專利名稱：利用地衣芽孢桿菌制備生物絮凝劑的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物絮凝劑，尤其是涉及一種利用地衣芽孢桿菌制備生物絮凝劑的方法。
背景技術(shù)：
生物絮凝劑是一類由微生物產(chǎn)生的可使液體中不易降解的固體懸浮顆粒、菌體細(xì)胞及膠 體粒子等凝集、沉淀的特殊高分子代謝產(chǎn)物，主要含有蛋白、粘多糖、纖維素和DNA等高
分子化合物。生物絮凝劑是利用生物技術(shù)，通過微生物發(fā)酵、分離提取而得到的一種新型、 高效、廉價(jià)的水處理劑(陳元彩，肖錦.天然有機(jī)高分子絮凝劑研究與應(yīng)用，工業(yè)水處理，1999， 19 (4): 11-13)。與傳統(tǒng)的無機(jī)和有機(jī)合成高分子絮凝劑相比，生物絮凝劑具有許多獨(dú)特的 性質(zhì)和優(yōu)點(diǎn)①無毒無害，安全性高；②易被微生物降解，無二次污染；③具有很強(qiáng)的除濁 和脫色性能；④適用范圍廣；⑤易于固液分離，形成沉淀物少；⑥有些生物絮凝劑還具有pH 和熱穩(wěn)定性強(qiáng)，用量小的特點(diǎn)(Takagi H， Kadowaki K. Poly-galactosamine produced by a microorganism. Nat Technol. 1985a,49(3): 121 -128)。
隨著工業(yè)和科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，無機(jī)和有機(jī)高分子絮凝劑的生產(chǎn)和應(yīng)用在取得長足進(jìn)步的 同時(shí)，其使用過程中的不安全性和給環(huán)境造成的二次污染也越來越引起人們的重視。如無機(jī) 絮凝劑在實(shí)際應(yīng)用中易給被處理液帶入大量無機(jī)離子，增加了脫鹽工序，過量的無機(jī)離子不 僅影響產(chǎn)品的風(fēng)味、口感，而且不利于人的健康，尤其是A產(chǎn)的攝入，與目前日益增多的老 年癡呆癥的引發(fā)有直接關(guān)系；鐵鹽類絮凝劑不僅對(duì)所用設(shè)備具有強(qiáng)腐蝕性，而且容易殘留鐵 離子，使被處理液帶有顏色，影響水質(zhì)；當(dāng)處理含有較多硫化物的工業(yè)廢水(如紡織印染廢 水，石油工業(yè)廢水，酸法造紙廢水等)時(shí)，由于F^+會(huì)被還原為Fe2+，同時(shí)生成膠體狀態(tài)的 FeS和Fe2S3的混合物，很難形成絮凝沉淀。
有機(jī)合成高分子絮凝劑丙烯酰胺多聚體雖然本身沒有任何毒性，但是其難降解性卻易造 成二次污染，而且聚合單體丙烯酰胺的殘留也是一個(gè)令人十分擔(dān)憂的問題，它不僅具有強(qiáng)烈 的神經(jīng)毒性，而且是強(qiáng)致癌物，現(xiàn)在許多國家和領(lǐng)域已禁止或限量使用此類絮凝劑，如美國 批準(zhǔn)使用的聚丙烯酰胺Separum Nplo最大容許濃度為1 mg/mL;英國規(guī)定PAM的投加劑量 平均不得超過0.5 mg/mL，最大投加劑量不得超過1 mg/mL。
天然高分子絮凝劑作為一類較新的水處理劑，是利用蛋白質(zhì)、多聚糖、木質(zhì)素、幾丁質(zhì)等生物體分泌的天然有機(jī)高分子，通過化學(xué)改性制成。由于天然有機(jī)高分子物質(zhì)具有無毒， 能安全降解的特點(diǎn)，所以曾一度引起重視，但天然絮凝劑較弱的絮凝活性卻限制了其進(jìn)一步 的推廣應(yīng)用，致使多年來在此領(lǐng)域能真正大規(guī)模用于工業(yè)生產(chǎn)的種類并不多。
目前己有一些關(guān)于生物絮凝劑產(chǎn)生菌的報(bào)道，涉及到細(xì)菌、真菌和藻類等。1984年，F(xiàn)attom A.等(Ali Fattom, Moshe Shilo. /V or附/c^'ww J隱l bioflocculant: production and activity.Archives of Microbiology, 1984,139(4):421-426)利用從排水渠內(nèi)獲得的絲狀藻青菌/Vwww'^ww ,7研制出 對(duì)斑脫土有良好絮凝效果的高分子生物絮凝劑。1986年，Kurane等(Kur加e R， Toeda K, Takeda
Agric Biol Chem， 1986,50:2309-2313)研究活性污泥法處理酞酚酯廢水時(shí)發(fā)現(xiàn)紅平紅球菌 J / wfococcw《e7Arap0fc，用特定的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件研制出了微生物絮凝劑NOC-1 ，該產(chǎn)品 可用于畜產(chǎn)廢水處理、膨脹污泥的沉降、瓦廠廢水及紙漿廢水處理。Nakamura等(NakamuraJ， Miyashiro S， Hirose Y. Purification and chemical analysis of microbial cell flocculant produced by ^y/ e^///^ w/"e AJ7002. Agric Biol Chem， 1976,40:619冒624)又用醬油曲霉^5^《/〃附ra/ae制 備出了生物絮凝劑AJ7002。Takagi(Takagi H, Kadowaki K. Purification and chemical properties of a flocculant produced by PaecZ/o/^cey. Agric Biol Chem， 1985, 49(11):3159-3164)利用擬青霉菌 尸^d/o附y(tǒng)c" /-7研制出生物絮凝劑PF101 。近年來國內(nèi)研究者也發(fā)現(xiàn)了一些能產(chǎn)生絮凝劑的 菌株。陸茂林等(陸茂林，施大林，王蕾，陳金林.微生物絮凝劑產(chǎn)生菌的篩選和發(fā)酵條件研究. 工業(yè)微生物，1997,27(2):25-28)從土壤和污泥中篩選出兩株活性較高的諾卡氏菌，并對(duì)其適宜 培養(yǎng)基、培養(yǎng)時(shí)間和培養(yǎng)液pH變化與絮凝活性之間的關(guān)系進(jìn)行了研究；宮小燕等(宮小燕， 王競，周集體.絮凝劑產(chǎn)生菌的篩選及其培養(yǎng)條件優(yōu).環(huán)境科學(xué)研究，1999， 12 (4): 9-ll)從 污水處理廠活性污泥中分離篩選到1株具有穩(wěn)定絮凝性狀的菌株，經(jīng)初步鑒定為假單胞菌 /^wMowomww.GA^-/,對(duì)絮凝活性條件進(jìn)行了初步研究；何寧等(何寧，李寅，陳堅(jiān).新型 生物絮凝劑REA-ll的代謝模型建立與代謝網(wǎng)絡(luò)分析.化工學(xué)報(bào)，2005， 56 (4): 687-694)研 究了谷氨酸棒桿菌Cw7ne6a"m'訓(xùn)g/Wfl附/c歸產(chǎn)生新型蛋白聚糖生物絮凝劑REA-ll的代謝 過程。2001年，Shih等(I丄.Shil, YT.Van, L.C.Yeh， H.G丄in, Y.N.Chang. Production of a biopolymer flocculant from 5ac/〃w /fc/ ewzyj nw'j and its flocculation properties. Bioresource Technology 2001,78: 267-272)利用谷氨酸、檸檬酸和甘油作為發(fā)酵培養(yǎng)基主要組分培養(yǎng) /k^m/ora^ CCRC 12826合成一種聚谷氨酸類生物絮凝劑，表現(xiàn)出較高的絮凝活性， 可望在廢水、飲用水以及食品發(fā)酵工業(yè)下游過程得到推廣應(yīng)用。
生物絮凝劑作為一類高效安全絮凝劑，在人們亟待尋求一種新型絮凝劑代替?zhèn)鹘y(tǒng)絮凝劑的今天，已得到了諸多研究者的重視和認(rèn)可，它終將取代或部分取代合成絮凝劑是大勢(shì)所趨。 因此，開發(fā)一種安全無毒、絮凝活性高、無二次污染、成本低廉、產(chǎn)量高的新型絮凝劑對(duì)物 質(zhì)產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝改進(jìn)、人類的健康和環(huán)境保護(hù)都有很重要的現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)目前微生物絮凝劑生產(chǎn)所存在的原料成本高、發(fā)酵周期長、絮凝 效率低等問題，提供一種具有較高絮凝活性、原料成本低、工業(yè)應(yīng)用潛力較大的利用地衣芽 孢桿菌制備生物絮凝劑的方法。
本發(fā)明采用的微生物為地衣芽孢桿菌(5"c 7/w/^/iem/w7m》，該微生物己于2009年01月 14日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏中心登記入冊(cè)編號(hào)為 CGMCCNo.2876。
地衣芽孢桿菌(萬acz7/^ //c/ em/w附的的篩選及鑒定采用以下方法
從實(shí)驗(yàn)室染菌培養(yǎng)基中，分離得到一株具有高絮凝活性的菌株。經(jīng)生理生化和16SrDNA 鑒定為地衣芽孢桿菌(5drc/腸//cAe"一/mX)。
篩選培養(yǎng)基(g/L):葡萄糖5 10，酵母膏1 3，尿素1 3， KH2PO40.1 0.5， K2HP04 0.1 0.5， NaC10.1 0.5， MgS04'7H20 0.2 0.5，蒸餾水，pH7.2 8.0。
斜面培養(yǎng)基(g/L):酵母膏1 3，牛肉膏1 3，胰蛋白胨2 7，葡萄糖10 20， FeS04 微量，瓊脂15 20，蒸餾水，pH7.2 7.5。
發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L):糖蜜7 12，酵母膏1 3，尿素1 3， KH2PO40.1 0.3， K2HPO40.1 0.3， NaC10.1 0.3， MgS04.7H20 0.2 0.5，蒸餾水，pH7.2 8.0。
選擇性培養(yǎng)基制作平板時(shí)加入1.5% 2%瓊脂。
初篩方法用篩選培養(yǎng)基制作平板，將樣品稀釋涂布，37'C培養(yǎng)16 20h，挑取生長快、 透明圈大且有粘性的菌落轉(zhuǎn)接于固體斜面培養(yǎng)基上，37'C培養(yǎng)16 20h后，4"C保存。
復(fù)篩方法從斜面上挑取菌苔接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，于37'C， 150-200 r/min培養(yǎng)1-2 d，測(cè) 定發(fā)酵液絮凝活性，挑選絮凝活性高的菌株。
菌種特征
菌落較大、透明、粘性很強(qiáng)；
孢子萌發(fā)時(shí)，營養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生的位置從赤道到頂端各種情況都有，孢子殼不是多處破裂， 也不迅速消解；
許多菌株在含有足夠的鐵水化合物培養(yǎng)基上形成紅色素，老培養(yǎng)物呈褐色； 大多數(shù)菌株精氨酸水解酶呈陽性。
616S rDNA測(cè)定提取菌株基因組，根據(jù)細(xì)菌通用引物對(duì)基因組進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得 1500bp左右的基因片段，測(cè)定堿基序列并做系統(tǒng)發(fā)育樹。 本發(fā)明的具體操作步驟如下-
1) 生物絮凝劑的發(fā)酵合成
將新鮮斜面上的菌苔轉(zhuǎn)接至種子培養(yǎng)基培養(yǎng)后，轉(zhuǎn)接至發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)，得生物絮凝劑 發(fā)酵液；
2) 生物絮凝劑的制備
將生物絮凝劑發(fā)酵液第一次離心，除去沉淀，收集上清液，向上清液中加入乙醇，靜置 后第二次離心，除去上清液，向第二次離心后的沉淀物中再加入無水乙醇，攪拌，第三次離 心，除去上清液，向乙醇沉淀物中加入十六烷基三甲基溴化銨，第四次離心，除去上清液得 到沉淀物，將沉淀物溶解于NaCl溶液中，加入無水乙醇，攪拌，靜置，第五次離心除去上清 液得沉淀物，將沉淀物冷凍真空干燥得到純品生物絮凝劑。
所述將新鮮斜面上的菌苔轉(zhuǎn)接至種子培養(yǎng)基培養(yǎng)的溫度最好為35 40°C，搖床轉(zhuǎn)速最好 為150 200 r/min，培養(yǎng)時(shí)間最好為16 20 h;所述轉(zhuǎn)接至發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)的接種量最好為 1% 8%，培養(yǎng)的溫度最好為30 40'C，搖床轉(zhuǎn)速最好為150 200r/min，培養(yǎng)的時(shí)間最好為 1 2d;
所述種子培養(yǎng)基由以下配比原料組成(g/L):
葡萄糖7 12，酵母膏0.3 0.6,尿素0.3 0.6， KH2P04 0.1 0.3， NaCl 0.1 0.3， MgSOr7H2O0.2 0.5，蒸餾水，pH7.2 8.0
所述發(fā)酵培養(yǎng)基由以下配比原料組成(g/L):
糖蜜7 12'酵母膏1 3，尿素1 3， KH2PO40.1~0.3， K2HP04 0.1 0.3， NaCl 0.1 0.3， MgSO4-7H2O0.2 0.5，蒸餾水，pH7.2 8.0。
向上清液中加入乙醇的量最好按體積比為上清液的2 3倍，乙醇的濃度最好按體積百分 比為95%，靜置的溫度最好為4'C，向乙醇沉淀物中加入十六垸基三甲基溴化銨的量最好按 體積比為乙醇沉淀物的0.5 1倍，十六垸基三甲基溴化銨的濃度最好按體積百分比為2%; 將沉淀物溶解于NaCl溶液中的NaCl溶液的濃度按體積百分比為3% 5%，加入無水乙醇的 量按體積比最好為2 3倍。所述第一、二、三、四、五次離心的轉(zhuǎn)速最好為4000 4500r/min， 離心的時(shí)間最好為20 min。
生物絮凝劑的絮凝活性(FlocculationRate)可采用以下方法測(cè)定
取40 mL lg/L高嶺土溶液加至50 mL刻度試管中，依次加入2.5 mLCaCl2溶液(1 g/L)和lmL待測(cè)液，蒸餾水加至滿刻度，充分混合后，迅速置于比色杯中，靜止5min后，用紫外 可見光光分光度計(jì)在波長550nm下測(cè)定吸光度。以空白發(fā)酵培養(yǎng)基作空白測(cè)定。計(jì)算公式如 下
絮凝活性(Flocculation Rate， U/mL)=x 100 x Z)
式中，A:待測(cè)樣品的OD55Q值，B:空白培養(yǎng)基的OD55o值，D:發(fā)酵液稀釋倍數(shù)。 生物絮凝劑的特征分析如下
利用紫外分光光度計(jì)、紅外光譜儀、斐林反應(yīng)、雙縮脲反應(yīng)等方式對(duì)純品生物絮凝劑進(jìn) 行成分分析，初步推斷本發(fā)明涉及的生物絮凝劑主要活性物質(zhì)是糖類物質(zhì)。
本發(fā)明由地衣芽孢桿菌制備生物絮凝劑的方法與現(xiàn)有技術(shù)中各種生物絮凝劑的制備方法 相比具有原料成本低、發(fā)酵周期短、活性高等特點(diǎn)，該生物絮凝劑無毒無害、無二次污染、 其生產(chǎn)工藝適合大規(guī)模生產(chǎn)及工業(yè)應(yīng)用，具有很好的推廣價(jià)值。


圖1為本發(fā)明實(shí)施例不同發(fā)酵時(shí)間對(duì)絮凝率的影響。在圖1中，橫坐標(biāo)為培養(yǎng)時(shí)間/h， 縱坐標(biāo)為絮凝活性U/mL。
圖2為本發(fā)明實(shí)施例生物絮凝劑的紫外掃描圖譜。在圖2中，橫坐標(biāo)為波長/nm，縱坐標(biāo) 為吸光度。
圖3為本發(fā)明實(shí)施例生物絮凝劑的紅外光譜。在圖3中，橫坐標(biāo)為波數(shù)/cm'1，縱坐標(biāo)為 透光率/%。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，以便為更好地理解本發(fā)明提供依據(jù)。 實(shí)施例1地衣芽孢桿菌合成生物絮凝劑的發(fā)酵過程曲線
將新鮮斜面上的菌苔轉(zhuǎn)接至100mL種子培養(yǎng)基中，37'C搖床培養(yǎng),轉(zhuǎn)速195 r/min， 20 h 后，按4%的接種量轉(zhuǎn)接至發(fā)酵培養(yǎng)基中，同樣條件繼續(xù)培養(yǎng)。測(cè)定不同時(shí)間發(fā)酵液的絮凝活 性，結(jié)果如圖1所示。從圖1可以看出發(fā)酵44h時(shí)絮凝活性達(dá)716U/mL。
種子培養(yǎng)基(g/L):葡萄糖IO，酵母膏0.5，尿素0.5， KH2PO40.1， NaC10.1， MgSCV7H20 0.2，蒸餾水，pH7.2。
發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L):糖蜜10，酵母膏1，尿素l， KH2PO40.1， K2HPO40.1， NaC10.1， MgSO4.7H2O0.2，蒸餾水，pH7.2。
實(shí)施例2生物絮凝劑的紫外掃描圖譜
將50 mL發(fā)酵液于4500 r/min離心20 min，除去沉淀，收集上清液。向上清液中加入2倍體積的95%乙醇，4。C靜置過夜后，4500 r/min再次離心20 min;重復(fù)上述操作2次。向乙 醇沉淀物中加入1倍體積的濃度為2%的十六烷基三甲基溴化銨，4500r/min離心，除去上清 液收集沉淀物。將沉淀物溶解于4e/。NaCl溶液中并攪拌2h，加入2倍體積無水乙醇，攪拌均 勻，4'C靜置過夜，離心除去上清液得沉淀物，將沉淀物冷凍真空干燥即得到純品生物絮凝劑。 將提純的生物絮劑用水稀釋經(jīng)進(jìn)行紫外可見分光光度掃描，結(jié)果如圖2所示。從圖2可以看 出，該生物絮凝劑在260 nm和280 nm均沒有峰出現(xiàn)，由此推測(cè)該生物絮凝劑的主要活性成 分既不是蛋白質(zhì)也不是核酸類物質(zhì)。 實(shí)施例3生物絮凝劑的紅外光譜圖
將實(shí)例2提純的生物絮劑經(jīng)傅立葉變換紅外光譜儀掃描，結(jié)果如圖3所示。從圖3可以 看出，該生物絮凝劑在2927.96 cn^處吸收，C-H不對(duì)稱伸縮振動(dòng)產(chǎn)生的結(jié)果，此吸收峰是 糖類的特征峰；3423.68cm—1處有強(qiáng)而寬的吸收峰，是糖環(huán)中-OH中和N-H振動(dòng)所致，表明分 子內(nèi)存在氫鍵；1637.14 cm'1處吸收峰為多糖中的乙酰氨基(-NHC0CH3)的C=0鍵伸縮振動(dòng)造 成的；1384.28 cm'1處吸收峰為羧基中的-COO—中C-O鍵對(duì)稱伸縮振動(dòng)的體現(xiàn)；1003.48 cm—1 強(qiáng)吸收峰是酯內(nèi)的C-O-C反對(duì)稱伸縮振動(dòng)吸收譜帶。該紅外光譜不僅顯示了糖的特征結(jié)構(gòu)， 還有酰胺結(jié)構(gòu)的特征吸收峰，由此可以推斷該生物絮凝劑可能是一種氨基多糖。
權(quán)利要求
1. 利用地衣芽孢桿菌制備生物絮凝劑的方法，其特征在于所述地衣芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)，該微生物已于2009年01月14日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏中心登記入冊(cè)編號(hào)為CGMCC No.2876；其具體操作步驟如下1)生物絮凝劑的發(fā)酵合成將新鮮斜面上的菌苔轉(zhuǎn)接至種子培養(yǎng)基培養(yǎng)后，轉(zhuǎn)接至發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)，得生物絮凝劑發(fā)酵液；2)生物絮凝劑的制備將生物絮凝劑發(fā)酵液第一次離心，除去沉淀，收集上清液，向上清液中加入乙醇，靜置后第二次離心，除去上清液，向第二次離心后的沉淀物中再加入無水乙醇，攪拌，第三次離心，除去上清液，向乙醇沉淀物中加入十六烷基三甲基溴化銨，第四次離心，除去上清液得到沉淀物，將沉淀物溶解于NaCl溶液中，加入無水乙醇，攪拌，靜置，第五次離心除去上清液得沉淀物，將沉淀物冷凍真空干燥得到純品生物絮凝劑。
2. 如權(quán)利要求1所述的利用地衣芽孢桿菌制備生物絮凝劑的方法，其特征在于所述將新 鮮斜面上的菌苔轉(zhuǎn)接至種子培養(yǎng)基培養(yǎng)的溫度為35 40'C，搖床轉(zhuǎn)速為150 200 r/min，培 養(yǎng)時(shí)間為16 20h。
3. 如權(quán)利要求1所述的利用地衣芽孢桿菌制備生物絮凝劑的方法，其特征在于所述轉(zhuǎn)接 至發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)的接種量為1% 8%，
4. 如權(quán)利要求1或3所述的利用地衣芽孢桿菌制備生物絮凝劑的方法，其特征在于培養(yǎng) 的溫度為30 40。C，搖床轉(zhuǎn)速為150 200r/min,培養(yǎng)的時(shí)間為l 2d。
5. 如權(quán)利要求1所述的利用地衣芽孢桿菌制備生物絮凝劑的方法，其特征在于所述種子 培養(yǎng)基由以下配比原料組成，單位為g/L:葡萄糖7 12，酵母膏0.3 0.6，尿素0.3 0.6， KH2P04 0.1~0.3， NaCl 0.1~0.3， MgSO4.7H2O0.2 0.5，蒸餾水，pH7.2 8.0。
6. 如權(quán)利要求1所述的利用地衣芽孢桿菌制備生物絮凝劑的方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基由以下配比原料組成，單位為g/L:糖蜜7 12，酵母膏1 3，尿素1 3， KH2PO40.1 0.3， K2HPO40.1 0.3， NaCl 0.1 0.3， MgSO4-7H2O0.2 0.5，蒸餾7jC， pH7.2 8.0。
7. 如權(quán)利要求1所述的利用地衣芽孢桿菌制備生物絮凝劑的方法，其特征在于向上清液 中加入乙醇的量按體積比為上清液的2 3倍，乙醇的濃度按體積百分比為95%，靜置的溫度 為4。C。
8. 如權(quán)利要求1所述的利用地衣芽孢桿菌制備生物絮凝劑的方法，其特征在于向乙醇沉 淀物中加入十六垸基三甲基溴化銨的量按體積比為乙醇沉淀物的0.5 1倍，十六垸基三甲基 溴化銨的濃度按體積百分比為2%。
9. 如權(quán)利要求1所述的利用地衣芽孢桿菌制備生物絮凝劑的方法，其特征在于將沉淀物 溶解于NaCl溶液中的NaCl溶液的濃度按體積百分比為3% 5%，加入無水乙醇的量按體積 比為2 3倍。
10. 如權(quán)利要求1所述的利用地衣芽孢桿菌制備生物絮凝劑的方法，其特征在于所述第 一、二、三、四、五次離心的轉(zhuǎn)速為4000 4500r/min，離心的時(shí)間為20min。
全文摘要
利用地衣芽孢桿菌制備生物絮凝劑的方法，涉及一種生物絮凝劑。提供一種具有較高絮凝活性、原料成本低、工業(yè)應(yīng)用潛力較大的利用地衣芽孢桿菌制備生物絮凝劑的方法。微生物為地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)。將新鮮斜面上的菌苔轉(zhuǎn)接至種子培養(yǎng)基培養(yǎng)后，轉(zhuǎn)接至發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)，得生物絮凝劑發(fā)酵液，離心除去沉淀收集上清液，加入乙醇靜置后離心，除去上清液，向沉淀物中再加入無水乙醇，攪拌，離心，除去上清液，向乙醇沉淀物中加入十六烷基三甲基溴化銨，離心，除去上清液得沉淀物，將沉淀物溶解于NaCl溶液中，加入無水乙醇，攪拌，靜置，離心除去上清液得沉淀物，將沉淀物冷凍真空干燥得到純品生物絮凝劑。
文檔編號(hào)C12P1/04GK101503709SQ20091011126
公開日2009年8月12日 申請(qǐng)日期2009年3月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月13日
發(fā)明者怡 于, 寧 何, 盧英華, 李清彪, 熊裕焱, 王遠(yuǎn)鵬 申請(qǐng)人:廈門大學(xué)