì)，例如外顯子5、外顯子4和5、外顯子3-5，或更多。
下文的表格描述了在本文提供的歐洲油菜序列中可能的無義突變的范圍 表2aFATB-A1(WOSR，SEQ ID NO1和2)中潛在的STOP密碼子突變 外顯子氨基酸核苷酸 野生型→ 號(hào)位置 位置 突變密碼子 外顯子153 157cag→tag 外顯子1 157+159cag→taa 外顯子179 235cag→tag 外顯子1 235+237cag→taa 外顯子190 268cag→tag 外顯子1 268+270cag→taa 外顯子194 281tgg→tag 外顯子1 282tgg→tga 外顯子1 281+282tgg→taa 外顯子1111 331cag→tag 外顯子1 331+333cag→taa 外顯子1112 335tgg→tag 外顯子1 336tgg→tga 外顯子1 335+336tgg→taa 外顯子1117 350tgg→tag 外顯子1 351tgg→tga 外顯子1 350+351tgg→taa 外顯子1136 406cag→tag 外顯子1 406+408cag→taa 外顯子1143 427cag→tag 外顯子1 427+429cag→taa 外顯子1148 442+443cgg→tag 外顯子1 442+444cgg→tga 外顯子1 442+443+444cgg→taa 外顯子1168502cag→tag 外顯子1 502+504cag→taa 外顯子2198678tgg→tag 外顯子2 679tgg→tga 外顯子2 678+679tgg→taa 外顯子2204695cag→tag 外顯子2 695+697cag→taa 外顯子2213723tgg→tag 外顯子3 798tgg→tga 外顯子2-3 723+798tgg→taa 外顯子3222824tgg→tag 外顯子3 825tgg→tga 外顯子3 824+825tgg→taa 外顯子3225832cag→tag 外顯子3 832+834cag→taa 外顯子3235863tgg→tag 外顯子3 864tgg→tga 外顯子3 863+864tgg→taa 外顯子3238871cga→tga 外顯子3 871+872cga→taa 外顯子4253986tgg→tag 外顯子4 987tgg→tga 外顯子4 986+987tgg→taa 外顯子42711039 cga→tga 外顯子4 1039+1040 cga→taa 外顯子53111250 tgg→tag 外顯子5 1251 tgg→tga 外顯子5 1250+1251 tgg→taa 外顯子53181270 cag→tag 外顯子5 1270+1272 cag→taa 外顯子53281301 tgg→tag 外顯子5 1302 tgg→tga 外顯子5 1301+1302 tgg→taa 外顯子53411339 cag→tag 外顯子5 1339+1341 cag→taa 外顯子53611399 cag→tag 外顯子5 1399+1401 cag→taa 外顯子53831465 cag→tag 外顯子5 1465+1467 cag→taa 外顯子53891483 cag→tag 外顯子5 1483+1485 cag→taa 外顯子54011520 tgg→tag 外顯子5 1521 tgg→tga 外顯子5 1520+1521 tgg→taa 外顯子54101 547tgg→tag 外顯子5 1548 tgg→tga 外顯子5 1547+1548 tgg→taa 表2bFATB-A1(SOSR，SEQ ID NO13和14)中潛在的STOP密碼子突變 外顯子 氨基酸 核苷酸 野生型→ 號(hào) 位置 位置 突變密碼子 外顯子153 157cag→tag 外顯子1 157+159cag→taa 外顯子178 232cag→tag 外顯子1 232+234cag→taa 外顯子189 265cag→tag 外顯子1 265+267cag→taa 外顯子193 278tgg→tag 外顯子1 279tgg→tga 外顯子1 278+279tgg→taa 外顯子1110328cag→tag 外顯子1 328+330cag→taa 外顯子1111332tgg→tag 外顯子1 333tgg→tga 外顯子1 332+333tgg→taa 外顯子1116347tgg→tag 外顯子1 348tgg→tga 外顯子1 347+348tgg→taa 外顯子1135403cag→tag 外顯子1 403+405cag→taa 外顯子11424 24 cag→tag 外顯子1 424+426cag→taa 外顯子1147439+440cgg→tag 外顯子1 439+441cgg→tga 外顯子1 439+440+441cgg→taa 外顯子1167499cag→tag 外顯子1 499+501cag→taa 外顯子2197675tgg→tag 外顯子2 676tgg→tga 外顯子2 675+676tgg→taa 外顯子2203692cag→tag 外顯子2 692+694cag→taa 外顯子2212720tgg→tag 外顯子3 795tgg→tga 外顯子2-3 720+795tgg→taa 外顯子3221821tgg→tag 外顯子3 822tgg→tga 外顯子3 821+822tgg→taa 外顯子3224829cag→tag 外顯子3 829+831cag→taa 外顯子3234860tgg→tag 外顯子3 861tgg→tga 外顯子3 860+861 tgg→taa 外顯子3237868 cga→tga 外顯子3 868+869 cga→taa 外顯子4252983 tgg→tag 外顯子4 984 tgg→tga 外顯子4 983+984 tgg→taa 外顯子42701036cga→tga 外顯子4 1036+1037 cga→taa 外顯子53101247tgg→tag 外顯子5 1248tgg→tga 外顯子5 1247+1248 tgg→taa 外顯子53171267cag→tag 外顯子5 1267+1269 cag→taa 外顯子53271298tgg→tag 外顯子5 1299tgg→tga 外顯子5 1298+1299 tgg→taa 外顯子53401336cag→tag 外顯子5 1336+1338 cag→taa 外顯子53601396cag→tag 外顯子5 1396+1398 cag→taa 外顯子53821462cag→tag 外顯子5 1462+1464 cag→taa 外顯子53881480cag→tag 外顯子5 1480+1482 cag→taa 外顯子54001517tgg→tag 外顯子5 1518tgg→tga 外顯子5 1517+1518 tgg→taa 外顯子54091544tgg→tag 外顯子5 1545tgg→tga 外顯子5 1544+1545 tgg→taa 表3aFATB-A2(WOSR，SEQ ID NO3和4)中潛在的STOP密碼子突變 外顯子 氨基酸核苷酸 野生型→ 號(hào) 位置 位置 突變密碼子 外顯子152154cag→tag 外顯子1 154+156cag→taa 外顯子179235cag→tag 外顯子1 235+237cag→taa 外顯子190268cag→tag 外顯子1 268+270cag→taa 外顯子194281tgg→tag 外顯子1 282tgg→tga 外顯子1 281+282tgg→taa 外顯子1111 331cag→tag 外顯子1 331+333cag→taa 外顯子1112 335tgg→tag 外顯子1 336tgg→tga 外顯子1 335+336tgg→taa 外顯子1117350tgg→tag 外顯子1 351tgg→tga 外顯子1 350+351tgg→taa 外顯子1136406cag→tag 外顯子1 406+408cag→taa 外顯子1143427cag→tag 外顯子1 427+429cag→taa 外顯子1168502cag→tag 外顯子1 502+504cag→taa 外顯子2198672tgg→tag 外顯子2 673tgg→tga 外顯子2 672+673tgg→taa 外顯子2204689cag→tag 外顯子2 689+691cag→taa 外顯子2213717tgg→tag 外顯子3 812tgg→tga 外顯子2-3 717+812tgg→taa 外顯子3222838tgg→tag 外顯子3 839tgg→tga 外顯子3 838+839tgg→taa 外顯子3225846cag→tag 外顯子3 846+848cag→taa 外顯子3235877tgg→tag 外顯子3 878tgg→tga 外顯子3 877+878tgg→taa 外顯子3238885+886cgg→tag 外顯子3 885+887cgg→tga 外顯子3 885+886+887cgg→taa 外顯子3248915cga→tga 外顯子3 915+916cga→taa 外顯子42531064 tgg→tag 外顯子4 1065 tgg→tga 外顯子4 1064+1065 tgg→taa 外顯子42711117 cga→tga 外顯子4 1117+1118 cga→taa 外顯子53111316 tgg→tag 外顯子5 1317 tgg→tga 外顯子5 1316+1317 tgg→taa 外顯子53181336 cag→tag 外顯子5 1336+1338 cag→taa 外顯子53281367 tgg→tag 外顯子5 1368 tgg→tga 外顯子5 1367+1368 tgg→taa 外顯子53411405 cag→tag 外顯子5 1405+1407 cag→taa 外顯子53611465 cag→tag 外顯子5 1465+1467cag→taa 外顯子53831531 cag→tag 外顯子5 1531+1533cag→taa 外顯子53871543 cga→tga 外顯子5 1543+1544cga→taa 外顯子53891549 cag→tag 外顯子5 1549+1551cag→taa 外顯子54011586 tgg→tag 外顯子5 1587 tgg→tga 外顯子5 1586+1587tgg→taa 外顯子54041594 cag→tag 外顯子5 1594+1596cag→taa 外顯子54101613 tgg→tag 外顯子5 1614 tgg→tga 外顯子5 1613+1614tgg→taa 表3bFATB-A2(SOSR，SEQ ID NO15和16)中潛在的STOP密碼子突變 外顯子氨基酸核苷酸 野生型→ 號(hào)位置 位置 突變密碼子 外顯子152 154cag→tag 外顯子1 154+156cag→taa 外顯子179 235cag→tag 外顯子1 235+237cag→taa 外顯子190 268cag→tag 外顯子1 268+270cag→taa 外顯子194 281tgg→tag 外顯子1 282tgg→tga 外顯子1 281+282tgg→taa 外顯子1111 331cag→tag 外顯子1 331+333cag→taa 外顯子1112 335tgg→tag 外顯子1 336tgg→tga 外顯子1 335+336tgg→taa 外顯子1117 350tgg→tag 外顯子1 351tgg→tga 外顯子1 350+351tgg→taa 外顯子1136 406cag→tag 外顯子1 406+408cag→taa 外顯子1143 427cag→tag 外顯子1 427+429cag→taa 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tgg→tag 外顯子5 1614 tgg→tga 外顯子5 1613+1614 tgg→taa 表4aFATB-A3(WOSR，SEQ ID NO5和6)中潛在的STOP密碼子突變 外顯子氨基酸核苷酸 野生型→ 號(hào)位置 位置 突變密碼子 外顯子152 154caa→taa 外顯子181 241caa→taa 外顯子182 244caa→taa 外顯子191 271cag→tag 外顯子1 271+273cag→taa 外顯子195 284tgg→tag 外顯子1 285tgg→tga 外顯子1 284+285tgg→taa 外顯子1112 334cag→tag 外顯子1 334+336cag→taa 外顯子1113 338tgg→tag 外顯子1 339tgg→tga 外顯子1 338+339tgg→taa 外顯子1137 409cag→tag 外顯子1 409+411cag→taa 外顯子1144 430cag→tag 外顯子1 430+432cag→taa 外顯子1169 505cag→tag 外顯子1 505+507cag→taa 外顯子2199 828tgg→tag 外顯子2 829tgg→tga 外顯子2 828+829tgg→taa 外顯子2205 845cag→tag 外顯子2 845+847cag→taa 外顯子2214 873tgg→tag 外顯子3 947tgg→tga 外顯子2-3 873+947tgg→taa 外顯子3223 973tgg→tag 外顯子3 974tgg→tga 外顯子3 973+974tgg→taa 外顯子3236 1012 tgg→tag 外顯子3 1013 tgg→tga 外顯子3 1012+1013 tgg→taa 外顯子3239 1020+1021 cgg→tag 外顯子3 1020+1022 cgg→tga 外顯子3 1020+1021+1022 cgg→taa 外顯子4254 1146 tgg→tag 外顯子4 1147 tgg→tga 外顯子4 1146+1147 tgg→taa 外顯子4272 1199 cga→tga 外顯子4 1199+1200 cga→taa 外顯子53121420tgg→tag 外顯子5 1421tgg→tga 外顯子5 1420+1421 tgg→taa 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1687 cag→tag 外顯子51687+1689 cag→taa 外顯子5401 1724 tgg→tag 外顯子51725 tgg→tga 外顯子51724+1725 tgg→taa 外顯子5410 1751 tgg→tag 外顯子51752 tgg→tga 外顯子51751+1752 tgg→taa 表6bFATB-C2(SOSR，SEQ ID NO21和22)中潛在的STOP密碼子突變 外顯子氨基酸 核苷酸 野生型→ 號(hào)位置 位置 突變密碼子 外顯子152 154cag→tag 外顯子1154+156cag→taa 外顯子179 235cag→tag 外顯子1235+237cag→taa 外顯子190 268cag→tag 外顯子1268+270cag→taa 外顯子194 281tgg→tag 外顯子1282tgg→tga 外顯子1281+282tgg→taa 外顯子1111 331cag→tag 外顯子1331+333cag→taa 外顯子1112 335tgg→tag 外顯子1336tgg→tga 外顯子1335+336tgg→taa 外顯子1117 350tgg→tag 外顯子1351tgg→tga 外顯子1350+351tgg→taa 外顯子1136 406cag→tag 外顯子1406+408cag→taa 外顯子1143 427cag→tag 外顯子1427+429cag→taa 外顯子1168 502cag→tag 外顯子1502+504cag→taa 外顯子2198 669tgg→tag 外顯子2670tgg→tga 外顯子2669+670tgg→taa 外顯子2204 686cag→tag 外顯子2686+688cag→taa 外顯子2213 714tgg→tag 外顯子3945tgg→tga 外顯子2-3 714+945tgg→taa 外顯子3222 971tgg→tag 外顯子3972tgg→tga 外顯子3971+972tgg→taa 外顯子3225 979cag→tag 外顯子3979+981cag→taa 外顯子3235 1010 tgg→tag 外顯子31011 tgg→tga 外顯子31010+1011 tgg→taa 外顯子3238 1018+1019 cgg→tag 外顯子31018+1020 cgg→tga 外顯子31018+1019+1020 cgg→taa 外顯子3248 1048 cga→tga 外顯子31048+1049 cga→taa 外顯子4253 1195 tgg→tag 外顯子41196 tgg→tga 外顯子41195+1196 tgg→taa 外顯子42711248cga→tga 外顯子4 1248+1249 cga→taa 外顯子53111454tgg→tag 外顯子5 1455tgg→tga 外顯子5 1454+1455 tgg→taa 外顯子53181474cag→tag 外顯子5 1474+1476 cag→taa 外顯子53281505tgg→tag 外顯子5 1506tgg→tga 外顯子5 1505+1506 tgg→taa 外顯子53411543cag→tag 外顯子5 1543+1545 cag→taa 外顯子53611603cag→tag 外顯子5 1603+1605 cag→taa 外顯子53831669cag→tag 外顯子5 1669+1671 cag→taa 外顯子53891687cag→tag 外顯子5 1687+1689 cag→taa 外顯子54011724tgg→tag 外顯子5 1725tgg→tga 外顯子5 1724+1725 tgg→taa 外顯子54101751tgg→tag 外顯子5 1752tgg→tga 外顯子5 1751+1752 tgg→taa 表7aFATB-C3(WOSR，SEQ ID NO11和12)中潛在的STOP密碼子突變 外顯子 氨基酸核苷酸 野生型→ 號(hào) 位置 位置 突變密碼子 外顯子152154caa→taa 外顯子181241caa→taa 外顯子182244caa→taa 外顯子191271cag→tag 外顯子1 271+273cag→taa 外顯子195284tgg→tag 外顯子1 285tgg→tga 外顯子1 284+285tgg→taa 外顯子1112 334cag→tag 外顯子1 334+336cag→taa 外顯子1113 338tgg→tag 外顯子1 339tgg→tga 外顯子1 338+339tgg→taa 外顯子1137 409cag→tag 外顯子1 409+411cag→taa 外顯子1144 430cag→tag 外顯子1 430+432cag→taa 外顯子1169505 cag→tag 外顯子1 505+507 cag→taa 外顯子21991018 tgg→tag 外顯子2 1019 tgg→tga 外顯子2 1018+1019 tgg→taa 外顯子22051035 cag→tag 外顯子2 1035+1037 cag→taa 外顯子22141063 tgg→tag 外顯子3 1138 tgg→tga 外顯子2-3 1063+1138 tgg→taa 外顯子32231164 tgg→tag 外顯子3 1165 tgg→tga 外顯子3 1164+1165 tgg→taa 外顯子32361203 tgg→tag 外顯子3 1204 tgg→tga 外顯子3 1203+1204 tgg→taa 外顯子32391211+1212 cgg→tag 外顯子3 1211+1213 cgg→tga 外顯子3 1211+1212+1213cgg→taa 外顯子42541329 tgg→tag 外顯子4 1330 tgg→tga 外顯子4 1329+1330 tgg→taa 外顯子42721382 cga→tga 外顯子4 1382+1383 cga→taa 外顯子53121578 tgg→tag 外顯子5 1579 tgg→tga 外顯子5 1578+1579 tgg→taa 外顯子53191598 cag→tag 外顯子5 1598+1600 cag→taa 外顯子53291629 tgg→tag 外顯子5 1630 tgg→tga 外顯子5 1629+1630 tgg→taa 外顯子53621727 cag→tag 外顯子5 1727+1729 cag→taa 外顯子53841793 cag→tag 外顯子5 1793+1795 cag→taa 外顯子53881805 cga→tga 外顯子5 1805+1806 cga→taa 外顯子53901811 cag→tag 外顯子5 1811+1813 cag→taa 外顯子53991838 cga→tga 外顯子5 1838+1839 cga→taa 外顯子54021848 tgg→tag 外顯子5 1849 tgg→tga 外顯子5 1848+1849 tgg→taa 外顯子54111875 tgg→tag 外顯子5 1876 tgg→tga 外顯子5 1875+1876 tgg→taa 表7bFATB-C3(SOSR，SEQ ID NO23和24)中潛在的STOP密碼子突變 外顯子 氨基酸核苷酸 野生型→ 號(hào) 位置 位置 突變密碼子 外顯子152154caa→taa 外顯子181241caa→taa 外顯子182244caa→taa 外顯子191271cag→tag 外顯子1 271+273cag→taa 外顯子195284tgg→tag 外顯子1 285tgg→tga 外顯子1 284+285tgg→taa 外顯子1112 334cag→tag 外顯子1 334+336cag→taa 外顯子1113 338tgg→tag 外顯子1 339tgg→tga 外顯子1 338+339tgg→taa 外顯子1137 409cag→tag 外顯子1 409+411cag→taa 外顯子1144 430cag→tag 外顯子1 430+432cag→taa 外顯子1169 505cag→tag 外顯子1 505+507cag→taa 外顯子2199 1019 tgg→tag 外顯子2 1020 tgg→tga 外顯子2 1019+1020 tgg→taa 外顯子2205 1036 cag→tag 外顯子2 1036+1038 cag→taa 外顯子2214 1064 tgg→tag 外顯子3 1139 tgg→tga 外顯子2-31064+1139 tgg→taa 外顯子3223 1165 tgg→tag 外顯子3 1166 tgg→tga 外顯子3 1165+1166 tgg→taa 外顯子3236 1204 tgg→tag 外顯子3 1205 tgg→tga 外顯子3 1204+1205 tgg→taa 外顯子3239 1212+1213 cgg→tag 外顯子3 1212+1214 cgg→tga 外顯子3 1212+1213+1214 cgg→taa 外顯子4254 1330 tgg→tag 外顯子4 1331 tgg→tga 外顯子4 1330+1331 tgg→taa 外顯子4272 1383 cga→tga 外顯子41383+1384cga→taa 外顯子5312 1579 tgg→tag 外顯子51580 tgg→tga 外顯子51579+1580tgg→taa 外顯子5319 1599 cag→tag 外顯子51599+1601cag→taa 外顯子5329 1630 tgg→tag 外顯子51631 tgg→tga 外顯子51630+1631tgg→taa 外顯子5362 1728 cag→tag 外顯子51728+1730cag→taa 外顯子5384 1794 cag→tag 外顯子51794+1796cag→taa 外顯子5388 1806 cga→tga 外顯子51806+1807cga→taa 外顯子5390 1812 cag→tag 外顯子51812+1814cag→taa 外顯子5399 1839 cga→tga 外顯子51839+1840cga→taa 外顯子5402 1849 tgg→tag 外顯子51850 tgg→tga 外顯子51849+1850tgg→taa 外顯子5411 1876 tgg→tag 外顯子51877 tgg→tga 外顯子51876+1877tgg→taa 顯而易見的，突變不限于上表顯示的內(nèi)容，可以理解在fatB等位基因中可以存在除序列表中所述以及上表所指的序列以外的類似的STOP突變。
如本文中使用的，F(xiàn)ATB等位基因中的剪接位點(diǎn)突變是FATB等位基因中這樣的突變，其中在相應(yīng)的野生型FATB等位基因中的突變導(dǎo)致前mRNA的異常剪接，從而導(dǎo)致突變蛋白具有顯著降低的活性或沒有活性。突變可以是在共有剪接位點(diǎn)序列中。例如，下表描述了共有序列，所述序列如果突變，可能影響正確的剪接。GT-AG剪接位點(diǎn)通常具有其他的保守性核苷酸，例如在內(nèi)含子的5’端(在外顯子中)的2個(gè)高度保守的核苷酸，通常是5’-AG-3’。在GT二核苷酸的3’-側(cè)(因而在內(nèi)含子中)，可以發(fā)現(xiàn)高度保守的四核苷酸5’-AAGT-3’。這意味著在供體位點(diǎn)可以鑒別高度保守的8個(gè)核苷酸。

^描述了剪接位點(diǎn)；R＝A或G；Y＝C或T；N＝A、C、G或T(但通常是G)；n＝多個(gè)核苷酸；粗體＝內(nèi)含子序列中的共有二核苷酸。Pu＝嘌呤堿基；Py＝嘧啶堿基。
本領(lǐng)域描述了剪接位點(diǎn)結(jié)構(gòu)和共有序列，用于鑒別外顯子和剪接位點(diǎn)序列的計(jì)算機(jī)程序是可獲得的，例如NetPLAntgene、BDGP或Genio、est2genome、FgeneSH等。比較基因組序列或前-mRNA序列與翻譯的蛋白質(zhì)可用于確定或驗(yàn)證剪接位點(diǎn)和異常剪接。
本文涵蓋了任何突變(插入、缺失和/或取代一個(gè)或多個(gè)核苷酸)，所述突變改變前-mRNA剪接，從而導(dǎo)致具有顯著降低的生物學(xué)活性的蛋白質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，包含剪接位點(diǎn)突變的突變FATB等位基因是這樣的FATB等位基因，其中改變的剪接是由在FA TB轉(zhuǎn)錄DNA區(qū)域中引入一個(gè)或多個(gè)上文粗體描述的共有二核苷酸的核苷酸取代產(chǎn)生的。例如，在供體剪接位點(diǎn)，可以將^GU突變成如^AU，和/或在受體剪接位點(diǎn)序列，可以將AG^突變成如AA^。在另一個(gè)實(shí)施方案中，包含剪接位點(diǎn)突變的突變FATB等位基因是這樣的FATB等位基因，其中改變的剪接是由在FATB轉(zhuǎn)錄DNA區(qū)域中引入外顯子序列的保守核苷酸中的一個(gè)或多個(gè)核苷酸取代產(chǎn)生的。
下表顯示了FA TB基因中可能的剪接位點(diǎn)，特別是在標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)含子的保守二核苷酸中，和外顯子中直接鄰接這些二核苷酸的核苷酸中(符號(hào)‘[’和‘]’表示外顯子-內(nèi)含子和內(nèi)含子-外顯子邊界以及剪接位點(diǎn)；下劃線的核苷酸是突變的)。
表8aFATB-A1(WOSR，SEQ ID NO1)中的潛在剪接位點(diǎn)突變 內(nèi)含子數(shù)核苷酸位置 野生型→突變體剪接位點(diǎn) 內(nèi)含子1-供體504g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子1-供體505g[gt...→g[at... 內(nèi)含子1-受體589...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子1-受體590...ag]g→...ag]a 內(nèi)含子2-供體723g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子2-供體724g[gt...→g[at... 內(nèi)含子2-受體797...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子2-受體798...ag]g→...ag]a 內(nèi)含子3-供體911g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子3-供體912g[gt...→g[at... 內(nèi)含子3-受體980...ag]t→...aa]t 內(nèi)含子4-供體1153 t[gt...→t[at... 內(nèi)含子4-受體1242 ...ag]c→...aa]c 內(nèi)含子4-受體1243 ...ag]c→...ag]t 表8bFA TB-A1(SOSR，SEQ ID NO13)中的潛在剪接位點(diǎn)突變 內(nèi)含子數(shù)核苷酸位置野生型→突變體剪接位點(diǎn) 內(nèi)含子1-供體501 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子1-供體502 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子1-受體586 ...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子1-受體587 ...ag]g→...ag]a 內(nèi)含子2-供體720 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子2-供體721 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子2-受體794 ...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子2-受體795 ...ag]g→...ag]a 內(nèi)含子3-供體908 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子3-供體909 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子3-受體977 ...ag]t→...aa]t 內(nèi)含子4-供體1150t[gt...→t[at... 內(nèi)含子4-受體1239...ag]c→...aa]c 內(nèi)含子4-受體1240...ag]c→...ag]t 表9aFATB-A2(WOSR，SEQ ID NO3)中的潛在剪接位點(diǎn)突變 內(nèi)含子數(shù)核苷酸位置野生型→突變體剪接位點(diǎn) 內(nèi)含子1-供體504 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子1-供體505 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子1-受體583 ...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子1-受體584 ...ag]g→...ag]a 內(nèi)含子2-供體717 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子2-供體718 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子2-受體811 ...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子2-受體812 ...ag]g→...ag]a 內(nèi)含子3-供體925 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子3-供體926 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子3-受體1058 ...ag]t→...aa]t 內(nèi)含子4-供體1231 t[gt...→t[at... 內(nèi)含子4-受體1308 ...ag]c →...aa]c 內(nèi)含子4-受體1309 ...ag]c→...ag]t 表9bFA TB-A2(SOSR，SEQ ID NO15)中的潛在剪接位點(diǎn)突變 內(nèi)含子數(shù)核苷酸位置野生型→突變體剪接位點(diǎn) 內(nèi)含子1-供體504 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子1-供體505 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子1-受體583 ...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子1-受體584 ...ag]g→...ag]a 內(nèi)含子2-供體717 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子2-供體718 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子2-受體811 ...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子2-受體812 ...ag]g→...ag]a 內(nèi)含子3-供體925 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子3-供體926 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子3-受體1058 ...ag]t→...aa]t 內(nèi)含子4-供體1231 t[gt...→t[at... 內(nèi)含子4-受體1308 ...ag]c →...aa]c 內(nèi)含子4-受體1309 ...ag]c→...ag]t 表10aFATB-A3(WOSR，SEQ ID NO5)中的潛在剪接位點(diǎn)突變 內(nèi)含子數(shù)核苷酸位置野生型→突變體剪接位點(diǎn) 內(nèi)含子1-供體507 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子1-供體508 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子1-受體739 ...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子1-受體740 ...ag]g →...ag]a 內(nèi)含子2-供體873 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子2-供體874 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子2-受體946 ...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子2-受體947 ...ag]g →...ag]a 內(nèi)含子3-供體1060 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子3-供體1061 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子3-受體1140 ...ag]t →...aa]t 內(nèi)含子4-供體1312 c[gt...→t[gt... 內(nèi)含子4-供體1313 c[gt...→c[at... 內(nèi)含子4-受體1412 ...ag]c→...aa]c 內(nèi)含子4-受體1413 ...ag]c→...ag]t 表10bFATB-A3(SOSR，SEQ ID NO17)中的潛在剪接位點(diǎn)突變 內(nèi)含子數(shù)核苷酸位置野生型→突變體剪接位點(diǎn) 內(nèi)含子1-供體507 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子1-供體508 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子1-受體739 ...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子1-受體740 ...ag]g→...ag]a 內(nèi)含子2-供體873 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子2-供體874 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子2-受體946 ...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子2-受體947 ...ag]g→...ag]a 內(nèi)含子3-供體1060 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子3-供體1061 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子3-受體1138 ...ag]t→...aa]t 內(nèi)含子4-供體1310 c[gt...→t[gt... 內(nèi)含子4-供體1311 c[gt...→c[at... 內(nèi)含子4-受體1394 ...ag]c→...aa]c 內(nèi)含子4-受體1395 ...ag]c→...ag]t 表11aFA TB-C1(WOSR，SEQ ID NO7)中的潛在剪接位點(diǎn)突變 內(nèi)含子數(shù)核苷酸位置野生型→突變體剪接位點(diǎn) 內(nèi)含子1-供體498 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子1-供體499 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子1-受體578 ...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子1-受體579 ...ag]g→...ag]a 內(nèi)含子2-供體712 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子2-供體713 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子2-受體790 ...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子2-受體791 ...ag]g→...ag]a 內(nèi)含子3-供體904 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子3-供體905 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子3-受體994 ...ag]t→...aa]t 內(nèi)含子4-供體1167 t[gt...→t[at... 內(nèi)含子4-受體1251 ...ag]c→...aa]c 內(nèi)含子4-受體1252 ...ag]c→...ag]t 表11bFA TB-C1(SOSR，SEQ ID NO19)中的潛在剪接位點(diǎn)突變 內(nèi)含子數(shù)核苷酸位置野生型→突變體剪接位點(diǎn) 內(nèi)含子1-供體498 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子1-供體499 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子1-受體578 ...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子1-受體579 ...ag]g→...ag]a 內(nèi)含子2-供體712 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子2-供體713 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子2-受體790 ...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子2-受體791 ...ag]g→...ag]a 內(nèi)含子3-供體904 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子3-供體905 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子3-受體994 ...ag]t→...aa]t 內(nèi)含子4-供體1167 t[gt...→t[at... 內(nèi)含子4-受體1251 ...ag]c→...aa]c 內(nèi)含子4-受體1252 ...ag]c→...ag]t 表12aFATB-C2(WOSR，SEQ ID NO9)中的潛在剪接位點(diǎn)突變 內(nèi)含子數(shù)核苷酸位置野生型→突變體剪接位點(diǎn) 內(nèi)含子1-供體504 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子1-供體505 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子1-受體580 ...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子1-受體581 ...ag]g→...ag]a 內(nèi)含子2-供體714 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子2-供體715 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子2-受體944 ...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子2-受體945 ...ag]g→...ag]a 內(nèi)含子3-供體1058 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子3-供體1059 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子3-受體1189 ...ag]t→...aa]t 內(nèi)含子4-供體1362 t[gt...→t[at... 內(nèi)含子4-受體1446 ...ag]c→...aa]c 內(nèi)含子4-受體1447 ...ag]c→...ag]t 表12bFATB-C2(SOSR，SEQ ID NO21)中的潛在剪接位點(diǎn)突變 內(nèi)含子數(shù)核苷酸位置野生型→突變體剪接位點(diǎn) 內(nèi)含子1-供體504 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...ag]c→...ag]t 表13bFATB-C3(SOSR，SEQ ID NO23)中的潛在剪接位點(diǎn)突變 內(nèi)含子數(shù)核苷酸位置 野生型→突變體剪接位點(diǎn) 內(nèi)含子1-供體507g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子1-供體508g[gt...→g[at... 內(nèi)含子1-受體930...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子1-受體931...ag]g→...ag]a 內(nèi)含子2-供體1064 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子2-供體1065 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子2-受體1138 ...ag]g→...aa]g 內(nèi)含子2-受體1139 ...ag]g→...ag]a 內(nèi)含子3-供體1252 g[gt...→a[gt... 內(nèi)含子3-供體1253 g[gt...→g[at... 內(nèi)含子3-受體1324 ...ag]t→...aa]t 內(nèi)含子4-供體1496 c[gt...→t[出... 內(nèi)含子4-供體1497 c[gt...→c[at... 內(nèi)含子4-受體1571 ...ag]c→...aa]c 內(nèi)含子4-受體1572 ...ag]c→...ag]t 根據(jù)發(fā)明的氨基酸序列 提供了來自蕓苔屬物種，特別是來自歐洲油菜的野生型(功能性)FATB氨基酸序列和突變FATB氨基酸序列(包括一個(gè)或多個(gè)突變，優(yōu)選的導(dǎo)致FATB蛋白的生物學(xué)活性顯著降低或無活性的突變)，但也可以來自其它的蕓苔屬作物物種。例如，包括A和/或C基因組的蕓苔屬物種，可以編碼不同的FATB-A或FATB-C氨基酸。此外，可以使用誘變方法在野生型FATB等位基因中產(chǎn)生突變，從而產(chǎn)生可以編碼其它突變FATB蛋白的突變等位基因。在一個(gè)實(shí)施方案中，在蕓苔屬植物中(即，內(nèi)源性的)提供了野生型和/或突變FATB氨基酸序列。然而，本文也提供了分離的FATB氨基酸序列(例如，從植物分離的或合成制造的)以及其變體和任意上述序列的片段。
已經(jīng)從歐洲油菜冬油菜(WOSR)和春油菜(SOSR)中分離了FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3蛋白的氨基酸序列，如序列表所示。描述了野生型FATB序列，同時(shí)根據(jù)野生型FATB序列，下文還描述了這些序列的突變FATB序列，和與這些序列實(shí)質(zhì)相似的序列。
如上所述，本文描述的蕓苔屬FATB蛋白是長(zhǎng)度約412-424個(gè)氨基酸，并包括多個(gè)結(jié)構(gòu)和功能結(jié)構(gòu)域。FATB蛋白N-末端部分的序列比成熟FATB蛋白的序列進(jìn)化保守較低。因此，成熟FATB蛋白的序列比前體蛋白質(zhì)的序列更少變化。
根據(jù)發(fā)明的“FATB-A1氨基酸序列”或“FATB-A1變體氨基酸序列”是這樣的氨基酸序列，當(dāng)所述氨基酸序列在具有或不具有轉(zhuǎn)運(yùn)肽的條件下比對(duì)時(shí)，與SEQ ID NO2(WOSR FATB-A1)和/或SEQ ID NO14(SOSRFATB-A1)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、98％、99％或100％序列同一性。這些氨基酸序列還可以被稱為與序列表中提供的FATB序列“實(shí)質(zhì)相似”或“實(shí)質(zhì)相同”。
根據(jù)發(fā)明的“FATB-A2氨基酸序列”或“FATB-A2變體氨基酸序列”是這樣的氨基酸序列，當(dāng)所述氨基酸序列在具有或不具有轉(zhuǎn)運(yùn)肽的條件下比對(duì)時(shí)，與SEQ ID NO4(WOSR FATB-A2)和/或SEQ ID NO16(SOSRFATB-A2)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。這些氨基酸序列還可以被稱為與序列表中提供的FATB序列“實(shí)質(zhì)相似”或“實(shí)質(zhì)相同”。
根據(jù)發(fā)明的“FATB-A3氨基酸序列”或“FATB-A3變體氨基酸序列”是這樣的氨基酸序列，當(dāng)所述氨基酸序列在具有或不具有轉(zhuǎn)運(yùn)肽的條件下比對(duì)時(shí)，與SEQ ID NO6(WOSR FATB-A3)和/或SEQ ID NO18(SOSRFATB-A3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。這些氨基酸序列還可以被稱為與序列表中提供的FATB序列“實(shí)質(zhì)相似”或“實(shí)質(zhì)相同”。
根據(jù)發(fā)明的“FATB-C1氨基酸序列”或“FATB-C1變體氨基酸序列”是這樣的氨基酸序列，當(dāng)所述氨基酸序列在具有或不具有轉(zhuǎn)運(yùn)肽的條件下比對(duì)時(shí)，與SEQ ID NO8(WOSR FATB-C1)和/或SEQ ID NO20(SOSRFATB-C1)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。這些氨基酸序列還可以被稱為與序列表中提供的FATB序列“實(shí)質(zhì)相似”或“實(shí)質(zhì)相同”。
根據(jù)發(fā)明的“FATB-C2氨基酸序列”或“FATB-C2變體氨基酸序列”是這樣的氨基酸序列，當(dāng)所述氨基酸序列在具有或不具有轉(zhuǎn)運(yùn)肽的條件下比對(duì)時(shí)，與SEQ ID NO10(WOSR FATB-C2)和/或SEQ ID NO22(SOSRFATB-C2)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。這些氨基酸序列還可以被稱為與序列表中提供的FATB序列“實(shí)質(zhì)相似”或“實(shí)質(zhì)相同”。
根據(jù)發(fā)明的“FATB-C3氨基酸序列”或“FATB-C3變體氨基酸序列”是這樣的氨基酸序列，當(dāng)所述氨基酸序列在具有或不具有轉(zhuǎn)運(yùn)肽的條件下比對(duì)時(shí)，與SEQ ID NO12(WOSR FATB-C3)和/或SEQ ID NO24(SOSRFATB-C3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。這些氨基酸序列還可以被稱為與序列表中提供的FATB序列“實(shí)質(zhì)相似”或“實(shí)質(zhì)相同”。
因此，發(fā)明提供了野生型、功能性FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3蛋白的氨基酸序列，包括其變體和片段(如下文進(jìn)一步定義的)，還提供了任意上述序列的突變氨基酸序列，其中所述氨基酸序列中的突變優(yōu)選的導(dǎo)致FATB蛋白生物學(xué)活性的顯著降低。突變FATB蛋白的生物學(xué)活性的顯著降低指，與野生型蛋白的活性相比，酶活性(即，酰基ACP-硫酯酶活性)降低至少30％、至少40％、50％或更多，至少90％或100％(無生物學(xué)活性)。
本文提供了內(nèi)源性和分離的氨基酸序列。FATB氨基酸序列或其變體的“片段”(如定義)可以是多種長(zhǎng)度，例如FATB序列(或變體序列)的至少10、12、15、18、20、50、100、200、400個(gè)連續(xù)的氨基酸。
功能性FATB蛋白的氨基酸序列 序列表中描述的氨基酸序列是來自歐洲油菜的野生型、功能性FATB蛋白。因此，這些序列對(duì)其分離來源的WOSR和SOSR植物是內(nèi)源性的?？梢栽谄渌|苔屬作物物種、變種、育種品系或野生登記物(accessions)中，用上述相同的氨基酸序列或其變體，來篩選其它的功能性FATB蛋白。
此外，可以理解，通過在氨基酸數(shù)據(jù)庫中篩選實(shí)質(zhì)相似的序列，可以以計(jì)算機(jī)鑒別FATB氨基酸序列及其變體(或任意所述序列的片段)。還提供了根據(jù)發(fā)明的氨基酸分子的片段。片段包括成熟蛋白質(zhì)的氨基酸序列，或者包含所有或部分氨基酸序列的更小片段，等。
突變FATB蛋白的氨基酸序列 相對(duì)于野生型氨基酸序列，包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、插入或取代的氨基酸序列是發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，此類突變氨基酸分子的片段也是。如上文所述，可以利用多種已知的方法產(chǎn)生和/或鑒別此類突變氨基酸序列。此外，以內(nèi)源性形式和以分離的形式提供了此類氨基酸分子。
在一個(gè)實(shí)施方案中，氨基酸序列中的突變導(dǎo)致相對(duì)于野生型蛋白，F(xiàn)ATB蛋白的生物學(xué)活性顯著降低或完全消失。如上所述，基本上，導(dǎo)致相對(duì)于野生型蛋白，蛋白質(zhì)包含至少一個(gè)氨基酸插入、缺失和/或取代的任何突變，都可以導(dǎo)致顯著降低的(或沒有)酶活性。然而，可以理解，在蛋白質(zhì)一些部分的突變更容易導(dǎo)致突變FATB蛋白降低的功能，例如導(dǎo)致截短的蛋白質(zhì)的突變(其中缺失了功能結(jié)構(gòu)域(例如，催化結(jié)構(gòu)域或底物特異性涉及的氨基酸(見上文))的重要部分)；或者具有催化功能或在底物特異性中涉及的保守性氨基酸殘基被取代的突變。
因此在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了包含一個(gè)或多個(gè)缺失或插入突變的突變FATB蛋白，從而缺失或插入導(dǎo)致在體內(nèi)具有顯著降低的活性或無活性的突變蛋白。此類突變FATB蛋白是這樣的FATB蛋白，其中與野生型FATB蛋白相比，缺失或插入了至少1個(gè)，至少2、3、4、5、10、20、30、50、100、200、300、400或更多個(gè)氨基酸，從而缺失或插入導(dǎo)致在體內(nèi)具有顯著降低的活性或無活性的突變蛋白。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供的突變FATB蛋白是截短的，從而截短導(dǎo)致在體內(nèi)具有顯著降低的活性或無活性的突變蛋白。此類截短的FATB蛋白是在相應(yīng)的野生型(成熟)FATB蛋白的C-末端部分缺少功能結(jié)構(gòu)域，并且保留了相應(yīng)的野生型(成熟)FATB蛋白的N-末端部分的FATB蛋白。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了截短的FATB蛋白，其包含相應(yīng)野生型(成熟)FATB蛋白的N-末端部分，直到但不包括木瓜蛋白酶-樣催化三聯(lián)體(如上述)的保守性Cys殘基。與野生型蛋白相比，突變蛋白截得越短，越容易缺失任何酶活性。因此，在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了截短的FATB蛋白，其包含相應(yīng)野生型(成熟)FATB蛋白的N-末端部分，直到但不包括木瓜蛋白酶-樣催化三聯(lián)體(如上述)的保守性His或Asn殘基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了截短的FATB蛋白，其包含相應(yīng)野生型(成熟)FATB蛋白的N-末端部分，直到但不包括底物特異性所涉及(如上述)的保守性Met、Lys、Val、Ser或Trp殘基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了截短的FATB蛋白，其包含相應(yīng)野生型(成熟)FATB蛋白的N-末端部分，缺少部分或全部的第二個(gè)4HBT結(jié)構(gòu)域，或缺少部分或全部的第一個(gè)4HBT結(jié)構(gòu)域(如上述)，或甚至更多的氨基酸。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了包含一個(gè)或多個(gè)取代突變的突變FATB蛋白，其中取代導(dǎo)致突變蛋白在體內(nèi)具有顯著降低的活性或無活性。此類突變FATB蛋白是這樣的FATB蛋白，其中具有催化功能的或者底物特異性涉及的保守性氨基酸殘基(例如，如上述)是被取代的。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了這樣的突變FATB蛋白，所述蛋白包含保守性氨基酸殘基的取代，所述氨基酸殘基具有催化功能，例如木瓜蛋白酶-樣催化三聯(lián)體的保守性Asn、His和Cys殘基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了這樣的突變FATB蛋白，所述蛋白包含保守性氨基酸殘基的取代，所述氨基酸殘基涉及底物特異性，例如保守性Met、Lys、Val、Ser或Trp殘基。
根據(jù)發(fā)明的方法 利用本領(lǐng)域常規(guī)的一系列方法，可以產(chǎn)生(例如通過誘變產(chǎn)生)和/或鑒別突變fatB等位基因，例如使用基于PCR的方法來擴(kuò)增部分或全部的fatB基因組或cDNA。
如本文中使用的，術(shù)語“誘變”指這樣的過程，其中植物細(xì)胞(例如，復(fù)數(shù)的蕓苔屬種子或其它部分，例如花粉)經(jīng)過誘導(dǎo)細(xì)胞DNA突變的技術(shù)，例如接觸誘變劑(如化學(xué)物質(zhì)(例如，乙基甲基磺酸鹽(EMS)、乙基亞硝基脲(ENU)等))或電離輻射(中子(如快中子誘變等)、α射線、γ射線(如鈷60源提供的)、X射線、UV-輻射等)，或兩個(gè)或多個(gè)前述技術(shù)的組合。因此，通過使用化學(xué)方式，例如通過將一種或多種植物組織與乙基甲基磺酸鹽(EMS)、乙基亞硝基脲等接觸；通過使用物理方式如X-射線等，或者通過γ輻射，如鈷60源提供的，可以實(shí)現(xiàn)一個(gè)或多個(gè)FATB等位基因的理想誘變。
在誘變后，利用已知的技術(shù)，從處理的種子生長(zhǎng)出，或從處理的細(xì)胞再生出蕓苔屬植物。例如，可以根據(jù)常規(guī)的生長(zhǎng)規(guī)程種植所獲得的蕓苔屬種子，在自花授粉后，在植物上形成種子。可選的，可以從處理的小孢子或花粉細(xì)胞中提取重雙單倍體小植物，立即形成純合植物。可以收獲在這一代或下一代作為此類自花授粉的結(jié)果所形成的額外種子，并篩選突變FATB等位基因的存在，利用本領(lǐng)域常規(guī)的技術(shù)，例如基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的技術(shù)(擴(kuò)增fatB等位基因)，或基于雜交的技術(shù)(例如，Southern印跡分析)，和/或fatB等位基因直接測(cè)序。為了在突變FATB等位基因中篩選點(diǎn)突變(所謂的單核苷酸多態(tài)性或SNP)的存在，可以使用本領(lǐng)域常規(guī)的SNP檢測(cè)方法，例如基于寡連接的技術(shù)、基于單堿基延伸的技術(shù)，或基于限制性位點(diǎn)差異的技術(shù)，如TILLING。
如上所述，特定野生型FATB等位基因的誘變(自發(fā)的和誘導(dǎo)的)導(dǎo)致在獲得的突變FATB等位基因中存在一個(gè)或多個(gè)缺失、插入或取代的核苷酸(后文稱為“突變區(qū)”)。因此，可以通過野生型FATB等位基因中的一個(gè)或多個(gè)缺失、插入或取代的核苷酸的分布和構(gòu)型，來表征突變FATB等位基因。一個(gè)或多個(gè)核苷酸在野生型FATB等位基因中分別插入、缺失或取代的位點(diǎn)也被稱為“突變區(qū)”。本文中使用的“5’或3’側(cè)翼區(qū)或序列”指突變(或相應(yīng)野生型)FATB等位基因中的DNA區(qū)域或序列，所述DNA區(qū)域或序列是至少20bp，優(yōu)選的至少50bp、至少750bp、至少1500bp，和多達(dá)5000bp的DNA(該DNA與含有一個(gè)或多個(gè)缺失、插入或取代的核苷酸的DNA不同)，優(yōu)選的所述DNA來自突變(或相應(yīng)野生型)FATB等位基因，位于突變FATB等位基因(或相應(yīng)的野生型FATB等位基因)突變區(qū)域直接相鄰的上游且與之相連(5’側(cè)翼區(qū)或序列)，或者位于所述突變區(qū)域直接相鄰的下游且與之相連(3’側(cè)翼區(qū)或序列)。
與相應(yīng)的野生型FATB等位基因的基因組特征相比，基于特定突變FATB等位基因的特殊基因組特征，例如，包含突變區(qū)域的基因組區(qū)域的特殊限制性圖譜、分子標(biāo)志物、或者側(cè)翼和/或突變區(qū)域的序列，開發(fā)了這樣的工具，所述工具用于鑒別特定突變FATB等位基因，或者包含特定突變FATB等位基因的植物或植物材料，或者包含所述含有特定突變FATB等位基因的植物材料的產(chǎn)品。
一旦測(cè)序了特定突變FATB等位基因，就可以通過分子生物學(xué)技術(shù)開發(fā)引物和探針，所述引物和探針特異性識(shí)別樣品核酸(DNA或RNA)中突變FATB等位基因的5’側(cè)翼、3’側(cè)翼和/或突變區(qū)域中的序列。例如，可以開發(fā)鑒別生物學(xué)樣品(例如植物、植物材料或包含植物材料的產(chǎn)品的樣品)中的突變FATB等位基因的PCR方法。此類PCR是基于至少兩種特異性的“引物“分別是一種識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)中的序列，另一種識(shí)別突變FATB等位基因的3’或5’側(cè)翼區(qū)中的序列；或者一種識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)中的序列，另一種識(shí)別突變FATB等位基因的突變區(qū)中的序列；或者分別是一種識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)中的序列，另一種識(shí)別跨越特定突變FATB等位基因的3’或5’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的序列(如下所述)。
優(yōu)選的引物具有在15至35個(gè)核苷酸之間的序列，在優(yōu)化的PCR條件下“特異性識(shí)別”在5’或3’側(cè)翼區(qū)中的序列，在突變區(qū)中的序列，或者跨越特定突變FATB等位基因的3’或5’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的序列，從而從包含特定突變FATB等位基因的核酸樣品中擴(kuò)增特定的片段(“突變FATB特定片段”或鑒別性擴(kuò)增子)。這意味著僅靶向突變FATB等位基因，在優(yōu)化的PCR條件下不擴(kuò)增植物基因組中的任何其它序列。
適合發(fā)明的PCR引物可以是以下的 -長(zhǎng)度范圍在17nt至約200nt的寡核苷酸，在其3’末端包含這樣的核苷酸序列，所述序列是選自特定突變FATB等位基因的5’側(cè)翼序列的至少17個(gè)連續(xù)的核苷酸，優(yōu)選的20個(gè)連續(xù)核苷酸(即，例如，與發(fā)明的突變FATB等位基因的一個(gè)或多個(gè)缺失、插入或取代的核苷酸5’側(cè)接的序列，例如與上述缺失、無義或剪接位點(diǎn)突變5’側(cè)接的序列，或與上述表格中表示的潛在STOP密碼子或剪接位點(diǎn)突變5’側(cè)接的序列)(識(shí)別5’側(cè)翼序列的引物)；或 -長(zhǎng)度范圍在17nt至約200nt的寡核苷酸，在其3’末端包含這樣的核苷酸序列，所述序列是選自特定突變FATB等位基因的3’側(cè)翼序列至少17個(gè)連續(xù)的核苷酸，優(yōu)選的20個(gè)連續(xù)核苷酸(即，例如，與發(fā)明的突變FATB等位基因的一個(gè)或多個(gè)缺失、插入或取代的核苷酸3’側(cè)接的序列的互補(bǔ)序列，例如與上述缺失、無義或剪接位點(diǎn)突變3’側(cè)接的序列的互補(bǔ)序列，或與上述表格中表示的潛在STOP密碼子或剪接位點(diǎn)突變3’側(cè)接的序列的互補(bǔ)序列)(識(shí)別3’側(cè)翼序列的引物)；或 -長(zhǎng)度范圍在17nt至約200nt的寡核苷酸，在其3’末端包含這樣的核苷酸序列，所述序列是選自特定突變FATB等位基因的突變區(qū)的序列的至少17個(gè)連續(xù)的核苷酸，優(yōu)選的20個(gè)核苷酸(即，例如，在發(fā)明的FATB基因中插入或取代的核苷酸序列，或其互補(bǔ)序列)(識(shí)別突變序列的引物)。
引物理所當(dāng)然的可以長(zhǎng)于所述的17個(gè)連續(xù)的核苷酸，可以是例如20、21、30、35、50、75、100、150、200nt長(zhǎng)或更長(zhǎng)。引物可以完全由選自所述側(cè)翼和突變序列的核苷酸序列的核苷酸序列組成。然而，引物5’末端的核苷酸序列(即，位于3’-的17個(gè)連續(xù)核苷酸外側(cè))較不關(guān)鍵。因此，視情況，引物的5’序列可以包括選自側(cè)翼或突變序列的核苷酸序列，但也可以含有一些(例如，1、2、5、10個(gè))錯(cuò)配。引物的5’序列甚至可以完全由側(cè)翼或突變序列不相關(guān)的核苷酸序列組成，例如，表示限制性酶識(shí)別位點(diǎn)的核苷酸序列。此類不相關(guān)的序列或具有錯(cuò)配的側(cè)翼DNA序列應(yīng)該優(yōu)選的不長(zhǎng)于100個(gè)，更優(yōu)選的不長(zhǎng)于50個(gè)甚至25個(gè)核苷酸。
此外，合適的引物在其3’端可以包含或由這樣的核苷酸序列組成，所述序列跨越側(cè)翼和突變序列之間的連接區(qū)(即，例如，在發(fā)明的突變FATB等位基因的一個(gè)或多個(gè)缺失、插入或取代的核苷酸5’側(cè)翼的序列，與一個(gè)或多個(gè)插入或取代的核苷酸的序列或在一個(gè)或多個(gè)缺失的核苷酸3’側(cè)翼的序列之間的連接區(qū)，例如，在與上述發(fā)明的FATB基因中的缺失、無義或剪接位點(diǎn)突變5’側(cè)翼的序列，和無義或剪接位點(diǎn)突變的序列或缺失突變3’側(cè)翼的序列之間的連接區(qū)；或者在上述表格所示的潛在STOP密碼子或剪接位點(diǎn)突變5’側(cè)翼的序列，和潛在STOP密碼子或剪接位點(diǎn)突變的序列之間的連接區(qū))，條件是所述位于3’的核苷酸不是專一的源自突變區(qū)或側(cè)翼區(qū)。
對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員也是顯而易見的，適當(dāng)選定的PCR引物對(duì)還應(yīng)當(dāng)不包含彼此互補(bǔ)的序列。
出于發(fā)明的目的，“SEQ ID NOX代表的核苷酸序列的互補(bǔ)序列”是這樣的核苷酸序列，所述序列可以源自將所代表的核苷酸序列，根據(jù)沙加夫法則(Chargaff’s rules)

通過其互補(bǔ)的核苷酸來取代核苷酸，并以5’至3’方向閱讀序列，即，與所代表的核苷酸序列相反的方向。
適合鑒別特定突變FATB等位基因的引物實(shí)例描述在實(shí)施例中。
如本文中使用的，“從位置X至位置Y的核苷酸序列SEQ ID NOZ”表示包括兩個(gè)核苷酸端點(diǎn)的核苷酸序列。
優(yōu)選的，擴(kuò)增的片段具有在50和1000核苷酸之間的長(zhǎng)度，例如在50和500核苷酸之間的長(zhǎng)度，或在100和350核苷酸之間的長(zhǎng)度。特定的引物可以具有與以下序列80至100％同一性的序列，所述序列是5’或3’側(cè)翼區(qū)中的序列、突變區(qū)中的序列或跨越特定突變FATB等位基因的3’或5’側(cè)翼和突變區(qū)之間的連接區(qū)的序列，條件是錯(cuò)配仍然允許用這些引物在優(yōu)化的PCR條件下特異性鑒別特定的突變FATB等位基因。但是，通過實(shí)驗(yàn)可以容易的確定可允許的錯(cuò)配范圍，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。
“突變FATB特異性片段”的檢測(cè)和/或鑒別可以以不同的方式發(fā)生，例如，在凝膠或毛細(xì)管電泳后通過大小評(píng)估，或通過基于熒光的檢測(cè)方法。還可以直接測(cè)序突變FATB特異片段。用于檢測(cè)擴(kuò)增的DNA片段的其它序列特異性方法也是本領(lǐng)域已知的。
本領(lǐng)域描述了標(biāo)準(zhǔn)的PCR規(guī)程，例如“PCR應(yīng)用手冊(cè)”(RocheMolecular Biochemicals，第2版，1999)和其他參考文獻(xiàn)。對(duì)于各個(gè)特定的突變FATB等位基因，“PCR應(yīng)用手冊(cè)”中詳細(xì)說明了優(yōu)化的PCR條件，包括特異性引物的序列。然而，可以理解，需要調(diào)整PCR鑒別規(guī)程中的多個(gè)參數(shù)適應(yīng)特定的實(shí)驗(yàn)室條件，并可以輕微調(diào)節(jié)來獲得相似的結(jié)果。例如，使用不同的制備DNA的方法可以需要調(diào)整例如引物的量、聚合酶、MgCl2濃度或使用的退火條件。相似的，其他引物的選擇可以指定用于PCR鑒別規(guī)程的其他優(yōu)化條件。然而，這些調(diào)整對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的，進(jìn)一步詳述在目前的PCR應(yīng)用手冊(cè)中，例如上文引用的。
實(shí)施例中描述了用于鑒別特定突變FATB等位基因的PCR鑒別規(guī)程的實(shí)例。
可選的，可以使用特定的引物來擴(kuò)增突變FATB特異性片段，所述片段可以用作“特異性探針”，用于鑒別生物學(xué)樣品中的特定突變FATB等位基因。在允許探針與核酸中相應(yīng)片段雜交的條件下，將生物學(xué)樣品的核酸與探針接觸，導(dǎo)致形成核酸/探針雜合體?？梢詸z測(cè)該雜合體的形成(例如，核酸或探針的標(biāo)記)，從而該雜合體的形成表示特定突變FATB等位基因的存在。本領(lǐng)域中已經(jīng)描述了此類基于特異性探針雜交(在固相載體或溶液中)的鑒別方法。特異性探針優(yōu)選的是序列，其在優(yōu)化的條件下，與特定突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和/或突變區(qū)中的區(qū)域(后文稱為“FATB突變特異區(qū)”)特異性雜交。優(yōu)選的，特異性探針包括20至1000bp、50至600bp、100至500bp、150至350bp之間的序列，其與特定區(qū)域的核苷酸序列至少80％，優(yōu)選的80至85％，更優(yōu)選的85至90％，特別優(yōu)選的90至95％，最優(yōu)選的95％至100％同一(或互補(bǔ))。優(yōu)選的，特異性探針可以包括約15至約100個(gè)連續(xù)的核苷酸的序列，所述核苷酸與特定突變FATB等位基因的特定區(qū)相同(或互補(bǔ))。
適合發(fā)明的特異性探針可以是如下 -長(zhǎng)度范圍在20nt至約1000nt的寡核苷酸，包含這樣的核苷酸序列或者與之具有至少80％序列同一性的序列，所述序列為至少20個(gè)連續(xù)的核苷酸，所述核苷酸選自特定突變FATB等位基因的5’側(cè)翼序列(即，例如，發(fā)明的突變FATB等位基因的一個(gè)或多個(gè)缺失、插入或取代的核苷酸5’側(cè)翼的序列，例如上述缺失、無義或剪接位點(diǎn)突變5’側(cè)翼的序列，或上述表格中表示的潛在STOP密碼子或剪接位點(diǎn)突變5’側(cè)翼的序列)(識(shí)別5’側(cè)翼序列的探針)；或 -長(zhǎng)度范圍在20nt至約1000nt的寡核苷酸，包含這樣的核苷酸序列或者與之具有至少80％序列同一性的序列，所述序列為至少20個(gè)連續(xù)的核苷酸，所述核苷酸選自特定突變FATB等位基因的3’側(cè)翼序列(即，例如，發(fā)明的突變FATB等位基因的一個(gè)或多個(gè)缺失、插入或取代的核苷酸3’側(cè)翼的序列，例如上述缺失、無義或剪接位點(diǎn)突變3’側(cè)翼的序列，或上述表格中表示的潛在STOP密碼子或剪接位點(diǎn)突變3’側(cè)翼的序列)，(識(shí)別3’側(cè)翼序列的探針)；或 -長(zhǎng)度范圍在20nt至約1000nt的寡核苷酸，包含這樣的核苷酸序列或者與之具有至少80％序列同一性的序列，所述序列為至少20個(gè)連續(xù)的核苷酸，所述核苷酸選自特定突變FATB等位基因的突變序列(即，例如，在發(fā)明的FATB基因中插入或取代的核苷酸序列，或其互補(bǔ)序列)(識(shí)別突變序列的探針)。
探針可以完全由選自所述側(cè)翼和突變序列的核苷酸序列組成。然而，在探針的5’或3’末端的核苷酸序列較不關(guān)鍵。因此，視情況，探針的5’或3’序列可以由選自側(cè)翼或突變序列的核苷酸序列組成，但也可以由與側(cè)翼或突變序列不相關(guān)的核苷酸序列組成。此類不相關(guān)的序列應(yīng)該優(yōu)選的不長(zhǎng)于50，更優(yōu)選的不長(zhǎng)于25或者甚至不長(zhǎng)于20或15個(gè)核苷酸。
此外，合適的探針可以包含或由這樣的核苷酸序列組成，所述序列跨越了側(cè)翼和突變序列之間的連接區(qū)(即，例如，在發(fā)明的突變FATB等位基因的一個(gè)或多個(gè)缺失、插入或取代的核苷酸5’側(cè)翼的序列，與一個(gè)或多個(gè)插入或取代的核苷酸的序列或在一個(gè)或多個(gè)缺失的核苷酸3’側(cè)翼的序列之間的連接區(qū)，例如，在上述發(fā)明的FATB基因中的缺失、無義或剪接位點(diǎn)突變5’側(cè)翼的序列，和無義或剪接位點(diǎn)突變的序列或缺失突變3’側(cè)翼的序列之間的連接區(qū)；或者在上述表格所示的潛在STOP密碼子或剪接位點(diǎn)突變5’側(cè)翼的序列，和潛在STOP密碼子或剪接位點(diǎn)突變的序列之間的連接區(qū))，條件是所述核苷酸序列不專一的源自突變區(qū)或側(cè)翼區(qū)。
實(shí)施例中描述了適合鑒別特定突變FATB等位基因的特異性探針的實(shí)例。
與特異性探針雜交的“突變FATB特異區(qū)”的檢測(cè)和/或鑒別可以以不同的方式進(jìn)行，例如，在凝膠電泳后通過大小評(píng)估，或通過基于熒光的檢測(cè)方法。其它用于檢測(cè)與特異性探針雜交的“突變FATB特異區(qū)”的序列特異性方法也是本領(lǐng)域已知的。
可選的，可以利用其它方法產(chǎn)生和鑒別包含一個(gè)或多個(gè)突變fatB等位基因的植物或植物部分，例如“Delete-a-geneTM”方法，所述方法使用PCR篩選通過快中子誘變(綜述見Li和Zhang，2002，F(xiàn)unct Integr Genomics2254-258)產(chǎn)生的缺失突變，例如鑒別EMS-誘導(dǎo)的點(diǎn)突變的TILLING方法(在基因組中靶向誘導(dǎo)的局部損傷)，其使用變性高效液相色譜(DHPLC)鑒別EMS-誘導(dǎo)的點(diǎn)突變，從而通過異源雙鏈體分析(McCallum等人，2000，Nat Biotech 18455，和McCallum等人，2000，Plant Physiol.123，439-442)檢測(cè)堿基對(duì)改變等。如上所述，TILLING使用高通量篩選突變(例如，使用突變體-野生型DNA異源雙鏈體的Cel 1切割，和使用凝膠測(cè)序系統(tǒng)檢測(cè))。因此，本文涵蓋了使用TILLING鑒別在一種或多種組織中包含一個(gè)或多個(gè)突變fatB等位基因的植物、種子和組織，以及用于產(chǎn)生和鑒別此類植物的方法。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)發(fā)明的方法包括步驟誘變植物種子(例如，EMS誘變)，植物個(gè)體或DNA的混合，目標(biāo)區(qū)域的PCR擴(kuò)增，異源雙鏈體形成和高通量檢測(cè)，突變植物的鑒別，突變PCR產(chǎn)物的測(cè)序?？梢岳斫馄渌T變和選擇方法可以等價(jià)的用于產(chǎn)生此類突變植物。
除了在fatB等位基因中誘導(dǎo)突變以外，可以通過本領(lǐng)域已知的方法鑒別天然(自發(fā))突變等位基因。例如，可以使用ECOTILLING(Henikoff等人，2004，Plant Physiology 135(2)630-6)在復(fù)數(shù)的植物或植物部分中篩選天然突變fatB等位基因的存在。對(duì)于上述誘變技術(shù)，優(yōu)選的篩選包含A和/或C基因組的蕓苔屬物種，使鑒別的fatB等位基因可以通過雜交(種間或種內(nèi)雜交)和選擇，隨后引入到其它蕓苔屬物種中，例如歐洲油菜。在ECOTILLING中，通過上述TILLING方法學(xué)，篩選育種品系或相關(guān)物種中的天然多態(tài)性，其中，使用單個(gè)植物或植物庫進(jìn)行PCR擴(kuò)增fatB靶，異源雙鏈體形成和高通量分析。然后可以選擇具有所需突變的單個(gè)植物，其隨后可以用于育種項(xiàng)目中來摻入所需的突變等位基因。
然后，可以測(cè)序所鑒別的突變等位基因，序列可以與野生型等位基因比較，來鑒別突變。任選的，可以通過同源或異源宿主中的表達(dá)來測(cè)試功能，以及在酶測(cè)定中測(cè)試突變FATB蛋白的功能。利用該方法可以鑒別復(fù)數(shù)的突變fatB等位基因(和含有一個(gè)或多個(gè)所述基因的蕓苔屬植物)。然后，如下文所述，可以通過雜交和選擇方法，將理想的突變等位基因與理想的野生型等位基因組合。最后，產(chǎn)生包含理想數(shù)量的突變fatB和理想數(shù)量的野生型FATB等位基因的單個(gè)植物。
適合作為PCR引物或特異性探針，用于檢測(cè)特定突變FATB等位基因的寡核苷酸也可用于開發(fā)確定特定突變FATB等位基因接合性狀態(tài)的方法。
為了確定特定突變FATB等位基因的接合性狀態(tài)，可以開發(fā)基于PCR的檢測(cè)，來確定突變和/或相應(yīng)野生型FATB特異性等位基因的存在 為了確定特定突變FATB等位基因的接合性狀態(tài)，可以以這樣的方式設(shè)計(jì)特異性識(shí)別野生型FATB等位基因的兩種引物，所述方式使所述引物針對(duì)彼此，并具有位于引物之間的突變區(qū)。這些引物可以是分別特異性識(shí)別5’和3’側(cè)翼序列的引物。該套引物允許突變體以及相應(yīng)的野生型FATB等位基因的同時(shí)診斷性PCR擴(kuò)增。
可選的，為了確定特定突變FATB等位基因的接合性狀態(tài)，可以以這樣的方式設(shè)計(jì)特異性識(shí)別野生型FATB等位基因的兩種引物，所述方式使所述引物針對(duì)彼此，并且其中之一特異性的識(shí)別突變區(qū)。這些引物可以是分別特異性識(shí)別野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)序列的引物。該套引物與特異性識(shí)別突變FATB等位基因中的突變區(qū)序列的第三引物一起，允許突變FATB基因以及野生型FATB基因的同時(shí)診斷性PCR擴(kuò)增。
可選的，為了確定特定突變FATB等位基因的接合性狀態(tài)，可以以這樣的方式設(shè)計(jì)特異性識(shí)別野生型FATB等位基因的兩種引物，所述方式使所述引物針對(duì)彼此，并且其中之一特異性的識(shí)別在5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)。這些引物可以是分別特異性識(shí)別野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼序列，和在突變區(qū)和3’或5’側(cè)翼區(qū)之間的連接區(qū)的引物。這套引物與第三引物一起，允許突變FATB基因以及野生型FATB基因的同時(shí)診斷性PCR擴(kuò)增，所述第三引物特異性的識(shí)別突變FATB等位基因的在突變區(qū)和3’或5’側(cè)翼區(qū)之間的連接區(qū)。
可選的，可以通過使用替代的引物組，確定特定突變FATB等位基因的接合性狀態(tài)，所述引物組特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因。
如果對(duì)于突變FATB基因或相應(yīng)的野生型FATB基因，植物是純合的，則不論對(duì)于突變或野生型FATB等位基因，上述診斷性PCR測(cè)定可以產(chǎn)生典型的單PCR產(chǎn)物，優(yōu)選在長(zhǎng)度上具有典型性。如果對(duì)于突變FATB基因，植物是雜合的，則會(huì)出現(xiàn)兩種特異的PCR產(chǎn)物，反映了突變和野生型FATB等位基因的擴(kuò)增。
進(jìn)行野生型和突變FATB特異性PCR產(chǎn)物的鑒別，例如可以通過在凝膠或毛細(xì)管電泳后的大小評(píng)估(例如，對(duì)于包含多個(gè)插入或缺失的核苷酸的突變FATB等位基因，導(dǎo)致從野生型和突變FATB等位基因擴(kuò)增的片段之間的大小差異，從而所述片段可以在凝膠上可視的分離)；通過在凝膠或毛細(xì)管電泳后，評(píng)估兩種不同片段的存在或缺失，從而突變FATB等位基因的診斷性PCR擴(kuò)增可以任選的與野生型FATB等位基因的診斷性PCR擴(kuò)增分別實(shí)施；通過擴(kuò)增片段的直接測(cè)序；或通過基于熒光的檢測(cè)方法。
實(shí)施例中描述了適合確定特定突變FATB等位基因接合性的引物實(shí)例。
可選的，為了確定特定突變FATB等位基因的接合性狀態(tài)，可以開發(fā)基于雜交的測(cè)定，來確定突變和/或相應(yīng)野生型FATB特定等位基因的存在 為了確定特定突變FATB等位基因的接合性狀態(tài)，可以以這樣的方式設(shè)計(jì)識(shí)別野生型FATB等位基因的兩種特異性探針，所述方式使每種探針特異性識(shí)別FATB野生型等位基因中的序列，并且突變區(qū)位于探針識(shí)別的序列之間。這些探針可以是分別特異性識(shí)別5’和3’側(cè)翼序列的探針。一種或，優(yōu)選的兩種上述探針的使用，允許突變以及相應(yīng)的野生型FATB等位基因的同時(shí)診斷雜交。
可選的，為了確定特定突變FATB等位基因的接合性狀態(tài)，可以以這樣的方式設(shè)計(jì)識(shí)別野生型FATB等位基因的兩種特異性探針，所述方式使探針之一特異性識(shí)別FATB野生型等位基因中在突變區(qū)上游或下游的序列，優(yōu)選的在突變區(qū)上游，且探針之一特異性識(shí)別突變區(qū)。這些探針可以是分別特異性識(shí)別野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)序列，優(yōu)選的5’側(cè)翼區(qū)序列，和突變區(qū)序列的探針。一種或，優(yōu)選的兩種上述探針，任選的與第三探針一起使用，允許突變以及野生型FATB基因的診斷雜交，所述第三探針特異性識(shí)別突變FATB等位基因的突變區(qū)序列。
可選的，為了確定特定突變FATB等位基因的接合性狀態(tài)，可以以這樣的方式設(shè)計(jì)識(shí)別野生型FATB等位基因的特異性探針，所述方式使探針特異性識(shí)別在野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)(優(yōu)選的5’側(cè)翼區(qū))和突變區(qū)之間的連接區(qū)。該探針任選的與第二探針一起，允許突變以及野生型FATB基因的診斷雜交，所述第二探針特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，優(yōu)選的5’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)，。
可選的，可以通過使用替代的探針組，來確定特定突變FATB等位基因的接合性狀態(tài)，所述探針組特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因。
如果對(duì)于突變FATB基因或相應(yīng)的野生型FATB基因，植物是純合的，則無論對(duì)于突變或野生型FATB基因，上述診斷雜交測(cè)定可以產(chǎn)生典型的單特異性雜交產(chǎn)物，例如一種或多種雜交DNA(限制性)片段，優(yōu)選的在長(zhǎng)度上具有典型性。如果對(duì)于突變FATB等位基因，植物是雜合的，則可以出現(xiàn)兩種特異性雜交產(chǎn)物，反映了突變和野生型FATB基因的雜交。
進(jìn)行野生型和突變FATB特異性雜交產(chǎn)物的鑒別，例如可以通過在凝膠或毛細(xì)管電泳后的大小評(píng)估(例如，對(duì)于包含多個(gè)插入或缺失的核苷酸的突變FATB等位基因，導(dǎo)致來自野生型和突變FATB等位基因的雜交DNA(限制性)片段之間的大小差異，從而所述片段可以在凝膠上可視的分離)；通過在凝膠或毛細(xì)管電泳后，評(píng)估兩種不同的特異性雜交產(chǎn)物的存在或缺失，從而突變FATB等位基因的診斷雜交可以任選的與野生型FATB等位基因的診斷雜交分別實(shí)施；通過雜交DNA(限制性)片段的直接測(cè)序；或通過基于熒光的檢測(cè)方法。
實(shí)施例中描述了適合確定特定突變FATB等位基因接合性的探針實(shí)例。
此外，還可以利用本文提供的特定突變FATB等位基因的特異性序列信息，開發(fā)特異性針對(duì)特定突變FATB等位基因的、不同于基于PCR-或基于雜交擴(kuò)增方法的檢測(cè)方法。此類替代的檢測(cè)方法包括基于特定核酸結(jié)構(gòu)的侵入性切割的線性信號(hào)擴(kuò)增檢測(cè)方法，也已知為InvaderTM技術(shù)(描述在例如美國(guó)專利5,985,557“Invasive Cleavage of Nucleic Acids”，6,001,567“Detection of Nucleic Acid sequences by Invader DirectedCleavage”，通過引用整合到本文中)，基于RT-PCR的檢測(cè)方法，例如Taqman，或其他檢測(cè)方法，例如SNPlex。
根據(jù)發(fā)明的試劑盒 如本文中使用的，“試劑盒”指用于實(shí)施發(fā)明方法的目的的試劑集合，更特別的，用于生物學(xué)樣品中特定突變FATB等位基因的鑒別，或包含特定突變FATB等位基因的植物材料的接合性狀態(tài)的確定等目的。更特別的，發(fā)明的試劑盒的優(yōu)選實(shí)施方案包括，如上所述，用于特定突變FATB等位基因鑒別的至少兩種特異性引物，或者用于接合性狀態(tài)確定的至少兩種或三種特異性引物。任選的，試劑盒還可以包括任何本文中描述的PCR鑒別規(guī)程中的其它試劑。可選的，根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，試劑盒可以包含至少一種特異性探針，如上所述，所述探針與生物學(xué)樣品的核酸特異性雜交，來鑒別其中特定突變FATB等位基因的存在，用于特定突變FATB等位基因的鑒別，或者包含至少兩種或三種用于確定接合性狀態(tài)的特異性探針。任選的，試劑盒還可以包括任何其它試劑(例如但不限于雜交緩沖液，標(biāo)記)，利用特異性探針，用于生物學(xué)樣品中特定突變FATB等位基因的鑒別。
發(fā)明的試劑盒可以用于質(zhì)量控制(例如，種子批次的純度)、檢測(cè)植物材料或包含或源自植物材料的材料(例如但不限于食品或飼料產(chǎn)品)中特定突變FATB等位基因的存在或缺失的目的，并且它的組分可以特異性調(diào)節(jié)用于上述目的。
如本文中使用的，術(shù)語“引物”涵蓋了能夠在依賴模板的過程，例如PCR中，引發(fā)新生核酸合成的任何核酸。通常，引物是10至30個(gè)核苷酸的寡核苷酸，但可以使用更長(zhǎng)的序列。可以以雙鏈形式提供引物，盡管單鏈形式是優(yōu)選的。探針可以作為引物使用，但被設(shè)計(jì)用于與靶DNA或RNA結(jié)合，而不需要在擴(kuò)增過程中使用。
如本文中使用的，當(dāng)術(shù)語“識(shí)別”指特異性引物時(shí)，指在方法所述條件下(例如PCR鑒別規(guī)程的條件)，特異性引物與特定突變FATB等位基因中的核酸序列特異性雜交的事實(shí)，從而通過陽性和陰性對(duì)照的存在確定特異性。
如本文中使用的，當(dāng)術(shù)語“雜交”指特異性探針時(shí)，指在標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格條件下，探針與特定突變FATB等位基因的核酸序列中的特定區(qū)域結(jié)合的事實(shí)。如本文中使用的，標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格條件指本文描述的用于雜交的條件，或Sambrook等人，1989(Molecular CloningA Laboratory Manual，第二版，Cold Spring Harbour Laboratory Press，NY)描述的常規(guī)雜交條件，例如可以包括下列步驟1)在濾膜上固定植物基因組DNA片段或BAC文庫DNA，2)在65℃，6X SSC，5X Denhardt氏試劑，0.5％SDS和20μg/ml變性載體DNA中預(yù)雜交濾膜1至2小時(shí)，3)添加已經(jīng)標(biāo)記的雜交探針，4)孵育16至24小時(shí)，5)在68℃，6X SSC，0.1％SDS中，洗滌濾膜一次30分鐘，6)在68℃，2X SSC，0.1％SDS中，洗滌濾膜三次(在30ml中兩次，各30分鐘，在500ml中1次，10分鐘)，和7)將濾膜在-70℃下暴露于X射線膜4至48小時(shí)。
如本文中使用的，“生物學(xué)樣品”是植物、植物材料或包含植物材料的產(chǎn)品的樣品。術(shù)語“植物”意在涵蓋任何成熟階段的蕓苔屬植物組織，以及來自或衍生自任何此類植物的任何細(xì)胞、組織或器官，包括但不限于任何種子、葉、莖、花、根、單細(xì)胞、配子、細(xì)胞培養(yǎng)物、組織培養(yǎng)物或原生質(zhì)體。如本文中使用的，“植物材料”指從植物獲得的或源自植物的材料。包含植物材料的產(chǎn)品涉及食品、飼料或其他產(chǎn)品，所述產(chǎn)品使用植物材料生產(chǎn)或可以被植物材料污染。可以理解，在本發(fā)明的上下文中，在此類生物學(xué)樣品中測(cè)試特異性針對(duì)特定突變FATB等位基因的核酸的存在，提示樣品中核酸的存在。因此，本文所指的用于在生物學(xué)樣品中鑒別特定突變FATB等位基因的方法，涉及鑒別生物學(xué)樣品的核酸，所述核酸包含特定突變FATB等位基因。
本發(fā)明還涉及將一株蕓苔屬植物中的一個(gè)或多個(gè)特定突變FATB等位基因轉(zhuǎn)移到另一蕓苔屬植物中，涉及在一株植物中特定FATB等位基因的組合，涉及包含一種或多種特定突變FATB等位基因的植物，從這些植物獲得的后代，以及涉及源自這些植物的植物細(xì)胞或植物材料。
因此，在發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供了用于從一株蕓苔屬植物向另一蕓苔屬植物轉(zhuǎn)移突變FATB等位基因的方法，包括步驟 (a)如上述，將包含突變FATB等位基因的蕓苔屬植物，與第二蕓苔屬植物雜交， (b)從雜交種(cross)收集F1雜種種子， (c)任選的，回交源自F1種子的F1植物(進(jìn)行一代或多代(x))，從雜交種收集BCx種子，并且在源自BCx種子的每一代BCx植物中鑒別，其包含如上述突變FATB等位基因， (d)任選的，從處理的F1或BC1植物的小孢子或花粉細(xì)胞中提取重雙單倍體植物，獲得純合植物， (e)將源自F1或BCx種子的F1或BC1植物自交， (f)從自交中收集F1S1或BCx S1種子， (g)鑒別源自F1S1或BCx S1種子的F1S1或BCx S1植物，其包含上述突變FATB等位基因。
在發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了用于在一株蕓苔屬植物中組合至少兩種突變FATB等位基因的方法，其包括步驟 (a)如上述，從一株蕓苔屬植物中向另一蕓苔屬植物轉(zhuǎn)移突變FATB等位基因， (b)重復(fù)步驟(a)直到在第二植物中組合了理想數(shù)量和/或類型的突變FATB等位基因。
在發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了生產(chǎn)蕓苔屬植物的方法，所述植物包含本文的三種不同的FATB基因的至少3種突變fatB等位基因，包括步驟 (a)如上述，在一株蕓苔屬植物中，組合至少三種不同的FATB基因的至少3種突變FA TB等位基因， (b)任選的，如上述，通過確定一種或多種突變FATB等位基因的接合性狀態(tài)，鑒別植物或其部分，所述植物或其部分對(duì)于一種或多種突變FATB等位基因是純合或雜合的， (c)任選的，鑒別具有顯著降低量的功能性FATB蛋白的植物或其部分， (d)任選的，鑒別生產(chǎn)種子油的植物，與相應(yīng)野生型蕓苔屬植物的種子油脂肪酸組成相比，所述種子油的脂肪酸組成被顯著改變， (e)任選的，生長(zhǎng)此類植物并從此類植物分離種子油，用于人類消費(fèi)品。
根據(jù)發(fā)明的植物種子油 根據(jù)發(fā)明提供了源自蕓苔屬植物的種子的“低飽和”和“無飽和”的油，特別是源自本文提供的歐洲油菜植物的種子，但也來自其它的蕓苔屬油料種子物種。例如，包含突變FATB-A和/或FATB-C基因的蕓苔屬油料種子物種，例如芥菜和蕪菁。
發(fā)現(xiàn)，僅在六個(gè)FATB基因中的一個(gè)或兩個(gè)中包含突變的歐洲油菜植物，不足以顯著降低植物種子油的飽和脂肪酸的百分比(wt％)，所述突變導(dǎo)致由突變fatB等位基因的野生型等價(jià)物編碼的功能性FATB蛋白的量顯著降低。認(rèn)為為了獲得產(chǎn)生低或無飽和的種子油的植物，植物中需要包含三種不同的FATB基因(選自FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3)的至少三個(gè)突變fatB等位基因。
因此，在發(fā)明的一個(gè)方面，提供了源自蕓苔屬植物種子的“低飽和”或“無飽和”的種子油，所述植物包含三種不同的FATB基因(選自FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3)的至少三個(gè)突變fatB等位基因，從而突變fatB等位基因?qū)е掠蛇@些突變fatB等位基因的野生型等價(jià)物編碼的功能性FATB蛋白類型的量顯著降低，從而在體內(nèi)在植物細(xì)胞中(特別是在發(fā)育的種子中)生產(chǎn)的功能性FATB蛋白的量整體顯著降低。
在發(fā)明的其它方面，提供了源自純合FATB三突變-、純合FATB四突變-和/或純合FATB五突變-蕓苔屬植物種子的”低飽和”或“無飽和”的種子油，其中突變等位基因選自基因FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3。
在發(fā)明的其它方面，提供了源自純合FATB三突變-、純合FATB四突變-和/或純合FATB五突變-蕓苔屬植物種子的”低飽和”或“無飽和”的種子油，所述蕓苔屬植物還包括其它突變FATB等位基因，其中對(duì)于另外的突變FATB等位基因而言，所述突變植物或植物部分是雜合的，并且其中突變等位基因選自基因FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3。
通過在一株植物中組合充分拷貝的特定突變fatB等位基因和充分拷貝的特定野生型FATB等位基因，可以精細(xì)調(diào)整產(chǎn)生的功能性FATB蛋白的量和/或類型，其隨后影響從質(zhì)體輸出游離飽和脂肪酸(的量和/或類型)，從而影響產(chǎn)生的種子油的脂肪酸組成。
因此，在發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了包含特定量和/或類型的飽和脂肪酸的種子油，所述種子油源自包含至少一個(gè)根據(jù)發(fā)明的特定突變FATB等位基因，和至少一個(gè)根據(jù)發(fā)明的特定野生型FATB等位基因的蕓苔屬植物的種子，從而突變和野生型FATB等位基因的特定組合導(dǎo)致在體內(nèi)植物細(xì)胞生產(chǎn)的功能性FATB蛋白的特定量和/或類型，特別是在發(fā)育的種子中。
發(fā)明還包括了本發(fā)明的種子油在食品應(yīng)用中的用途，特別是可預(yù)見人類健康益處的食品應(yīng)用。盡管本發(fā)明的油主要用作人類膳食(食品應(yīng)用)的油，它們還可以具有在動(dòng)物飲食(飼料應(yīng)用)中的用途。其它應(yīng)用，例如將具有根據(jù)發(fā)明的特定修飾相對(duì)量和/或組成的飽和脂肪酸的種子油(特別是根據(jù)發(fā)明含有顯著低于7％飽和脂肪酸的種子油)與其它植物油(特別是含有顯著高于7％飽和脂肪酸的植物油，例如在背景章節(jié)中提及的那些)混合，從而降低后者中的飽和脂肪酸水平，從而使其更適合一些應(yīng)用，例如但不限于生物柴油的生產(chǎn)，也包括在發(fā)明中。
序列 序列表描述了野生型FATB序列的基因組FATB蛋白-編碼DNA。這些序列包含由4個(gè)內(nèi)含子間隔的5個(gè)外顯子。在cDNA和相應(yīng)的加工mRNA(即，剪接RNA)中，去除了內(nèi)含子并連接了外顯子。因此，例如，來自冬油菜(WOSR)歐洲油菜的編碼野生型FATB-A1蛋白的FATB-A1基因的cDNA具有SEQ ID NO1中位置1-504、590-723、798-911、981-1152和1243-1560的序列。
FATB基因 SEQ ID NO 1FA TB-A1基因(具有內(nèi)含子)的DNA，編碼來自冬油菜(WOSR)歐洲油菜的野生型FATB-A1蛋白。
SEQ ID NO 2由SEQ ID NO1編碼的野生型FATB-A1蛋白。
SEQ ID NO 3FATB-A2基因(具有內(nèi)含子)的DNA，編碼來自冬油菜(WOSR)歐洲油菜的野生型FATB-A2蛋白。
SEQ ID NO 4由SEQ ID NO3編碼的野生型FATB-A2蛋白。
SEQ ID NO 5FATB-A3基因(具有內(nèi)含子)的DNA，編碼來自冬油菜(WOSR)歐洲油菜的野生型FATB-A3蛋白。
SEQ ID NO 6由SEQ ID NO5編碼的野生型FATB-A3蛋白。
SEQ ID NO 7FATB-C1基因(具有內(nèi)含子)的DNA，編碼來自冬油菜(WOSR)歐洲油菜的野生型FATB-C1蛋白。
SEQ ID NO 8由SEQ ID NO7編碼的野生型FATB-C1蛋白。
SEQ ID NO 9FATB-C2基因(具有內(nèi)含子)的DNA，編碼來自冬油菜(WOSR)歐洲油菜的野生型FATB-C2蛋白。
SEQ ID NO 10由SEQ ID NO9編碼的野生型FATB-C2蛋白。
SEQ ID NO 11FATB-C3基因(具有內(nèi)含子)的DNA，編碼來自冬油菜(WOSR)歐洲油菜的野生型FATB-C3蛋白。
SEQ ID NO 12由SEQ ID NO11編碼的野生型FATB-C3蛋白。
SEQ ID NO 13FATB-A1基因(具有內(nèi)含子)的DNA，編碼來自春油菜(SOSR)歐洲油菜的野生型FATB-A1蛋白。
SEQ ID NO 14由SEQ ID NO13編碼的野生型FATB-A1蛋白。
SEQ ID NO 15FATB-A2基因(具有內(nèi)含子)的DNA，編碼來自春油菜(SOSR)歐洲油菜的野生型FATB-A2蛋白。
SEQ ID NO 16由SEQ ID NO15編碼的野生型FATB-A2蛋白。
SEQ ID NO 17FATB-A3基因(具有內(nèi)含子)的DNA，編碼來自春油菜(SOSR)歐洲油菜的野生型FATB-A3蛋白。
SEQ ID NO 18由SEQ ID NO17編碼的野生型FATB-A3蛋白。
SEQ ID NO 19FATB-C1基因(具有內(nèi)含子)的DNA，編碼來自春油菜(SOSR)歐洲油菜的野生型FATB-C1蛋白。
SEQ ID NO 20由SEQ ID NO19編碼的野生型FATB-C1蛋白。
SEQ ID NO 21FATB-C2基因(具有內(nèi)含子)的DNA，編碼來自春油菜(SOSR)歐洲油菜的野生型FATB-C2蛋白。
SEQ ID NO 22由SEQ ID NO21編碼的野生型FATB-C2蛋白。
SEQ ID NO 23FATB-C3基因(具有內(nèi)含子)的DNA，編碼來自春油菜(SOSR)歐洲油菜的野生型FATB-C3蛋白。
SEQ ID NO 24由SEQ ID NO23編碼的野生型FATB-C3蛋白。
SEQ ID NO 79FATB1基因的DNA，編碼來自擬南芥的野生型FATB1蛋白。
SEQ ID NO 80由SEQ ID NO79編碼的野生型FATB1蛋白。
引物和探針 SEQ ID NO 255′At FATB1探針 SEQ ID NO 26寡核苷酸引物KVA05-14 SEQ ID NO 27寡核苷酸引物KVA05-15 SEQ ID NO 283′At FATB1探針 SEQ ID NO 29寡核苷酸引物KVA05-16 SEQ ID NO 30寡核苷酸引物KVA05-17 SEQ ID NO 31用于檢測(cè)FATB-A1(SEQ ID NO13)的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 32用于檢測(cè)FATB-A1(SEQ ID NO13)的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 33用于檢測(cè)FATB-A2(SEQ ID NO15)的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 34用于檢測(cè)FATB-A2(SEQ ID NO15)的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 35用于檢測(cè)FATB-A3(SEQ ID NO17)的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 36用于檢測(cè)FATB-A3(SEQ ID NO17)的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 37用于檢測(cè)FATB-C1(SEQ ID NO19)的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 38用于檢測(cè)FATB-C1(SEQ ID NO19)的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 39用于檢測(cè)FATB-C2(SEQ ID NO21)的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 40用于檢測(cè)FATB-C2(SEQ ID NO21)的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 41用于檢測(cè)FATB-C3(SEQ ID NO23)的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 42用于檢測(cè)FATB-C3(SEQ ID NO23)的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 43用于檢測(cè)FATB-A1的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 44用于檢測(cè)FATB-A2的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 45用于檢測(cè)FATB-A2的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 46用于檢測(cè)FATB-A3的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 47用于檢測(cè)FATB-C1的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 48用于檢測(cè)FATB-C2的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 49用于檢測(cè)FATB-C3的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 50用于檢測(cè)FATB-A1-EMS05的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 51用于檢測(cè)FATB-A1的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 52用于檢測(cè)FATB-A1-EMS05和-A1的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 53用于檢測(cè)FATB-A1-EMS06的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 54用于檢測(cè)FATB-A1的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 55用于檢測(cè)FATB-A1-EMS06和-A1的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 56用于檢測(cè)FATB-A2-EMS05的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 57用于檢測(cè)FATB-A2的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 58用于檢測(cè)FATB-A2-EMS05和-A2的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 59用于檢測(cè)FATB-A2-EMS01的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 60用于檢測(cè)FATB-A2的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 61用于檢測(cè)FATB-A2-EMS01和-A2的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 62用于檢測(cè)FATB-A3-EMS01的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 63用于檢測(cè)FATB-A3的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 64用于檢測(cè)FATB-A3-EMS01和-A3的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 65用于檢測(cè)FATB-C1-EMS05的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 66用于檢測(cè)FATB-C1的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 67用于檢測(cè)FATB-C1-EMS05、-C1-EMS04和-C1的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 68用于檢測(cè)FATB-C1-EMS04的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 69用于檢測(cè)FATB-C1的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 70用于檢測(cè)FATB-C2-EMS02的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 71用于檢測(cè)FATB-C2的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 72用于檢測(cè)FATB-C2-EMS02和-C2的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 73用于檢測(cè)FATB-C2-EMS03的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 74用于檢測(cè)FATB-C2的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 75用于檢測(cè)FATB-C2-EMS03和-C2的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 76用于檢測(cè)FATB-C3-EMS02的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 77用于檢測(cè)FATB-C3的正向寡核苷酸 SEQ ID NO 78用于檢測(cè)FATB-C3-EMS02和-C3的反向寡核苷酸 SEQ ID NO 81用于檢測(cè)FATB-A1-EMS05的寡核苷酸 SEQ ID NO 82用于檢測(cè)FATB-A1-EMS05的寡核苷酸 SEQ ID NO 83用于檢測(cè)FATB-A1-EMS06的寡核苷酸 SEQ ID NO 84用于檢測(cè)FATB-A1-EMS06的寡核苷酸 SEQ ID NO 85用于檢測(cè)FATB-A2-EMS01的寡核苷酸 SEQ ID NO 86用于檢測(cè)FATB-A2-EMS01的寡核苷酸 SEQ ID NO 87用于檢測(cè)FATB-A2-EMS05的寡核苷酸 SEQ ID NO 88用于檢測(cè)FATB-A2-EMS05的寡核苷酸 SEQ ID NO 89用于檢測(cè)FATB-A3-EMS01的寡核苷酸 SEQ ID NO 90用于檢測(cè)FATB-A3-EMS01的寡核苷酸 SEQ ID NO 91用于檢測(cè)FATB-C1-EMS04的寡核苷酸 SEQ ID NO 92用于檢測(cè)FATB-C1-EMS04的寡核苷酸 SEQ ID NO 93用于檢測(cè)FATB-C1-EMS05的寡核苷酸 SEQ ID NO 94用于檢測(cè)FATB-C1-EMS05的寡核苷酸 SEQ ID NO 95用于檢測(cè)FATB-C2-EMS02的寡核苷酸 SEQ ID NO 96用于檢測(cè)FATB-C2-EMS02的寡核苷酸 SEQ ID NO 97用于檢測(cè)FATB-C2-EMS03的寡核苷酸 SEQ ID NO 98用于檢測(cè)FATB-C2-EMS03的寡核苷酸 SEQ ID NO 99用于檢測(cè)FATB-C3-EMS02的寡核苷酸 SEQ ID NO 100用于檢測(cè)FATB-C3-EMS02的寡核苷酸 SEQ ID NO 101用于檢測(cè)ENDO1的寡核苷酸 SEQ ID NO 102用于檢測(cè)ENDO1的寡核苷酸 除非在實(shí)施例中另外陳述，所有重組DNA技術(shù)都根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程來進(jìn)行，如Sambrook和Russell(2001)Molecular CloningA LaboratoryManual，第3版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，NY，Ausubel等人，(1994)Current Protocols in Molecular Biology，Current Protocols，USA的第1和2卷，以及Brown(1998)Molecular Biology LabFax，第二版，Academic Press(UK)的卷I和II中描述的。用于植物分子工作的標(biāo)準(zhǔn)材料和方法描述在R.D.D.Croy的Plant Molecular Biology Labfax(1993)中，由BIOS Scientific Publications Ltd(UK)和Blackwell ScientificPublications，UK聯(lián)合出版。用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的標(biāo)準(zhǔn)材料和方法可見于Dieffenbach和Dveksler(1995)PCR PrimerA Laboratory Manual，ColdSpring Harbor Laboratory Press，和McPherson等人，(2000)PCR-BasicsFrom Background to Bench，第一版，Springer Verlag，Germany中。用于AFLP分析的標(biāo)準(zhǔn)程序描述在Vos等人，(1995，NAR 234407-4414)和公開的EP專利申請(qǐng)EP 534858中。
實(shí)施例 實(shí)施例1-確定歐洲油菜中的FATB基因數(shù)和分離FATB基因的DNA序列 為了確定歐洲油菜中的FATB基因數(shù)，和不同F(xiàn)ATB基因的序列，如下篩選不同的歐洲油菜變種的細(xì)菌人工染色體(BAC)文庫 1.1分離包含F(xiàn)ATB序列的BAC克隆 為了鑒別含有這樣的BAC克隆的大腸桿菌菌落，通過標(biāo)準(zhǔn)的Southern雜交程序，篩選良種的歐洲油菜春油菜品系(后文稱為“SOSR”)和歐洲油菜冬油菜變種Express(后文稱為“WOSR Express”)的BAC文庫(平均克隆大小為大于120kb)，所述BAC克隆包含不同的歐洲油菜變種的FATB序列，所述文庫在高密度尼龍濾膜上按獨(dú)立的一式兩份克隆排列 -通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)制備DNA模板，所述模板用于制備檢測(cè)蕓苔屬FATB基因的探針 -模板 (a)pGEM5Zf(+)載體，包含來自擬南芥哥倫比亞變種(Arabidopisthaliana cv.Colombia)(At1g08510)的FATB1基因5’部分的487bp片段(SEQ ID NO25)(pKVA48) (b)pGEM5Zf(+)載體，包含來自擬南芥哥倫比亞變種的FATB1基因3’部分的352bp片段(SEQ ID NO28)(pKVA49) -引物 (a)正向引物5’-GAACTTTCATCAACCAGTTACC-3’ (KVA05-14-SEQ ID NO26) 反向引物5’-TTATGC-AAGAGGATAGCTTACC-3’ (KVA05-15-SEQ ID NO27) (b)正向引物5-CAGTGTGTGGGTGATGATGA-3’ (KVA05-16-SEQ ID NO29) 反向引物5’-TATTCCCACTGGAGCACTCT-3’ (KVA05-17-SEQ ID NO30) -PCR混合物 20μl10xPCR緩沖液，2μl dNTPs(25mM)，1μl Taq聚合酶(5U/μl)，168μl H2O，和 -4μl KVA05-14(10μM)，4μlKVA05-15(10μM)，1μl pKVA48(20pg/μl)， -4μl KVA05-16(10μM)，4μl KVA05-17(10μM)，1μl pKVA49(20pg/μl)， 分成4x 50μl -熱循環(huán)譜94℃4min；5x[94℃(變性)1min和50℃(退火)1min和72℃(延伸)2min]；25x[94℃(變性)40sec和50℃(退火)40sec和72℃(延伸)1min]；72℃5min冷卻至10℃。
-其產(chǎn)生 (a)載體pKVA48中包含的擬南芥FATB1基因的487bp DNA片段(SEQ ID NO25；“5’AtFATB1探針”)。
(b)載體pKVA49中包含的擬南芥FA TB1基因的352bp DNA片段(SEQ ID NO28；“3’AtFATB1探針”)。
-純化DNA片段，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程標(biāo)記478bp DNA片段(“5’AtFATB1探針”)(例如，使用α-32P-dCTP和Ready-To-Go DNA labeling Beads——Amersham

)，將其用于與尼龍膜上的DNA雜交。可選的，可以標(biāo)記352bp DNA片段(“3’AtFATB1探針”)，并用于與尼龍膜上的DNA雜交。
-在65℃，30ml的下列雜交緩沖液中實(shí)施預(yù)雜交2小時(shí)6XSSC(20XSSC含有3.0M NaCl，0.3M Na檸檬酸，pH 7.0)，5X Denhardt’s(100XDenhardt’s含有2％Ficoll，2％聚乙烯吡咯烷酮，2％牛血清白蛋白)，0.5％SDS和20μg/ml變性載體DNA(單鏈魚精子DNA，具有平均長(zhǎng)度120-3000核苷酸) -在下列條件下實(shí)施雜交 -通過在95℃加熱5min使標(biāo)記的探針變性，并在冰上冷卻5分鐘，添加到15ml雜交緩沖液中(與預(yù)雜交相同的緩沖液) -在65℃實(shí)施雜交過夜。
-在65℃，雜交管中洗滌印跡三次30分鐘(在具有0.1％SDS的30ml6x SSC中一次，在具有0.1％SDS的30ml 2x SSC中兩次)，在65℃，在盒中用具有0.1％SDS的500ml 2x SSC洗滌一次，10分鐘。
-在-70℃，將Kodak X-OMAT AR膜暴露在放射性印跡下4小時(shí)。
-基于陽性信號(hào)，通過篩選BAC文庫，從WOSR Express中挑選了72個(gè)大腸桿菌菌落(陽性總數(shù)114)，所述菌落含有的BAC克隆包含F(xiàn)ATB序列，并且在第二輪BAC文庫篩選中，通過篩選來自SOSR的BAC文庫，挑選了40個(gè)所述菌落(陽性總數(shù)135)(后文中稱為“陽性菌落”)。
1.2包含全長(zhǎng)FATB序列的BAC克隆的分離 為了鑒別包含具有一個(gè)FATB基因的全長(zhǎng)基因組序列的BAC克隆的陽性菌落，對(duì)從陽性菌落分離的BAC克隆DNA和從歐洲油菜分離的基因組DNA實(shí)施Southern印跡分析 -通過本領(lǐng)域已描述過的堿裂解，從在100ml(對(duì)于WOSR Express)或25ml(對(duì)于SOSR)含有25μg/ml氯霉素的Luria Broth培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的陽性菌落中，分離BAC克隆DNA。
-根據(jù)溴化十六烷基三甲基銨(CTAB)方法(Doyle和Doyle，1987，Phytochemistry Bulletin 1911-15)，從歐洲油菜冬油菜變種Darmor(后文稱為“WOSR Darmor”)的葉組織中分離基因組DNA。
-通過在含有溴化乙錠(ICN

)的1％TBE(

)瓊脂糖凝膠(

)上，將1μl每種樣品的帶強(qiáng)度，與含有25ng/ml Lambda DNA(Life

)的1、2、4、8和20μl溶液的帶強(qiáng)度比較，評(píng)估每種制品的DNA濃度。
-在20μl的終反應(yīng)體積中，用限制性酶AseI和EcoRV，消化100-200ng(對(duì)于WOSR Express)或10ng(對(duì)于SOSR)的BAC克隆DNA，以及從WOSR Darmor中分離1.7μg基因組DNA，使用生產(chǎn)商(New EnglandBiolabs)建議的條件。調(diào)整消化時(shí)間和/或限制性酶的量，保證在沒有非特異性降解的條件下，完全消化基因組DNA樣品。
-在消化后，向消化的DNA樣品中加入2μl含有RNA酶的上樣染料(12.5ml1％二甲苯腈藍(lán)FF；12.5ml1％溴酚藍(lán)水溶性指示劑；25ml甘油；100μl 0.5M EDTA pH8；1μl RNA酶(10mg/ml))，在37℃孵育樣品30min。
-在1％TAE瓊脂糖凝膠上上樣。
-包括用PstI消化的噬菌體Lambda DNA(

)(產(chǎn)生29種片段(按bp)11501、5077、4749、4507、2838、2556、2459、2443、2140、1986、1700、1159、1093、805、514、468、448、339、264、247、216、211、200、164、150、94、87、72、15——斜體字的片段在標(biāo)準(zhǔn)電泳中不可見)(對(duì)于WOSR Express)或1kbp DNA梯度(Life Technologies)(對(duì)于SOSR)作為大小標(biāo)準(zhǔn)。
-在電泳后，通過干燥堿性毛細(xì)管印跡，將DNA樣品(消化的BAC克隆和基因組DNA)轉(zhuǎn)移到尼龍膜上(Hybond-N+Amersham Pharmacia

)。
-如上所述，通過標(biāo)準(zhǔn)的Southern雜交程序，篩選具有消化的BAC克隆和基因組DNA的尼龍膜，進(jìn)行BAC文庫篩選，除基因組DNA外，在-70℃將Kodak XOMAT AR膜暴露于放射性印跡下2天。
-用限制性酶AseI和EcoRV消化鑒別的陽性菌落的BAC克隆DNA和從歐洲油菜WOSR Darmor分離的基因組DNA，并且用5’AtFATB1探針(SEQ ID NO25)雜交(參見表14)獲得了雜交模式，基于上述雜交模式之間的比較，和表現(xiàn)出特定限制性模式的BAC克隆數(shù)，將BAC克隆分成6組，針對(duì)6組中的每一組選出含有全長(zhǎng)FA TB序列的BAC克隆(命名為FATB1至6)。
-通過標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)序技術(shù)(Agowa)，確定在選定的陽性菌落的BAC克隆中包含的FATB序列。
表14消化的BAC克隆和基因組DNA與5’AtFATB1探針(SEQ IDNO25)雜交的雜交模式
通過對(duì)所鑒別的陽性菌落的BAC克隆DNA，和從歐洲油菜WOSRDarmor分離的基因組DNA的AFLP分析，驗(yàn)證了6個(gè)不同的BAC克隆組的存在(Vos等人，1995，Nucleic Acids Research 23(21)4407-4414)。
實(shí)施例2-表征來自歐洲油菜的FATB基因序列 在測(cè)序后，用FgeneSH(Softberry，Inc.Mount Kisco，NY，USA)和est2genome(Rice等人，2000，Trends in Genetics 16(6)276-277；Mott，1997，Comput.Applic.13477-478)確定了FATB序列的編碼區(qū)，如序列表所示。
不同F(xiàn)A TB序列與分離自芫菁(AA)和甘藍(lán)(CC)的部分FATB序列的比對(duì)顯示，F(xiàn)ATB1、FATB2和FATB3序列源自A基因組，而FATB4、FATB5和FATB6序列源自C基因組。
具有或不具有內(nèi)含子序列的不同F(xiàn)A TB編碼區(qū)，以及FATB氨基酸序列的多路比對(duì)(Align Plus程序-Scientific&Educational Software，USA；利用下列缺省參數(shù)錯(cuò)配罰分＝2，開發(fā)空位罰分＝4，延伸空位罰分＝1；對(duì)于核苷酸，所使用的缺省評(píng)分矩陣是標(biāo)準(zhǔn)線性的(Standard linear)，而對(duì)于蛋白質(zhì)，缺省評(píng)分矩陣是BLOSUM62)顯示，與其它FATB基因相比，F(xiàn)ATB1和FATB4，F(xiàn)ATB2和FATB5，F(xiàn)ATB3和FATB6彼此更加相關(guān)，表明它們是部分同源基因。
基于上述分析，序列FA TB1-FA TB6分別重命名為FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3，并且該命名在說明書全文使用。本文提供了WOSR和SOSR歐洲油菜基因的蛋白質(zhì)和核酸序列。
WOSR序列 WOSR Express的基因組序列，即包括內(nèi)含子序列的FATB-A1至FATB-A3和FATB-C1至FATB-C3的蛋白質(zhì)編碼區(qū)，分別表示為SEQ IDNO1，SEQ ID NO3，SEQ ID NO5，SEQ ID NO7，SEQ ID NO9和SEQ ID NO11。這些核酸序列編碼的FATB-A1至FATB-A3和FATB-C1至FATB-C3的蛋白質(zhì)序列分別描述為SEQ ID NO2，SEQ ID NO4，SEQID NO6，SEQ ID NO8，SEQ ID NO10和SEQ ID NO12。
SOSR序列 SOSR的基因組序列，即包括內(nèi)含子序列的FATB-A1至FATB-A3和FATB-C1至FATB-C3的蛋白質(zhì)編碼區(qū)，表示為SEQ ID NO13，SEQ IDNO15，SEQ ID NO17，SEQ ID NO19，SEQ ID NO21和SEQ ID NO23。這些核酸序列編碼的FATB-A1至FATB-A3和FATB-C1至FATB-C3的蛋白質(zhì)序列分別在SEQ ID NO14，SEQ ID NO16，SEQ ID NO18，SEQID NO20，SEQ ID NO22和SEQ ID NO24。
表15顯示了在具有或不具有內(nèi)含子序列的條件下，WOSR Express(表15a)和SOSR(表15b)的不同F(xiàn)ATB編碼區(qū)之間的百分比(核苷酸)序列同一性，并顯示了在同源的FATB-A1和FATB-C1，F(xiàn)ATB-A2和FATB-C2，F(xiàn)ATB-A3和FATB-C3之間較高程度的相關(guān)性(參見下劃線的值)，表明不同的FATB基因在外顯子比內(nèi)含子序列中更保守。
表15a在具有/不具有內(nèi)含子序列的條件下，獲得自WOSR Express的不同F(xiàn)ATB編碼區(qū)之間的百分比(核苷酸)序列同一性 表15b在具有/不具有內(nèi)含子序列的條件下，獲得自SOSR的不同F(xiàn)ATB編碼區(qū)之間的百分比(核苷酸)序列同一性 下表16顯示了獲得自WOSR Express(W)和SOSR(S)的不同F(xiàn)ATB編碼區(qū)(具有/不具有內(nèi)含子序列)之間的百分比(核苷酸)序列同一性，并顯示了，在不同的歐洲油菜變種或育種品系之間，部分同源的FATB-A1和FATB-C1，F(xiàn)ATB-A2和FATB-C2，F(xiàn)ATB-A3和FATB-C3之間較高程度的相關(guān)性是保守的(參見下劃線的值)，即，例如，在來自不同變種的部分同源的FATB-A1和FATB-C1序列之間的百分比序列同一性，高于這些FATB基因與同一變種的其它FATB基因之間的百分比序列同一性。
此外可見，在相同基因的WOSR和SOSR等位基因之間存在高百分比序列同一性(例如，來自WOSR的FATB-A1和來自SOSR的FATB-A1，參見粗體值)，表明歐洲油菜變種和育種品系在其基因組中具有密切相關(guān)的FATB等位基因。
表16在有/無內(nèi)含子序列條件下WOSR Express(W)和SOSR(S)的不同F(xiàn)ATB編碼區(qū)的序列同一性 表17a和b顯示，WOSR Express(表17a)和SOSR(表17b)的不同F(xiàn)ATB氨基酸序列之間的百分比(氨基酸)序列同一性。
表17aWOSR Express的不同F(xiàn)ATB氨基酸序列之間的百分比序列同一性 表17bSOSR的不同F(xiàn)ATB氨基酸序列之間的百分比序列同一性 表18顯示，WOSR Express(W)和SOSR(S)的不同F(xiàn)ATB氨基酸序列之間的百分比(氨基酸)序列同一性。百分比序列同一性表示FATB-A1和FATB-C1，F(xiàn)ATB-A2和FATB-C2，F(xiàn)ATB-A3和FATB-C3是部分同源基因(參見下劃線值)，并且在這些部分同源物之間較高程度的相關(guān)性在不同變種之間是保守的。
此外可見，相同F(xiàn)ATB基因的WOSR和SOSR蛋白之間，存在高的百分比序列同一性(例如，來自WOSR的FATB-A1和來自SOSR的FATB-A1；參見粗體的值)，表明歐洲油菜變種和育種品系的基因組中具有密切相關(guān)的FATB等位基因，編碼相同或高度相似的蛋白質(zhì)。
表18WOSR Express(W)和SOSR(S)的不同F(xiàn)ATB氨基酸序列之間的百分比序列同一性 實(shí)施例3-蕓苔屬FATB基因的表達(dá) 為了分析不同F(xiàn)ATB基因在不同組織中的表達(dá)，對(duì)從不同蕓苔屬植物組織中分離的總RNA實(shí)施對(duì)各種FA TB基因特異的半定量RT-PCR測(cè)定。
模板 -一系列增加量的總RNA，即，0.1ng、1ng、10ng和100ng，分離自葉、根、未開放的花蕾和頂端(apices)、子葉、開花11天后有he無種子的豆莢以及這些豆莢的種子、開花后21天和34天的豆莢的種子，和歐洲油菜SOSR的愈傷組織，根據(jù)生產(chǎn)商的說明使用RNeasy Plant Minikit(Qiagen)。
-一系列增加量的基因組DNA，即，0.1ng、1ng和10ng，根據(jù)CTAB方法(Doyle和Doyle，1987，Phytochemistry Bulletin 1911-15)分離自歐洲油菜SOSR的葉組織。
引物和從靶FATB基因擴(kuò)增的片段長(zhǎng)度 -確定FATB-A1基因的表達(dá)(SEQ ID NO13) 正向5’-CTGATAACGAGACGTCCTCAC-3’(SEQ ID NO31) 反向5’-CATCCTGGAGACGGAGCAGG-3’(SEQ ID NO32) →對(duì)于FATB-A1RNA模板957bp，和 →對(duì)于FATB-A1基因組DNA模板1275bp -確定FATB-A2基因的表達(dá)(SEQ ID NO15) 正向5’-CTGCCTGACTGGAGTATGCTG-3’(SEQ ID NO33) 反向5’-GTTGTTGCTCCTGTCTTGGAG-3’(SEQ ID NO34) →對(duì)于FATB-A2RNA模板956bp，和 →對(duì)于FATB-A2基因組DNA模板1340bp -確定FATB-A3基因的表達(dá)(SEQ ID NO17) 正向5’-GCAGTGGATGATGCTTGATAC-3’(SEQ ID NO35) 反向5’-CAAGTCGTTGATGGTGTTTTC-3’(SEQ ID NO36) →對(duì)于FATB-A3RNA模板900bp，和 →對(duì)于FATB-A3基因組DNA模板1367bp -確定FATB-C1基因的表達(dá)(SEQ ID NO19) 正向5’-CTGCCTGACTGGAGCATGCTC-3’(SEQ ID NO37) 反向5’-GTTCTTCCTCTCACCACTTCG-3’(SEQ ID NO38/67) →對(duì)于FATB-C1RNA模板926bp，和 →對(duì)于FATB-C1基因組DNA模板1259bp -確定FATB-C2基因的表達(dá)(SEQ ID NO21) 正向5’-ATCGTTCAGGATGGTCTTGTC-3’(SEQ ID NO39) 反向5’-GCAGTCTTGTCATCAAGTTTG-3’(SEQ ID NO40) →對(duì)于FATB-C2RNA模板500bp，和 →對(duì)于FATB-C2基因組DNA模板937bp -確定FATB-C3基因的表達(dá)(SEQ ID NO23) 正向5’-ACAGTGGATGATGCTTGACTC-3’(SEQ ID NO41) 反向5’-CGAACATAGTCAGCAGTCTTC-3’(SEQ ID NO42) →對(duì)于FATB-C3RNA模板582bp，和 →對(duì)于FATB-C3基因組DNA模板1151bp。
PCR混合物 -對(duì)于用RNA進(jìn)行的RT-PCR(所述RNA用具有

TaqDNA聚合酶(Invitrogen)的SuperscriptTMIII One-Step RT-PCR系統(tǒng)制備)12.5μl 2x反應(yīng)混合物，1μl SuperscriptTMIII/

Taq DNA聚合酶，9.5μl Milli-Q H2O，1μl RNA(0.1ng/μl，1ng/μl，10ng/μl和100ng/μl)，0.5μl正向引物(20μM)，0.5μl反向引物(20μM))＝總體積25μl； -對(duì)于用基因組DNA進(jìn)行的PCR12.5μl 2x反應(yīng)混合物，0.2μl

Taq DNA聚合酶(5U/μl，Invitrogen)，0.5μl正向引物(20μM)，0.5μl反向引物(20μM))，1μl DNA(0.1ng/μl，1ng/μl和10ng/μl)，10.3μl Milli-Q H2O＝總體積25μl； 熱循環(huán)譜55℃30min(cDNA合成)，94℃2min；30x[94℃(變性)15sec和57℃(退火)30sec和68℃(延伸)2min]；68℃5min冷卻至10℃。
在擴(kuò)增后，向PCR樣品中加入5μl上樣染料(2.5ml 0.1％溴酚藍(lán)，2.5ml 0.1％二甲苯腈藍(lán)，5ml甘油，50μl 0.5M EDTA，pH8)，將15μl樣品上樣至含有溴化乙錠的1％TAE(10x(400mM Tris-乙酸鹽+100mM EDTA)；

)瓊脂糖(

)凝膠，同時(shí)上樣合適的分子量標(biāo)志(1Kb DNA梯，

Life Technologies)。
從歐洲油菜SOSR的不同組織的總RNA和基因組DNA中，用FATB基因-特異性引物擴(kuò)增后獲得條帶模式評(píng)價(jià)如下 -不接受來自單次RT-PCR運(yùn)行和單份RT-PCR混合物的RNA樣品的數(shù)據(jù)，但是下述情況除外分別擴(kuò)增自一系列增加量的基因組DNA和總RNA的PCR產(chǎn)物和RT-PCR產(chǎn)物(在RT-PCR產(chǎn)物的情況下如果有的話；見下文)表現(xiàn)出，針對(duì)靶FA TB基因的預(yù)期的片段長(zhǎng)度(如上述)，和與增量的模板DNA和RNA在量上分別成比例增加。
-泳道不含有任何針對(duì)特定靶FATB基因的預(yù)期大小的RT-PCR產(chǎn)物(所述產(chǎn)物擴(kuò)增自系列增加量的總RNA)，表示在從其中制備模板RNA的相應(yīng)組織中，不表達(dá)或以極低水平表達(dá)特定的靶FATB基因。
-泳道含有針對(duì)特定靶FATB基因的預(yù)期大小的RT-PCR產(chǎn)物(所述產(chǎn)物擴(kuò)增自系列增加量的總RNA)，表示在從其中制備模板RNA的相應(yīng)組織中，表達(dá)特定的靶FATB基因。
為了確定相對(duì)于特定組織中其它FATB基因的表達(dá)水平，特定組織中各FATB基因的表達(dá)水平，將在電泳凝膠上觀察到的FATB RT-PCR產(chǎn)物的條帶強(qiáng)度(獲得自DNA的溴化乙錠染色，在UV光下觀察)，與在電泳凝膠上觀察到的擴(kuò)增自系列增量的基因組DNA的FATB PCR產(chǎn)物的條帶強(qiáng)度相比。
結(jié)果 在分析的所有組織中表達(dá)所有的FATB基因(表19中的+)。在11、21和34天的豆莢種子和葉子中(基于10ng RNA)，各種FATB基因的表達(dá)水平顯示在表20中的括號(hào)中，所述表達(dá)水平表示為基因組DNA的量(ng)，所述基因組DNA的量產(chǎn)生的條帶強(qiáng)度與FATB基因-特異性RT-PCR產(chǎn)物的條帶強(qiáng)度(如上所述)相當(dāng)。
表20 圖1中表示了種子中(基于10ng RNA)各種FATB基因的時(shí)間(開花后11、21和34天)和表達(dá)水平，所述表達(dá)水平以基因組DNA的量(ng)表示，所述基因組DNA的量產(chǎn)生的條帶強(qiáng)度與FATB基因-特異性RT-PCR產(chǎn)物的條帶強(qiáng)度(如上所述)相當(dāng)。
實(shí)施例4-突變蕓苔屬FATB等位基因(fatB)的產(chǎn)生和分離 實(shí)施例1中鑒別的FATB基因中的突變是使用下述方法產(chǎn)生和鑒別的，如下所述。在4.1節(jié)中，描述了fatB等位基因的產(chǎn)生，所述等位基因包含一個(gè)或多個(gè)核苷酸的缺失，例如缺失部分或全部fatB等位基因(“缺失突變”)。在4.2節(jié)中，描述了fatB等位基因的產(chǎn)生和分離，所述等位基因包含STOP密碼子突變(“無義突變”)和/或一個(gè)或多個(gè)剪接位點(diǎn)突變。
4.1fatB缺失突變體的產(chǎn)生和篩選 -使用本領(lǐng)域所述的快中子誘變方法，誘變來自歐洲油菜SOSR的種子(野生型，稱為“M0”種子)，產(chǎn)生突變種子群體(稱為“M1”種子)。
-生長(zhǎng)60000株M1植物，并自交。收獲每一單株M1植物的M2種子。
-生長(zhǎng)源自不同M1植物的1000株M2植物，并根據(jù)CTAB方法(Doyle和Doyle，1987，Phytochemistry Bulletin 1911-15)，從每一單株M2植物的葉樣品制備DNA樣品。將M2植物自交，獲得M3種子。
-如實(shí)施例1所述，評(píng)估DNA樣品的濃度。在下列條件下，用限制性酶AseI和EcoRV消化1.7μg的基因組DNA，總反應(yīng)體積為20μl(酶和緩沖液來自New England

) -AseI消化17μl DNA(100ng/μl)，1μl AseI(10U/μl)，2μl NEB3緩沖液 -EcoRV消化17μl DNA(100ng/μl)，1μl EcoRI(10U/μl)，2μl NEB3緩沖液，0.2μl100x牛血清白蛋白 在37℃孵育過夜或在37℃孵育4小時(shí)。
-消化后，向消化的DNA樣品中加入2μl含有RNA酶的上樣染料(12,5ml1％二甲苯腈藍(lán)FF；12,5ml1％溴酚藍(lán)水溶性指示劑；25ml甘油；100μl 0.5M EDTA pH8；1μlRNase(10mg/ml))，在37℃孵育樣品30min。樣品上樣至1％TAE(

)瓊脂糖凝膠。包括用限制性酶PstI消化噬菌體Lambda DNA(

)(產(chǎn)生29種片段(bp))作為標(biāo)準(zhǔn)大小11501、5077、4749、4507、2838、2556、2459、2443、2140、1986、1700、1159、1093、805、514、468、448、339、264、247、216、211、200、164、150、94、87、72、15(斜體字的片段在標(biāo)準(zhǔn)電泳中不可見)。
-在電泳后，通過干燥堿性毛細(xì)管印跡，將DNA樣品(消化的基因組DNA)轉(zhuǎn)移至尼龍膜(Hybond-N+Amersham Pharmacia

)上。如實(shí)施例1所述，通過標(biāo)準(zhǔn)Southern雜交程序，針對(duì)基因組DNA，用5’AtFATB1探針(SEQ ID NO25)篩選具有消化的基因組DNA的尼龍膜。在-70℃，將Kodak XOMAT AR膜暴露于放射性印跡2天。
結(jié)果 將用AseI和EcoRV消化M2蕓苔屬植物的基因組DNA，并用5’AtFATB1探針(SEQ ID NO25)雜交后獲得的雜交模式，與用AseI和EcoRV消化野生型蕓苔屬SOSR植物的基因組DNA，并用5’At FATB1探針(SEQID NO25)雜交后獲得的雜交模式相比(表21)。為了確定雜交的DNA片段和不同F(xiàn)ATB基因之間的對(duì)應(yīng)性，將后者的雜交模式與具有實(shí)施例1鑒別的一種FA TB基因的全長(zhǎng)序列的BAC克隆DNA的雜交模式相比，所述BAC克隆DNA用AseI和EcoRV消化并用5’At FA TB1探針(SEQ IDNO25)雜交(參見上表14)。
表21消化的歐洲油菜的基因組DNA與5’At FATB1探針雜交的雜交模式
缺少一種表21所示的雜交DNA片段表示，在用快中子誘變方法誘變植物中缺失了完整的FATB等位基因。
表22中顯示了純合的M2蕓苔屬植物以及缺失的雜交DNA片段(missing hybridizing DNA fragment)，所述植物包含鑒別的fatB缺失。
表22
通過下列PCR測(cè)定驗(yàn)證了純合M2蕓苔屬植物中特定FATB等位基因的缺失 -模板DNA -分離自M2蕓苔屬植物的葉材料的基因組DNA，所述植物被鑒別為含有特定FATB基因中的缺失或特定FATB基因缺失(“FATBx”)。
-陽性對(duì)照FATBx基因的BAC克隆DNA(該陽性對(duì)照的成功擴(kuò)增表明PCR在允許擴(kuò)增特定靶FATBx序列的條件下運(yùn)行)。
-陰性對(duì)照不同于FATBx基因的FATB基因的BAC克隆DNA(當(dāng)觀察到預(yù)期的結(jié)果時(shí)，即，沒有擴(kuò)增特定的FATBx PCR產(chǎn)物，表示沒有其它FATB基因的可檢測(cè)的背景擴(kuò)增)。
-野生型DNA對(duì)照是這樣的PCR，其中提供的模板DNA是從沒有FATBx基因缺失的M2蕓苔屬植物制備的基因組DNA。當(dāng)觀察到預(yù)期的結(jié)果時(shí)，即，僅擴(kuò)增特定的FATBx PCR產(chǎn)物，表示在基因組DNA樣品中，沒有可檢測(cè)的背景擴(kuò)增，例如其它FATB基因的可檢測(cè)的背景擴(kuò)增。
-引物和從野生型靶FATBx基因擴(kuò)增的片段長(zhǎng)度(“FATBx-特定PCR片段”) -為了證實(shí)存在FATB-A1基因(SEQ ID NO13)中的缺失或FATB-A1基因缺失 正向5’-CTGATAACGAGACGTCCTCAC-3’(SEQ ID NO31) 反向5’-CAGTCTTAACATGGTTGAGTG-3’(SEQ ID NO43)→403bp -為了證實(shí)存在FATB-A2基因(SEQ ID NO15)中的缺失或FATB-A2基因缺失 正向5’-CATGTTCCATCTTCTTCCTCG-3’(SEQ ID NO44) 反向5’-TATTGGGACAACATGTGAGTG-3’(SEQ ID NO45)→513bp -為了證實(shí)存在FATB-A3基因(SEQ ID NO17)中的缺失或FATB-A3基因缺失 正向5’-GCAGTGGATGATGCTTGATAC-3’(SEQ ID NO35) 反向5’-TTCTTCTTAACCATCTCAGGT-3’(SEQ ID NO46)→487bp -為了證實(shí)存在FATB-C1基因(SEQ ID NO19)中的缺失或FATB-C1基因缺失 正向5’-CTGCCTGACTGGAGCATGCTC-3’(SEQ ID NO37) 反向5’-CCAAACCCATCTCCAAGCAGC-3’(SEQ ID NO47)→367bp -為了證實(shí)存在FATB-C2基因(SEQ ID NO21)中的缺失或FATB-C2基因缺失 正向5’-ATCGTTCAGGATGGTCTTGTC-3’(SEQ ID NO39) 反向5’-TAACTCACAACGAGAACCAGG-3’(SEQ ID NO48)→397bp -為了證實(shí)存在FATB-C3基因(SEQ ID NO23)中的缺失或FATB-C3基因缺失 正向5’-ACAGTGGATGATGCTTGACTC-3’(SEQ ID NO41) 反向5’-CTTTGATAATCTCCTTGTCAC-3’(SEQ ID NO49)→1035bp -PCR混合物2.5μl 10x PCR緩沖液，0.25μl dNTP(20μM)，0.5μl正向引物(10μM)，0.5μl反向引物(10μM)，0.25μl Taq聚合酶(5U/μl)，20μl Milli-Q H2O，1μl DNA(50ng/μl)＝總體積25μl； -熱循環(huán)譜94℃4min；25x[94℃(變性)1min和57℃(退火)1min和72℃(延伸)2min]；72℃5min冷卻至4℃。
-在擴(kuò)增后，向PCR樣品中加入5μl上樣染料(2.5ml 0.1％溴酚藍(lán)，2.5ml 0.1％二甲苯腈藍(lán)，5ml甘油，50μl 0.5M EDTA，pH8)，將樣品上樣至1％TAE(10x(400mM Tris-乙酸鹽+100mM EDTA)；

)瓊脂糖(

)凝膠，同時(shí)上樣合適的分子量標(biāo)志(100bp DNA標(biāo)志物，

)。
-如下評(píng)價(jià)在用FATBx-特異性引物擴(kuò)增M2蕓苔屬植物的基因組DNA后獲得的條帶模式 -不接受來自單次PCR運(yùn)行和單份PCR混合物的DNA樣品的數(shù)據(jù)，所述DNA樣品分離自M2蕓苔屬植物的葉材料，所述植物經(jīng)鑒定包含F(xiàn)ATBx基因內(nèi)的缺失突變或所述基因的缺失突變，除非 -陰性對(duì)照是PCR擴(kuò)增陰性的(無片段)， -陽性對(duì)照表現(xiàn)出預(yù)期的PCR產(chǎn)物(特定的FATBx片段)， -野生型DNA對(duì)照顯示出預(yù)期的結(jié)果(僅特定的FATBx片段)。
-沒有表現(xiàn)出預(yù)期大小的特定FATBx基因的PCR產(chǎn)物的泳道，表示在從其中制備基因組模板DNA的相應(yīng)植物中，包含特定FATBx基因內(nèi)的缺失或所述基因的缺失。
-表現(xiàn)出預(yù)期大小的特定FATBx基因的PCR產(chǎn)物的泳道，表示在其中制備基因組模板DNA的相應(yīng)植物中，不包含特定FATBx基因內(nèi)的缺失或所述基因的缺失。
證實(shí)了純合M2植物No.LOSA018包含F(xiàn)ATB-A1的缺失，純合M2植物Nrs.LOSA002、3、5包含F(xiàn)ATB-A2的缺失，和純合M2植物Nr.LOSA004包含F(xiàn)ATB-C2的缺失。
4.2包含一個(gè)或多個(gè)點(diǎn)突變的FATB等位基因的產(chǎn)生和分離 -將來自歐洲油菜SOSR的30000顆種子(M0種子)在去離子的或蒸餾的水中在濕潤(rùn)濾紙上預(yù)浸滲2小時(shí)。半數(shù)種子暴露在0.8％EMS中，半數(shù)暴露在1％EMS(SigmaM0880)，孵育4小時(shí)。
-將誘變的種子(M1種子)漂洗3次，并在通風(fēng)櫥中干燥過夜。在土壤中生長(zhǎng)30000株M1植物，自交產(chǎn)生M2種子。收獲每單株M1植物的M2種子。
-生長(zhǎng)源自不同的M1植物的2倍4800株M2植物，并根據(jù)CTAB方法(Doyle和Doyle，1987，Phytochemistry Bulletin 1911-15)，從每單株M2植物的葉樣品中制備DNA樣品。M2植物自交獲得M3種子。
-通過標(biāo)準(zhǔn)測(cè)序技術(shù)(Agowa)直接測(cè)序，和使用NovoSNP軟件(VIBAntwerp)分析序列中存在的點(diǎn)突變，在DNA樣品中篩選FATB基因中點(diǎn)突變的存在，所述點(diǎn)突變導(dǎo)致引入STOP密碼子或剪接位點(diǎn)突變。
-從而鑒別出以下突變FATB等位基因(fatB) 表23aSOSR的FATB基因中的STOP密碼子突變 (1)包含F(xiàn)ATB-A1-EMS05、FATB-A3-EMS01、FATB-C1-EMS04和FATB-C3-EMS02的種子(命名為08MBBN000584)，已經(jīng)于2008年6月27日，以登錄號(hào)NCIMB 41568，保藏在NCIMB Limited中(弗格森大廈，克萊伯區(qū)，伯克伯恩，阿伯丁，蘇格蘭，AB219YA，英國(guó)(FergusonBuilding，Craibstone Estate，Bucksburn，Aberdeen，Scotland，AB21 9YA，UK))。
(2)包含F(xiàn)ATB-A1-EMS06、FATB-A2-EMS01、FATB-C1-EMS05和FATB-C2-EMS03的種子(命名為08MBBN000572)，已經(jīng)于2008年6月27日，以登錄號(hào)NCIMB 41567，保藏在NCIMB Limited(弗格森大廈，克萊伯區(qū)，伯克伯恩，阿伯丁，蘇格蘭，AB219YA，英國(guó)(FergusonBuilding，Craibstone Estate，Bucksburn，Aberdeen，Scotland，AB21 9YA，UK))。
(3)包含F(xiàn)ATB-A2-EMS05、FATB-C1-EMS05和FATB-C2-EMS02的種子(命名為08MBBN000553)，已經(jīng)于2008年6月27日，以登錄號(hào)NCIMB 41566，保藏在NCIMB Limited(弗格森大廈，克萊伯區(qū)，伯克伯恩，阿伯丁，蘇格蘭，AB21 9YA，英國(guó)(Ferguson Building，CraibstoneEstate，Bucksburn，Aberdeen，Scotland，AB219YA，UK))。
表23bSOSR的FATB基因中的剪接位點(diǎn)突變 (1)包含F(xiàn)ATB-A 1-EMS05、FATB-A3-EMS01、FATB-C1-EMS04和FATB-C3-EMS02的種子(命名為08MBBN000584)，已經(jīng)于2008年6月27日，以登錄號(hào)NCIMB 41568，保藏在NCIMB Limited中(弗格森大廈，克萊伯區(qū)，伯克伯恩，阿伯丁，蘇格蘭，AB219YA，英國(guó)(FergusonBuilding，Craibstone Estate，Bucksburn，Aberdeen，Scotland，AB21 9YA，UK))。
總而言之，上述實(shí)施例顯示了如何產(chǎn)生并分離突變FATB等位基因。而且，包含此類突變等位基因的植物材料可用于組合植物中理想的突變和/或野生型等位基因，如下列實(shí)施例中所述。
實(shí)施例5-鑒別包含突變蕓苔屬FATB等位基因的蕓苔屬植物 在實(shí)施例5中鑒別的包含F(xiàn)ATB基因內(nèi)突變的蕓苔屬植物是如下鑒別的 5.1包含F(xiàn)ATB等位基因缺失的蕓苔屬植物的鑒別 -對(duì)于所鑒別的包含F(xiàn)ATB基因缺失的每一株純合的M2植物，生長(zhǎng)M3植物，并從每單株M3植物的葉樣品中制備DNA樣品 -對(duì)每一單株M3植物的每一份DNA樣品，實(shí)施特異性針對(duì)FATB基因的PCR測(cè)定，所述FA TB基因經(jīng)鑒別包含缺失突變(如實(shí)施例4.1所述)。
-將包含經(jīng)鑒別的突變的純合子M3植物自交，收獲M4種子。
5.2在FATB基因中包含點(diǎn)突變的蕓苔屬植物的鑒別 -對(duì)于在M2植物的DNA樣品中鑒別的每種突變FATB基因，當(dāng)M2植物包含F(xiàn)ATB突變時(shí)，生長(zhǎng)50株源自同一M1植物的M2植物，并從每單株M2植物的葉樣品中制備DNA樣品。
-如以上實(shí)施例4.2所述，在DNA樣品中篩選經(jīng)鑒別的點(diǎn)FATB突變的存在。
-將包含相同突變的雜合或純合(基于電泳圖確定)M2植物自交，收獲M3種子。
實(shí)施例6-包含突變蕓苔屬FATB基因的蕓苔屬植物種子油脂肪酸組成的分析 為了確定蕓苔屬植物中突變FATB基因的存在，與蕓苔屬植物的種子油脂肪酸組成之間的相關(guān)性，通過從種子中提取脂肪酰，并通過毛細(xì)管氣相-液相色譜分析它們?cè)诜N子油中的相對(duì)水平，來分析包含突變FATB基因的蕓苔屬植物的種子油的脂肪酸組成，如下 -干燥種子樣品并稱重。將0.8g種子放入塑料瓶中。向每個(gè)瓶?jī)?nèi)加入鋼軋碎桿(steel crushing rod)。然后用2ml甲基化溶液(10g甲醇鈉在500ml甲醇中)和0.8ml石油醚填滿該瓶。在Eberbach振蕩器上振蕩加蓋的瓶。在揭蓋和振蕩前，向每個(gè)瓶中加入1ml去離子水。在3500rpm離心瓶5min。
-將25-50μl石油醚層從每個(gè)樣品轉(zhuǎn)移至氣相色譜(GC)自動(dòng)采樣瓶中。在開始振蕩前，向每個(gè)瓶?jī)?nèi)加入100μl0.4M磷酸鹽緩沖液和800μl石油醚。在氣象色譜中注射0.4-0.6μl的樣品石油醚層用于分析。分析從氣象色譜打印輸出的結(jié)果，并計(jì)算每種脂肪酸的含量。
6.1.蕓苔屬植物中一種蕓苔屬FATB等位基因的存在與所述蕓苔屬植物的種子油脂肪酸組成之間的相關(guān)性 為了確定以純合和/或雜合狀態(tài)在蕓苔屬植物中的一種突變FATB等位基因的存在，與蕓苔屬植物的種子油脂肪酸組成之間的相關(guān)性，如上述分析實(shí)施例5.1中鑒別的蕓苔屬植物的種子油脂肪酸組成。
與野生型植物的種子油脂肪酸組成相比，沒有觀察到純合的單突變植物的種子油脂肪酸組成有顯著的差異，特別是總飽和脂肪酸(即，C14:0、C16:0、C18:0、C20:0、C22:0和C24:0脂肪酸的水平)，棕櫚酸(C16:0)和硬脂酸(C18:0)的水平(參見表24)。
表24在包含一種純合狀態(tài)的突變FATB等位基因(即，表22所示的FATB-AX-FNY或FATB-CX-FNY等位基因，在第2列稱為‘a(chǎn)X-fnY’和‘cX-fnY’；野生型FATB等位基因被稱為‘AX’和‘CX’)的蕓苔屬植物的種子油中，總飽和脂肪酸(即，C14:0、C16:0、C18:0、C20:0、C22:0和C24:0脂肪酸；‘飽和’)，棕櫚酸(C16:0)和硬脂酸(C18:0)的水平(基于脂肪酸總量的重量百分比)。

6.2.蕓苔屬植物中存在一至四種突變蕓苔屬FATB等位基因與這些蕓苔屬植物的種子油脂肪酸組成之間的相關(guān)性 為了確定以純合和/或雜合狀態(tài)存在于蕓苔屬植物中的一至四種突變FATB等位基因的存在，與蕓苔屬植物的種子油脂肪酸組成之間的相關(guān)性，將實(shí)施例5.2中鑒別的蕓苔屬植物，或其包含突變FATB等位基因的后代彼此雜交，如上分析每株后代蕓苔屬植物的種子油脂肪酸組成。
表25和圖8顯示，野生型植物中平均總飽和脂肪酸水平的范圍在8.24至10.52％之間，在純合的單突變FATB植物中在6.53至12.12％之間，在純合的雙突變FATB植物中在6.47至10.01％之間，在純合的三突變FATB植物中在5.68至8.43％之間，在純合的四突變FATB植物中在5.72至7.7％之間。表25和圖8還顯示，在特定FATB基因中的突變，例如FATB-A2和FATB-C2，可以比其它FATB基因中的突變對(duì)飽和脂肪酸的水平具有更強(qiáng)的影響。
在溫室中生長(zhǎng)所分析的植物。由于在田間生長(zhǎng)的野生型植物的種子油的平均總飽和脂肪酸水平通常在約6.5％和7.5％之間，而非在溫室生長(zhǎng)植物中觀察到的8.24至10.52％，因此，預(yù)期在田間生長(zhǎng)的突變植物的種子油的總飽和脂肪酸水平也將更低。突變植物生長(zhǎng)在田間，確定種子油脂肪酸組成。
表25在包含至少一種純合狀態(tài)的突變FA TB等位基因(即，表23所示的FATB-AX-EMSY或FATB-CX-EMSY等位基因，在第1列稱為‘a(chǎn)X-emsY’和‘cX-emsY’，在第2列中稱為‘a(chǎn)X’和‘cX’；野生型FATB等位基因被稱為‘AX’和‘CX’)的蕓苔屬植物的種子油中，總飽和脂肪酸(即，C14:0、C16:0、C18:0、C20:0、C22:0和C24:0脂肪酸；‘飽和’)，棕櫚酸(C16:0)和硬脂酸(C18:0)的水平(基于脂肪酸總量的重量百分比)。



(1)包含F(xiàn)ATB-A1-EMS05、FATB-A3-EMS01、FATB-C1-EMS04和FATB-C3-EMS02的種子(命名為08MBBN000584)，已經(jīng)于2008年6月27日，以登錄號(hào)NCIMB 41568，保藏在NCIMB Limited中(弗格森大廈，克萊伯區(qū)，伯克伯恩，阿伯丁，蘇格蘭，AB21 9YA，英國(guó)(FergusonBuilding，Craibstone Estate，Bucksburn，Aberdeen，Scotland，AB21 9YA，UK))。
(2)包含F(xiàn)ATB-A1-EMS06、FATB-A2-EMS01、FATB-C1-EMS05和FATB-C2-EMS03的種子(命名為08MBBN000572)，已經(jīng)于2008年6月27日，以登錄號(hào)NCIMB 41567，保藏在NCIMB Limited(弗格森大廈，克萊伯區(qū)，伯克伯恩，阿伯丁，蘇格蘭，AB219YA，英國(guó)(FergusonBuilding，Craibstone Estate，Bucksburn，Aberdeen，Scotland，AB21 9YA，UK))。
(3)包含F(xiàn)ATB-A2-EMS05、FATB-C1-EMS05和FATB-C2-EMS02的種子(命名為08MBBN000553)，已經(jīng)于2008年6月27日，以登錄號(hào)NCIMB 41566，保藏在NCIMB Limited(弗格森大廈，克萊伯區(qū)，伯克伯恩，阿伯丁，蘇格蘭，AB219YA，英國(guó)(Ferguson Building，CraibstoneEstate，Bucksburn，Aberdeen，Scotland，AB219YA，UK))。
6.3.蕓苔屬植物中以純合和/或雜合狀態(tài)存在五至六種突變蕓苔屬FATB等位基因與這些蕓苔屬植物的種子油脂肪酸組成之間的相關(guān)性 為了確定以純合和/或雜合狀態(tài)存在于蕓苔屬植物中的五至六種突變FATB等位基因，與蕓苔屬植物的種子油脂肪酸組成之間的相關(guān)性，將實(shí)施例5.2中鑒別的蕓苔屬植物，或其包含突變FATB等位基因的后代彼此雜交，如上分析每株后代蕓苔屬植物的種子油脂肪酸組成。
實(shí)施例7-將突變FATB基因轉(zhuǎn)移至(良種)蕓苔屬品系中 通過下列方法將突變FATB基因轉(zhuǎn)移至(良種)蕓苔屬品系中 將包含突變FATB基因的植物(供體植物)，與(良種)蕓苔屬品系(良種親本/回歸親本)或缺失突變FATB基因的變種雜交。使用下列漸滲方案(突變FA TB基因縮寫為fatB，同時(shí)野生型描述為FATB) 初始雜交fatB/fatB(供體植物)XFATB/FATB(良種親本) F1植物 FATB/fatB BC1雜交FATB/fatBX FATB/FATB(回歸親本) BC1植物50％FATB/fatB和50％FATB/FATB 使用例如突變FATB等位基因(fatB)的AFLP或PCR標(biāo)志物選擇該50％FATB/fatB。
BC2雜交FATB/fatB(BC1植物)X FATB/FATB(回歸親本) BC2植物50％FATB/fatB和50％FATB/FATB 使用例如針對(duì)突變FATB等位基因(fatB)的AFLP或PCR標(biāo)志物選擇該50％FATB/fatB。
重復(fù)回交至BC3至BC6 BC6植物50％FATB/fatB和50％FATB/FATB 使用例如針對(duì)突變FATB等位基因(fatB)的AFLP或PCR標(biāo)志物選擇該50％FATB/fatB。
BC6S1雜交FATB/fatBX FATB/fatB BC6S1植物25％FATB/FATB和50％FATB/fatB和25％fatB/fatB 使用例如針對(duì)突變FATB等位基因(fatB)的AFLP或PCR標(biāo)志物選擇含有fatB的植物。
使用例如針對(duì)突變和野生型等位基因的AFLP或PCR標(biāo)志物選擇單株BC6S1植物，所述植物對(duì)于突變FATB等位基因是純合的(fatB/fatB)。
然后將這些植物用于生產(chǎn)種子。
為了選擇包含F(xiàn)ATB等位基因缺失的植物，可以使用如實(shí)施例4.1所述那些的雜交測(cè)定或PCR測(cè)定。
為了選擇在FATB等位基因中包含點(diǎn)突變的植物，可以通過本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)序技術(shù)進(jìn)行直接測(cè)序，例如實(shí)施例4.2所述的那些技術(shù)?？蛇x的，可以開發(fā)PCR測(cè)定，來區(qū)分在FATB等位基因中包含特定點(diǎn)突變的植物，和不包含該特定點(diǎn)突變的植物。因此，開發(fā)了以下區(qū)分性PCR測(cè)定，來檢測(cè)實(shí)施例4.2中鑒別的突變等位基因的存在或缺失，以及接合性狀態(tài)(參見表23) -模板DNA -分離自純合或雜合突變蕓苔屬植物的葉材料的基因組DNA(包含突變FATB等位基因，后文稱為“FATB-Xx-EMSXX”)。
-野生型DNA對(duì)照分離自野生型蕓苔屬植物的葉材料的基因組DNA(包含突變FATB等位基因的野生型等價(jià)體，后文稱為“FATB-Xx-WT”)。
-陽性DNA對(duì)照分離自純合突變蕓苔屬植物的葉材料的基因組DNA，所述植物已知包含F(xiàn)ATB-Xx-EMSXX。
-表26中顯示了引物和擴(kuò)增自突變和相應(yīng)野生型靶FATB基因的片段的長(zhǎng)度。每個(gè)引物組由一條特異針對(duì)突變體和野生型靶基因的引物(例如，引物L(fēng)OSA104R5特異針對(duì)FATB-A1-EMS06和FATB-A1-WT)和一條特異針對(duì)核苷酸差異的引物(例如，引物L(fēng)OSA105MF1特異針對(duì)FATB-A1-EMS06，和引物L(fēng)OSA105WF1特異針對(duì)FATB-A1-WT)組成。通常，后一種引物的最后一個(gè)核苷酸與核苷酸差異相匹配(表26中下劃線的核苷酸)，但是可以添加一個(gè)(或多個(gè))額外的靶特異性核苷酸，來改善引物及其靶序列之間的退火(參見例如，特異針對(duì)FATB-A2-EMS05等位基因的引物L(fēng)OSA112MR2中的粗體核苷酸，與引物L(fēng)OSA112WR2相比，后者特異針對(duì)FATB-A2-WT等位基因)。
-PCR混合物2.5μl 10x PCR緩沖液(15mM MgCl2)，0.25μl dNTP(20mM)，1μl正向引物(10μM)，1μl反向引物(10μM)，0.25μlTaq聚合酶(5U/μl)，19.5μl Milli-Q H2O，0.5μl DNA(20-50ng/μl)＝總體積25μl； -熱循環(huán)譜95℃4min；30x[95℃(變性)1min，和表26說明的退火溫度1min和72℃(延伸)2min]；72℃5min；冷卻至4℃。通過在MJ Research熱循環(huán)儀上的PTC-200(Biozym)上的溫度梯度PCR確定優(yōu)化的退火溫度，其中退火溫度在57℃至70℃之間變動(dòng)。野生型FATB特異性引物的優(yōu)化退火溫度是這樣的溫度，在所述溫度下，可以從野生型蕓苔屬植物DNA樣品中檢測(cè)到預(yù)期大小的清晰的PCR片段(如下所述)，而從突變蕓苔屬植物的DNA樣品中檢測(cè)不到。突變FATB特異性引物的優(yōu)化退火溫度是這樣的溫度，在所述溫度下，可以從突變蕓苔屬植物DNA樣品中檢測(cè)到預(yù)期大小的清晰的PCR片段(如下所述)，而從野生型蕓苔屬植物的DNA樣品中檢測(cè)不到。
-在擴(kuò)增后，向15μl PCR樣品中添加5μl上樣染料(橙色染料)，并將樣品上樣至1.5％瓊脂糖凝膠中。
-如下評(píng)估擴(kuò)增突變蕓苔屬植物的基因組DNA后所獲得的條帶模式 -不接受在單次PCR運(yùn)行和單份PCR混合物中的DNA樣品的數(shù)據(jù)，所述DNA樣品分離自突變蕓苔屬植物的葉材料，除非 -野生型DNA對(duì)照在FATB-Xx-WT特異性PCR測(cè)定中顯示出預(yù)期大小的PCR片段，在FATB-Xx-EMSXX特異性PCR測(cè)定中沒有顯示出預(yù)期大小的PCR片段 -陽性DNA對(duì)照在FATB-Xx-EMSXX特異性PCR測(cè)定中顯示出預(yù)期大小的PCR片段，在FATB-Xx-WT特異性PCR測(cè)定中沒有顯示出預(yù)期大小的PCR片段 -在FATB-Xx-WT特異性PCR測(cè)定中沒有顯示出預(yù)期大小的PCR產(chǎn)物，而在FATB-Xx-EMSXX特異性PCR測(cè)定中顯示出預(yù)期大小的PCR片段的泳道，表示從其中制備基因組模板DNA的相應(yīng)植物是FATB-Xx-EMSXX的純合突變。
-在FATB-Xx-WT特異性PCR測(cè)定和FATB-Xx-EMSXX特異性PCR測(cè)定中顯示出預(yù)期大小的PCR片段的泳道，表示從其中制備基因組模板DNA的相應(yīng)植物是FATB-Xx-EMSXX的雜合突變。
-在FATB-Xx-WT特異性PCR測(cè)定中顯示出預(yù)期大小的PCR片段，而在FATB-Xx-EMSXX特異性PCR測(cè)定中沒有顯示出預(yù)期大小的PCR產(chǎn)物的泳道，表示從其中制備基因組模板DNA的相應(yīng)植物是野生型植物。
表26


＊ho＝純合子，he＝雜合子 可選的，可以使用InvaderTM技術(shù)(Third Wave Agbio)來區(qū)分在FATB等位基因中包含特定點(diǎn)突變的植物和不包含特定點(diǎn)突變的植物。因此，可以開發(fā)下列區(qū)分性InvaderTM探針，來檢測(cè)實(shí)施例4中鑒別的突變等位基因的存在或缺失，以及接合性狀態(tài)(參見表23a和b) -開發(fā)了特異針對(duì)突變(可以通過附加“flap1”序列來區(qū)分)或相應(yīng)野生型(可以通過附加“flap2”序列來區(qū)分)靶FATB基因的探針，以及可以與其組合使用的“侵入型”探針。通常，每種探針組由特異針對(duì)突變或野生型靶基因的一種探針(所述探針在5’flap序列后的第一個(gè)核苷酸與核苷酸差異(表27中下劃線的核苷酸)相匹配(所謂的“主探針”，例如具有SEQ ID NO82的探針特異針對(duì)FATB-A1-EMS05))，和特異針對(duì)核苷酸差異上游的核苷酸的一種探針(所謂的

oligo”，例如具有SEQ ID NO81的探針特異針對(duì)FATB-A1-EMS05和FATB-A1-WT之間的核苷酸差異的上游核苷酸)組成。后一引物的最后一個(gè)核苷酸可以與突變體中的核苷酸差異匹配，但該最后一個(gè)核苷酸也可以使用其它的核苷酸(如表27中粗體核苷酸所示)，只要當(dāng)與靶DNA雜交時(shí)，所述主探針和

oligo仍然能夠形成單堿基重疊，產(chǎn)生被

酶(ThirdWave Agbio)識(shí)別的特定侵入性結(jié)構(gòu)(invasive structure)。根據(jù)生產(chǎn)商(Third Wave Agbio)的規(guī)定，實(shí)施InvaderTM測(cè)定程序和數(shù)據(jù)解釋。簡(jiǎn)而言之，表示為“flap1”和“flap2”的核苷酸序列代表5’“flap”序列，在InvaderTM測(cè)定的初級(jí)階段，所述序列被從主探針上切除，并分別與FRETTM盒1和2中的序列互補(bǔ)，而不與靶突變或野生型序列互補(bǔ)。如果在初級(jí)階段切除了主探針，且在次級(jí)階段flap-1探針和/或flap-2-探針分別與FRETTM盒1和2雜交，則分別產(chǎn)生表示樣品中存在突變或相應(yīng)野生型靶FATB基因的信號(hào)。
-可選的，特異針對(duì)突變靶FA TB基因的探針(表27中表示為“5’flap1-x”)與特異針對(duì)內(nèi)部對(duì)照基因的探針(表27中表示為“5’flap2-x”；對(duì)照基因表示為ENDO1)組合使用。如果在初級(jí)階段切除了主探針，并在次級(jí)階段flap1-探針和/或flap2-探針分別與FRETTM盒1和2雜交，則產(chǎn)生分別表示樣品中存在突變靶FATB基因和內(nèi)源性對(duì)照基因的信號(hào)?；趶腇RETTM盒1產(chǎn)生的信號(hào)量相對(duì)于從FRETTM盒2產(chǎn)生的信號(hào)量，可以確定突變FATB等位基因的接合性狀態(tài)(純合的FATB等位基因產(chǎn)生的信號(hào)是雜合FATB等位基因的約2倍)。
表27


序列表
<110>拜爾生物科學(xué)公司(Bayer BioScience N.V.)
B·拉加(Laga，Benjamin)
B·登博爾(den Boer，Bart)
B·朗伯特(Lambert，Bart)
<120>包含突變脂酰-ACP硫酯酶等位基因的蕓苔屬植物
<130>BCS 07-2011
<160>102
<170>PatentIn版本3.3
<210>1
<211>1563
<212>DNA
<213>歐洲油菜(Brassica napus)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(504)
<220>
<221>mat_peptide
<222>(1)..(1560)
<223>在氨基酸91起始的成熟肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(490)..(492)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(590)..(723)
<220>
<221>misc_feature
<222>(611)..(613)
<223>保守Lys
<220>
<221>misc_feature
<222>(683)..(685)
<223>保守Val
<220>
<221>CDS
<222>(798)..(911)
<220>
<221>misc_feature
<222>(850)..(852)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(981)..(1152)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1018)..(1020)
<223>保守Ser
<220>
<221>CDS
<222>(1243)..(1560)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1249)..(1251)
<223>保守Trp
<220>
<221>misc_feature
<222>(1267)..(1269)
<223>保守Asn
<220>
<221>misc_feature
<222>(1273)..(1275)
<223>保守His
<220>
<221>misc_feature
<222>(1378)..(1380)
<223>保守Cys
<400>1
atg gtg gcc acc tca gct aca tcc tca ttc ttc cct ctc cca tct ttc 48
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
ccc ctc gac ccc acc gca aaa acc aac aaa gtc acc acc tcc acc aac 96
Pro Leu Asp Pro Thr Ala Lys Thr Asn Lys Val Thr Thr Ser Thr Asn
20 25 30
ttc tcc ggc ctc tcc ccc act cca aac tcc tcc ggc agg atg aag gtt144
Phe Ser Gly Leu Ser Pro Thr Pro Asn Ser Ser Gly Arg Met Lys Val
35 40 45
aaa cca aac gct cag gcc cca ccc aag atc aac ggc aag aga gtc ggt192
Lys Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Arg Val Gly
50 55 60
ctc cct tct ggc tcg gtg aag cct gat aac gag acg tcc tca cag cat240
Leu Pro Ser Gly Ser Val Lys Pro Asp Asn Glu Thr Ser Ser Gln His
65 70 75 80
ccc gca gca ccg agg acg ttc atc aac cag ctg cct gac tgg agc atg288
Pro Ala Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
ctt ctt gct gca ata aca acc gtc ttc ttg gcg gct gag aag cag tgg336
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
atg atg ctt gac tgg aaa ccg agg cgc tct gac gtg att atg gat ccg384
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Val Ile Met Asp Pro
115 120 125
ttt ggg tta ggg agg atc gtt cag gat ggg ctt gtg ttc cgt cag aat432
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
ttc tct att cgg tct tat gag ata ggt gct gat cgc tct gcg tct ata480
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
gaa acg gtt atg aat cat tta cag gtactgatta tgattatgat tatgattgta534
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
gttgcttgtt gttactggac aaagttaata tgtattgctg ttatggttat gatag gaa592
Glu
acg gca ctc aac cat gtt aag act gct gga ctg ctt gga gat ggg ttt 640
Thr Ala Leu Asn His Val Lys Thr Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe
170 175 180 185
ggt tct act cct gag atg gtt aag aag aac ttg att tgg gtt gtt act 688
Gly Ser Thr Pro Glu Met Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr
190 195 200
cgt atg cag gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagctatt 733
Arg Met Gln Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
205 210
ctcaagcaac cctgagaatc actgcttcct ttgtcatttg cttattcaaa tatctgtctc 793
acag g gga gat gtt gtg gaa gta gat aca tgg gtg agc cag tct gga 840
Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln Ser Gly
215 220 225
aag aac ggt atg cgt cgt gat tgg cta gtt cga gat ggc aat act gga 888
Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Gly Asn Thr Gly
230 235 240
gaa att tta aca aga gca tca ag gttagatttt tatttatcgg ttaggtatct941
Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser
245 250
gaaaatttga gttactaatg caaaatatta tttttgcag t gtg tgg gtg atg atg996
Val Trp Val Met Met
255
aat aaa ctg aca aga aga tta tca aag att cct gaa gag gtt cga ggg1044
Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly
260 265 270
gag ata gag cct tac ttt gtt aat tca gac cca gtc ctt gct gag gac1092
Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Leu Ala Glu Asp
275 280 285
agc aga aag tta act aaa ctt gat gac aag act gct gac tat gtt cgt1140
Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg
290 295 300
tct ggt ctc act gtaagtatgc atactttctc tatgtttcat caaagcctgt1192
Ser Gly Leu Thr
305
aaacttctga gattcttaca gtttttattt ggtaatttaa acttttgcag ccg cgt 1248
Pro Arg
310
tgg agt gac ttg gat gtt aac cag cac gtt aac aat gtg aag tac atc1296
Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile
315 320 325
ggg tgg ata ctg gag agt gca cct gtg ggg atg atg gag agt cag aag1344
Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Met Met Glu Ser Gln Lys
330 335 340
ctg aaa agc atg act ctg gag tat cgc agg gag tgc ggg agg gac agt1392
Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser
345 350 355
gtg ctt cag tcc ctc acc gcg gtt tcg ggc tgc gat gtt ggt agt ctt1440
Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu
360 365 370
ggg aca gct ggt gaa gtg gaa tgt cag cac ctg ctc cgt ctc cag gat1488
Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu Leu Arg Leu Gln Asp
375 380 385 390
gga gct gaa gtg gtg aga gga aga aca gag tgg agt tcc aaa aca tca1536
Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser Ser Lys Thr Ser
395 400 405
aca aca act tgg gac att aca ccg tga1563
Thr Thr Thr Trp Asp Ile Thr Pro
410
<210>2
<211>414
<212>PRT
<213>歐洲油菜
<400>2
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Pro Leu Asp Pro Thr Ala Lys Thr Asn Lys Val Thr Thr Ser Thr Asn
20 25 30
Phe Ser Gly Leu Ser Pro Thr Pro Asn Ser Ser Gly Arg Met Lys Val
35 40 45
Lys Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Arg Val Gly
50 55 60
Leu Pro Ser Gly Ser Val Lys Pro Asp Asn Glu Thr Ser Ser Gln His
65 70 75 80
Pro Ala Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Val Ile Met Asp Pro
115 120 125
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys
165 170 175
Thr Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Val
180 185 190
Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val Asp
195 200 205
Lys Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser
210 215 220
Gln Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Gly
225 230 235 240
Asn Thr Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met Met
245 250 255
Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly
260 265 270
Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Leu Ala Glu Asp
275 280 285
Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg
290 295 300
Ser Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val
305 310 315 320
Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly
325 330 335
Met Met Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg
340 345 350
Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly
355 360 365
Cys Asp Val Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His
370 375 380
Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu
385 390 395 400
Trp Ser Ser Lys Thr Ser Thr Thr Thr Trp Asp Ile Thr Pro
405 410
<210>3
<211>1659
<212>DNA
<213>歐洲油菜
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(504)
<220>
<221>mat_peptide
<222>(1)..(1656)
<223>在氨基酸91起始的成熟肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(490)..(492)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(584)..(717)
<220>
<221>misc_feature
<222>(605)..(607)
<223>保守Lys
<220>
<221>misc_feature
<222>(677)..(679)
<223>保守Val
<220>
<221>CDS
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<220>
<221>misc_feature
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<223>保守Met
<220>
<221>CDS
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<220>
<221>misc_feature
<222>(1096)..(1098)
<223>保守Ser
<220>
<221>CDS
<222>(1309)..(1656)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1315)..(1317)
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<220>
<221>misc_feature
<222>(1333)..(1335)
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<220>
<221>misc_feature
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<220>
<221>misc_feature
<222>(1444)..(1446)
<223>保守Cys
<400>3
atg gtg gct act tgc gct acg tcg tcg ttt ttt cat gtt cca tct tct 48
Met Val Ala Thr Cys Ala Thr Ser Ser Phe Phe His Val Pro Ser Ser
1 5 10 15
tcc tcg ctt gat acg aat ggg aag ggg aac aga gtt ggg tcc act aat 96
Ser Ser Leu Asp Thr Asn Gly Lys Gly Asn Arg Val Gly Ser Thr Asn
20 25 30
ttt gct gga ctt aac tca acg cca agc tct ggg agg atg aag gtt aag144
Phe Ala Gly Leu Asn Ser Thr Pro Ser Ser Gly Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gct cag gct cca ccc aag atc aac ggg aag aaa gct aac ttg192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Lys Ala Asn Leu
50 55 60
cct ggc tct gta gag ata tca aag gct gac aac gag act tcg cag ccc240
Pro Gly Ser Val Glu Ile Ser Lys Ala Asp Asn Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
gca cac gca ccg agg acg ttt atc aac cag ctg cct gac tgg agt atg288
Ala His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
ctg ctt gct gct ata act acc att ttc ttg gca gcg gag aaa cag tgg336
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
atg atg ctt gac tgg aaa ccg agg cgt tct gat atg att atg gat cct384
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp Pro
115 120 125
ttt ggt tta ggg aga att gtt cag gat ggt ctt gtg ttc cgt cag aat432
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
ttt tcc att agg tct tat gaa ata ggt gct gat cgc tct gcg tct ata480
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
gaa act gtc atg aat cat tta cag gtactgcttt gattgtggtt acactcacat 534
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
gttgtcccaa tagatatatg ctcatgacaa gctcttatgc taatgacag gaa acg gcg 592
Glu Thr Ala
170
ctt aat cat gtg aag tct gcc gga ctg ctg gaa aat ggg ttt ggg tcc640
Leu Asn His Val Lys Ser Ala Gly Leu Leu Glu Asn Gly Phe Gly Ser
175 180 185
act cct gag atg ttt aag aag aat ttg ata tgg gtc gtt gct cgt atg688
Thr Pro Glu Met Phe Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Ala Arg Met
190 195 200
cag gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagccatt gttagtctta 737
Gln Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
205 210
gcacttgact taaaatcatt ttgcatatta cagtgtgcgt agatcatttg cttattcaaa 797
tatctgactc acag g gga gat gtt gtg gaa gtg gat act tgg gtt agt cag 848
Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln
215 220 225
tct gga aag aat ggt atg cgt cgt gat tgg cta gtt cgg gat tgc aat896
Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys Asn
230 235 240
act gga gaa att gta acg cga gca tca ag gtcagagttc ttatattttg 945
Thr Gly Glu Ile Val Thr Arg Ala Ser Ser
245 250
gtttactcca gctattatcg ttttgctctc tgtttgtatt gtttcctctg ccattagttt 1005
gataattgag tctttatagt tgtatatgta tggcaatttt cttctttttg cag t ttg 1062
Leu
tgg gtg atg atg aat aaa ctc aca agg aga ttg tca aag att cct gaa1110
Trp Val Met Met Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu
255 260 265
gag gtt cga ggg gaa ata gag cct tat ttt gtg aac tct gat cct gtc1158
Glu Val Arg Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val
270 275 280
att gcc gaa gac agc aga aag tta aca aaa ctt gat gac aag act gct1206
Ile Ala Glu Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala
285 290 295 300
gac tat gtt cgt tct ggt ctc act gtaagtacct tacctttcga caagcctgtc 1260
Asp Tyr Val Arg Ser Gly Leu Thr
305
aaaactcttg aggttctaat ggtttggtaa tgaacttttt tttggcag ccg agg tgg 1317
Pro Arg Trp
310
agt gac ttg gat gtt aac cag cat gtt aac aat gta aag tac att ggg1365
Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly
315 320 325
tgg ata ctg gag agt gct cca gca ggg atg ctg gag agt cag aag ctg1413
Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ala Gly Met Leu Glu Ser Gln Lys Leu
330 335 340
aaa agc atg act ctg gag tat cgc agg gag tgc ggg aga gac agt gtg1461
Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val
345 350 355
ctt cag tct ctc acc gca gtc tct gga tgt gat gtc ggt aac ctc ggg1509
Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Cys Asp Val Gly Asn Leu Gly
360 365 370 375
aca gcc ggg gaa gtg gag tgt cag cat ttg ctt cga ctc cag gat gga1557
Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly
380 385 390
gct gaa gtg gtg aga gga aga aca gag tgg agc tcc cag aca gga gca1605
Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser Ser Gln Thr Gly Ala
395 400 405
aca act tgg gga cac tac tac atc gta aac att ggt cct ttg gtt cct1653
Thr Thr Trp Gly His Tyr Tyr Ile Val Asn Ile Gly Pro Leu Val Pro
410 415 420
ttg taa1659
Leu
<210>4
<211>424
<212>PRT
<213>歐洲油菜
<400>4
Met Val Ala Thr Cys Ala Thr Ser Ser Phe Phe His Val Pro Ser Ser
1 5 10 15
Ser Ser Leu Asp Thr Asn Gly Lys Gly Asn Arg Val Gly Ser Thr Asn
20 25 30
Phe Ala Gly Leu Asn Ser Thr Pro Ser Ser Gly Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Lys Ala Asn Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val Glu Ile Ser Lys Ala Asp Asn Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
Ala His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp Pro
115 120 125
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys
165 170 175
Ser Ala Gly Leu Leu Glu Asn Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Phe
180 185 190
Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Ala Arg Met Gln Val Val Val Asp
195 200 205
Lys Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser
210 215 220
Gln Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys
225 230 235 240
Asn Thr Gly Glu Ile Val Thr Arg Ala Ser Ser Leu Trp Val Met Met
245 250 255
Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly
260 265 270
Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Ile Ala Glu Asp
275 280 285
Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg
290 295 300
Ser Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val
305 310 315 320
Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ala Gly
325 330 335
Met Leu Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg
340 345 350
Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly
355 360 365
Cys Asp Val Gly Asn Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His
370 375 380
Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu
385 390 395 400
Trp Ser Ser Gln Thr Gly Ala Thr Thr Trp Gly His Tyr Tyr Ile Val
405 410 415
Asn Ile Gly Pro Leu Val Pro Leu
420
<210>5
<211>1733
<212>DNA
<213>歐洲油菜
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(507)
<220>
<221>mat_peptide
<222>(1)..(1730)
<223>在氨基酸92起始的成熟肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(493)..(495)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
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<220>
<221>misc_feature
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<223>保守Lys
<220>
<221>misc_feature
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<223>保守Val
<220>
<221>CDS
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<220>
<221>misc_feature
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<223>保守Met
<220>
<221>CDS
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<220>
<221>misc_feature
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<223>保守Ser
<220>
<221>CDS
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<220>
<221>misc_feature
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<223>保守Trp
<220>
<221>misc_feature
<222>(1437)..(1439)
<223>保守Asn
<220>
<221>misc_feature
<222>(1443)..(1445)
<223>保守His
<220>
<221>misc_feature
<222>(1548)..(1550)
<223>保守Cys
<400>5
atg gtg gcc acc tct gct aca tcc tca ttc ttc cct ctc cca tct tcc 48
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
tct ctc gac ccc aat ggc aaa acc aac aaa ctc acc tcc acc aac ttc 96
Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Asn Lys Leu Thr Ser Thr Asn Phe
20 25 30
tcc gga ctc aac ccc aca cca aac tct tcc ggc agg tta aag gtc aaa144
Ser Gly Leu Asn Pro Thr Pro Asn Ser Ser Gly Arg Leu Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gcc caa gct cca tcc aag atc aac ggc aag aaa gtc tct ctg192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Ser Lys Ile Asn Gly Lys Lys Val Ser Leu
50 55 60
cca ggc tca gta cac atc gta aag act gat aat aac cac gat ctc tcg240
Pro Gly Ser Val His Ile Val Lys Thr Asp Asn Asn His Asp Leu Ser
65 70 75 80
caa caa cac gca ccc aga acg ttc atc aac cag ctg cct gac tgg agc288
Gln Gln His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser
85 90 95
atg ctt ctc gcc gcc atc aca acg gtc ttc tta gca gct gag aag cag336
Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln
100 105 110
tgg atg atg ctt gat act aaa ccg aga cgc tcc gac atg att atg gat384
Trp Met Met Leu Asp Thr Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp
115 120 125
ccg ttt ggg tta ggg aga atc gtt cag gat ggg ctt gtg tac cgt cag432
Pro Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Tyr Arg Gln
130 135 140
aat ttc gat atc agg tct tat gaa ata ggt gct gat cgc tct gca tct480
Asn Phe Asp Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser
145 150 155 160
ata gaa act gtc atg aat cac tta cag gtatattaca atcacactcg 527
Ile Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
tttgatacta tagcttgacc cgcactgatg ttggttttta tatttttata aattatttag 587
tgacatatag atataggtta tttagatatt tctaggttcc tacgaaccta cccggactca 647
aaccctgtcc gtaaaattga gtttaatttt aaaccaaaaa aatccgatac ccgaaaaaac 707
cgatctgtat ctaactcttg tcctcatgac ag gaa acg gca ctc aac cat gtg760
Glu Thr Ala Leu Asn His Val
170 175
aag tct gca gga ctg ctg gga gat ggg ttt ggt tct acg cct gag atg808
Lys Ser Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met
180 185 190
gtt aag aag aac ttg ata tgg gtc gtt act cgt atg cag gtt gtc gtt856
Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val
195 200 205
gat aaa tat cct act tg gtaagctctc ttgccactta accttaaaca903
Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
210
atatgcatga atcatttgct tattcaaatg tctgtttcac cag g gga gat gtt gtt 959
Gly Asp Val Val
215
gaa gta gat aca tgg gtc agt aag tct ggg aag aac ggt atg cgt cgt1007
Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Lys Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg
220 225 230
gat tgg cta gtt cgg gat tgc aat acc gga gaa atc tta aca cgt gca1055
Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys Asn Thr Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala
235 240 245 250
tca ag gttagcttct ttttgttttt ttgtttactc cagctattat ctgatgattg 1110
Ser Ser
agttataacc atctctatgt tacaaaacag t gtg tgg gtg atg atg aat aaa 1162
Val Trp Val Met Met Asn Lys
255
ctg aca agg aga tta tca aag ctt cct gaa gag gtt cga ggg gaa ata1210
Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Leu Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile
260 265 270 275
gag cct tac ttt gtg aac tct gac cca atc ctt gcc gag gac agc aga1258
Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Ile Leu Ala Glu Asp Ser Arg
280 285 290
aag tta aca aag cta gat gac aag act gct gac tat gtt cgc tct ggt1306
Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg Ser Gly
295 300 305
ctc acc gtaagtataa atattcaact ctttatcttt tagcgtgtaa aactcttgag 1362
Leu Thr
agattcttat gagtttagat tcttatgagt ttggtgatga acttttgcag ccg aga1418
Pro Arg
310
tgg agt gac ttg gat gtt aac cag cat gtt aac aac gtg aag tac att1466
Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile
315 320 325
ggt tgg ata ctc gag agt gct cca gta gag atg atg gag aag cat aag1514
Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Glu Met Met Glu Lys His Lys
330 335 340
ctg aaa agc atg act ctg gag tat agg agg gaa tgc ggg aga gac agt1562
Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser
345 350 355
gtg ctt cag tct ctc acc gcg gtt tcg gga tgc gat gtt ggt agc ctc1610
Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu
360 365 370 375
ggg aca gct ggt gaa gtg gaa tgt cag cat ttg ctt cga ctc cag gat1658
Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu Leu Arg Leu Gln Asp
380 385 390
gga gct gaa gtg gtg aag gga cga aca gtg tgg agt tcg aaa aca cca1706
Gly Ala Glu Val Val Lys Gly Arg Thr Val Trp Ser Ser Lys Thr Pro
395 400 405
tca acg act tgg gac act aca tcg taa1733
Ser Thr Thr Trp Asp Thr Thr Ser
410 415
<210>6
<211>415
<212>PRT
<213>歐洲油菜
<400>6
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Asn Lys Leu Thr Ser Thr Asn Phe
20 25 30
Ser Gly Leu Asn Pro Thr Pro Asn Ser Ser Gly Arg Leu Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Ser Lys Ile Asn Gly Lys Lys Val Ser Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val His Ile Val Lys Thr Asp Asn Asn His Asp Leu Ser
65 70 75 80
Gln Gln His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser
85 90 95
Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln
100 105 110
Trp Met Met Leu Asp Thr Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp
115 120 125
Pro Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Tyr Arg Gln
130 135 140
Asn Phe Asp Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser
145 150 155 160
Ile Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val
165 170 175
Lys Ser Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met
180 185 190
Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val
195 200 205
Asp Lys Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val
210 215 220
Ser Lys Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp
225 230 235 240
Cys Asn Thr Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met
245 250 255
Met Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Leu Pro Glu Glu Val Arg
260 265 270
Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Ile Leu Ala Glu
275 280 285
Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val
290 295 300
Arg Ser Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His
305 310 315 320
Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val
325 330 335
Glu Met Met Glu Lys His Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg
340 345 350
Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser
355 360 365
Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln
370 375 380
His Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Lys Gly Arg Thr
385 390 395 400
Val Trp Ser Ser Lys Thr Pro Ser Thr Thr Trp Asp Thr Thr Ser
405 410 415
<210>7
<211>1572
<212>DNA
<213>歐洲油菜
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(498)
<220>
<221>mat_peptide
<222>(1)..(1569)
<223>在氨基酸89起始的成熟肽
<220>
<221>misc_feature
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<223>保守Met
<220>
<221>CDS
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<220>
<221>misc_feature
<222>(610)..(612)
<223>保守Lys
<220>
<221>misc_feature
<222>(672)..(674)
<223>保守Val
<220>
<221>CDS
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<220>
<221>misc_feature
<222>(843)..(845)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(995)..(1166)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1032)..(1034)
<223>保守Ser
<220>
<221>CDS
<222>(1252)..(1569)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1258)..(1260)
<223>保守Trp
<220>
<221>misc_feature
<222>(1276)..(1278)
<223>保守Asn
<220>
<221>misc_feature
<222>(1282)..(1284)
<223>保守His
<220>
<221>misc_feature
<222>(1387)..(1389)
<223>保守Cys
<400>7
atg gtg gcc acc tca gct aca tcc tca ttc ttc cct ctc cca tct tcc48
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
ccc ctc gac ccc acc gca aaa acc aac aaa gtc acc acc tcc acc aac 96
Pro Leu Asp Pro Thr Ala Lys Thr Asn Lys Val Thr Thr Ser Thr Asn
20 25 30
ttc tcc ggc ctc acc ccc acg ccg aac tcc gcc agg atg aag gtt aaa144
Phe Ser Gly Leu Thr Pro Thr Pro Asn Ser Ala Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gct cag gcc cca ccc aag atc aac ggc aag aga gtc ggc ctc192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Arg Val Gly Leu
50 55 60
cct ggc tcg gtg gag atc ttg aag cct gat agc gag act tcg caa cca240
Pro Gly Ser Val Glu Ile Leu Lys Pro Asp Ser Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
gca ccg agg acg ttc atc aac cag ctg cct gac tgg agc atg ctc ctc288
Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu Leu
85 90 95
gcc gcc atc acg acc gtc ttc ttg gcg gct gag aag cag tgg atg atg336
Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp Met Met
100 105 110
ctc gac tgg aaa ccg agg cgt tct gac gtg att atg gat ccg ttt ggg384
Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Val Ile Met Asp Pro Phe Gly
115 120 125
tta ggg agg atc gtt cag gat ggg ctt gtg ttc cgt cag aat ttt tct432
Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn Phe Ser
130 135 140
att cgg tct tat gag ata ggt gct gat cgc tct gcg tct ata gaa acg480
Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile Glu Thr
145 150 155 160
gtt atg aat cat tta cag gtactgatta tgattatgat tgtagtcgct 528
Val Met Asn His Leu Gln
165
tgttgttact gggcaaactt aaatatgtat tgctcttatg gttgtgatag gaa acg 584
Glu Thr
gca ctc aac cat gtt aag act gct ggg ctg ctt gga gat ggg ttt ggt632
Ala Leu Asn His Val Lys Thr Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly
170 175 180
tct act cct gag atg gtt aag aag aac ttg ata tgg gtt gtt act cgt680
Ser Thr Pro Glu Met Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg
185 190 195 200
atg cag gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagctatt ctcaaacaac 732
Met Gln Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
205 210
tctgagaatc actgcttcct ttgtgagtca tttgcttatt caaatatctg cctcatag g 791
gga gat gtt gtg gaa gta gat aca tgg gtg agc cag tct gga aag aac839
Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln Ser Gly Lys Asn
215 220 225
ggt atg cgt cgt gat tgg cta gtt cga gat ggc aat act gga gag att887
Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Gly Asn Thr Gly Glu Ile
230 235 240
tta aca aga gca tca ag gttagatttt attttttggt ttacttgggt 934
Leu Thr Arg Ala Ser Ser
245
tagatatctg ataattgagt tataatcatc tccgtgttgt gtaaactatt ctttttgcag 994
t gtg tgg gtg atg atg aat aaa ctg aca aga aga tta tca aag att cct 1043
Val Trp Val Met Met Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro
250 255 260 265
gaa gag gtt cga ggg gag ata gag cct tac ttt gtt aac tca gac cca 1091
Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro
270 275 280
gtc ctt gcc gag gac agc aga aag tta aca aaa ctt gat gac aaa act 1139
Val Leu Ala Glu Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr
285 290 295
gct gtc tat gtt cgt tct ggt ctc act gtaagtacaa atacttcact 1186
Ala Val Tyr Val Arg Ser Gly Leu Thr
300 305
ctatgtttca acaaagcctg taaatttttg agtctcttac aggtttggta atgaactttt 1246
tgcag ccg cgt tgg agt gac ttg gat gtt aac cag cac gtt aac aat gtg 1296
Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val
310 315 320
aag tac atc ggg tgg ata ctg gag agt gct cca gtg ggg atg atg gag1344
Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Met Met Glu
325 330 335
agt cag aag ctg aaa agc atg act ctg gag tat cgc agg gag tgt ggg1392
Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly
340 345 350
aga gac agt gtg ctc cag tcc ctc acc gcg gtt tcg ggc tgc gat atc1440
Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Cys Asp Ile
355 360 365
ggt agc ctc ggg aca gcc ggt gaa gtg gaa tgt cag cat ctg ctc aga1488
Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu Leu Arg
370 375 380 385
ctc cag gat gga gcc gaa gtg gtg aga gga aga aca gag tgg agt tcc1536
Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser Ser
390 395 400
aaa aca tca aca aca act tgg gac atc aca ccg tga1572
Lys Thr Ser Thr Thr Thr Trp Asp Ile Thr Pro
405 410
<210>8
<211>412
<212>PRT
<213>歐洲油菜
<400>8
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
Pro Leu Asp Pro Thr Ala Lys Thr Asn Lys Val Thr Thr Ser Thr Asn
20 25 30
Phe Ser Gly Leu Thr Pro Thr Pro Asn Ser Ala Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Arg Val Gly Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val Glu Ile Leu Lys Pro Asp Ser Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu Leu
85 90 95
Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp Met Met
100 105 110
Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Val Ile Met Asp Pro Phe Gly
115 120 125
Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn Phe Ser
130 135 140
Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile Glu Thr
145 150 155 160
Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys Thr Ala
165 170 175
Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Val Lys Lys
180 185 190
Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val Asp Lys Tyr
195 200 205
Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln Ser
210 215 220
Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Gly Asn Thr
225 230 235 240
Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met Met Asn Lys
245 250 255
Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile
260 265 270
Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Leu Ala Glu Asp Ser Arg
275 280 285
Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Val Tyr Val Arg Ser Gly
290 295 300
Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn
305 310 315 320
Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Met Met
325 330 335
Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys
340 345 350
Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Cys Asp
355 360 365
Ile Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu Leu
370 375 380
Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser
385 390 395 400
Ser Lys Thr Ser Thr Thr Thr Trp Asp Ile Thr Pro
405 410
<210>9
<211>1770
<212>DNA
<213>歐洲油菜
<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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atg gtg gct act tcc gct acg tcc tcg ttt ttt cat gtt cca tct tcc 48
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe His Val Pro Ser Ser
1 5 10 15
tcc tct ctt gat act aat ggg aag ggg aac aga gtt gcg tcc acg aac 96
Ser Ser Leu Asp Thr Asn Gly Lys Gly Asn Arg Val Ala Ser Thr Asn
20 25 30
ttc gct gga ctt aac tca acg cca agc tct ggg agg atg aag gtt aaa144
Phe Ala Gly Leu Asn Ser Thr Pro Ser Ser Gly Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gct cag gct cca ccc aag atc aac ggg aag aaa gct aac ttg192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Lys Ala Asn Leu
50 55 60
cct ggt tct gta gag ata tca aag tct gac aac gag act tcg cag ccc240
Pro Gly Ser Val Glu Ile Ser Lys Ser Asp Asn Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
gca ccc gca ccg agg acg ttt atc aac cag ctg cct gac tgg agc atg288
Ala Pro Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
ctt ctc gct gcc ata aca acc att ttc ttg gcg gct gag aaa cag tgg336
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
atg atg ctt gac tgg aaa ccc agg cgt tct gat atg att atg gat cct384
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp Pro
115 120 125
ttc ggt tta ggg aga atc gtt cag gat ggt ctt gtc ttt cgt cag aat432
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
ttc tcc att agg tct tat gag ata ggt gct gat cgc tct gcg tct ata480
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
gaa act gtt atg aat cat tta cag gtaggtacta ctttgattgt tatcacactt 534
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
gtcaatagat atatatgctc atgacaagct cttatgctaa tgacag gaa acg gcc 589
Glu Thr Ala
170
cta aac cat gtg aag tct gcc gga ctg ctg gaa aat ggg ttt ggt tct 637
Leu Asn His Val Lys Ser Ala Gly Leu Leu Glu Asn Gly Phe Gly Ser
175 180 185
act ccc gag atg ttt aag aag aac ttg ata tgg gtc gtt gct cgt atg 685
Thr Pro Glu Met Phe Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Ala Arg Met
190 195 200
cag gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagccatt gtcagtctta734
Gln Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
205 210
ccacttaact taaaatcatt atgctactgt ctctgagaat ccctggttct cgttgtgagt794
tatccaaatt atcttgcata aacttgagta tgcaagttca tgctctcact tgctcatgtg854
actaggacat tttgcaccct tagattacat gatgtgcttg catattacag tgtgcataga914
tcattactta ttcaaatatc tgactaacag g gga gat gtt gtg gaa gtg gat 966
Gly Asp Val Val Glu Val Asp
215 220
aca tgg gtt agt cag tct gga aag aat ggt atg cgt cgt gat tgg ctg 1014
Thr Trp Val Ser Gln Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu
225 230 235
gtt cgg gat tgc aat act gga gaa att gta acg cga gca tca ag 1058
Val Arg Asp Cys Asn Thr Gly Glu Ile Val Thr Arg Ala Ser Ser
240 245 250
gtcagagttc ttatgttttg gtttactgac tccagctatt atcattttgc tctctgtttg 1118
tattgtttgc tctgccatta gtttgataat agagacttta tatatgtatg gcaattttct 1178
tctttttgca g t ttg tgg gtg atg atg aat aaa ctc aca agg aga ttg 1226
Leu Trp Val Met Met Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu
255 260
tca aag att cct gaa gag gtt cga ggg gaa ata gag cct tat ttt gtg1274
Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val
265 270 275
aac tct gat cct gtc att gcc gaa gac agc aga aag tta acc aaa ctt1322
Asn Ser Asp Pro Val Ile Ala Glu Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu
280 285 290 295
gat gac aag act gct gac tat gtt cgt tcg ggt ctc act gtaagtaccc 1371
Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg Ser Gly Leu Thr
300 305
tacctttcaa caacaagctt gtcaaaactc tcgaggttgg ttcttatgga ttggtaatga 1431
aactttttta ttcag ccg agg tgg agt gac ttg gat gtt aac cag cat gtt 1482
Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val
310 315 320
aac aat gta aag tac atc ggg tgg ata ctg gag agt gct cca gca ggg1530
Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ala Gly
325 330 335
atg ctg gag agt cag aag ctg aaa agc atg act ctg gag tat cgc agg1578
Met Leu Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg
340 345 350
gag tgc ggg aga gac agt gtg ctt cag tct ctc acc gcg gtc tct gga1626
Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly
355 360 365
tgt gat gtc ggt aac ctc ggg aca gcc ggg gaa gtg gag tgt cag cat1674
Cys Asp Val Gly Asn Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His
370 375 380
ttg ctt cgt ctc cag gat gga gct gaa gtg gtg aga gga aga aca gag1722
Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu
385 390 395 400
tgg agt tcc aag aca gaa gca aca act tgg gac act gct aca tcg taa1770
Trp Ser Ser Lys Thr Glu Ala Thr Thr Trp Asp Thr Ala Thr Ser
405 410 415
<210>10
<211>415
<212>PRT
<213>歐洲油菜
<400>10
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe His Val Pro Ser Ser
1 5 10 15
Ser Ser Leu Asp Thr Asn Gly Lys Gly Asn Arg Val Ala Ser Thr Asn
20 25 30
Phe Ala Gly Leu Asn Ser Thr Pro Ser Ser Gly Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Lys Ala Asn Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val Glu Ile Ser Lys Ser Asp Asn Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
Ala Pro Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp Pro
115 120 125
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys
165 170 175
Ser Ala Gly Leu Leu Glu Asn Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Phe
180 185 190
Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Ala Arg Met Gln Val Val Val Asp
195 200 205
Lys Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser
210 215 220
Gln Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys
225 230 235 240
Asn Thr Gly Glu Ile Val Thr Arg Ala Ser Ser Leu Trp Val Met Met
245 250 255
Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly
260 265 270
Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Ile Ala Glu Asp
275 280 285
Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg
290 295 300
Ser Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val
305 310 315 320
Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ala Gly
325 330 335
Met Leu Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg
340 345 350
Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly
355 360 365
Cys Asp Val Gly Asn Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His
370 375 380
Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu
385 390 395 400
Trp Ser Ser Lys Thr Glu Ala Thr Thr Trp Asp Thr Ala Thr Ser
405 410 415
<210>11
<211>1891
<212>DNA
<213>歐洲油菜
<220>
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<220>
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<220>
<221>misc_feature
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<221>misc_feature
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<223>保守His
<220>
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<223>保守Cys
<400>11
atg gtg gcc acc tct gct aca tcc tca ttc ttc cct ctc cca tct tcc 48
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
tct ctc gac cct aat ggc aaa acc aac aaa ctc acc tcc acc aac ttc 96
Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Asn Lys Leu Thr Ser Thr Asn Phe
20 25 30
tct gga ctc aac ccc ata cca aac tct tcc ggc agg tta aag gtc aaa144
Ser Gly Leu Asn Pro Ile Pro Asn Ser Ser Gly Arg Leu Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gcc caa gct cca tcc aag atc aac ggc aat aat gtc tcc ttg192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Ser Lys Ile Asn Gly Asn Asn Val Ser Leu
50 55 60
cca ggc tca gta cac atc gta aag act gat aat aac cac gat ctc tcg240
Pro Gly Ser Val His Ile Val Lys Thr Asp Asn Asn His Asp Leu Ser
65 70 75 80
caa caa cac gca ccc aga acg ttc atc aac cag cta cct gac tgg agc288
Gln Gln His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser
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atg ctt ctc gcc gcc atc aca acg gtc ttc tta gct gct gag aaa cag336
Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln
100 105 110
tgg atg atg ctt gac tcg aaa ccg agg cgt tct gat atg att atg gat384
Trp Met Met Leu Asp Ser Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp
115 120 125
ccg ttc ggg tta ggg agg atc gtt cag gat ggg ctt gtg tac cgt cag432
Pro Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Tyr Arg Gln
130 135 140
aac ttc gat atc agg tct tat gaa ata ggt gct gat cgc tct gcg tct480
Asn Phe Asp Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser
145 150 155 160
ata gaa aca gtc atg aac cac tta cag gtatattaca atcacactcg 527
Ile Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
attgatacta gagcttgaca tgttggtttt tatcttttta taaattgttt agtgacattt 587
tcaaacatat agatataggt tatttagata tttctaggtt cctacaaacc tacccagact 647
caaaccccgt ccggaaattt ataatattaa taccgaacag agttttattt taaaccaaaa 707
aatcagttga cccgcacggg atgttggttt ttatctattt tatacattgt ttaaggacat 767
ttttaaacat ataaatatag gttatttaga tatttctagg ttcctacgaa cctacccgga 827
aatttataat acccgaacat agtttaattt ttaaaccaaa aatccaatac ccgaaaaaac 887
caatctgtga tatgcatgat ctaactcttg tcctcgtgac ag gaa acg gct ctc 941
Glu Thr Ala Leu
170
aac cat gtg aag tct gct gga ctg ctg gga gat ggg ttt ggt tct acc989
Asn His Val Lys Ser Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr
175 180 185
cct gag atg gtt aag aag aac ttg ata tgg gtc gtt act cgt atg cag 1037
Pro Glu Met Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln
190 195 200 205
gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagccctc ttagcactta 1083
Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
210
accttaaaac aatatgcatg aatcatttgc ttattcaaat gtctgcttca ccag g gga 1141
Gly
215
gat gtt gtt gaa gta gat aca tgg gtt agt aag tct ggg aag aat ggt 1189
Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Lys Ser Gly Lys Asn Gly
220 225 230
atg cgt cgt gat tgg cta gtt cgg gat tgt aat act gga gaa att tta1237
Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys Asn Thr Gly Glu Ile Leu
235 240 245
aca aga gca tca ag gttagcttct ttttgtttac tccagctatt atctgattat1291
Thr Arg Ala Ser Ser
250
tgagttataa ccatctctgt gttgcaaaac ag t gtg tgg gtg atg atg aat aaa 1345
Val Trp Val Met Met Asn Lys
255
gtg aca agg aga tta tca aag ctt cct gaa gag gtt cga ggg gaa ata1393
Val Thr Arg Arg Leu Ser Lys Leu Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile
260 265 270 275
gag cct tac ttt gtg aac tct gac cct atc ctt gcc gag gac agc aga1441
Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Ile Leu Ala Glu Asp Ser Arg
280 285 290
aag tta aca aaa cta gat gag aag act gct gac tat gtt cgc tct gg1489
Lys Leu Thr Lys Leu Asp Glu Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg Ser Gly
295 300 305
ctc acc gtaagtataa atatttgttt ttatctttca gcaagtgaga ttctgatggg 1545
Leu Thr
tttggtgatt atctaacttt tgcag ccg aga tgg agt gac ttg gat gtt aac1597
Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn
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cag cat gtt aac aac gtg aag tac att ggt tgg ata ctc gag agt gct1645
Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala
320 325 330
cca gtg gag atg atg gag aag cat aag ctg aaa agc atg act ctg gag1693
Pro Val Glu Met Met Glu Lys His Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu
335 340 345 350
tat agg agg gaa tgc ggg aga gac agt gtg ctt cag tct ctc acc gcg1741
Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala
355 360 365
gtt tcg ggt tgc gat gtt ggt agc ctc ggg aca gct ggt gaa gtg gaa1789
Val Ser Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu
370 375 380
tgt cag cat ttg ctt cga ctc cag gat gga gct gaa gtg gtg aag gga1837
Cys Gln His Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Lys Gly
385 390 395
cga aca gtg tgg agt tcc aaa aca cca tca aca act tgg gac act aca1885
Arg Thr Val Trp Ser Ser Lys Thr Pro Ser Thr Thr Trp Asp Thr Thr
400 405 410
tcg taa1891
Ser
415
<210>12
<211>415
<212>PRT
<213>歐洲油菜
<400>12
Met Val AIa Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Asn Lys Leu Thr Ser Thr Asn Phe
20 25 30
Ser Gly Leu Asn Pro Ile Pro Asn Ser Ser Gly Arg Leu Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Ser Lys Ile Asn Gly Asn Asn Val Ser Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val His Ile Val Lys Thr Asp Asn Asn His Asp Leu Ser
65 70 75 80
Gln Gln His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser
85 90 95
Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln
100 105 110
Trp Met Met Leu Asp Ser Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp
115 120 125
Pro Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Tyr Arg Gln
130 135 140
Asn Phe Asp Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser
145 150 155 160
Ile Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val
165 170 175
Lys Ser Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met
180 185 190
Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val
195 200 205
Asp Lys Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val
210 215 220
Ser Lys Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp
225 230 235 240
Cys Asn Thr Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met
245 250 255
Met Asn Lys Val Thr Arg Arg Leu Ser Lys Leu Pro Glu Glu Val Arg
260 265 270
Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Ile Leu Ala Glu
275 280 285
Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Glu Lys Thr Ala Asp Tyr Val
290 295 300
Arg Ser Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His
305 310 315 320
Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val
325 330 335
Glu Met Met Glu Lys His Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg
340 345 350
Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser
355 360 365
Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln
370 375 380
His Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Lys Gly Arg Thr
385 390 395 400
Val Trp Ser Ser Lys Thr Pro Ser Thr Thr Trp Asp Thr Thr Ser
405 410 415
<210>13
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<212>DNA
<213>歐洲油菜
<220>
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<220>
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<220>
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atg gtg gcc acc tca gct aca tcc tca ttc ttc cct ctc cca tct tcc 48
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
cca ctc gac ccc acc gca aaa acc aac aaa gtc acc acc tcc acc aac 96
Pro Leu Asp Pro Thr Ala Lys Thr Asn Lys Val Thr Thr Ser Thr Asn
20 25 30
ttc tcc ggc ctc tcc ccc act cca aac tcc tcc ggc agg atg aag gtt144
Phe Ser Gly Leu Ser Pro Thr Pro Asn Ser Ser Gly Arg Met Lys Val
35 40 45
aaa cca aac gct cag gcc cca ccc aag atc aac ggc aag aga gtc ggt192
Lys Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Arg Val Gly
50 55 60
ctc cct ggc tcg gtg aag cct gat aac gag acg tcc tca cag cat ccc240
Leu Pro Gly Ser Val Lys Pro Asp Asn Glu Thr Ser Ser Gln His Pro
65 70 75 80
gca gca ccg agg acg ttc atc aac cag ctg cct gac tgg agc atg ctt288
Ala Ala Pro Arg Thr PheIle Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu
85 90 95
ctt gct gca ata aca acc gtc ttc ttg gcg gct gag aag cag tgg atg336
Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp Met
100 105 110
atg ctt gac tgg aaa ccg agg cgc tct gac gtg att atg gat ccg ttt384
Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Val Ile Met Asp Pro Phe
115 120 125
ggg tta ggg agg atc gtt cag gat ggg ctt gtg ttc cgt cag aat ttc432
Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn Phe
130 135 140
tct att cgg tct tat gag ata ggt gct gat cgc tct gcg tct ata gaa480
Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile Glu
145 150 155 160
acg gtt atg aat cat tta cag gtactgatta tgattatgat tatgattgta 531
Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
gttgcttgtt gttactggac aaagttaata tgtattgctg ttatggttat gatag gaa 589
Glu
acg gca ctc aac cat gtt aag act gct gga ctg ctt gga gat ggg ttt637
Thr Ala Leu Asn His Val Lys Thr Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe
170 175 180
ggt tct act cct gag atg gtt aag aag aac ttg att tgg gtt gtt act685
Gly Ser Thr Pro Glu Met Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr
185 190 195 200
cgt atg cag gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagctatt 730
Arg Met Gln Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
205 210
ctcaagcaac cctgagaatc actgcttcct ttgtcatttg cttattcaaa tatctgtctc 790
acag g gga gat gtt gtg gaa gta gat aca tgg gtg agc cag tct gga 837
Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln Ser Gly
215 220 225
aag aac ggt atg cgt cgt gat tgg cta gtt cga gat ggc aat act gga 885
Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Gly Asn Thr Gly
230 235 240
gaa att tta aca aga gca tca ag gttagatttt tatttatcgg ttaggtatct938
Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser
245
gaaaatttga gttactaatg caaaatatta tttttgcag t gtg tgg gtg atg atg993
Val Trp Val Met Met
255
aat aaa ctg aca aga aga tta tca aag att cct gaa gag gtt cga ggg1041
Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly
260 265 270
gag ata gag cct tac ttt gtt aat tca gac cca gtc ctt gct gag gac1089
Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Leu Ala Glu Asp
275 280 285
agc aga aag tta act aaa ctt gat gac aag act gct gac tat gtt cgt1137
Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg
290 295 300
tct ggt ctc act gtaagtatgc atactttctc tatgt ttcat caaagcctgt 1189
Ser Gly Leu Thr
305
aaacttctga gattcttaca gtttttattt ggtaatttaa acttttgcag ccg cgt 1245
Pro Arg
tgg agt gac ttg gat gtt aac cag cac gtt aac aat gtg aag tac atc1293
Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile
310 315 320 325
ggg tgg ata ctg gag agt gca cct gtg ggg atg atg gag agt cag aag1341
Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Met Met Glu Ser Gln Lys
330 335 340
ctg aaa agc atg act ctg gag tat cgc agg gag tgc ggg agg gac agt1389
Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser
345 350 355
gtg ctt cag tcc ctc acc gcg gtt tcg ggc tgc gat gtt ggt agt ctt1437
Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu
360 365 370
ggg aca gct ggt gaa gtg gaa tgt cag cac ctg ctc cgt ctc cag gat1485
Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu Leu Arg Leu Gln Asp
375 380 385
gga gct gaa gtg gtg aga gga aga aca gag tgg agt tcc aaa aca tca1533
Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser Ser Lys Thr Ser
390 395 400 405
aca aca act tgg gac att aca ccg tga1560
Thr Thr Thr Trp Asp Ile Thr Pro
410
<210>14
<211>413
<212>PRT
<213>歐洲油菜
<400>14
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
Pro Leu Asp Pro Thr Ala Lys Thr Asn Lys Val Thr Thr Ser Thr Asn
20 25 30
Phe Ser Gly Leu Ser Pro Thr Pro Asn Ser Ser Gly Arg Met Lys Val
35 40 45
Lys Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Arg Val Gly
50 55 60
Leu Pro Gly Ser Val Lys Pro Asp Asn Glu Thr Ser Ser Gln His Pro
65 70 75 80
Ala Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu
85 90 95
Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp Met
100 105 110
Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Val Ile Met Asp Pro Phe
115 120 125
Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn Phe
130 135 140
Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile Glu
145 150 155 160
Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys Thr
165 170 175
Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Val Lys
180 185 190
Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val Asp Lys
195 200 205
Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln
210 215 220
Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Gly Asn
225 230 235 240
Thr Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met Met Asn
245 250 255
Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu
260 265 270
Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Leu Ala Glu Asp Ser
275 280 285
Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg Ser
290 295 300
Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn
305 310 315 320
Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Met
325 330 335
Met Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu
340 345 350
Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Cys
355 360 365
Asp Val Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu
370 375 380
Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp
385 390 395 400
Ser Ser Lys Thr Ser Thr Thr Thr Trp Asp Ile Thr Pro
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<213>歐洲油菜
<220>
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atg gtg gct act tgc gct acg tcg tcg ttt ttt cat gtt cca tct tct48
Met Val Ala Thr Cys Ala Thr Ser Ser Phe Phe His Val Pro Ser Ser
1 5 10 15
tcc tcg ctt gat acg aat ggg aag ggg aac aga gtt ggg tcc act aat96
Ser Ser Leu Asp Thr Asn Gly Lys Gly Asn Arg Val Gly Ser Thr Asn
20 25 30
ttt gct gga ctt aac tca acg cca agc tct ggg agg atg aag gtt aag144
Phe Ala Gly Leu Asn Ser Thr Pro Ser Ser Gly Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gct cag gct cca ccc aag atc aac ggg aag aaa gct aac ttg192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Lys Ala Asn Leu
50 55 60
cct ggc tct gta gag ata tca aag gct gac aac gag act tcg cag ccc240
Pro Gly Ser Val Glu Ile Ser Lys Ala Asp Asn Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
gca cac gca ccg agg acg ttt atc aac cag ctg cct gac tgg agt atg288
Ala His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
ctg ctt gct gct ata act acc att ttc ttg gca gcg gag aaa cag tgg336
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
atg atg ctt gac tgg aaa ccg agg cgt tct gat atg att atg gat cct384
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp Pro
115 120 125
ttt ggt tta ggg aga att gtt cag gat ggt ctt gtg ttc cgt cag aat432
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
ttt tcc att agg tct tat gaa ata ggt gct gat cgc tct gcg tct ata480
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
gaa act gtc atg aat cat tta cag gtactgcttt gattgtggtt acactcacat 534
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
gttgtcccaa tagatatatg ctcatgacaa gctcttatgc taatgacag gaa acg gcg 592
Glu Thr Ala
170
ctt aat cat gtg aag tct gcc gga ctg ctg gaa aat ggg ttt ggg tcc640
Leu Asn His Val Lys Ser Ala Gly Leu Leu Glu Asn Gly Phe Gly Ser
175 180 185
act cct gag atg ttt aag aag aat ttg ata tgg gtc gtt gct cgt atg688
Thr Pro Glu Met Phe Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Ala Arg Met
190 195 200
cag gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagccatt gttagtctta 737
Gln Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
205 210
gcacttgact taaaatcatt ttgcatatta cagtgtgcgt agatcatttg cttattcaaa 797
tatctgactc acag g gga gat gtt gtg gaa gtg gat act tgg gtt agt cag 848
Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln
215 220 225
tct gga aag aat ggt atg cgt cgt gat tgg cta gtt cgg gat tgc aat896
Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys Asn
230 235 240
act gga gaa att gta acg cga gca tca ag gtcagagttc ttatattttg 945
Thr Gly Glu Ile Val Thr Arg Ala Ser Ser
245 250
gtttactcca gctattatcg ttttgctctc tgtttgtatt gtttcctctg ccattagttt 1005
gataattgag tctttatagt tgtatatgta tggcaatttt cttctttttg cag t ttg 1062
Leu
tgg gtg atg atg aat aaa ctc aca agg aga ttg tca aag att cct gaa 1110
Trp Val Met Met Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu
255 260 265
gag gtt cga ggg gaa ata gag cct tat ttt gtg aac tct gat cct gtc 1158
Glu Val Arg Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val
270 275 280
att gcc gaa gac agc aga aag tta aca aaa ctt gat gac aag act gct 1206
Ile Ala Glu Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala
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gac tat gttcgt tct ggt ctc act gtaagtacct tacctttcga caagcctgtc 1260
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305
aaaactcttg aggttctaat ggtttggtaa tgaacttttt tttggcag ccg agg tgg 1317
Pro Arg Trp
310
agt gac ttg gat gtt aac cag cat gtt aac aat gta aag tac att ggg1365
Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly
315 320 325
tgg ata ctg gag agt gct cca gca ggg atg ctg gag agt cag aag ctg1413
Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ala Gly Met Leu Glu Ser Gln Lys Leu
330 335 340
aaa agc atg act ctg gag tat cgc agg gag tgc ggg aga gac agt gtg1461
Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val
345 350 355
ctt cag tct ctc acc gca gtc tct gga tgt gat gtc ggt aac ctc ggg1509
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360 365 370 375
aca gcc ggg gaa gtg gag tgt cag cat ttg ctt cga ctc cag gat gga1557
Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly
380 385 390
gct gaa gtg gtg aga gga aga aca gag tgg agc tcc aag aca gga gca1605
Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser Ser Lys Thr Gly Ala
395 400 405
aca act tgg gac act act aca tcg taa1632
Thr Thr Trp Asp Thr Thr Thr Ser
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<211>415
<212>PRT
<213>歐洲油菜
<400>16
Met Val Ala Thr Cys Ala Thr Ser Ser Phe Phe His Val Pro Ser Ser
1 5 10 15
Ser Ser Leu Asp Thr Asn Gly Lys Gly Asn Arg Val Gly Ser Thr Asn
20 25 30
Phe Ala Gly Leu Asn Ser Thr Pro Ser Ser Gly Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Lys Ala Asn Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val Glu Ile Ser Lys Ala Asp Asn Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
Ala His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp Pro
115 120 125
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys
165 170 175
Ser Ala Gly Leu Leu Glu Asn Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Phe
180 185 190
Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Ala Arg Met Gln Val Val Val Asp
195 200 205
Lys Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser
210 215 220
Gln Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys
225 230 235 240
Asn Thr Gly Glu Ile Val Thr Arg Ala Ser Ser Leu Trp Val Met Met
245 250 255
Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly
260 265 270
Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Ile Ala Glu Asp
275 280 285
Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg
290 295 300
Ser Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val
305 310 315 320
Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ala Gly
325 330 335
Met Leu Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg
340 345 350
Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly
355 360 365
Cys Asp Val Gly Asn Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His
370 375 380
Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu
385 390 395 400
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<212>DNA
<213>歐洲油菜
<220>
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<220>
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<220>
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<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(740)..(873)
<220>
<221>misc_feature
<222>(761)..(763)
<223>保守Lys
<220>
<221>misc_feature
<222>(833)..(835)
<223>保守Val
<220>
<221>CDS
<222>(947)..(1060)
<220>
<221>misc_feature
<222>(999)..(1001)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(1139)..(1310)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1176)..(1178)
<223>保守Ser
<220>
<221>CDS
<222>(1395)..(1712)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1401)..(1403)
<223>保守Trp
<220>
<221>misc_feature
<222>(1419)..(1421)
<223>保守Asn
<220>
<221>misc_feature
<222>(1425)..(1427)
<223>保守His
<220>
<221>misc_feature
<222>(1530)..(1532)
<223>保守Cys
<400>17
atg gtg gcc acc tct gct aca tcc tca ttc ttc cct ctc cca tct tcc 48
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
tct ctc gac ccc aat ggc aaa acc aac aaa gcc acc tcc acc aac ttc 96
Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Asn Lys Ala Thr Ser Thr Asn Phe
20 25 30
tcc gga ctc aac ccc aca cca aac tct tcc ggc agg tta aag gtc aaa144
Ser Gly Leu Asn Pro Thr Pro Asn Ser Ser Gly Arg Leu Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gct cag gct cca tcc aag atc aac ggc aag aaa gtc tcc ttg192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Ser Lys Ile Asn Gly Lys Lys Val Ser Leu
50 55 60
cca ggc tca gta cac atc gta aag act gat aat aac cac gat ctc tcg240
Pro Gly Ser Val His Ile Val Lys Thr Asp Asn Asn His Asp Leu Ser
65 70 75 80
caa caa aac gca ccc aga acg ttc atc aac cag cta cct gac tgg agc288
Gln Gln Asn Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser
85 90 95
atg ctt ctc gcc gcc atc aca acg gtc ttc tta gca gct gag aag cag336
Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln
100 105 110
tgg atg atg ctt gat act aaa ccg aga cgc tcc gac atg att atg gat384
Trp Met Met Leu Asp Thr Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp
115 120 125
ccg ttt ggg tta ggg aga atc gtt cag gat ggg ctt gtg tac cgt cag432
Pro Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Tyr Arg Gln
130 135 140
aat ttc gat atc agg tct tat gaa ata ggt gct gat cgc tct gca tct480
Asn Phe Asp Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser
145 150 155 160
ata gaa act gtc atg aat cac tta cag gtatattaca atcacactcg 527
Ile Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
tttgatacta tagcttgacc cgcactgatg ttggttttta tatttttata aattgtttag 587
tgacatatag atataggtta tttagatatt tctaggttcc tacgaaccta cccggactca 647
aaccctgtcc gtaaaattga gtttaatttt aaaccaaaaa aatccgatac ccgaaaaaac 707
cgatctgtat ctaactcttg tcctcatgac ag gaa acg gct ctc aac cat gtg760
Glu Thr Ala Leu Asn His Val
170 175
aag tct gca gga ctg ctg gga gat ggg ttt ggt tct aca cct gag atg808
Lys Ser Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met
180 185 190
gtt aag aag aac ttg ata tgg gtt gtt act cgt atg cag gtt gta gtt856
Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val
195 200 205
gat aaa tat cct act tg gtaagctctc ttgccactta accttaaaca 903
Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
210
atatgcatga atcatttgct tattcaaatg tctgtttcac cag g gga gat gtt gtt 959
Gly Asp Val Val
215
gaa gta gat aca tgg gtc agt aag tct ggg aag aat ggt atg cgt cgt 1007
Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Lys Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg
220 225 230
gat tgg cta gtt cgt gat tgc aat act gga gaa atc tta aca cgc gca 1055
Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys Asn Thr Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala
235 240 245 250
tca ag gttagcttta ttttgttttt gtttactcca gctattatct gattattgag1110
Ser Ser
ttataaccat ctctatgtta caaaacag t gtg tgg gtg atg atg aat aaa ctg 1163
Val Trp Val Met Met Asn Lys Leu
255 260
aca agg aga tta tca aag ctt cct gaa gag gtt cga ggg gaa ata gag1211
Thr Arg Arg Leu Ser Lys Leu Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile Glu
265 270 275
cct tac ttt gtg aac tct gac cca atc ctt gcc gag gac agc aga aag1259
Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Ile Leu Ala Glu Asp Ser Arg Lys
280 285 290
tta aca aag cta gat gac aag act gct gac tat gtt cgc tct ggt ctc1307
Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg Ser Gly Leu
295 300 305
acc gtaagtataa atattcaact ctttatcttt tagcgtgtaa aactcttgag 1360
Thr
agattcttat gagtttggtg atgaactttt gcag ccg aga tgg agt gac ttg gat 1415
Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp
310 315
gtt aac cag cat gtt aac aac gtg aag tac att ggt tgg ata ctc gag1463
Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu
320 325 330
agt gct cca gta gag atg atg gag aag cat aag ctg aaa agc atg act1511
Ser Ala Pro Val Glu Met Met Glu Lys His Lys Leu Lys Ser Met Thr
335 340 345
ctg gag tat agg agg gaa tgc ggg aga gac agt gtg ctt cag tct ctc1559
Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu
350 355 360
acc gcg gtt tcg gga tgc gat gtt ggt agc ctc ggg aca gct ggt gaa1607
Thr Ala Val Ser Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu
365 370 375 380
gtg gaa tgt cag cat ttg ctt cga cac cag gat gga gct gaa gtg gtg1655
Val Glu Cys Gln His Leu Leu Arg His Gln Asp Gly Ala Glu Val Val
385 390 395
aag gga cga aca gtg tgg agt tcg aaa aca cca tca acg act tgg gac1703
Lys Gly Arg Thr Val Trp Ser Ser Lys Thr Pro Ser Thr Thr Trp Asp
400 405 410
act aca tcg taa 1715
Thr Thr Ser
415
<210>18
<211>415
<212>PRT
<213>歐洲油菜
<400>18
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Asn Lys Ala Thr Ser Thr Asn Phe
20 25 30
Ser Gly Leu Asn Pro Thr Pro Asn Ser Ser Gly Arg Leu Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Ser Lys Ile Asn Gly Lys Lys Val Ser Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val His Ile Val Lys Thr Asp Asn Asn His Asp Leu Ser
65 70 75 80
Gln Gln Asn Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser
85 90 95
Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln
100 105 110
Trp Met Met Leu Asp Thr Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp
115 120 125
Pro Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Tyr Arg Gln
130 135 140
Asn Phe Asp Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser
145 150 155 160
Ile Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val
165 170 175
Lys Ser Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met
180 185 190
Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val
195 200 205
Asp Lys Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val
210 215 220
Ser Lys Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp
225 230 235 240
Cys Asn Thr Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met
245 250 255
Met Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Leu Pro Glu Glu Val Arg
260 265 270
Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Ile Leu Ala Glu
275 280 285
Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val
290 295 300
Arg Ser Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His
305 310 315 320
Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val
325 330 335
Glu Met Met Glu Lys His Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg
340 345 350
Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser
355 360 365
Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln
370 375 380
His Leu Leu Arg His Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Lys Gly Arg Thr
385 390 395 400
Val Trp Ser Ser Lys Thr Pro Ser Thr Thr Trp Asp Thr Thr Ser
405 410 415
<210>19
<211>1572
<212>DNA
<213>歐洲油菜
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(498)
<220>
<221>mat_peptide
<222>(1)..(1569)
<223>在氨基酸89起始的成熟肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(484)..(486)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(579)..(712)
<220>
<221>misc_feature
<222>(600)..(602)
<223>保守Lys
<220>
<221>misc_feature
<222>(672)..(674)
<223>保守Val
<220>
<221>CDS
<222>(791)..(904)
<220>
<221>misc_feature
<222>(848)..(850)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(995)..(1166)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1032)..(1034)
<223>保守Ser
<220>
<221>CDS
<222>(1252)..(1569)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1258)..(1260)
<223>保守Trp
<220>
<221>misc_feature
<222>(1276)..(1278)
<223>保守Asn
<220>
<221>misc_feature
<222>(1282)..(1284)
<223>保守His
<220>
<221>misc_feature
<222>(1387)..(1389)
<223>保守Cys
<400>19
atg gtg gcc acc tca gct aca tcc tca ttc ttc cct ctc cca tct tcc 48
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
ccc ctc gac ccc acc gca aaa acc aac aaa gtc acc acc tcc acc aac 96
Pro Leu Asp Pro Thr Ala Lys Thr Asn Lys Val Thr Thr Ser Thr Asn
20 25 30
ttc tcc ggc ctc aca ccc acg ccg aac tcc gcc agg atg aag gtt aaa144
Phe Ser Gly Leu Thr Pro Thr Pro Asn Ser Ala Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gct cag gcc cca ccc aag atc aac ggc aag aga gtc ggc ctc192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Arg Val Gly Leu
50 55 60
cct ggc tcg gtg gag atc ttg aag cct gat agc gag act tcg caa cca240
Pro Gly Ser Val Glu Ile Leu Lys Pro Asp Ser Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
gca ccg agg acg ttc atc aac cag ctg cct gac tgg agc atg ctc ctc288
Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu Leu
85 90 95
gcc gcc atc acg acc gtc ttc ttg gcg gct gag aag cag tgg atg atg336
Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp Met Met
100 105 110
ctc gac tgg aaa ccg agg cgt tct gac gtg att atg gat ccg ttt ggg384
Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Val Ile Met Asp Pro Phe Gly
115 120 125
tta ggg agg atc gtt cag gat ggg ctt gtg ttc cgt cag aat ttt tct432
Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn Phe Ser
130 135 140
att cgg tct tat gag ata ggt gct gat cgc tct gcg tct ata gaa acg480
Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile Glu Thr
145 150 155 160
gtt atg aat cat tta cag gtactgatta tgattatgat tgtagtcgct 528
Val Met Asn His Leu Gln
165
tgttgttact ggacaaactt aaatatgtat tgctcttatg gttgtgatag gaa acg 584
Glu Thr
gca ctc aac cat gtt aag act gct ggg ctg ctt gga gat ggg ttt ggt632
Ala Leu Asn His Val Lys Thr Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly
170 175 180
tct act cct gag atg gtt aag aag aac ttg ata tgg gtt gtt act cgt680
Ser Thr Pro Glu Met Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg
185 190 195 200
atg cag gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagctatt ctcaaacaac 732
Met Gln Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
205 210
tctgagaatc actgcttcct ttgtgagtca tttgcttatt caaatatctg cctcatag g 791
gga gat gtt gtg gaa gta gat aca tgg gtg agc cag tct gga aag aac839
Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln Ser Gly Lys Asn
215 220 225
ggt atg cgt cgt gat tgg ctt gtt cgg gat ggc aat act gga gag att887
Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Gly Asn Thr Gly Glu Ile
230 235 240
tta aca aga gca tca ag gttagatttt attttttggt ttacttgggt934
Leu Thr Arg Ala Ser Ser
245
tagatatctg ataattgagt tataatcatc tccgtgttgt gtaaactatt ctttttgcag 994
t gtg tgg gtg atg atg aat aaa ctg aca aga aga tta tca aag att cct 1043
Val Trp Val Met Met Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro
250 255 260 265
gaa gag gtt cga ggg gag ata gag cct tac ttt gtt aac tca gac cca1091
Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro
270 275 280
gtc ctt gcc gag gac agc aga aag tta aca aaa ctt gat gac aaa act1139
Val Leu Ala Glu Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr
285 290 295
gct gtc tat gtt cgt tct ggt ctc act gtaagtacaa atacttcact 1186
Ala Val Tyr Val Arg Ser Gly Leu Thr
300 305
ctatgtttca acaaagcctg taaatttttg agtctcttac aggtttggta atgaactttt 1246
tgcag ccg cgt tgg agt gac ttg gat gtt aac cag cac gtt aac aat gtg 1296
Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val
310 315 320
aag tac atc ggg tgg ata ctg gag agt gct cca gtg ggg atg atg gag1344
Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Met Met Glu
325 330 335
agt cag aag ctg aaa agc atg act ctg gag tat cgc agg gag tgt ggg1392
Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly
340 345 350
aga gac agt gtg ctc cag tcc ctc acc gcg gtt tcg ggc tgc gat atc1440
Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Cys Asp Ile
355 360 365
ggt agc ctc ggg aca gcc ggt gaa gtg gaa tgt cag cat ctg ctc aga1488
Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu Leu Arg
370 375 380 385
ctc cag gat gga gcc gaa gtg gtg aga gga aga aca gag tgg agt tcc1536
Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser Ser
390 395 400
aaa aca tca aca aca act tgg gac atc aca ccg tga1572
Lys Thr Ser Thr Thr Thr Trp Asp Ile Thr Pro
405 410
<210>20
<211>412
<212>PRT
<213>歐洲油菜
<400>20
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
Pro Leu Asp Pro Thr Ala Lys Thr Asn Lys Val Thr Thr Ser Thr Asn
20 25 30
Phe Ser Gly Leu Thr Pro Thr Pro Asn Ser Ala Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Arg Val Gly Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val Glu Ile Leu Lys Pro Asp Ser Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu Leu
85 90 95
Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp Met Met
100 105 110
Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Val Ile Met Asp Pro Phe Gly
115 120 125
Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn Phe Ser
130 135 140
Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile Glu Thr
145 150 155 160
Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys Thr Ala
165 170 175
Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Val Lys Lys
180 185 190
Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val Asp Lys Tyr
195 200 205
Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln Ser
210 215 220
Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Gly Asn Thr
225 230 235 240
Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met Met Asn Lys
245 250 255
Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile
260 265 270
Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Leu Ala Glu Asp Ser Arg
275 280 285
Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Val Tyr Val Arg Ser Gly
290 295 300
Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn
305 310 315 320
Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Met Met
325 330 335
Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys
340 345 350
Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Cys Asp
355 360 365
Ile Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu Leu
370 375 380
Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser
385 390 395 400
Ser Lys Thr Ser Thr Thr Thr Trp Asp Ile Thr Pro
405 410
<210>21
<211>1770
<212>DNA
<213>歐洲油菜
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(504)
<220>
<221>mat_peptide
<222>(1)..(1767)
<223>在氨基酸91起始的成熟肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(490)..(492)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(581)..(714)
<220>
<221>misc_feature
<222>(602)..(604)
<223>保守Lys
<220>
<221>misc_feature
<222>(674)..(676)
<223>保守Val
<220>
<221>CDS
<222>(945)..(1058)
<220>
<221>misc_feature
<222>(997)..(999)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(1190)..(1361)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1227)..(1229)
<223>保守Ser
<220>
<221>CDS
<222>(1447)..(1767)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1453)..(1455)
<223>保守Trp
<220>
<221>misc_feature
<222>(1471)..(1473)
<223>保守Asn
<220>
<221>misc_feature
<222>(1477)..(1479)
<223>保守His
<220>
<221>misc_feature
<222>(1582)..(1584)
<223>保守Cys
<400>21
atg gtg gct act tcc gct acg tcc tcg ttt ttt cat gtt cca tct tcc 48
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe His Val Pro Ser Ser
1 5 10 15
tcc tct ctt gat act aat ggg aag ggg aac aga gtt gcg tcc acg aac 96
Ser Ser Leu Asp Thr Asn Gly Lys Gly Asn Arg Val Ala Ser Thr Asn
20 25 30
ttc gct gga ctt aac tca acg cca agc tct ggg agg atg aag gtt aaa144
Phe Ala Gly Leu Asn Ser Thr Pro Ser Ser Gly Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gct cag gct cca ccc aag atc aac ggg aag aaa gct aac ttg192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Lys Ala Asn Leu
50 55 60
cct ggt tct gta gag ata tca aag tct gac aac gag act tcg cag ccc240
Pro Gly Ser Val Glu Ile Ser Lys Ser Asp Asn Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
gca ccc gca ccg agg acg ttt atc aac cag ctg cct gac tgg agc atg288
Ala Pro Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
ctt ctc gct gcc ata aca acc att ttc ttg gcg gct gag aaa cag tgg336
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
atg atg ctt gac tgg aaa ccc agg cgt tct gat atg att atg gat cct384
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp Pro
115 120 125
ttc ggt tta ggg aga atc gtt cag gat ggt ctt gtc ttt cgt cag aat432
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
ttc tcc att agg tct tat gag ata ggt gct gat cgc tct gcg tct ata480
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
gaa act gtt atg aat cat tta cag gtaggtacta ctttgattgt tatcacactt 534
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
gtcaatagat atatatgctc atgacaagct cttatgctaa tgacag gaa acg gcc 589
Glu Thr Ala
170
cta aac cat gtg aag tct gcc gga ctg ctg gaa aat ggg ttt ggt tct637
Leu Asn His Val Lys Ser Ala Gly Leu Leu Glu Asn Gly Phe Gly Ser
175 180 185
act ccc gag atg ttt aag aag aac ttg ata tgg gtc gtt gct cgt atg685
Thr Pro Glu Met Phe Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Ala Arg Met
190 195 200
cag gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagccatt gtcagtctta 734
Gln Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
205 210
ccacttaact taaaatcatt atgctactgt ctctgagaat ccctggttct cgttgtgagt 794
tatccaaatt atcttgcata aacttgagta tgcaagttca tgctctcact tgctcatgtg 854
actaggacat tttgcaccct tagattacat gatgtgcttg catattacag tgtgcataga 914
tcattactta ttcaaatatc tgactaacag g gga gat gtt gtg gaa gtg gat 966
Gly Asp Val Val Glu Val Asp
215 220
aca tgg gtt agt cag tct gga aag aat ggt atg cgt cgt gat tgg ctg 1014
Thr Trp Val Ser Gln Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu
225 230 235
gtt cgg gat tgc aat act gga gaa att gta acg cga gca tca ag1058
Val Arg Asp Cys Asn Thr Gly Glu Ile Val Thr Arg Ala Ser Ser
240 245 250
gtcagagttc ttatgttttg gtttactgac tccagctatt atcattttgc tctctgtttg 1118
tattgtttgc tctgccatta gtttgataat agagacttta tatatgtatg gcaattttct 1178
tctttttgca g t ttg tgg gtg atg atg aat aaa ctc aca agg aga ttg1226
Leu Trp Val Met Met Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu
255 260
tca aag att cct gaa gag gtt cga ggg gaa ata gag cct tat ttt gtg 1274
Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val
265 270 275
aac tct gat cct gtc att gcc gaa gac agc aga aag tta acc aaa ctt 1322
Asn Ser Asp Pro Val Ile Ala Glu Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu
280 285 290 295
gat gac aag act gct gac tat gtt cgt tcg ggt ctc act gtaagtaccc1371
Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg Ser Gly Leu Thr
300 305
tacctttcaa caacaagctt gtcaaaactc tcgaggttgg ttcttatgga ttggtaatga 1431
aactttttta ttcag ccg agg tgg agt gac ttg gat gtt aac cag cat gtt 1482
Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val
310 315 320
aac aat gta aag tac atc ggg tgg ata ctg gag agt gct cca gca ggg 1530
Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ala Gly
325 330 335
atg ctg gag agt cag aag ctg aaa agc atg act ctg gag tat cgc agg 1578
Met Leu Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg
340 345 350
gag tgc ggg aga gac agt gtg ctt cag tct ctc acc gcg gtc tct gga1626
Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly
355 360 365
tgt gat gtc ggt aac ctc ggg aca gcc ggg gaa gtg gag tgt cag cat1674
Cys Asp Val Gly Asn Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His
370 375 380
ttg ctt cgt ctc cag gat gga gct gaa gtg gtg aga gga aga aca gag1722
Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu
385 390 395 400
tgg agt tcc aag aca gaa gca aca act tgg gac act gct aca tcg taa1770
Trp Ser Ser Lys Thr Glu Ala Thr Thr Trp Asp Thr Ala Thr Ser
405 410 415
<210>22
<211>415
<212>PRT
<213>歐洲油菜
<400>22
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe His Val Pro Ser Ser
1 5 10 15
Ser Ser Leu Asp Thr Asn Gly Lys Gly Asn Arg Val Ala Ser Thr Asn
20 25 30
Phe Ala Gly Leu Asn Ser Thr Pro Ser Ser Gly Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Lys Ala Asn Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val Glu Ile Ser Lys Ser Asp Asn Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
Ala Pro Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp Pro
115 120 125
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys
165 170 175
Ser Ala Gly Leu Leu Glu Asn Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Phe
180 185 190
Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Ala Arg Met Gln Val Val Val Asp
195 200 205
Lys Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser
210 215 220
Gln Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys
225 230 235 240
Asn Thr Gly Glu Ile Val Thr Arg Ala Ser Ser Leu Trp Val Met Met
245 250 255
Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Scr Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly
260 265 270
Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Ile Ala Glu Asp
275 280 285
Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg
290 295 300
Ser Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val
305 310 315 320
Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ala Gly
325 330 335
Met Leu Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg
340 345 350
Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly
355 360 365
Cys Asp Val Gly Asn Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His
370 375 380
Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu
385 390 395 400
Trp Ser Ser Lys Thr Glu Ala Thr Thr Trp Asp Thr Ala Thr Ser
405 410 415
<210>23
<211>1892
<212>DNA
<213>歐洲油菜
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(507)
<220>
<221>mat_peptide
<222>(1)..(1889)
<223>在氨基酸92起始的成熟肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(493)..(495)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(931)..(1064)
<220>
<221>misc_feature
<222>(952)..(954)
<223>保守Lys
<220>
<221>misc_feature
<222>(1024)..(1026)
<223>保守Val
<220>
<221>CDS
<222>(1139)..(1252)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1191)..(1193)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(1325)..(1496)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1362)..(1364)
<223>保守Ser
<220>
<221>CDS
<222>(1572)..(1889)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1578)..(1580)
<223>保守Trp
<220>
<221>misc_feature
<222>(1596)..(1598)
<223>保守Asn
<220>
<221>misc_feature
<222>(1602)..(1604)
<223>保守His
<220>
<221>misc_feature
<222>(1707)..(1709)
<223>保守Cys
<400>23
atg gtg gcc acc tct gct aca tcc tca ttc ttc cct ctc cca tct tcc 48
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
tct ctc gac cct aat ggc aaa acc aac aaa ctc acc tcc acc aac ttc 96
Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Asn Lys Leu Thr Ser Thr Asn Phe
20 25 30
tct gga ctc aac ccc ata cca aac tct tcc ggc agg tta aag gtc aaa144
Ser Gly Leu Asn Pro Ile Pro Asn Ser Ser Gly Arg Leu Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gcc caa gct cca tcc aag atc aac ggc aat aat gtc tcc ttg192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Ser Lys Ile Asn Gly Asn Asn Val Ser Leu
50 55 60
cca ggc tca gta cac atc gta aag act gat aat aac cac gat ctc tcg240
Pro Gly Ser Val His Ile Val Lys Thr Asp Asn Asn His Asp Leu Ser
65 70 75 80
caa caa cac gca ccc aga acg ttc atc aac cag cta cct gac tgg agc288
Gln Gln His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser
85 90 95
atg ctt ctc gcc gcc atc aca acg gtc ttc tta gct gct gag aaa cag336
Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln
100 105 110
tgg atg atg ctt gac tcg aaa ccg agg cgt tct gat atg att atg gat384
Trp Met Met Leu Asp Ser Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp
115 120 125
ccg ttc ggg tta ggg agg atc gtt cag gat ggg ctt gtg tac cgt cag432
Pro Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Tyr Arg Gln
130 135 140
aac ttc gat atc agg tct tat gaa ata ggt gct gat cgc tct gcg tct480
Asn Phe Asp Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser
145 150 155 160
ata gaa aca gtc atg aac cac tta cag gtatattaca atcacactcg 527
Ile Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
attgatacta gagcttgaca tgttggtttt tatcttttta taaattgttt agtgacattt 587
tcaaacatat agatataggt tatttagata tttctaggtt cctacaaacc tacccagact 647
caaaccccgt ccggaaattt ataatattaa taccgaacag agttttattt taaaccaaaa 707
aatcagttga cccgcacggg atgttggttt ttatctattt tatacattgt ttaaggacat 767
ttttaaacat ataaatatag gttatttaga tatttctagg ttcctacgaa cctacccgga 827
aatttataat acccgaacat agtttaattt ttaaaccaaa aaatccaata cccgaaaaaa 887
ccaatctgtg atatgcatga tctaactctt gtcctcgtga cag gaa acg gct ctc942
Glu Thr Ala Leu
170
aac cat gtg aag tct gct gga ctg ctg gga gat ggg ttt ggt tct acc 990
Asn His Val Lys Ser Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr
175 180 185
cct gag atg gtt aag aag aac ttg ata tgg gtc gtt act cgt atg cag1038
Pro Glu Met Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln
190 195 200 205
gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagccctc ttagcactta 1084
Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
210
accttaaaac aatatgcatg aatcatttgc ttattcaaat gtctgcttca ccag g gga 1142
Gly
215
gat gtt gtt gaa gta gat aca tgg gtt agt aag tct ggg aag aat ggt1190
Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Lys Ser Gly Lys Asn Gly
220 225 230
atg cgt cgt gat tgg ctt gtt cgg gat tgt aat act gga gaa att tta1238
Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys Asn Thr Gly Glu Ile Leu
235 240 245
aca aga gca tca ag gttagcttct ttttgtttac tccagctatt atctgattat1292
Thr Arg Ala Ser Ser
250
tgagttataa ccatctctgt gttgcaaaac ag t gtg tgg gtg atg atg aat aaa 1346
Val Trp Val Met Met Asn Lys
255
gtg aca agg aga tta tca aag ctt cct gaa gag gtt cga ggg gaa ata1394
Val Thr Arg Arg Leu Ser Lys Leu Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile
260 265 270 275
gag cct tac ttt gtg aac tct gac cct atc ctt gcc gag gac agc aga1442
Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Ile Leu Ala Glu Asp Ser Arg
280 285 290
aag tta aca aaa cta gat gag aag act gct gac tat gtt cgc tct ggt 1490
Lys Leu Thr Lys Leu Asp Glu Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg Ser Gly
295 300 305
ctc acc gtaagtataa atatttgttt ttatctttca gcaagtgaga ttctgatggg 1546
Leu Thr
tttggtgatt atctaacttt tgcag ccg aga tgg agt gac ttg gat gtt aac1598
Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn
310 315
cag cat gtt aac aac gtg aag tac att ggt tgg ata ctc gag agt gct1646
Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala
320 325 330
cca gtg gag atg atg gag aag cat aag ctg aaa agc atg act ctg gag1694
Pro Val Glu Met Met Glu Lys His Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu
335 340 345 350
tat agg agg gaa tgc ggg aga gac agt gtg ctt cag tct ctc acc gcg1742
Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala
355 360 365
gtt tcg ggt tgc gat gtt ggt agc ctc ggg aca gct ggt gaa gtg gaa1790
Val Ser Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu
370 375 380
tgt cag cat ttg ctt cga ctc cag gat gga gct gaa gtg gtg aag gga1838
Cys Gln His Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Lys Gly
385 390 395
cga aca gtg tgg agt tcc aaa aca cca tca aca act tgg gac act aca1886
Arg Thr Val Trp Ser Ser Lys Thr Pro Ser Thr Thr Trp Asp Thr Thr
400 405 410
tcg taa1892
Ser
415
<210>24
<211>415
<212>PRT
<213>歐洲油菜
<400>24
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Asn Lys Leu Thr Ser Thr Asn Phe
20 25 30
Ser Gly Leu Asn Pro Ile Pro Asn Ser Ser Gly Arg Leu Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Ser Lys Ile Asn Gly Asn Asn Val Ser Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val His Ile Val Lys Thr Asp Asn Asn His Asp Leu Ser
65 70 75 80
Gln Gln His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser
85 90 95
Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln
100 105 110
Trp Met Met Leu Asp Ser Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp
115 120 125
Pro Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Tyr Arg Gln
130 135 140
Asn Phe Asp Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser
145 150 155 160
Ile Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val
165 170 175
Lys Ser Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met
180 185 190
Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val
195 200 205
Asp Lys Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val
210 215 220
Ser Lys Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp
225 230 235 240
Cys Asn Thr Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met
245 250 255
Met Asn Lys Val Thr Arg Arg Leu Ser Lys Leu Pro Glu Glu Val Arg
260 265 270
Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Ile Leu Ala Glu
275 280 285
Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Glu Lys Thr Ala Asp Tyr Val
290 295 300
Arg Ser Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His
305 310 315 320
Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val
325 330 335
Glu Met Met Glu Lys His Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg
340 345 350
Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser
355 360 365
Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln
370 375 380
His Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Lys Gly Arg Thr
385 390 395 400
Val Trp Ser Ser Lys Thr Pro Ser Thr Thr Trp Asp Thr Thr Ser
405 410 415
<210>25
<211>487
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>5’AtFATB1探針
<400>25
gaactttcat caaccagtta cctgactgga gcatgcttct tgctgctata actacgattt 60
tcttagcggc tgagaaacag tggatgatgc ttgattggaa acctaggcgt tctgacatgc120
tggtggatcc ttttggtata gggagaattg ttcaggatgg ccttgtgttc cgtcagaatt180
tttctattag gtcatatgaa ataggtgctg atcgctctgc atctatagaa accgtcatga240
atcatctgca ggtaccattt gattatgatt acggttacct gttgtcactg gtttaattga300
tatgtatgaa caagctctta tgctcatgac aggaaacggc gcttaatcat gttaagactg360
ctggattgct tggagatggg tttggctcta cacctgagat gtttaagaag gacttgatat420
gggttgtcac tcgtatgcag gttgtggttg ataaatatcc tacttggtaa gctatcctct480
tgcataa 487
<210>26
<211>22
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>寡核苷酸引物KVA05-14
<400>26
gaactttcat caaccagtta cc 22
<210>27
<211>22
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>寡核苷酸引物KVA05-15
<400>27
ttatgcaaga ggatagctta cc 22
<210>28
<211>352
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>3’AtFATB1探針
<400>28
cagtgtgtgg gtgatgatga ataaactgac aaggagattg tcaaagattc ctgaagaggt 60
tcgaggggaa atagagcctt attttgtgaa ttctgatcct gtccttgccg aggacagcag120
aaagttaaca aaaattgatg acaagactgc tgactatgtt cgatctggtc tcactgtaag180
tatctagtat ttactgctgt atgtttcaac aaacctttga ccagcttgta agactctcta240
atggcttggt aatgaacatt ttcagcctcg atggagtgac ctagatgtta accagcatgt300
gaataatgta aagtacattg ggtggatcct ggagagtgct ccagtgggaa ta352
<210>29
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>寡核苷酸引物KVA05-16
<400>29
cagtgtgtgg gtgatgatga 20
<210>30
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>寡核苷酸引物KVA05-17
<400>30
tattcccact ggagcactct 20
<210>31
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A1(SOSR)的正向引物
<400>31
ctgataacga gacgtcctca c 21
<210>32
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A1(SORS)的反向引物
<400>32
catcctggag acggagcagg 20
<210>33
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A2(SOSR)的正向引物
<400>33
ctgcctgact ggagtatgct g 21
<210>34
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A2(SOSR)的反向引物
<400>34
gttgttgctc ctgtcttgga g 21
<210>35
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A3(SOSR)的正向引物
<400>35
gcagtggatg atgcttgata c 21
<210>36
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A3(SOSR)的反向引物
<400>36
caagtcgttg atggtgtttt c 21
<210>37
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C1(SOSR)的正向引物
<400>37
ctgcctgact ggagcatgct c 21
<210>38
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C1(SOSR)的反向引物
<400>38
gttcttcctc tcaccacttc g 21
<210>39
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C2(SOSR)的正向引物
<400>39
atcgttcagg atggtcttgt c 21
<210>40
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C2(SOSR)的反向引物
<400>40
gcagtcttgt catcaagttt g 21
<210>41
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C3(SOSR)的正向引物
<400>41
acagtggatg atgcttgact c 21
<210>42
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C3(SOSR)的反向引物
<400>42
cgaacatagt cagcagtctt c 21
<210>43
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A1中的缺失突變的反向引物
<400>43
cagtcttaac atggttgagt g 21
<210>44
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A2中的缺失突變的正向引物
<400>44
catgttccat cttcttcctc g 21
<210>45
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A2中的缺失突變的反向引物
<400>45
tattgggaca acatgtgagt g 21
<210>46
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A3中的缺失突變的反向引物
<400>46
ttcttcttaa ccatctcagg t 21
<210>47
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C1中的缺失突變的反向引物
<400>47
ccaaacccat ctccaagcag c 21
<210>48
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C2中的缺失突變的反向引物
<400>48
taactcacaa cgagaaccag g 21
<210>49
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C3中的缺失突變的反向引物
<400>49
ctttgataat ctccttgtca c 21
<210>50
<211>22
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A1-EMS05的正向寡核苷酸
<400>50
ggcggctgag aagcagtgaa ta 22
<210>51
<211>22
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A1的正向寡核苷酸
<400>51
ggcggctgag aagcagtgga tg 22
<210>52
<211>19
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于FATB-A1-EMS05和-A1的反向寡核苷酸
<400>52
ggactgaagc acactgtcc 19
<210>53
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A1-EMS06的正向寡核苷酸
<400>53
cagtggatga tgcttgactg a 21
<210>54
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A1的正向寡核苷酸
<400>54
cagtggatga tgcttgactg g 21
<210>55
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A1-EMS06和-A1的反向寡核苷酸
<400>55
gcatacgagt aacaacccaa 20
<210>56
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A2-EMS05的反向寡核苷酸
<400>56
agcagcaagc agcatacttc 20
<210>57
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A2的反向寡核苷酸
<400>57
tagcagcaag cagcatactc 20
<210>58
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A2-EMS05和-A2的正向寡核苷酸
<400>58
gagttgggtc cactaatttt g 21
<210>59
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A2-EMS01的反向寡核苷酸
<400>59
gagttgggtc cactaatttt g 21
<210>60
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A2的反向寡核苷酸
<400>60
cggaacacaa gaccatccta20
<210>61
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A2-EMS01和-A2的正向寡核苷酸
<400>61
cggaacacaa gaccatcctg 20
<210>62
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A3-EMS01的反向寡核苷酸
<400>62
tatttatcaa ctacaaccta 20
<210>63
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A3的反向寡核苷酸
<400>63
tatttatcaa ctacaacctg 20
<210>64
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A3-EMS01和-A3的正向寡核苷酸
<400>64
caatggcaaa accaacaaag c21
<210>65
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C1-EMS05的正向寡核苷酸
<400>65
gttaagaaga acttgatatg a 21
<210>66
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C1的正向寡核苷酸
<400>66
gttaagaaga acttgatatg g 21
<210>67
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C1-EMS05、-C1-EMS04和-C1的反向寡核苷酸
<400>67
gttcttcctc tcaccacttc g 21
<210>68
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C1-EMS04的正向寡核苷酸
<400>68
cggttatgaa tcatttacaa20
<210>69
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C1的正向寡核苷酸
<400>69
cggttatgaa tcatttacag 20
<210>70
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C2-EMS02的正向寡核苷酸
<400>70
gtctgacaac gagacttcgt 20
<210>71
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C2的正向寡核苷酸
<400>71
gtctgacaac gagacttcgc 20
<210>72
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C2-EMS02和-C2的反向寡核苷酸
<400>72
cagtattgca atcccgaacc 20
<210>73
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C2-EMS03的正向寡核苷酸
<400>73
tggcggctga gaaacagtga 20
<210>74
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C2的正向寡核苷酸
<400>74
tggcggctga gaaacagtgg 20
<210>75
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C2-EMS03和-C2的反向寡核苷酸
<400>75
agggtactta cagtgagacc c21
<210>76
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C3-EMS02的正向寡核苷酸
<400>76
cagtcatgaa ccacttacag a 21
<210>77
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C3的正向寡核苷酸
<400>77
cagtcatgaa ccacttacag g 21
<210>78
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C3-EMS02和-C3的反向寡核苷酸
<400>78
caacctgcat acgagtaacg20
<210>79
<211>2864
<212>DNA
<213>擬南芥(Arabidopsis thaliana)
<220>
<221>CDS
<222>(501)..(998)
<220>
<221>mat_peptide
<222>(501)..(2361)
<223>在氨基酸89起始的成熟肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(984)..(986)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(1080)..(1213)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1101)..(1103)
<223>保守Lys
<220>
<221>misc_feature
<222>(1173)..(1175)
<223>保守Val
<220>
<221>CDS
<222>(1441)..(1554)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1493)..(1495)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(1782)..(1953)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1819)..(1821)
<223>保守Ser
<220>
<221>CDS
<222>(2044)..(2361)
<220>
<221>misc_feature
<222>(2050)..(2052)
<223>保守Trp
<220>
<221>misc_feature
<222>(2068)..(2070)
<223>保守Asn
<220>
<221>misc_feature
<222>(2074)..(2076)
<223>保守His
<220>
<221>misc_feature
<222>(2179)..(2181)
<223>保守Cys
<400>79
acaagttttt gtttttcttt tgcgtttcta cgatctggtt ttaccggctt tagctttttc 60
tcgcttctgt tctttgttgt tttgtatttc agatctggtg ttttttttct tacctgcatc120
aaattggttt ctaccaaaac ttcggaaacc tcttttggca aatgttgaat ctttgaatac180
aatgacgatt tacataatag tctcagtggc cgaactggat tatcttacaa tttacgcaat240
aacaaaaagt tttttttttt tttttttttt tgtgtgtgtg tgtggtgtgt tgaagatttt300
tagtgtttgt ttacttcgtt tatggaagtc cttttcctct tctgccattt ttgtagttaa360
ctacaaatta tacctacttt aggaagatcc tcctgctagt agctaaaaga tgtagcattt420
attttattat cactcacttg agctaacttt tttcgatctt tatttggtgg cagtgtcttt480
gaacgcttca tctcctcgtc atg gtg gcc acc tct gct acg tcg tca ttc ttt533
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe
1 5 10
cct gta cca tct tct tca ctt gat cct aat gga aaa ggc aat aag att581
Pro Val Pro Ser Ser Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Gly Asn Lys Ile
15 20 25
ggg tct acg aat ctt gct gga ctc aat tct gca cct aac tct ggt agg629
Gly Ser Thr Asn Leu Ala Gly Leu Asn Ser Ala Pro Asn Ser Gly Arg
30 35 40
atg aag gtt aaa cca aac gct cag gct cca cct aag att aat ggg aaa677
Met Lys Val Lys Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys
45 50 55
aag gtt ggt ttg cct ggt tct gta gat att gta agg act gat acc gag725
Lys Val Gly Leu Pro Gly Ser Val Asp Ile Val Arg Thr Asp Thr Glu
60 65 70 75
acc tca tca cac cct gcg ccg aga act ttc atc aac cag tta cct gac773
Thr Ser Ser His Pro Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp
80 85 90
tgg agc atg ctt ctt gct gct ata act acg att ttc tta gcg gct gag821
Trp Ser Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu
95 100 105
aaa cag tgg atg atg ctt gat tgg aaa cct agg cgt tct gac atg ctg869
Lys Gln Trp Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Leu
110 115 120
gtg gat cct ttt ggt ata ggg aga att gtt cag gat ggc ctt gtg ttc917
Val Asp Pro Phe Gly Ile Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe
125 130 135
cgt cag aat ttt tct att agg tca tat gaa ata ggt gct gat cgc tct965
Arg Gln Asn Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser
140 145 150 155
gca tct ata gaa acc gtc atg aat cat ctg cag gtaccatttg attatgatta 1018
Ala Ser Ile Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
160 165
cggttacctg ttgtcactgg tttaattgat atgtatgaac aagctcttat gctcatgaca 1078
g gaa acg gcg ctt aat cat gtt aag act gct gga ttg ctt gga gat ggg 1127
Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys Thr Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly
170 175 180
ttt ggc tct aca cct gag atg ttt aag aag aac ttg ata tgg gtt gtc 1175
Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Phe Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val
185 190 195
act cgt atg cag gtt gtg gtt gat aaa tat cct act tg gtaagctatc1223
Thr Arg Met Gln Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
200 205 210
ctcttgcata aacctggttc tgcaggttca tgctctcact ctttttaacc aggtttggga 1283
aaaatgatgt gtatttcgtt ttttcagttg atactgcttt tacagtacga gatatatgct 1343
catatgacta atgacttctt gcaccctgaa ttatatgctc tgcatgcata ttatattgca 1403
tcataactca tttgcttatt caatatatgc ctcacag g gga gat gtt gtt gaa1456
Gly Asp Val Val Glu
215
gta gac acc tgg gtc agt cag tct gga aag aat ggt atg cgt cgt gat 1504
Val Asp Thr Trp Val Ser Gln Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp
220 225 230
tgg cta gtt cgg gac tgt aat act gga gaa acc tta aca cga gca tca 1552
Trp Leu Val Arg Asp Cys Asn Thr Gly Glu Thr Leu Thr Arg Ala Ser
235 240 245
ag gttagatttt cttttggtat atttataagt tattctcatt ttcttcatct1604
Ser
gatcattcat tggtctttct gatgaagata cctgatgtct ttactctctt tttatagtgt 1664
ttgctctatc atcaattaaa caaaaaacta cacaagttta tgtaatgaat aattaggaat 1724
tttttggtct catgggttag ctatttgaca gatgtattgc aaaatattat cttgcag t 1782
gtg tgg gtg atg atg aat aaa ctg aca agg aga ttg tca aag att cct 1830
Val Trp Val Met Met Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro
250 255 260 265
gaa gag gtt cga ggg gaa ata gag cct tat ttt gtg aat tct gat cct 1878
Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro
270 275 280
gtc ctt gcc gag gac agc aga aag tta aca aaa att gat gac aag act1926
Val Leu Ala Glu Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Ile Asp Asp Lys Thr
285 290 295
gct gac tat gtt cga tct ggt ctc act gtaagtatct agtatttact 1973
Ala Asp Tyr Val Arg Ser Gly Leu Thr
300 305
gctgtatgtt tcaacaaacc tttgaccagc ttgtaagact ctctaatggc ttggtaatga 2033
acattttcag cct cga tgg agt gac cta gat gtt aac cag cat gtg aat 2082
Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn
310 315
aat gta aag tac att ggg tgg atc ctg gag agt gct cca gtg gga ata2130
Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Ile
320 325 330 335
atg gag agg cag aag ctg aaa agc atg act ctg gag tat cgg agg gaa2178
Met Glu Arg Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu
340 345 350
tgc ggg aga gac agt gtg ctt cag tcc ctc act gca gtt acg ggt tgc2226
Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Thr Gly Cys
355 360 365
gat atc ggt aac ctg gca aca gcg ggg gat gtg gaa tgt cag cat ttg2274
Asp Ile Gly Asn Leu Ala Thr Ala Gly Asp Val Glu Cys Gln His Leu
370 375 380
ctc cga ctc cag gat gga gcg gaa gtg gtg aga gga aga aca gag tgg2322
Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp
385 390 395
agt agt aaa aca cca aca aca act tgg gga act gca ccg taagaaaaag 2371
Ser Ser Lys Thr Pro Thr Thr Thr Trp Gly Thr Ala Pro
400 405 410
aaaacacaac aacaatggct catttgaatc cccttgtaac tatatctgct actaccacct 2431
tgcttgcttg caaccaccac caccaccacc accatttcat gtcctcctcc tcacaaaagt 2491
ttcggccacc aaccctttgt atatttcttt ttttggttct tcttcttttt ttattcgatg 2551
gagatttatt atatttattt aatctttcta tttatttttt tgcttaatgg gaaatgggtg 2611
tcgtgtatca ttacgaattc tgatgttatg taacccatgt gccagcggaa gacaaaggca 2671
tcaactctct cttatcctaa atttattgta ctttgttgag ttttgtagtt gtttccagct 2731
aaacaagcac gtggacgatc cttgtaatga atttgtatga atgtgatgcc ttgtacctgt 2791
aaatttgatt gaaaggctat ttaataaaca cgaacaacca aaacggtttg tccaaacaat 2851
aaagccatcg cat 2864
<210>80
<211>412
<212>PRT
<213>擬南芥
<400>80
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Val Pro Ser Ser
1 5 10 15
Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Gly Asn Lys Ile Gly Ser Thr Asn Leu
20 25 30
Ala Gly Leu Asn Ser Ala Pro Asn Ser Gly Arg Met Lys Val Lys Pro
35 40 45
Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Lys Val Gly Leu Pro
50 55 60
Gly Ser Val Asp Ile Val Arg Thr Asp Thr Glu Thr Ser Ser His Pro
65 70 75 80
Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu Leu
85 90 95
Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp Met Met
100 105 110
Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Leu Val Asp Pro Phe Gly
115 120 125
Ile Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn Phe Ser
130 135 140
Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile Glu Thr
145 150 155 160
Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys Thr Ala
165 170 175
Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Phe Lys Lys
180 185 190
Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val Asp Lys Tyr
195 200 205
Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln Ser
210 215 220
Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys Asn Thr
225 230 235 240
Gly Glu Thr Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met Met Asn Lys
245 250 255
Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile
260 265 270
Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Leu Ala Glu Asp Ser Arg
275 280 285
Lys Leu Thr Lys Ile Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg Ser Gly
290 295 300
Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn
305 310 315 320
Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Ile Met
325 330 335
Glu Arg Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys
340 345 350
Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Thr Gly Cys Asp
355 360 365
Ile Gly Asn Leu Ala Thr Ala Gly Asp Val Glu Cys Gln His Leu Leu
370 375 380
Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser
385 390 395 400
Ser Lys Thr Pro Thr Thr Thr Trp Gly Thr Ala Pro
405 410
<210>81
<211>28
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A1-EMS05的寡核苷酸
<400>81
gcgcctcggt ttccagtcaa gcatcatc 28
<210>82
<211>16
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A1-EMS05的寡核苷酸
<400>82
tcactgcttc tcagcc 16
<210>83
<211>32
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A1-EMS06的寡核苷酸
<400>83
gatccataat cacgtcagag cgcctcggtt tc 32
<210>84
<211>17
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A1-EMS06的寡核苷酸
<400>84
tcagtcaagc atcatcc 17
<210>85
<211>40
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A2-EMS01的寡核苷酸
<400>85
acctaatgga aaaattctga cggaacacaa gaccatcctt 40
<210>86
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A2-EMS01的寡核苷酸
<400>86
aaacaattct ccctaaacca 20
<210>87
<211>40
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A2-EMS05的寡核苷酸
<400>87
tgccaagaaa atggtagtta tagcagcaag cagcatactc 40
<210>88
<211>14
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A2-EMS05的寡核苷酸
<400>88
tcagtcaggc agct 14
<210>89
<211>41
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A3-EMS01的寡核苷酸
<400>89
aagagagctt accaagtagg atatttatca actacaacct t41
<210>90
<211>18
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-A3-EMS01的寡核苷酸
<400>90
acatacgagt aacaaccc 18
<210>91
<211>43
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C1-EMS04的寡核苷酸
<400>91
ccagtaacaa caagcgacta caatcataat cataatcagt acc 43
<210>92
<211>23
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C1-EMS04的寡核苷酸
<400>92
ttgtaaatga ttcataaccg ttt 23
<210>93
<211>41
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C1-EMS05的寡核苷酸
<400>93
taggatattt atcaacgaca acctgcatac gagtaacaac c 41
<210>94
<211>23
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C1-EMS05的寡核苷酸
<400>94
tcatatcaag ttcttcttaa cca 23
<210>95
<211>43
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C2-EMS02的寡核苷酸
<400>95
cctggttctg tagagatatc aaagtctgac aacgagactt cgc43
<210>96
<211>12
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C2-EMS02的寡核苷酸
<400>96
tagcccgcac cc 12
<210>97
<211>31
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C3-EMS03的寡核苷酸
<400>97
agaacgcctg ggtttccagt caagcatcat c 31
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<211>16
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C3-EMS03的寡核苷酸
<400>98
tcactgtttc tcagcc 16
<210>99
<211>40
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C3-EMS02的寡核苷酸
<400>99
cgctctgcgt ctatagaaac agtcatgaac cacttacagt 40
<210>100
<211>24
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)FATB-C3-EMS02的寡核苷酸
<400>100
atatattaca atcacactcg attg 24
<210>101
<211>26
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)END01的寡核苷酸
<400>101
tgaggagcgt ggtggtccca cacctt 26
<210>102
<211>13
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于檢測(cè)END01的寡核苷酸
<400>102
cgatgcgacc agc 1權(quán)利要求
1、包含至少三種FATB基因或其部分的蕓苔屬植物，特征是在其基因組中包含至少一種突變FATB等位基因。
2、權(quán)利要求1的植物，其中FATB基因選自FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3。
3、權(quán)利要求1或2的植物，其中FA TB基因包含選自以下的核酸分子
-包含與SEQ ID NO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO9或SEQ ID NO11至少90％序列同一性的核酸分子；和
-編碼包含與SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ IDNO8、SEQ ID NO10或SEQ ID NO12至少90％序列同一性的氨基酸序列的核酸分子。
4、根據(jù)任一上述權(quán)利要求的植物，所述植物在其基因組中包含至少三種突變FATB等位基因，其中突變FATB等位基因是至少三種不同的FATB基因的突變等位基因。
5、根據(jù)任一上述權(quán)利要求的植物，其在其基因組中包含至少四或五種突變FATB等位基因，其中突變FATB等位基因是至少四或五種不同的FATB基因的突變等位基因。
6、根據(jù)任一上述權(quán)利要求的植物，其包含至少一種野生型FATB等位基因。
7、根據(jù)任一上述權(quán)利要求的植物，其針對(duì)野生型和突變FATB等位基因是純合的。
8、根據(jù)權(quán)利要求7的植物，其包含一種額外的突變FATB等位基因，其中額外的突變FATB等位基因選自剩余的野生型FATB等位基因，其中所述植物對(duì)于該額外的突變FATB等位基因是雜合的。
9、根據(jù)任一上述權(quán)利要求的植物，其中所述突變FATB等位基因編碼FATB蛋白，其中與野生型FATB蛋白相比，一個(gè)或多個(gè)氨基酸被插入、缺失或取代。
10、根據(jù)任一上述權(quán)利要求的植物，其中所述突變FATB等位基因編碼截短的FATB蛋白，不編碼FATB蛋白或者編碼與野生型FATB蛋白相比，具有顯著降低的生物學(xué)活性或無生物學(xué)活性的FATB蛋白。
11、根據(jù)任一上述權(quán)利要求的植物，其中所述突變FATB等位基因包含缺失突變。
12、根據(jù)權(quán)利要求11的植物，其中所述FATB等位基因選自FATB-A1-FN1、FATB-A2-FN1、FATB-A2-FN2、FATB-A2-FN3和FATB-C2-FN1。
13、根據(jù)權(quán)利要求1-10的任一項(xiàng)的植物，其中所述突變FATB等位基因包含無義突變。
14、根據(jù)權(quán)利要求13的植物，其中所述FATB等位基因選自FATB-A1-EMS01、FATB-A1-EMS02、FATB-A1-EMS03、FATB-A1-EMS05、FATB-A1-EMS06、FATB-A2-EMS01、FATB-A2-EMS04、FATB-A2-EMS05、FATB-A3-EMS01、FATB-C1-EMS01、FATB-C2-EMS02、FATB-C2-EMS03、FATB-C2-EMS05和FATB-C2-EMS06。
15、根據(jù)權(quán)利要求1-10的任一項(xiàng)的植物，其中所述突變FATB等位基因包含剪接位點(diǎn)突變。
16、根據(jù)權(quán)利要求15的植物，其中所述FATB等位基因選自FATB-A1-EMS07、FATB-A1-EMS09、FATB-A2-EMS02、FATB-A2-EMS03、FATB-C1-EMS04、FATB-C2-EMS04和FATB-C3-EMS02。
17、根據(jù)任一上述權(quán)利要求的植物，其中與不包含突變FATB等位基因的相應(yīng)植物生產(chǎn)的功能性FATB蛋白的量相比，所述突變FATB等位基因?qū)е略隗w內(nèi)植物細(xì)胞內(nèi)功能性FATB蛋白的量顯著降低。
18、根據(jù)任一上述權(quán)利要求的植物，所述植物生產(chǎn)種子油，與相應(yīng)野生型蕓苔屬植物的種子油的脂肪酸組成相比，所述種子油的脂肪酸組成顯著改變。
19、根據(jù)權(quán)利要求18的植物，其中與相應(yīng)野生型蕓苔屬植物的種子油中的飽和脂肪酸水平相比，種子油的飽和脂肪酸水平顯著降低。
20、根據(jù)權(quán)利要求18或19的植物，其中種子油具有等于或少于6wt％、5wt％、4wt％、3.5wt％(例如少于或等于3wt％、2wt％或1wt％)飽和脂肪酸，特別是棕櫚酸和/或硬脂酸，這是基于種子油中的脂肪酸總量。
21、根據(jù)權(quán)利要求18-20的任一項(xiàng)的植物，其中種子油可以標(biāo)記為低飽和或無飽和油。
22、根據(jù)權(quán)利要求1-21的任一項(xiàng)的植物，其中所述植物是蕓苔屬作物物種，優(yōu)選的歐洲油菜(Brassica napus)、芥菜(Brassica juncea)、埃塞俄比亞芥(Brassica carinata)、蕪菁(Brassica rapa)或甘藍(lán)(Brassicaoleracea)。
23、根據(jù)權(quán)利要求1-22的任一項(xiàng)的植物，其中所述植物是蕓苔屬油料種子物種，優(yōu)選的歐洲油菜、芥菜或蕪菁。
24、從根據(jù)權(quán)利要求1-23的任一項(xiàng)的植物的種子可獲得的種子油。
25、蕓苔屬FATB基因的突變等位基因，其中FATB基因選自FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3。
26、根據(jù)權(quán)利要求25的突變等位基因，其中FATB基因包含選自以下的核酸分子
-包含與SEQ ID NO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO9或SEQ ID NO11至少90％序列同一性的核酸分子；和
-編碼包含與SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ IDNO8、SEQ ID NO10或SEQ ID NO12至少90％序列同一性的氨基酸序列的核酸分子。
27、根據(jù)權(quán)利要求25或26的突變等位基因，其編碼FATB蛋白，與野生型FATB蛋白相比，所述FATB蛋白中插入、缺失或取代了一個(gè)或多個(gè)氨基酸。
28、根據(jù)權(quán)利要求25-27的任一項(xiàng)的突變等位基因，其編碼截短的FATB蛋白，不編碼FATB蛋白，或編碼與野生型FATB蛋白相比，具有生物學(xué)活性顯著降低的或無生物學(xué)活性的FATB蛋白。
29、根據(jù)權(quán)利要求25-28的任一項(xiàng)的突變等位基因，其中所述突變FATB等位基因包含缺失突變。
30、根據(jù)權(quán)利要求29的突變等位基因，其中所述FATB等位基因選自FATB-A1-FN1、FATB-A2-FN1、FATB-A2-FN2、FATB-A2-FN3和FATB-C2-FN1。
31、根據(jù)權(quán)利要求25-28的任一項(xiàng)的突變等位基因，其中所述突變FATB等位基因包含無義突變。
32、根據(jù)權(quán)利要求31的突變等位基因，其中所述FATB等位基因選自FATB-A1-EMS01、FATB-A1-EMS02、FATB-A1-EMS03、FATB-A1-EMS05、FATB-A1-EMS06、FATB-A2-EMS01、FATB-A2-EMS04、FATB-A2-EMS05、FATB-A3-EMS01、FATB-C1-EMS01、FATB-C2-EMS02、FATB-C2-EMS03、FATB-C2-EMS05和FATB-C2-EMS06。
33、根據(jù)權(quán)利要求25-28的任一項(xiàng)的突變等位基因，其中所述突變FATB等位基因包含剪接位點(diǎn)突變。
34、根據(jù)權(quán)利要求33的突變等位基因，其中所述FATB等位基因選自FATB-A1-EMS07、FATB-A1-EMS09、FATB-A2-EMS02、FATB-A2-EMS03、FATB-C1-EMS04、FATB-C2-EMS04和FATB-C3-EMS02。
35、根據(jù)權(quán)利要求25-34的任一項(xiàng)的突變等位基因，其分離自蕓苔屬作物物種，優(yōu)選的歐洲油菜、芥菜、埃塞俄比亞芥、蕪菁或甘藍(lán)。
36、根據(jù)權(quán)利要求25-35的任一項(xiàng)的突變等位基因，其分離自蕓苔屬油料種子物種，優(yōu)選的歐洲油菜、芥菜或蕪菁。。
37、由根據(jù)權(quán)利要求25-36的任一項(xiàng)的突變等位基因編碼的突變FATB蛋白。
38、在生物學(xué)樣品中，用于鑒別根據(jù)權(quán)利要求25-36的任一項(xiàng)的突變FATB等位基因的方法，其包括在存在于所述生物學(xué)樣品中的核酸中，確定突變FATB特定區(qū)域的存在。
39、根據(jù)權(quán)利要求38的方法，其還包括使生物學(xué)樣品進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)測(cè)定，所述測(cè)定使用至少兩種引物的組，所述組選自
-引物的組，其中分別是一種所述引物特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，且另一所述引物特異性識(shí)別突變FATB等位基因的3’或5’側(cè)翼區(qū)，
-引物的組，其中一種所述引物特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，且另一所述引物特異性識(shí)別突變FATB等位基因的突變區(qū)，
-引物的組，其中分別是一種所述引物特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，且另一所述引物特異性識(shí)別在突變FATB等位基因的3’或5’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)。
40、根據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中
-特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)的所述引物，分別由選自突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列組成，或
-特異性識(shí)別突變FATB等位基因的突變區(qū)的所述引物，由選自突變FATB等位基因的突變序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列組成，或
-特異性識(shí)別在突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的所述引物，由選自跨越突變FA TB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列組成，其中所述17至200個(gè)連續(xù)核苷酸不專一的源自突變序列或側(cè)翼序列。
41、根據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中
-特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)的所述引物，在其3’末端分別包含至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，所述至少17個(gè)連續(xù)核苷酸選自突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼序列，或
-特異性識(shí)別突變FATB等位基因的突變區(qū)的所述引物，在其3’末端包含至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，所述至少17個(gè)連續(xù)核苷酸選自突變FATB等位基因的突變序列，或
-特異性識(shí)別在突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的所述引物，在其3’末端包含至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，所述至少17個(gè)連續(xù)核苷酸選自跨越突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的序列，其中所述位于3’的17個(gè)連續(xù)核苷酸不專一的源自突變序列或側(cè)翼序列。
42、根據(jù)權(quán)利要求39-41的任一項(xiàng)的方法，
-其中所述突變FATB等位基因是FATB-A1-FN1，且其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO31的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO32的序列的引物，或
-其中所述突變FATB等位基因是FATB-A1-FN1，且其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO31的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO43的序列的引物，或
-其中所述突變FATB等位基因選自FATB-A2-FN1、FATB-A2-FN2和FATB-A2-FN3，且其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO33的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO34的序列的引物，或
-其中所述突變FATB等位基因選自FATB-A2-FN1、FATB-A2-FN2和FATB-A2-FN3，且其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO44的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO45的序列的引物，或
-其中所述突變FATB等位基因是FATB-C2-FN1，且其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO39的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO40的序列的引物，或
-其中所述突變FATB等位基因是FATB-C2-FN1，且其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO39的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO48的序列的引物。
43、根據(jù)權(quán)利要求39-41的任一項(xiàng)的方法，其中所述突變FATB等位基因選自FATB-A1-EMS05、FATB-A1-EMS06、FATB-A2-EMS01、FATB-A2-EMS05、FATB-A3-EMS01、FATB-C1-EMS04、FATB-C1-EMS05、FATB-C2-EMS02、FATB-C2-EMS03和FATB-C3-EMS02，且其中所述引物組分別選自
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO50的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO52的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO53的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO55的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO58的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO60的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO58的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO56的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO64的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO62的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO68的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO38的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO65的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO67的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO70的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO72的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO73的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO75的序列的引物，和
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO76的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO78的序列的引物。
44、根據(jù)權(quán)利要求38的方法，其還包括將生物學(xué)樣品進(jìn)行使用至少一種特定探針的組的雜交測(cè)定，所述探針組選自
-探針組，其中第一探針特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’側(cè)翼區(qū)，且第二探針特異性識(shí)別突變FATB等位基因的3’側(cè)翼區(qū)，
-探針組，其中第一探針特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，且第二探針特異性識(shí)別突變FATB等位基因的突變區(qū)，
-特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的探針，任選地，與特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)的第二探針組合。
45、根據(jù)權(quán)利要求44的方法，其中
-所述特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)的探針，分別包括選自突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼序列的20至1000個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或與其具有至少80％序列同一性的序列，或
-所述特異性識(shí)別突變FATB等位基因的突變區(qū)的探針，包括選自突變FATB等位基因的突變序列的20至1000個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或與其具有至少80％序列同一性的序列，或
-所述特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的探針，分別包括選自跨越突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的序列的20至1000個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或與其具有至少80％序列同一性的序列，其中所述20至1000個(gè)連續(xù)核苷酸不是專一的源自突變或側(cè)翼序列。
46、根據(jù)權(quán)利要求44或45的方法，其中所述突變FATB等位基因選自FATB-A1-FN1、FATB-A2-FN1、FATB-A2-FN2、FATB-A2-FN3和FATB-C2-FN1，且其中所述特異性探針包含SEQ ID NO25或28的核苷酸序列。
47、根據(jù)權(quán)利要求44或45的方法，其中所述突變FATB等位基因選自FATB-A1-EMS05、FATB-A1-EMS06、FATB-A2-EMS01、FATB-A2-EMS05、FATB-A3-EMS01、FATB-C1-EMS04、FATB-C1-EMS05、FATB-C2-EMS02、FATB-C2-EMS03和FATB-C3-EMS02，且其中所述探針組分別選自
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO81的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO82的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO83的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO84的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO85的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO86的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO87的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO88的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO89的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO90的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO91的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO92的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO93的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO94的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO95的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO96的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO97的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO98的序列的探針，和
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO99的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO100的序列的探針。
48、確定蕓苔屬植物、植物材料或種子中根據(jù)權(quán)利要求25-36的任一項(xiàng)的突變FA TB等位基因接合性狀態(tài)的方法，其包括確定在所述植物、植物材料或種子的基因組DNA中突變和/或相應(yīng)野生型FATB特定區(qū)域的存在。
49、根據(jù)權(quán)利要求49的方法，其包括使所述植物、植物材料或種子的基因組DNA進(jìn)行使用至少2或至少3種引物的組的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)測(cè)定，其中所述引物中的兩種特異性識(shí)別野生型FATB等位基因，選自
-分別的，第一引物，其特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，和第二引物，其特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的3’或5’側(cè)翼區(qū)，
-第一引物，其特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，和第二引物，其特異性識(shí)別野生型FATB等位基因的突變位點(diǎn)，
-分別的，第一引物，其特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，和第二引物，其特異性識(shí)別在野生型FATB等位基因的3’或5’側(cè)翼區(qū)和突變位點(diǎn)之間的連接區(qū)，并且
其中，所述引物中的兩種特異性識(shí)別突變FATB等位基因，選自
-分別的，第一引物，其特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，和第二引物，其特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的3’或5’側(cè)翼區(qū)，
-第一引物，其特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，和第三引物，其特異性識(shí)別突變FATB等位基因的突變區(qū)，
-分別的，第一引物，其特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，和第三引物，其特異性識(shí)別在突變FATB等位基因的3’或5’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)。
50、根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中
-所述特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)的引物，分別由選自突變或野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列組成，或
-所述特異性識(shí)別野生型FATB等位基因的突變位點(diǎn)或突變FATB等位基因的突變區(qū)的引物，分別由選自野生型FATB等位基因的突變位點(diǎn)的序列或突變FATB等位基因的突變區(qū)序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列組成，或
-所述特異性識(shí)別在野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變位點(diǎn)之間，或在突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的引物，分別由選自以下序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列組成跨越野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變位點(diǎn)之間的連接區(qū)的序列，或跨越突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的序列，其中所述17至200個(gè)連續(xù)核苷酸不是專一的源自突變位點(diǎn)或突變區(qū)或側(cè)翼序列。
51、根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中
-所述特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)的引物，在其3’末端分別包括選自突變或野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼序列的17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或
-所述特異性識(shí)別突變位點(diǎn)或突變區(qū)的引物，在其3’末端分別包括選自野生型FATB等位基因的突變位點(diǎn)的序列或突變FATB等位基因的突變區(qū)序列的17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或
-所述特異性識(shí)別5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變位點(diǎn)或突變區(qū)之間的連接區(qū)的引物，在其3’末端分別包括選自以下序列的17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列跨越5’或3’側(cè)翼區(qū)和野生型FATB等位基因的突變位點(diǎn)或突變FATB等位基因的突變區(qū)之間的連接區(qū)的序列，其中所述位于3’的17個(gè)連續(xù)核苷酸不是專一的源自突變位點(diǎn)或突變區(qū)或側(cè)翼序列。
52、根據(jù)權(quán)利要求50-52的任一項(xiàng)的方法，
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-A1，且所述突變FATB等位基因是FATB-A1-FN1，其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO31的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO32的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-A1，且所述突變FATB等位基因是FATB-A1-FN1，其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO31的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO43的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-A2，且所述突變FATB等位基因選自FATB-A2-FN1、FATB-A2-FN2和FATB-A2-FN3，其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO33的序列的引物和/或一種包含SEQ IDNO34的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-A2，且所述突變FATB等位基因選自FATB-A2-FN1、FATB-A2-FN2和FATB-A2-FN3，其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO44的序列的引物和/或一種包含SEQ IDNO45的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-C2，且所述突變FATB等位基因是FATB-C2-FN1，其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO39的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO40的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-C2，且所述突變FATB等位基因是FATB-C2-FN1，其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO39的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO48的序列的引物。
53、根據(jù)權(quán)利要求50-52的任一項(xiàng)的方法，
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-A1，且所述突變FATB等位基因是FATB-A1-EMS05，其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO50的序列的引物，一種包含SEQ ID NO51的序列的引物和/或一種包含SEQID NO52的序列的引物，
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-A1，且所述突變FATB等位基因是FATB-A1-EMS06，其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO53的序列的引物，一種包含SEQ ID NO54的序列的引物和/或一種包含SEQID NO55的序列的引物，
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-A2，且所述突變FATB等位基因是FATB-A2-EMS01，其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO59的序列的引物，一種包含SEQ ID NO60的序列的引物和/或一種包含SEQID NO61的序列的引物，
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-A2，且所述突變FATB等位基因是FATB-A2-EMS05，其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO56的序列的引物，一種包含SEQ ID NO57的序列的引物和/或一種包含SEQID NO58的序列的引物，
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-A3，且所述突變FATB等位基因是FATB-A3-EMS01，其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO62的序列的引物，一種包含SEQ ID NO63的序列的引物和/或一種包含SEQID NO64的序列的引物，
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-C1，且所述突變FATB等位基因是FATB-C1-EMS04，其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO67的序列的引物，一種包含SEQ ID NO68的序列的引物和/或一種包含SEQID NO69的序列的引物，
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-C1，且所述突變FATB等位基因是FATB-C1-EMS05，其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO65的序列的引物，一種包含SEQ ID NO66的序列的引物和/或一種包含SEQID NO67的序列的引物，
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-C2，且所述突變FATB等位基因是FATB-C2-EMS02，其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO70的序列的引物，一種包含SEQ ID NO71的序列的引物和/或一種包含SEQID NO72的序列的引物，
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-C2，且所述突變FATB等位基因是FATB-C2-EMS03，其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO73的序列的引物，一種包含SEQ ID NO74的序列的引物和/或一種包含SEQID NO75的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-C3，且所述突變FATB等位基因是FATB-C3-EMS02，其中所述引物組包括一種包含SEQ ID NO76的序列的引物，一種包含SEQ ID NO77的序列的引物和/或一種包含SEQID NO78的序列的引物。
54、根據(jù)權(quán)利要求49的方法，其包括
使所述植物、植物材料或種子的基因組DNA進(jìn)行使用至少2種特異性探針的組的雜交測(cè)定，其中所述特異性探針的至少一種特異性的識(shí)別野生型FATB等位基因或內(nèi)源基因，選自
-第一探針，其特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因或內(nèi)源基因的5’側(cè)翼區(qū)，和第二探針，其特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因或內(nèi)源基因的3’側(cè)翼區(qū)，
-第一探針，其特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，和第二探針，其特異性識(shí)別野生型FATB等位基因的突變位點(diǎn)，
-探針，其特異性識(shí)別野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變位點(diǎn)之間的連接區(qū)，并且
其中，所述特異性探針中的至少一種特異性識(shí)別突變FATB等位基因，選自
-第一探針，其特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’側(cè)翼區(qū)，和第二探針，其特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的3’側(cè)翼區(qū)，
-第一探針，其特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，和第三探針，其特異性識(shí)別突變FATB等位基因的突變區(qū)，
-探針，其特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)。
55、根據(jù)權(quán)利要求54的方法，其中
-所述特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因或內(nèi)源基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)的探針，分別包括選自突變或野生型FATB等位基因或內(nèi)源基因的5’或3’側(cè)翼序列的20至1000個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或與其具有至少80％序列同一性的序列，或
-所述特異性識(shí)別突變位點(diǎn)或突變區(qū)的探針，分別包括選自野生型FATB等位基因的突變位點(diǎn)或突變FATB等位基因的突變區(qū)的序列的20至1000個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或與其具有至少80％序列同一性的序列，或
-所述特異性識(shí)別在5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變位點(diǎn)或突變區(qū)之間的連接區(qū)的探針，分別包括選自以下序列的20至1000個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列跨越野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變位點(diǎn)之間的連接區(qū)的序列，或跨越突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的序列；或與其具有至少80％序列同一性的序列，其中所述20至1000個(gè)連續(xù)核苷酸不是專一的源自突變位點(diǎn)或突變區(qū)或側(cè)翼序列。
56、根據(jù)權(quán)利要求54或55的方法，其中分別的，所述野生型FATB等位基因選自FATB-A1、FATB-A2和FATB-C2，所述突變FATB等位基因選自FATB-A1-FN1、FATB-A2-FN1、FATB-A2-FN2、FATB-A2-FN3和FATB-C2-FN1，且其中所述特異性探針包含SEQ ID NO25或28的核苷酸序列。
57、根據(jù)權(quán)利要求54或55的方法，
-其中所述特異性針對(duì)所述內(nèi)源基因的探針組包括一種包含SEQ IDNO101的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO102的序列的探針，且
-其中所述特異性針對(duì)突變FATB等位基因FATB-A1-EMS05、FATB-A1-EMS06、FATB-A2-EMS01、FATB-A2-EMS05、FATB-A3-EMS01、FATB-C1-EMS04、FATB-C1-EMS05、FATB-C2-EMS02、FATB-C2-EMS03或FATB-C3-EMS02的探針組，分別選自
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO81的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO82的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO83的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO84的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO85的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO86的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO87的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO88的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO89的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO90的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO91的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO92的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO93的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO94的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO95的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO96的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO97的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO98的序列的探針，和
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO99的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO100的序列的探針。
58、用于鑒別生物學(xué)樣品中的根據(jù)權(quán)利要求25-36的任一項(xiàng)的突變FA TB等位基因的試劑盒，其包括至少兩種引物的組，所述組選自
-引物的組，其中分別是一種所述引物特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，且另一所述引物特異性識(shí)別突變FATB等位基因的3’或5’側(cè)翼區(qū)，
-引物的組，其中一種所述引物特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，且另一所述引物特異性識(shí)別突變FATB等位基因的突變區(qū)，
-引物的組，其中分別是一種所述引物特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，且另一所述引物特異性識(shí)別在突變FATB等位基因的3’或5’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)。
59、根據(jù)權(quán)利要求58的試劑盒，其中
-特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)的所述引物，分別由選自突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列組成，或
-特異性識(shí)別突變FATB等位基因的突變區(qū)的所述引物，由選自突變FATB等位基因的突變序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列組成，或
-特異性識(shí)別在突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的所述引物，由選自跨越突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列組成，其中所述17至200個(gè)連續(xù)核苷酸不專一的源自突變序列或側(cè)翼序列。
60、根據(jù)權(quán)利要求58的試劑盒，其中
-特異性識(shí)別突變FA TB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)的所述引物，在其3’末端分別包含至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，所述至少17個(gè)連續(xù)核苷酸選自突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼序列，或
-特異性識(shí)別突變FATB等位基因的突變區(qū)的所述引物，在其3’末端包含至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，所述至少17個(gè)連續(xù)核苷酸選自突變FATB等位基因的突變序列，或
-特異性識(shí)別在突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的所述引物，在其3’末端包含至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，所述至少17個(gè)連續(xù)核苷酸選自跨越突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的序列，其中所述位于3’的17個(gè)連續(xù)核苷酸不專一的源自突變序列或側(cè)翼序列。
61、根據(jù)權(quán)利要求58-60的任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述至少兩種引物的組選自
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO31的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO32的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO31的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO43的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO33的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO34的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO44的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO45的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO39的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO40的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO39的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO48的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO50的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO52的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO53的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO55的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO58的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO60的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO58的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO56的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO64的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO62的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO68的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO38的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO65的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO67的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO70的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO72的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO73的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO75的序列的引物，和
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO76的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO78的序列的引物。
62、用于鑒別生物學(xué)樣品中根據(jù)權(quán)利要求25-36的任一項(xiàng)的突變FATB等位基因的試劑盒，其包括至少一種特異性探針的組，所述組選自
-特異性探針組，其中第一探針特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’側(cè)翼區(qū)，且第二探針特異性識(shí)別突變FATB等位基因的3’側(cè)翼區(qū)，
-特異性探針組，其中第一探針特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，且第二探針特異性識(shí)別突變FATB等位基因的突變區(qū)，
-特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的特異性探針，任選地，與特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)的第二探針組合。
63、根據(jù)權(quán)利要求62的試劑盒，其中
-所述特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)的探針，分別包括選自突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼序列的20至1000個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或與其具有至少80％序列同一性的序列，或
-所述特異性識(shí)別突變FATB等位基因的突變區(qū)的探針，包括選自突變FATB等位基因的突變序列的20至1000個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或與其具有至少80％序列同一性的序列，或
-所述特異性識(shí)別突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的探針，分別包括選自跨越突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的序列的20至1000個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或與其具有至少80％序列同一性的序列，其中所述20至1000個(gè)連續(xù)核苷酸不是專一的源自突變或側(cè)翼序列。
64、根據(jù)權(quán)利要求62-63的任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述至少一種探針的組分別選自
-包含SEQ ID NO25或28的核苷酸序列的特異性探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO101的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO102的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO81的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO82的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO83的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO84的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO85的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO86的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO87的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO88的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO89的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO90的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO91的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO92的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO93的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO94的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO95的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO96的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO97的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO98的序列的探針，和
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO99的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO100的序列的探針。
65、用于確定蕓苔屬植物、植物材料或種子中根據(jù)權(quán)利要求25-36的任一項(xiàng)的突變FATB等位基因的接合性狀態(tài)的試劑盒，其包括引物的組，所述組選自
-至少兩種引物的組，其中分別是，第一引物，特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，和第二引物，特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的3’或5’側(cè)翼區(qū)，
-至少三種引物的組，其中，第一引物，特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，第二引物，特異性識(shí)別突變FATB等位基因的突變區(qū)，和第三引物，特異性識(shí)別野生型FATB等位基因的突變區(qū)，
-至少三種引物的組，其中分別是，第一引物，特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，第二引物，特異性識(shí)別突變FATB等位基因的3’或5’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)，和第三引物，分別特異性識(shí)別野生型FATB等位基因的3’或5’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)。
66、根據(jù)權(quán)利要求65的試劑盒，其中
-所述特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)的引物，分別由選自突變或野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列組成，或
-所述特異性識(shí)別野生型FATB等位基因或突變FATB等位基因的突變區(qū)的引物，分別由選自野生型FATB等位基因的突變區(qū)的序列或突變FATB等位基因的突變區(qū)的序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列組成，或
-所述特異性識(shí)別在野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間，或在突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的引物，分別由選自以下序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列組成跨越野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的序列，或跨越突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的序列，其中所述17至200個(gè)連續(xù)核苷酸不是專一的源自突變區(qū)或側(cè)翼序列。
67、根據(jù)權(quán)利要求65的試劑盒，其中
-所述特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)的引物，在其3’末端分別包括選自突變或野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼序列的17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或
-所述特異性識(shí)別突變區(qū)的引物，在其3’末端分別包括選自野生型FATB等位基因的突變區(qū)或突變FATB等位基因的突變區(qū)的序列的17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或
-所述特異性識(shí)別5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的引物，在其3’末端分別包括選自以下的17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列跨越5’或3’側(cè)翼區(qū)和野生型FATB等位基因的突變區(qū)或者突變FATB等位基因的突變區(qū)之間的連接區(qū)的序列，其中所述位于3’的17個(gè)連續(xù)核苷酸不是專一的源自突變區(qū)或側(cè)翼序列。
68、根據(jù)權(quán)利要求65-67的任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述引物組選自
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO31的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO32的序列的引物，或
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO31的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO43的序列的引物，或
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO33的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO34的序列的引物，或
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO44的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO45的序列的引物，或
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO39的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO40的序列的引物，或
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO39的序列的引物和/或一種包含SEQ ID NO48的序列的引物，或
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO50的序列的引物、一種包含SEQ ID NO51的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO52的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO53的序列的引物、一種包含SEQ ID NO54的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO55的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO59的序列的引物、一種包含SEQ ID NO60的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO61的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO56的序列的引物、一種包含SEQ ID NO57的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO58的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO62的序列的引物、一種包含SEQ ID NO63的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO64的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO67的序列的引物、一種包含SEQ ID NO68的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO69的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO65的序列的引物、一種包含SEQ ID NO66的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO67的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO70的序列的引物、一種包含SEQ ID NO71的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO72的序列的引物，
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO73的序列的引物、一種包含SEQ ID NO74的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO75的序列的引物，或者
-引物組，其包括一種包含SEQ ID NO76的序列的引物、一種包含SEQ ID NO77的序列的引物，和/或一種包含SEQ ID NO78的序列的引物。
69、用于確定蕓苔屬植物、植物材料或種子中根據(jù)權(quán)利要求25-36的任一項(xiàng)的突變FATB等位基因的接合性狀態(tài)的試劑盒，其包括探針的組，選自
-至少兩種探針的組，其中第一探針，特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’側(cè)翼區(qū)，和第二探針，特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的3’側(cè)翼區(qū)，
-至少三種探針的組，其中，第一探針，特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)，第二探針，特異性識(shí)別突變FATB等位基因的突變區(qū)，和第三探針，特異性識(shí)別野生型FATB等位基因的突變區(qū)，
-至少兩種探針的組，其中，第一探針，特異性識(shí)別在突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)，和第二探針，特異性識(shí)別在野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)。
70、根據(jù)權(quán)利要求69的試劑盒，其中
-所述特異性識(shí)別突變和野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)的探針，分別包括選自突變或野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼序列的20至1000個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或與其具有至少80％序列同一性的序列，或
-所述特異性識(shí)別突變區(qū)的探針，分別包括選自野生型FATB等位基因的突變區(qū)或突變FATB等位基因的突變區(qū)的序列的20至1000個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或與其具有至少80％序列同一性的序列，或
-所述特異性識(shí)別在5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的探針，分別包括選自以下序列的20至1000個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列跨越野生型FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的序列，或跨越突變FATB等位基因的5’或3’側(cè)翼區(qū)和突變區(qū)之間的連接區(qū)的序列；或與其具有至少80％序列同一性的序列，其中所述20至1000個(gè)連續(xù)核苷酸不是專一的源自突變區(qū)或側(cè)翼序列。
71、根據(jù)權(quán)利要求69或70的試劑盒，其中所述探針的組分別選自
-包含SEQ ID NO25或28的核苷酸序列的特異性探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO101的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO102的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO81的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO82的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO83的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO84的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO85的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO86的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO87的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO88的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO89的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO90的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO91的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO92的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO93的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO94的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO95的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO96的序列的探針，
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO97的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO98的序列的探針，和
-探針組，其包括一種包含SEQ ID NO99的序列的探針和/或一種包含SEQ ID NO100的序列的探針。
72、用于在一株植物中組合根據(jù)權(quán)利要求25-36的任一項(xiàng)的至少兩種選定的突變FATB等位基因的方法，其包括步驟
-根據(jù)權(quán)利要求38-47的任一項(xiàng)鑒別至少兩株植物，每株包含至少一種選定的突變FATB等位基因，
-將至少兩株植物雜交，從至少一株雜交種中收集F1雜種種子，
-任選的，根據(jù)權(quán)利要求38-47的任一項(xiàng)鑒別這樣的F1植物，所述F1植物包含至少兩種選定的突變FATB等位基因。
73、根據(jù)權(quán)利要求72的方法，其還包括通過根據(jù)權(quán)利要求48-57的任一項(xiàng)確定選定的突變FATB等位基因的接合性狀態(tài)來鑒別F1植物的步驟，所述植物對(duì)于選定的突變FATB等位基因是純合的或雜合的。
74、用于將根據(jù)權(quán)利要求25-36的任一項(xiàng)的至少一種選定的突變FATB等位基因，從一株植物向另一植物轉(zhuǎn)移的方法，其包括步驟
(a)根據(jù)權(quán)利要求38-47的任一項(xiàng)鑒別第一植物，所述植物包含至少一種選定的突變FATB等位基因，
(b)將第一植物與第二植物雜交，所述第二植物不包含所述至少一種選定的突變FATB等位基因，并從所述雜交種中收集F1雜種種子，
(c)任選的，根據(jù)權(quán)利要求38-47的任一項(xiàng)鑒別這樣的F1植物，所述F1植物包含所述至少一種選定的突變FATB等位基因，
(d)將包含所述至少一種選定的突變FATB等位基因的F1植物與第二植物回交至少一代(x)，所述第二種植物不包含所述至少一種選定的突變FATB等位基因，并從所述雜交種中收集BCx種子，
(e)根據(jù)權(quán)利要求38-47的任一項(xiàng)的方法，在每一代中鑒別包含所述至少一種選定的突變FATB等位基因的BCx植物。
75、根據(jù)權(quán)利要求74的方法，其還包括通過根據(jù)權(quán)利要求48-57的任一項(xiàng)，確定選定的突變FATB等位基因的接合性狀態(tài)來鑒別BCx植物的步驟，所述植物對(duì)于選定的突變FATB等位基因是純合的或雜合的。
76、用于生產(chǎn)根據(jù)權(quán)利要求1-23的任一項(xiàng)的植物的方法，其包括根據(jù)權(quán)利要求72-75的任一項(xiàng)，與一種蕓苔屬植物組合和/或向其中轉(zhuǎn)移根據(jù)權(quán)利要求25-36的任一項(xiàng)的突變FATB等位基因。
77、蕓苔屬種子，其選自
-包含F(xiàn)ATB-A1-EMS05、FATB-A3-EMS01、FATB-C1-EMS04和FATB-C3-EMS02的蕓苔屬種子，所述種子已經(jīng)于2008年6月27日，以登錄號(hào)NCIMB 41568保藏于NCIMB Limited，
-包含F(xiàn)ATB-A1-EMS06、FATB-A2-EMS01、FATB-C1-EMS05和FATB-C2-EMS03的蕓苔屬種子，所述種子已經(jīng)于2008年6月27日，以登錄號(hào)NCIMB 41567保藏于NCIMB Limited，
-包含F(xiàn)ATB-A2-EMS05、FATB-C1-EMS05和FATB-C2-EMS02的蕓苔屬種子，所述種子已經(jīng)于2008年6月27日，以登錄號(hào)NCIMB 41566保藏于NCIMB Limited。
78、從權(quán)利要求77的種子獲得的蕓苔屬植物或其細(xì)胞、部分、種子或后代。
79、苔屬植物或其細(xì)胞、部分、種子或后代，其在其基因組中包含F(xiàn)ATB-A1-EMS05、FATB-A1-EMS06、FATB-A2-EMS01、FATB-A2-EMS05、FATB-A3-EMS01、FATB-C1-EMS04、FATB-C1-EMS05、FATB-C2-EMS02、FATB-C2-EMS03或FATB-C3-EMS02等位基因，其通過繁殖從權(quán)利要求77的種子生長(zhǎng)的蕓苔屬植物和/或用其育種獲得。
80、包含F(xiàn)ATB-A1-EMS05、FATB-A1-EMS06、FATB-A2-EMS01、FATB-A2-EMS05、FATB-A3-EMS01、FATB-C1-EMS04、FATB-C1-EMS05、FATB-C2-EMS02、FATB-C2-EMS03或FATB-C3-EMS02等位基因的種子，包含所述等位基因的參考種子已經(jīng)于2008年6月27日，以登錄號(hào)NCIMB 41566、NCIMB 41567和/或NCIMB41568保藏于NCIMB Limited。
81、從權(quán)利要求77的種子產(chǎn)生的，包含F(xiàn)ATB-A1-EMS05、FATB-A1-EMS06、FATB-A2-EMS01、FATB-A2-EMS05、FATB-A3-EMS01、FATB-C1-EMS04、FATB-C1-EMS05、FATB-C2-EMS02、FATB-C2-EMS03或FATB-C3-EMS02等位基因的植物或其細(xì)胞、部分、種子或后代。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含新型種子脂類組成的作物植物。提供了編碼蕓苔屬脂酰-?；d體蛋白(ACP)硫酯酶B蛋白(FATB)和類似蛋白的野生型和突變核酸分子。還提供了在其基因組中包含至少三種突變fatB等位基因的蕓苔屬植物、組織和種子，其中顯著改變了種子油脂肪酸組合物或模式。
文檔編號(hào)C12N9/16GK101688220SQ200880024009
公開日2010年3月31日 申請(qǐng)日期2008年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月9日
發(fā)明者B·拉加, B·登博爾, B·朗伯特 申請(qǐng)人:拜爾生物科學(xué)公司