專利名稱：：重組鼠骨髓瘤細胞及其應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種重組鼠骨髓瘤細胞及其應用。
背景技術(shù)：
：哺乳動物細胞大規(guī)模發(fā)酵是確保抗體藥物能夠批量生產(chǎn)供應臨床使用的基礎(chǔ)，也是現(xiàn)代生物制藥領(lǐng)域中最為關(guān)鍵的技術(shù)。美國食品藥品管理局在2000年1月-2004年12月批準上市的31種生物技術(shù)藥物中，約70%為哺乳動物細胞表達的重組蛋白。目前國際上主要用CHO、SP2/0、NSO等三種細胞系生產(chǎn)重組蛋白治療藥物。例如治療淋巴瘤的Rituximab，治療類風濕性關(guān)節(jié)炎的Infliximab,和預防急性器官排斥的Daclizumab分別是用CH0，NS0和SP2/0表達的。目前我國批準上市的由哺乳動物細胞表達得到的藥物產(chǎn)品很少，只有促紅細胞生成素(EP0)、CH0基因工程乙肝疫苗、以及最近批準上市的治療性抗體藥物益賽普(有效成分相當于美國食品藥品管理局批準的Enbrel)和泰欣生(有效成分相當于美國食品藥品管理局批準的Erbitux)等少數(shù)幾種生物技術(shù)藥物。主要是由于哺乳動物細胞表達的技術(shù)復雜和控制要求高，而這已成為我國生物技術(shù)藥物產(chǎn)業(yè)化最難跨越的"門檻"。目前研發(fā)主要集中在CHO細胞上，而關(guān)于NSO細胞的研究很少。NS0細胞是小鼠衆(zhòng)細胞瘤細胞，與CHO細胞最大的區(qū)別在于NSO細胞不需要基因擴增的過程就可以得到高表達細胞株。這一特點不但可以節(jié)約6個月的工程細胞株開發(fā)時間，而且可以大大簡化藥物申報時對細胞株穩(wěn)定性的鑒定工作。NSO細胞是懸浮培養(yǎng)的細胞，不需要從貼壁到懸浮的馴化過程，這也是其相對于CHO細胞的優(yōu)勢之一。因此，加強對NS0細胞的研究，從而實現(xiàn)用NSO細胞株大規(guī)模生產(chǎn)藥物產(chǎn)品，將會對生物技術(shù)藥物產(chǎn)業(yè)化產(chǎn)生重要意義。在細胞培養(yǎng)過程中，L一谷氨酰胺是很重要的，脫掉氨基后，可作為培養(yǎng)細胞的能量來源，參與蛋白質(zhì)的合成與核酸代謝。由于NSO細胞中谷氨酰胺合成酶的活性低，所以需要在培養(yǎng)基中提供外源谷氨酰胺才能生長。但L一谷氨酰胺在溶液中不穩(wěn)定，在高溫下會分解成吡咯烷酮和羧酸，使得培養(yǎng)基的pH值難以控制，而培養(yǎng)基酸堿度的微小變化都將引起細胞存活率的下降；另外還有一些毒降解產(chǎn)物如NH"會不可逆轉(zhuǎn)地損壞細胞壁。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個目的是提供一種谷氨酰胺合成酶編碼基因的表達盒。3本發(fā)明所提供的谷氨酰胺合成酶編碼基因的表達盒，由上游至下游依次為序列表中序列1所示的CMV啟動子序列、谷氨酰胺合成酶的編碼基因序列、序列表中序列2所示的SV40增強子序列。上述表達盒中，所述谷氨酰胺合成酶的編碼基因的核苷酸序列具體可如序列表中序列3所示。本發(fā)明的另一個目的是提供一種能在無谷氨酰胺培養(yǎng)基中生長的重組鼠骨髓瘤細胞。本發(fā)明所提供的重組鼠骨髓瘤細胞，是將上述任一所述表達盒導入鼠骨髓瘤細胞中得到的。所述鼠骨髓瘤細胞具體可為鼠骨髓瘤細胞NSO。所述重組鼠骨髓瘤細胞具體可為鼠骨髓瘤細胞NSONS0-GS1，其保藏號為CGMCCNo.2128。該細胞株已于2007年08月06日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址北京市朝陽區(qū)大屯路，中國科學院微生物研究所，郵編100101)，保藏號為CGMCCNo.2128。本發(fā)明的另一個目的是提供一種培養(yǎng)上述能在無谷氨酰胺培養(yǎng)基中生長的重組鼠骨髓瘤細胞的方法。本發(fā)明所提供的培養(yǎng)能在無谷氨酰胺培養(yǎng)基中生長的重組鼠骨髓瘤細胞的方法，是將所述重組鼠骨髓瘤細胞接種于含8-10%(體積百分含量)血清、pH值為7.4-7.6的、無谷氨酰胺的RPMI1640培養(yǎng)基，在37士0.5。C條件下培養(yǎng)。能在無谷氨酰胺培養(yǎng)基中生長的重組鼠骨髓瘤細胞在生產(chǎn)外源蛋白中的應用也屬于本發(fā)明的保護范圍。本發(fā)明的能在無谷氨酰胺培養(yǎng)基中生長的重組鼠骨髓瘤細胞，在無谷氨酰胺培養(yǎng)基中的培養(yǎng)效率高，細胞密度可達106個/ml,培養(yǎng)得到的NS0細胞能表達目的外源蛋白，且表達能力強，可達12-18pg/cell/24h。用本發(fā)明的能在無谷氨酰胺培養(yǎng)基中生長的重組鼠骨髓瘤細胞表達外源蛋白，既能保證細胞培養(yǎng)效率和表達效率，又可減輕谷氨酰胺的分解給細胞帶來的傷害，進而提高生物制品成品率和利潤率。同時本發(fā)明的細胞制備方法，又節(jié)省了成本。這種能在無谷氨酰胺培養(yǎng)基中生長的重組鼠骨髓瘤細胞及其制備方法在生物制藥領(lǐng)域?qū)袕V闊的應用前景。圖1為載體PCI-CSP的圖譜。圖2為載體PCI-GS-CSP的圖譜。圖3為載體PCI-gpt的圖譜。具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明均為常規(guī)方法。4下述實施例中所用的試劑如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。實施例1、制備可在無谷氨酰胺培養(yǎng)基中生長的重組鼠骨髓瘤細胞一、構(gòu)建谷氨酰胺表達載體PCI-GS-CSP:PCI-CSP質(zhì)粒的構(gòu)建所述PCI-CSP是在pCI-neo(PromegaCat.ttE1841)基礎(chǔ)上構(gòu)建的。具體步驟如下以pCI-neo為模板，PCR擴增CMVEnhancer/promoter序列，5，禾n3，端分別帶有BglII和Xbal-Xhol位點(Fl)(引物序列為GGCTCGACAGATCTTCAATATTGGCCATTAGCCATATTATTCA、CTCGAGTCTAGAGATCTGACGGTTCACTAAACGAGCTCT)，擴增得到的CMVEnhancer/promot,er序列如序列表中序列1所示；以pCI-neo為模板，PCR擴增SV40latepolyA至SV40enhancer/earlypromoter序列，5，和3，端分別帶有Xbal-Xhol和Hindlll-Sail位點(F2)(弓I物序列為CAGATCTCTAGACTCGAGCAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGG、GTCGACAAGCTTTTTGCAAAAGCCTAGGCCT)，擴增得到的SV40latepolyA至SV40enhancer/earlypromoter序列如序列表中序列2所示；利用以上Fl和F2片段為模板進行PCR擴增，將兩個片段連接成一個片段(F3)(引物序列為GGCTCGACAGATCTTCAATATTGGCCATTAGCCATATTATTCA、GATATTTTATTGTCGACAAGCTTTTTGCAAAAGCCTAGGCCT)。隨后利用兩條互補弓|物褪火方法合成syntheticpoly(A)序列，5，和3'端分別帶有Hindlll-Sall和BamHI位點(F4);兩條互補引物為混和后，煮沸5分鐘，自然降溫至室溫。以F3和F4片段為模板進行PCR擴增(引物序列為GGCTCGACAGATCTTCAATATTGGCCATTAGCCATATTATTCA，GGATCCCACACAAAAAACCAACACACAGATG),將兩個片段連接成一個片段(F5)。用BglII和BamHI酶切F5片段，連接到BglII和BamHI酶切后的pCI-neo載體上，完成PCI-CSP構(gòu)建。物理圖譜見圖1。從離體的人外周血巾分離外周血單個核細胞(PBMC)，提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄，以反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板，PCR擴增人谷氨酰胺合成酶基因(GS)，擴增引物為PCI-glu-U:5AGATCTGCTAGCATGACCACCTCAGCAAGTTCCCA3PCI-glu-L:5TCATGTCTGCTCGAGTCAATTTTTGTACTGGAAGGGCTCAT3將該谷氨酰胺合成酶基因片段以Xbal/Xhol酶切，純化后克隆進PCI-CSP質(zhì)粒的Xbal/XhoI酶切位點，得到重組質(zhì)粒表達載體PCI-GS-CSP。物理圖譜見圖2。重組質(zhì)粒PCI-GS-CSP中含有人谷氨酰胺合成酶基因，其核苷酸序列如序列表中序列3所示。二、電轉(zhuǎn)NS0細胞大量提取質(zhì)粒，用BglII、HindIII雙酶切重組質(zhì)粒PCI-GS-CSP，然后再用BamHI繼續(xù)酶切，得到3.lkb、2.0kb、0.5kb片段，乙醇沉淀，將3.lkb的含谷氨酰胺合成酶基因的片段電轉(zhuǎn)入鼠骨髓瘤細胞NSO細胞(TheEuropeanCollectionofAnimalCellCulture,ECACC)。電轉(zhuǎn)條件為將107個細胞置于0.4cm電轉(zhuǎn)杯，3uFD,1500瓦電壓。三、電轉(zhuǎn)后NSO細胞的培養(yǎng)及保存電轉(zhuǎn)后細胞重懸于20mlpH7.4、含終濃度10%(體積百分含量)胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基(表l〉，然后將細胞懸液種入兩塊96孔板，在37。C，培養(yǎng)24小時后，吸出培養(yǎng)基，加入pH7.4、含終濃度1(F。胎牛血清的無谷氨酰胺RPMI1640培養(yǎng)基，200ul/孔，培養(yǎng)4周后，挑選5株在該無谷氨酰胺培養(yǎng)液中生長快的克隆，移至24孔板，繼續(xù)用該無谷氨酰胺培養(yǎng)液培養(yǎng)。當細胞培養(yǎng)于五個10cm培養(yǎng)皿，擴增達5xl07個細胞時，將其中的一株(名稱為NS0-GS1)保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，其保藏編號為CGMCCNo.2128，保藏日期是2007年8月6曰。將鼠骨髓瘤細胞NS0-GS1CGMCCNo.2128置于含終濃度10%胎牛血清無谷氨酰胺RPMI1640培養(yǎng)基(pH為7.4)中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37°C，5%CO"每72小時傳代培養(yǎng)一次。三次重復實驗的結(jié)果表明，培養(yǎng)細胞密度高達(1±0.2)xl(f個/ml。表1RPMI1640培養(yǎng)基的組成序號化合物名稱含量(mg/L)序號化合物名稱含量(mg/U1L-精氨酸鹽酸鹽240.0021硝酸鈣69.502L-天門冬酰胺-水物56.8022硫酸鎂48,803L-天門冬氨酸20.0023磷酸二氫鈉677.004L-半胱氨酸鹽酸鹽-水物72.9024氯化鉀概005L-谷氨酸20.0025氯化鈉6000.006甘氨酸10.0026葡萄糖2000.。07L-組氨酸鹽酸鹽-水物20.3027谷胱甘肽1.008L-羥脯氨酸20.0028酚紅5.006<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例2、用鼠骨髓瘤細胞NS0-GS1CGMCCNo.2128表達人TNF-alpha可溶性受體將編碼人TNF-alpha二型受體胞外段的cDNA序列與編碼人免疫球蛋白IgGlFc段的cDNA序列通過PCR構(gòu)建成重組基因(TNFR-Fc)(序列表中序列4所示)；將TNFR-Fc插入到有選擇性標記(鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，gpt)和基因表達調(diào)控區(qū)(CMV啟動子，終止子)的表達載體pCI-gpt的Xbal和Xhol位點，得到該重組蛋白表達載體pCI-gpt-TNFR-Fc。用限制性內(nèi)切酶Fspl將pCI-gpt-TNFR-Fc線性化，用電轉(zhuǎn)染的方法將其導入到NSO-GSl(CGMCCNo.2128)細胞中。用霉酚酸酯(Mycophenolate)在含黃嘌呤(Xanthine)的培養(yǎng)基中篩選轉(zhuǎn)染細胞，獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞株。將轉(zhuǎn)染成功的細胞在含終濃度10%(體積百分含量)胎牛血清的、pH值為7.4的無谷氨酰胺RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)三天，用ELISA鑒定TNFR-Fc的分泌，ELISA板上包被goatantihuIgG(H+L)(KPL公司，貨號01-10-06)，一抗為轉(zhuǎn)染后的細胞上清，二抗為HRP-goatanti-HuIgG(r)(KPL公司，貨號074-1002)。三次重復實驗的結(jié)果表明細胞密度可達(1±0.2)xl()6個/m1,目的外源蛋白的表達量可達12-18pg/cell/24h。pCI-gpt的構(gòu)建步驟用限制性內(nèi)切酶HindIII和Xhol酶切序列表中序列5所示的gptDNA片段，連接到HindlII和SalI酶切后的pCI-CSP載體上，得到重組載體PCI-gpt?！?10〉中國科學院生物物理研究所〈120〉重組鼠骨髓瘤細胞及其應用〈160>5<210>1<211〉750<212〉腿<213〉人工序列<220>〈223〉<400>1tcaatattggttggccattgaatatgaccggtcsttsgttgcctggctgaagt33cgccaccacttggcacggtaaatgggcagtacatccaatgggcgtcaatgggagtcgatcgcccgagcagagctccc3ttsgcc3C3tacgttgtccatgttggccstsgcccatccgcccsacgatagggacttgt3C3tcs3gcccgcctggctacgtattagggatagcggtttgttttggcccccgttgacgtttagtgaa七3tt3ttC3t3tCt3t3tC33ttgsttsttatatggagtt3cccccgccctccattgacgtgt3tc3tststtatgccc3tcatcgctatttgactcscggcsaatgggcccgtcagatctggttatatataatatgtacgactagttatccgcgttacasttgscgtc3tcaatgggtggccaagtccggtacatgacctaccatggtggggatttccaacgggactttggtaggcgtggcataaatcaatttatattgt33tsgt33ttaacttacggataatgacgtgagtatttacccccctattgttacgggsctatgcggttttagtctccaccCC3333tgtCtacggtgggaatattggct3gctcstgtcccwttscgggtsaatggcccatgttcccatggtasactgc3cgtc33tgattcctacttgggcagt3C3cccsttgscgtgtaacaactgggtctatat3750601201802403〇0360420480540600660720<210〉2〈211〉1252〈212〉DNA〈213〉人工序列<220〉〈223〉〈■〉2cagacatgatsatgctttatgggsggttttttgtgswttttaasgcsaggatgagtttgtgtgatgctaasttgcattct3333CCtCtg3C333CC3Cttgcttt3ttattttatgttacaaatgtggaactagaatgtgtsaccatttcaggttcagat33gctgcaggggsgstgttaaggstcga60120180240tccgggctggcctgaatggcacgcgcagcgccttcctttcttsgggttccggttcacgta3cgttctttstattcttttgggtattttctaccatggcctctccccagcagcccct33cttggctgactaccsg33gt3gcgtsst3gcgg33tgg3cgctg3ccgct3ctcgccacgttgatttagtgcgtgggccatcatagtggactatttatasggMtttascgcccttscgcsttggaatgtgtcasagcatgcccgcccstcc3tttttttt3tgsggaggctasgaggcccggccctgtagcacttgccagccgccggctttttt3cggc3Cgccctgatagcttgttccaagsttttgccggwbtttsscctgtgcggt3ctgsaagagggtcagttagg3tCtC33tt3tgcsaagcatcgcccctasctttatgcagatttttggaggcaccgatcgcggcgcatt33gccctagcgcccccgtcaagctcgaccccaacggtttttcstttcggccttttcacaccgaacttggttagtgtggaasggtcagcaaccgcatctcaattccgcccagtggccgaggcccctaggctttCCttCCC33CgcgcggcgggccgctcctttctctaaatcggccctttgacC3CtC33CCCattggttaaacgctt3C33tcatscgcggaggt3ccttcttccccsggctaggtgtggaataigtc3gc33tccgcccattgcctcggcctagttgcgcsgtgtggtggttcgctttcttcggggctcccttt3gggtg3tgttggsgtcctatctcggtcttcctgatgctctgcgca_gcg5ggcgga3accccsgcaggagtccccsggccdtsgtcccctccgccccactgagctstttt30036042048054060066072078084090096010201080114012001252<210〉3〈211〉1122〈212〉DNA〈213〉人工序列<220〉〈223〉〈400〉3atgaccacctcctcagggtgcgctgcaagaS3tttcgstgcctgctgccsgttttcaagtatggacatgggggacagatgtattactgtgcgggcctgctcsgtgggaatgcccgtttca3sgccc3ttcstgcgggaggcsccsgtsccsctggsttccgccagcat3Ccgcccctctgctcs3tgai33agaaagtccacccggaccctgctctsgtsctgtttcgggstgagcaaccaggcaccccttgtgtgggagctgtatgctggttcagattggtcttgcatcgctgggaactgagaatggtctacatccgtgc3tgas3cctcgcsttccccgccaactgcgaccggcgatgaCC3Ctt333tggccatgtatggacagtgagtttscsgtctccccttccgtgcctgcagsggcacccctggtggttggcctaccttgtgaatgtgtgtgasgaatggtgcagaagtacatcctstgstcccC33C3tC33Cgactgttggcccccttttcggcccttccsgaaaggcatcaatctggatcgcccaagtgtggagggttccaaaggsccctaaccaatttgatttggcatggtccaacggcttatg.gcaggggcggggactagactttggagggctgccatagaggaggccaaagggsggccgacttttctggtgacagaagtac3aaa3ttagcaggtgtaatggtactggtggaagagttacagtgacatacasgctggtggcacacctgtcccagggccacatcgtggaatgccgaggttgggagatcstgat3gc33cccascttcsgttgagsaacttggacaatgcctggtgtagcagggttacttccctcatccgcatgtccctgagaaggactggcctgagtgggtatctcgtggttatgtgaataaacggat3taccctcatgccagggtccaggcccsttscC3tgcctgcctctctgggtgctttgatcctcaccsaggccccgacgtctacastcgtagctgsagatcgtcacgtgtctt60120180240300360420480540600660720780840900960102010801122〈210〉4〈211〉1488〈212〉DNA<213〉人工序列9〈220〉〈223〉<400〉43tggcgcccgcacgccttgccggctcsgagagcacatacaagctctgaccaggcccggctcgcssgtgcctgcaagccctCCCC3CC3g3acgtccacgttccacacgatttcctgctccccagttggaggaactcctgg3tctcccggsgtcsagttcsgaggagcagttggctgaatgccatcccgggt3tcccsgcgaccscgcctcC3C33CC3CttcgccgtctgccgcccsggtaatactatgaaagtcttctgcccagctctgaggtggsaacggtactgcgcgcccgggcttgtgccccgggtctgtaacgtcccccscccgCCC33C3C3Ccaatgggcccggggsccgtccccctgsggtactggtacgttctccs33gcatgagctgacacatcgccgtccgtgctggaggtggcagcaggccgcgctgggcatttacaccagacagcttaccaagsccgsactgggtttcaagcctgcgctgsgcaagcggcgtggccgscgttctccggtggccatcgsgtstggccgcagccsactC3gcccccc3agtcttcctccacatgcgtgggacggcgtggtaccgtgtgcssgtgcasgcaaagggcagcaagaaccsgggagtgggsgctccgacggcggggaacgtcgsgcctctccgccgtcggacccctscgccccagatgtgcttcggacaccgcccgagtgctactcgggaaccaggsggggt3gaccaggasaacacgacttcctgggaatgccsggggcsgccag33ccc3gctgaagggs3ctcac3C3tttCCCCCC33gtggtcgacggaggtgcstagtcsgcgtccgtctccs3C3ccccgagaacgtcagcctgaagcaatgggctccttcttccttctcatgctctgtctccggtggagctctgcggagcccgggcagcaaatgtgtgtgsctctgagctgtggagaaccgcatgccggctgtgctgs33C3tccatccscggacaagcatggatacscttsccgcactgctccgcactggcgagcccaccgtgtgsgccscgaatgccaagactc3ccgtcctssgccctccccscsggtgt3cctgcctggt3gccgg3g33tct3csgc33ccgtgatgcaggctgcggcggagcscatgcctcgccgggcctgtgsggscctcccgctgtctgcacctgccgcgccgctgagacgtggtgtatttgcsggtgcagtctgcccsgccagtgaagcacctcccttcgctcttcccagcscctcaccctcatgagsccctgsgasagccgcgggcaccaggacagccccc3tccaccctgccccsaaggcttcgctcaccgtgtgagggtctg60120180240300360420480540600660720780840900960102〇10801140120012601320138014401488〈210〉5〈211〉459〈212〉DNA<213〉人工序列〈220〉〈223〉〈400〉5atgagcgaaasatacatcgtcacctgggacatgttgcagatccatgcacgtaaactcgca60agccgactgatgccttctgaacaatggaaaggcattattgccgtaagccgtggcggtctg120gtaccgggtgcgttactggcgcgtgaactgggtattcgtcatgtcgataccgtttgtatt180tccagctscgatcacgacaaccagcgcgagcttsaagtgctgaaacgcgcagssggcgst240ggcgaaggcttcatcgttattg3tgacctggtggataccggtggtsctgcggttgcgatt300cgtgaaatgtatccaaaagcgcactttgtcaccatcttcgcaaaaccggctggtcgtccg360ctggttgatgactatgttgttgatatcccgcaagatacctggattgaacagccgtgggst420atgggcgtcgtattcgtcccgccaatctccggtcgctaa459權(quán)利要求1、谷氨酰胺合成酶編碼基因的表達盒，由上游至下游依次為序列表中序列1所示的CMV啟動子序列、谷氨酰胺合成酶的編碼基因序列、序列表中序列2所示的SV40增強子序列。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的表達盒，其特征在于所述谷氨酰胺合成酶的編碼基因的核苷酸序列如序列表中序列3所示。3、一種重組鼠骨髓瘤細胞，是將權(quán)利要求1或2所述的表達盒導入鼠骨髓瘤細胞中得到的。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組鼠骨髓瘤細胞，其特征在于所述鼠骨髓瘤細胞為鼠骨髓瘤細胞NSO。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組鼠骨髓瘤細胞，其特征在于所述重組鼠骨髓瘤細胞為鼠骨髓瘤細胞NSONS0-GS1，其保藏號為CGMCCNo.2128。6、一種培養(yǎng)權(quán)利要求3-5中任一所述重組鼠骨髓瘤細胞的方法，是將所述重組鼠骨髓瘤細胞接種于含8-10%(體積百分含量)血清、pH值為7.4-7.6無谷氨酰胺的RPMI1640培養(yǎng)基，在37±0.5。C條件下培養(yǎng)。7、權(quán)利要求3-5中任一所述重組鼠骨髓瘤細胞在生產(chǎn)外源蛋白中的應用。全文摘要本發(fā)明公開了一種重組鼠骨髓瘤細胞及其應用。該重組鼠骨髓瘤細胞是NSO-GS1，其保藏號為CGMCCNo.2128。本發(fā)明的能在無谷氨酰胺培養(yǎng)基中生長的鼠骨髓瘤細胞NSO，在無谷氨酰胺培養(yǎng)基中的培養(yǎng)效率高，細胞密度可達10⁶個/ml，培養(yǎng)得到的NSO細胞能表達目的外源蛋白，且表達能力強，可達12-18pg/cell/24h。用本發(fā)明的能在無谷氨酰胺培養(yǎng)基中生長的鼠骨髓瘤細胞NSO表達外源蛋白，既能保證細胞培養(yǎng)效率和表達效率，又可減輕谷氨酰胺的分解給細胞帶來的傷害，進而提高生物制品成品率和利潤率。同時本發(fā)明的細胞制備方法，又節(jié)省了成本。這種能在無谷氨酰胺培養(yǎng)基中生長的鼠骨髓瘤細胞NSO及其制備方法在生物制藥領(lǐng)域?qū)袕V闊的應用前景。文檔編號C12N15/85GK101613716SQ200910090070公開日2009年12月30日申請日期2009年7月27日優(yōu)先權(quán)日2009年7月27日發(fā)明者捷唐,朱衛(wèi)彬,娜李,賈俊英申請人:中國科學院生物物理研究所