專利名稱：：耐熱性相關(guān)蛋白及其編碼基因與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種與抗逆性相關(guān)的蛋白及其編碼基因與應(yīng)用，特別是涉及一種與耐熱性相關(guān)的蛋白及其編碼基因7ayffi!F化與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：隨著全球人口的增加，對糧食的需求日益增加。作為世界范圍內(nèi)主要的糧食作物，小麥生育后期的高溫脅迫嚴(yán)重影響著其產(chǎn)量和品質(zhì)，給人們的生活帶來了很大的影響，因此我們迫切需要研究小麥耐熱性的機(jī)理，開發(fā)耐熱相關(guān)基因，并將它們應(yīng)用到小麥育種，從而培育出耐熱品種。Multiproteinbridgingfactor1(MBF1)，作為一種轉(zhuǎn)錄共激活子，可以通過連接TATA-BoxBindingProtein(TBP)和某種轉(zhuǎn)錄因子激活依賴于該轉(zhuǎn)錄因子的下游基因的表達(dá)。雖然MBF1家族基因最早在蠶中發(fā)現(xiàn)，但對這類基因的特性以及功能的研究主要集中在植物，特別是擬南芥中。而擬南芥中的研究表明AtMBFlc基因可能通過影響體內(nèi)乙烯途徑、水楊酸途徑以及海藻糖途徑提高植株的耐熱性。在小麥中僅有關(guān)于TaMBFla基因的表達(dá)受病原菌侵染誘導(dǎo)的報道，還未有關(guān)于小麥該家族基因與耐熱性關(guān)系的報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種耐熱性相關(guān)的蛋白及其編碼基因。本發(fā)明所提供的耐熱性相關(guān)的蛋白，名稱為7<3iffiWc(TriticumaestivumMultiproteinBridgingFactorlc)，來源于普il/j、麥f7>7'z^.c/z3e5^i「w/77厶J，是如下l)或2)的蛋白質(zhì)1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；2)將序列表中序列2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與耐熱性相關(guān)的由1)衍生的蛋白質(zhì)。為了使1)中的71<3#5,化便于純化，可在由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末端連接上如表l所示的標(biāo)簽。<table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>上述2)中的7aiffiWc可人工合成，也可先合成編碼基因，在進(jìn)行生物表達(dá)得到。上述2)中的7aiffi^c的編碼基因可通過將序列表中序列1自5'末端第1095-1565位堿基所示的DNA序列中缺失一個或幾個氨基酸殘基的密碼子，和/或進(jìn)行一個或幾個堿基對的錯義突變，和/或在其5'端和/或3'端連上表1所示的標(biāo)簽的編碼序列得到。上述與抗逆性相關(guān)蛋白的DNA基因也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。與耐熱性相關(guān)的蛋白的DNA基因?yàn)槿缦?)-4)中任一所述的基因1)其編碼序列是序列表中序列1的自5'末端第1095-1565位脫氧核糖核苷酸；2)其核苷酸序列是序列表中的序列l(wèi);3)在嚴(yán)格條件下與序列表中序列1的自5'末端第1095-1565位脫氧核糖核苷酸雜交且編碼權(quán)利要求1所述蛋白的DNA分子；4)與l)或2)的基因具有90X以上的同源性且編碼權(quán)利要求1所述蛋白的DNA分子。序列表中的序列1由1761個堿基組成，其開放閱讀框架(ORF)為自5'末端第1095-1565位堿基，編碼具有序列表中序列2的氨基酸序列的7^ffiWc蛋白。上述嚴(yán)格條件可為用O.1XSSPE(或0.1XSSC)，0.1XSDS的溶液，在DNA或者RNA雜交實(shí)驗(yàn)中65'C下雜交并洗膜。序列表中的序列1由1761個脫氧核苷酸組成。自5'端第1位至1094位脫氧核苷酸為啟動子區(qū)，自5'端第1095位至1565位脫氧核苷酸為編碼框序列，編碼具有序列表中序列2的氨基酸殘基序列的蛋白質(zhì)。自5'端第1566位至1761位脫氧核苷酸為3'端非翻譯區(qū)序列。序列表中的序列2由156個氨基酸殘基組成，含有兩個結(jié)構(gòu)域，其中N端(序列2的自氨基端第12位至83位氨基酸殘基)編碼MultiproteinBridgingFactor1(MBF1)結(jié)構(gòu)域，C端(序列2的自氨基端第90位至142位氨基酸殘基)編碼螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋(Helix-Turn-Helix—XRE，HTH—XRE)結(jié)構(gòu)域。擴(kuò)增上述&#",化基因全長或其任一片段的引物對也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。含有上述與抗逆性相關(guān)蛋白編碼基因的重組載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系和重組菌也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。其中，上游引物和下游引物之間的距離在50到5000個堿基之間；該引物對中的每一個引物的長度為15到30個堿基。如，引物1:5，-AAGACAGAGGCGAGGAGAAG-3，；引物2:5，-ACCACAAAGCAACCCGAGA-3，。使用7a/^/7c基因構(gòu)建重組表達(dá)載體時，可在其轉(zhuǎn)錄起始核苷酸前加上任何一種增強(qiáng)型、組成型、組織特異型或誘導(dǎo)型啟動子，如花椰菜花葉病毒(CAMV)35S啟動子、泛素(Ubiquitin)基因啟動子(pUbi)等，它們可單獨(dú)使用或與其它的啟動子結(jié)合使用；此外，使用本發(fā)明的基因構(gòu)建表達(dá)載體時，還可使用增強(qiáng)子，包括翻譯增強(qiáng)子或轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子，這些增強(qiáng)子區(qū)域可以是ATG起始密碼子或鄰接區(qū)域起始密碼子等，但必需與編碼序列的閱讀框相同，以保證整個序列的正確翻譯。所述翻譯控制信號和起始密碼子的來源是廣泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻譯起始區(qū)域可以來自轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域或結(jié)構(gòu)基因。為了便于對轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞或植物進(jìn)行鑒定及篩選，可對所用植物表達(dá)載體進(jìn)行加工，如加入在植物中表達(dá)可產(chǎn)生顏色變化的酶或發(fā)光化合物的基因(GUS基因、GFP基因、螢光素酶基因等)、具有抗性的抗生素標(biāo)記物(慶大霉素標(biāo)記物、卡那霉素標(biāo)記物等)或是抗化學(xué)試劑標(biāo)記基因(如抗除莠劑基因)等。從轉(zhuǎn)基因植物的安全性考慮，可不加任何選擇性標(biāo)記基因，直接以逆境篩選轉(zhuǎn)化植株。所述重組表達(dá)載體具體可為在植物表達(dá)載體pYES2的多克隆位點(diǎn)間插入上述與抗逆性相關(guān)蛋白的編碼基因得到的重組表達(dá)載體，如TaMBFlc-pYES2。攜帶有本發(fā)明的與耐熱性相關(guān)蛋白編碼基因7Mffi"F化的植物表達(dá)載體可通過Ti質(zhì)粒、Ri質(zhì)粒、植物病毒載體、直接DNA轉(zhuǎn)化、顯微注射、電導(dǎo)、農(nóng)桿菌介導(dǎo)等常規(guī)生物學(xué)方法轉(zhuǎn)化到植物細(xì)胞或組織中。被轉(zhuǎn)化的植物宿主可以是水稻、小麥、擬南芥、非洲菊、矮牽?；蝰R鈴薯等。本發(fā)明還提供了上述與耐熱性相關(guān)蛋白編碼基因7^ffi^c在制備耐熱重組酵母中的應(yīng)用。利用可以引導(dǎo)外源基因在酵母中表達(dá)的載體，將本發(fā)明的rai^F7c基因?qū)虢湍讣?xì)胞，將7siffi^c基因過表達(dá)，酵母表現(xiàn)為對高溫脅迫的抗性增強(qiáng)。說明7^!^7c是與耐熱性相關(guān)的蛋白。與耐熱相關(guān)蛋白7^i^F7c及其編碼基因?qū)τ谂嘤鼓嫘蕴岣叩淖魑铩⒘植莸刃缕贩N具有重要的理論及實(shí)際意義，可用于農(nóng)牧業(yè)和生態(tài)環(huán)境治理所需的抗性植物品種的培育與鑒定。下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。圖1為7<3#^/7^基因在熱脅迫下的誘導(dǎo)表達(dá)模式。圖2為7^i^尸7c基因在其它非生物脅迫及激素處理下的誘導(dǎo)表達(dá)模式。圖3為7ai^,7c與GFP的融合蛋白在熱脅迫前后的亞細(xì)胞定位結(jié)果。圖4為轉(zhuǎn)化TaMBFlc-pYES2和pYES2的酵母細(xì)胞在熱脅迫條件下的生長狀況。具體實(shí)施例方式下述實(shí)驗(yàn)方法如無特別說明均為常規(guī)方法。實(shí)施例l、7aiffiWc基因的克隆(1)小麥raiffi^c基因序列的電子克隆以AffymetrixGenechipwheatGenomearray中探針號為Ta.12225.1.SI—x—at的序列為基礎(chǔ)序列，在NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)網(wǎng)站上進(jìn)行ORFfinder分析，發(fā)現(xiàn)該序列已包含完整的0RF序列，以此序列為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)基因特異引物。(2)小麥71<3^^7^基因的00酤及非翻譯區(qū)序列克隆根據(jù)電子克隆得到的序列設(shè)計(jì)引物，所用引物對為TaMBFlc-1:5'-AAGACAGAGGCGAGGAGAAG-3，和TaMBFlc-2:5'-ACCACAAAGCAACCCGAGA-3'。實(shí)驗(yàn)材料為普通小麥品種TAM107(TriticumaestivmnL)，即5分鐘，再用蒸餾水沖洗3遍，置于常溫萌動24小時。挑選萌動一致的種子轉(zhuǎn)移至鋪有三層濕潤濾紙的培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中(正常生長條件為白天/晚上，22/18°C，12h/12h，濕度60%)生長10天。將生長十天的幼苗轉(zhuǎn)移至4(TC的培養(yǎng)箱中，處理l個小時后，取葉片迅速置于液氮中，-80。C保存，待用。以上述葉片為材料進(jìn)行RNA提取并反轉(zhuǎn)錄為cDNA作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物經(jīng)過測序驗(yàn)證后，得到7aiffiWc基因的ORF區(qū)段。利用BDGenomeWalkerUniversalKit(購自Clontech公司)得到5'端的啟動子區(qū)域1094bp，全序列信息見序列分析表中的序列l(wèi)，登錄Plantcare(http:〃bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/htm1/)網(wǎng)站對該區(qū)域所包含的順式作用成分進(jìn)行了分析，見表2;r^E^c的ORF序列編碼的蛋白質(zhì)序列如序列表中的序列2，共含有兩個保守的結(jié)構(gòu)域，其中N端(序列2的自氨基端第12位至83位氨基酸殘基)編碼MultiproteinBridgingFactor1(MBF1)結(jié)構(gòu)域，C端(序列2的自氨基端第90位至142位氨基酸殘基)編碼螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋(Helix-Turn-Helix—XRE，HLH—XRE)結(jié)構(gòu)域。并且7^ffi^c基因是一個不含有內(nèi)含子的轉(zhuǎn)錄共激活子。表2T^ffiWc啟動子區(qū)域所包含的順式作用元件及其數(shù)目位點(diǎn)名稱_功能描述_數(shù)目CGTCA-motif茉莉酸甲酯應(yīng)答元件T"TGACG-motif茉莉酸甲酯應(yīng)答元件2HSE熱激元件3MBS干旱誘導(dǎo)的MYB轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)2TCA-element水楊酸應(yīng)答元件1GC-motifLTRmotiflib缺氧特異誘導(dǎo)的元件低溫應(yīng)答元件脫落酸應(yīng)答元件實(shí)施例2、7ai^/^:基因在高溫脅迫下的誘導(dǎo)表達(dá)模式將如上所述在正常條件下生長十天的小麥幼苗進(jìn)行如下的熱脅迫處理(1)直接在4(TC高溫條件處理0.25、0.5、1、2、12和24小時，分別命名為O.25h、0.5h、lh、2h、12h和24h;(2)34。C熱鍛煉3小時后40。C高溫處理0.25、0.5、1和2小時，分別命名為O.25sh、0.5sh、lsh和2sh;(3)34。C熱鍛煉3小時后，正常條件下恢復(fù)生長0、1、2和12小時，分別命名為3s、lsc、2sc和12sc，未進(jìn)行任何高溫處理的材料命名為ck。取處理后的葉片，提取RNA進(jìn)行Northern雜交。用引物對TaMBFlc-1:5'-AAGACAGAGGCGAGGAGAAG-3，和TaMBFlc-3:5'-CGGAGGCATTCTTGTTCGTC-3'擴(kuò)增7MEWc基因的片段并回收，利用Takara公司的探針標(biāo)記試劑盒進(jìn)行探針標(biāo)記，用于Northern雜交。結(jié)果如圖l所示，在正常條件下(ck)7a^SF7c不表達(dá)或者表達(dá)很弱，而熱處理15分鐘(0.25h)便可以誘導(dǎo)它的表達(dá)，且在直接熱處理2小時達(dá)到最高(2h)。直接熱脅迫處理(h系列)比經(jīng)過熱鍛煉后處理(sh系列)上調(diào)明顯，34'C熱鍛煉3小時(3s)可以輕微誘導(dǎo)它的表達(dá)，且一旦恢復(fù)到正常條件(sc)，該基因的表達(dá)即恢復(fù)到正常水平。實(shí)施例3、7^,化基因在其它脅迫下的誘導(dǎo)表達(dá)模式以20%PEG-6000、250mMNaCl、氧化脅迫(100uMH202)處理，以及植物激素ACC(200uM)、ABAU00yM)、MeJA(100uM)分別處理小麥幼苗，并取不同處理時間的小麥葉片，提取RNA進(jìn)行Northern雜交，所用探針以及標(biāo)記方法同上。其中脅迫處理的具體方法為如下高鹽處理在培養(yǎng)瓶中加入NaCl溶液至終濃度為250mM。PEG處理在培養(yǎng)瓶中加入PEG-6000溶液至終濃度為20%(質(zhì)量百分含量)。ABA處理把ABA(分析純，購自Sigma-aldrich)溶解在DMSO中制成10mMjt存液，然后加入到培養(yǎng)瓶中至終濃度為100uM。ACC處理把ACC溶解在水中制成lOmM母液，然后加到培養(yǎng)瓶中至終濃度200uM。MeJA處理吸取一定體積的MeJA(分析純，購自Sigma-aldrich)加入水中制成10mM母液，然后加入到培養(yǎng)瓶中至終濃度100uM。HA處理吸取一定體積的30%的HA(購自北京化工廠)加入水中制成100uM的工作液。在加入上述溶液以后，分別在處理0、0.5、1、6、12小時選取小麥的葉片，迅速置于液氮中，于-8(TC冰箱中保存，待用。其中O小時的樣品為每種處理的對照CK，同時以未處理的小麥葉片(即只生長在水中)，作為對光周期響應(yīng)的對照組CK。Northern結(jié)果如圖2所示，7^ffiWc的表達(dá)受干旱脅迫快速且短暫誘導(dǎo)，在處理30分鐘時即達(dá)到最高，l小時后開始減弱。7^ffi^c可以輕微應(yīng)答氧化脅迫(H202，0.5h)、ABA(lh)和乙烯合成前體ACC(0.5h和lh)。實(shí)施例4、7aiffi^c基因所編碼蛋白在熱脅迫前后的亞細(xì)胞定位為驗(yàn)證7M^/7c基因在細(xì)胞以及高溫脅迫中的作用部位，將7^9尸7c的編碼區(qū)(5'端第1095位至1565位脫氧核苷酸)插入pEGAD(SeanR.Cutler,DavidW.Ehrhardt,JoelS.Griffitts，andChrisR.SomervilleRandomGFP::cDNAfusionsenablevisualizationofsubcellularstructuresincellsofArabidopsisatahighfrequency,PNAS，2000，(97)3718—3723)的35S啟動子和綠色熒光蛋白GFP基因之間得到含有TaMBFlc-GFP融合基因的重組表達(dá)載體TaMBFlc-pEGAD，通過GFP表達(dá)部位確定蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位情況，將上述重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌菌株EHA105，經(jīng)葉盤法將包含有TaMBFlc-pEGAD轉(zhuǎn)入煙草品種NC98，利用激光共聚焦顯微鏡觀察綠色熒光所處的位置。結(jié)果如圖3所示，在正常條件下(圖中A)，可以在細(xì)胞膜和細(xì)胞壁以及氣孔保衛(wèi)細(xì)胞上觀察到熒光，而經(jīng)過37。C高溫處理后(圖中B)，只能在保衛(wèi)細(xì)胞處觀察到熒光。構(gòu)建方法如下以上述葉片的cDNA為模板，利用引物TaMBFlc-6:5'-TACTGGGTACCATGGAAGGAGCAATGCCGACGG-3'和TaMBF1c_7:5，-TACTGGGATCCACCACAAAGCAACCCGAGA-3，，將得到的7k/^尸7c片段插入pYES2(購自Invitrogen公司)的限制型內(nèi)切酶kpnl和BamHI(購自Takara公司)酶切位點(diǎn)之間，得到含有7Mffi^7c編碼區(qū)片段的重組表達(dá)載體TaMBFlc-pYES2。實(shí)施例5、7ki^F化基因的表達(dá)增強(qiáng)真核生物酵母細(xì)胞的抗逆性為了驗(yàn)證7^SWc在真核生物耐熱性中的作用，將其與pYES2載體(購自Invitrogen公司)進(jìn)行連接構(gòu)建了酵母表達(dá)載體TaMBFlc-pYES2。構(gòu)建方法如下以上述葉片的cDNA為模板，利用引物TaMBFlc-6:5'-TACTGGGTACCATGGAAGGAGCAATGCCGACGG-3'和TaMBF1c-7:5'-TACTGGGATCCACCACAAAGCAACCCGAGA-3，，將得到的7^JffiP7c片段插入pYES2(購自Invitrogen公司)的限制型內(nèi)切酶kpnI和BamHI(購自Takara公司)酶切位點(diǎn)之間，得到含有raiffi^c編碼區(qū)片段的重組表達(dá)載體TaMBFlc-pYES2。利用醋酸鋰法制備轉(zhuǎn)化了重組表達(dá)載體TaMBFlc-pYES2的酵母菌株INVScl(購自Invitrogen公司)，作為實(shí)驗(yàn)組。挑選在缺失培養(yǎng)基SD-Ura(MinimalSDBase和-UraDOsupplement均購自Clontech公司)上表現(xiàn)為陽性的克隆，按照Invitrogen公司提供的技術(shù)手冊進(jìn)行基因的誘導(dǎo)表達(dá)20小時后，各取1ml在水浴鍋中分別進(jìn)行30°C、45t:和48"C的高溫脅迫處理l小時，將不同溫度處理后的酵母細(xì)胞分別稀釋l、10、100和1000倍，取20u1點(diǎn)于缺失培養(yǎng)基SD-Ura(Clontech)上，在30。C倒置培養(yǎng)2-3天待出現(xiàn)克隆，觀察并記錄結(jié)果，從而進(jìn)行酵母的耐熱性評價。同時，利用醋酸鋰法制備轉(zhuǎn)空載體(pYES2)的酵母菌株INVScl作為對照組，進(jìn)行與實(shí)驗(yàn)組相同的耐熱脅迫處理。結(jié)果如圖4所示，在正常生長條件下(30°C)，轉(zhuǎn)空載體(pYES2)對照組及轉(zhuǎn)重組表達(dá)載體TaMBFlc-pYES2的酵母的生長趨勢沒有顯著差別；在溫度提高到45"C后，兩者的生長趨勢仍沒有顯著差別；而進(jìn)行1小時的48'C熱脅迫后，轉(zhuǎn)空載體(pYES2)酵母的生長明顯受到抑制，而轉(zhuǎn)重組表達(dá)載體TaMBFlc-pYES2的酵母雖然生長較溫度3(TC、45X:有所抑制，但是與轉(zhuǎn)空載體(pYES2)的對照組相比，還是具有明顯的生長優(yōu)勢。說明轉(zhuǎn)重組表達(dá)載體TaMBFlc-pYES2的酵母比轉(zhuǎn)空載體(pYES2)的酵母具有更高的耐熱性。序列表<110〉中國農(nóng)業(yè)大學(xué)〈120〉耐熱性相關(guān)的蛋白及其編碼基因與應(yīng)用〈160>1<210〉1<211〉1761<212〉DNA<213〉小麥(TriticumaestivumL.)<400〉1actatagggcacgcgtggtcgacggcccgggctggtaaaagcacctgtagcactgaatggcccgttgcaccagatacgtttcattttgctggacatgcagacgtaggcgactacatcacagagctcctcccttcgccgccccgacctcctccctccgctgtgagctcattcgccaacctcatacgactcatcccccctatccgactttcgggatcgactctctgtccgcccccgcgcttctggtcaccttcctacccaaggcctaggccctcgacctcgattcaagcagcaagctagtttgcctgaacatttttcctaaatcaccattcttatgtttgggagtgaatacagtaaatctttttttgccaaggaagtttgat60ctcgtctcgaacctccctcc120tagagtttgaagagtccgtc180cacctgtgattctcaagtga240ccctgagctccacacctccg300tcccgtgccctccgaactcc360ctcgccccgtcaactcctcc420aaacgtaataatctgaaaca480gtacttgctaaattttatct540頁tctttttttgcgggtgaaattttatctttttgtacagaagaagaagactactctctctgt600aaattaatataagagcgtttagatcactaa犯tagtaatctaaacgctcttatattagtt660tatggagggagtacaaatcaacgaattccagtttcgtgccgcgcactgaatttgtttttt720ttaataggaaaggtcacagaa/tttgaatgagtagtgcgtgaccgccaagtaccctctcct780aggtttaccgtggtatccaagtttttagacccatctgcagccgtccgttcccctgaactg840cctacaatcgacggtgcgcaaacaactgacctctctcccagaaccttccagaccacacga900gtgcacgagcgcgttcaggaaccttcccgaaccgcctcccaaccgtcatcgtccacctcc960accgtccacgccctctatatatgcgtccccaccaaacccaatggcacgagaaatgagaaa1020gacagaggcgaggagaaga_aaaaaatctax;aggaaaaacaggggagaggcagagagaaca1080gaagcgaaggagcaatgccgacgggcaggatgagcggcaacatcacgcaggactgggagc1140cggtggtgctgcggcgggcgaagcccaaggcggccgacctcaagtccgccaaggcggtga1200accaggcgctgcggacgggcgcgccggtggagacggtgcgcaaggcggcggcggggacga1260acaagaatgcctccgccgcggccgtggcggcgcccgcgcggaagctggacgagatgacgg1320agcctgcggggctggggcgcgtgggcggcgacgtgcgcgcggccatccagaaggcgcgcg1380tggcgaaaggatggagccaggcggagctggccaagcgcatcaacgagcgggcgcaggtgg1440tgcaggagtacgagagcggcaaggccgtccccgtccaggccgtgctcgccaagatggagc1500gcgccctcgaggtcaagctccgcggcaaggcggttggggcgcccgcgcccgccgggacaa1560agtgatggtccgtggggacatatcctttcctgtgaatttgtgatgaatggtagtaaatca1620gatctgtaaatctcgggttgctttgtggtggatkgggttgtaagtcgtgcaaagkgataa1680atctccatgtgaaatttgatgtcaaatcctaaatcctattgtgagctgatttgcaatttt1740aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa<210〉2〈211〉156<212>PRT<213>小麥(Tritic咖aestivumL.)<400〉2MetProThrGlyArgMetSerGlyAsnlieThrGinAspTrpGluPro151015ValValLeuArgArgAlaLysProLysAlaAlaAspLeuLysSerAla202530LysAlaValAsnGinAlaLeuArgThrGlyAlaProValGluThrVal354045ArgLysAlaAlaAlaGlyThrAsnLysAsnAlaSerAlaAlaAlaVal5055601761AlaAlaProAlaArgLysLeuAspGluMetThrGluProAlaGlyLeu65707580GlyArgValGlyGlyAspValArgAlaAlalieGinLysAlaArgVal859095AlaLysGlyTrpSerGinAlaGluLeuAlaLysArglieAsnGluArg100105110AlaGinValValGinGluTyrGluSerGlyLysAlaValProValGin115120125AlaValLeuAlaLysMetGluArgAlaLeuGluValLysLeuArgGly130135140LysAlaValGlyAlaProAlaProAlaGlyThrLys14515015權(quán)利要求1、一種蛋白，是如下1)或2)的蛋白質(zhì)1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；2)將序列表中序列2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與耐熱性相關(guān)的由1)衍生的蛋白質(zhì)。2、權(quán)利要求l所述蛋白的編碼基因。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的編碼基因，其特征在于所述蛋白的DNA基因?yàn)槿缦?)-4)中任一所述的基因1)其編碼序列是序列表中序列1的自5'末端第1095-1565位脫氧核糖核苷酸；2)其核苷酸序列是序列表中的序列l(wèi);3)在嚴(yán)格條件下與序列表中序列1的自5'末端第1095-1565位脫氧核糖核苷酸雜交且編碼權(quán)利要求1所述蛋白的DNA分子；4)與l)或2)的基因具有90X以上的同源性且編碼權(quán)利要求1所述蛋白的DNA分子。4、含有權(quán)利要求2或3所述基因的重組載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組載體，其特征在于所述重組載體為在pYES2的多克隆位點(diǎn)間插入權(quán)利要求2或3所述基因得到的重組表達(dá)載體。6、擴(kuò)增權(quán)利要求2或3所述基因的全長或其任一片段的引物對。7、權(quán)利要求2或3所述的編碼基因在制備耐熱重組酵母中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種耐熱性相關(guān)的蛋白及其編碼基因。本發(fā)明所提供的耐熱性相關(guān)的蛋白，名稱為TaMBF1c(TriticumaestivumMultiproteinBindingFactorlc)，來源于普通小麥(TriticumaestivumL.)，是如下1)或2)的蛋白質(zhì)1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；2)將序列表中序列2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與耐熱性相關(guān)的由1)衍生的蛋白質(zhì)。耐熱相關(guān)蛋白TaMBF1c及其編碼基因?qū)τ谂嘤鼓嫘蕴岣叩淖魑铩⒘植莸刃缕贩N具有重要的理論及實(shí)際意義，可用于農(nóng)牧業(yè)和生態(tài)環(huán)境治理所需的抗性植物品種的培育與鑒定。文檔編號C12N15/11GK101585871SQ20091008789公開日2009年11月25日申請日期2009年6月25日優(yōu)先權(quán)日2009年6月25日發(fā)明者倪中福,劉志勇,姚穎垠,孫其信,彭惠茹,杜金昆,梁榮奇,秦丹丹,解超杰申請人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)