專利名稱：：酸性果膠酶液體制劑的生產(chǎn)方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于果膠酶生產(chǎn)
技術領域：
，涉及一種酸性果膠酶液體制劑的生產(chǎn)方法。技術背景酸性果膠酶是一種可將植物及其果實中含有的果膠類物質，降解為小分子的半乳糖醛酸的酶制劑。可廣泛應用于以植物果實、蔬菜等為原料的食品工業(yè)、飲料工業(yè)、果酒等工業(yè)生產(chǎn)中，具有提高果汁過濾速度、增加出汁率和收率、提高產(chǎn)品澄清度、延長產(chǎn)品保質期的作用。目前，市場上的酸性果膠酶制劑主要有液體制劑、粉劑和顆粒制劑三種劑型。其中，液體酸性果膠酶在常溫下保存酶活損失快，保質期短，難于商品化；而且其活力低4萬個單位(u/g)
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術液體酸性果膠酶在常溫下保存酶活損失快、保質期短的問題，提供一種酸性果膠酶液體制劑的生產(chǎn)方法。本發(fā)明酸性果膠酶液體制劑的生產(chǎn)方法，具體按下述工藝步驟進行1)、斜面菌種的制備以黑曲霉為菌種，用麩皮、瓊脂、蘋果渣按重量比20:2:l的比例制成斜面種子培養(yǎng)基，12rC高壓滅菌30min，冷卻后劃線接種于3(TC恒溫培養(yǎng)72h;2)、搖瓶菌種的制備按麩皮100g、硫酸銨2g、葡萄糖lg、水200ml的配料比稱好原料，攪拌均勻后裝入3L三角瓶中，12rC高壓滅菌30min，冷卻后接種斜面菌種，接種重量比為1%~5%，30。C恒溫培養(yǎng)48h;3)、發(fā)酵制備熟曲按麩皮IOO、蘋果渣20、葵盤粉20、硫酸銨2、葡萄糖1和水300的重量配比稱好原料，混合拌勻后，121'C滅菌lh，冷卻后接種搖瓶菌種，接種重量比為3%，控制發(fā)酵室溫度為2832。C，濕度80~100%,發(fā)酵84~96h，即得熟曲；4)、浸提以0.02mol的磷酸氫二鈉溶液與O.Olmol的檸檬酸溶液配制成pH為3.8的浸提液，熟曲與浸提液按l:3的重量比混合拌勻，浸提30min;5)、固液分離浸提后經(jīng)壓榨得混汁，在混汁中加入重量比為1%的氧化鋁聚凝劑以除去大分子雜質，再經(jīng)板框過濾得清汁；6)、去渣澄清清汁經(jīng)超濾膜微濾，以除去清汁中的雜菌；7)、乙醇沉淀將微濾后的清汁，在攪拌的狀態(tài)下按80%的重量比加入體積比為95%的乙醇，靜置沉淀10h;8)、固液分離將步驟7)的沉淀物壓濾，除去乙醇，制得固態(tài)果膠酶；9)、復溶將固態(tài)果膠酶加入溶劑中進行復溶，即得酸性果膠酶液體酶制劑；所述溶劑3由甘油、山梨醇、聚乙二醇和山梨酸鉀組成，與固態(tài)果膠酶的重量比分別為20%、12%、0.5%禾卩0.1%。所述溶劑由甘油、山梨醇和聚乙二醇組成，與固態(tài)果膠酶的重量比分別為25%、12%和0.5%，復溶時，用鹽酸在快速攪拌的狀態(tài)下調整pH至3.8。本發(fā)明以蘋果渣為誘導物，以黑曲霉為菌種，經(jīng)過發(fā)酵、浸提、固液分離、去渣澄清、乙醇沉淀、固液分離、復溶工序制得液體酸性果膠酶酶制劑，解決了現(xiàn)有技術液體酸性果膠酶在常溫下保存酶活損失快、保質期短的問題。具體實施方式本發(fā)明酸性果膠酶液體制劑的生產(chǎn)方法，具體按下述工藝步驟進行實施例l1)、斜面菌種的制備以黑曲霉3.316為菌種，該菌種來源于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏號為CGMCC，No3.316;用麩皮、瓊脂、蘋果渣按重量比20:2:l的比例制成斜面培養(yǎng)基，12rC高壓滅菌30min，冷卻后劃線接種于30'C恒溫培養(yǎng)72h;2)、搖瓶菌種的制備按麩皮100g、硫酸銨2g、葡萄糖lg、水200ml的配料比稱好原料，攪拌均勻后裝入3L三角瓶中，12rC高壓滅菌30min，冷卻后接種斜面菌種，接種重量比為1%，3(TC恒溫培養(yǎng)48h;3)、發(fā)酵制備熟曲按麩皮IOO、蘋果渣20、葵盤粉20、硫酸銨2、葡萄糖1和水300的重量配比稱好原料，混合拌勻后，121'C滅菌lh，冷卻后接種搖瓶菌種，接種重量比為3%，控制發(fā)酵室溫度為30。C，濕度90%，發(fā)酵90h，即得熟曲；4)、浸提以0.02mol的磷酸氫二鈉溶液與0.01mol的檸檬酸溶液配制成pH為3.8的浸提液，熟曲與浸提液按l:3的重量比混合拌勻，浸提30min;5)、固液分離浸提后經(jīng)壓榨得混汁，在混汁中加入重量比為1%的氧化鋁聚凝劑混勻，再經(jīng)板框過濾得清汁；6)、去渣澄清清汁經(jīng)超濾膜微濾，以除去清汁中的雜菌；7)、乙醇沉淀將微濾后的清汁，在攪拌的狀態(tài)下按80%的重量比加入體積比為95%的乙醇，靜置沉淀10h;8)、固液分離將步驟7)的沉淀物壓濾，除去乙醇，制得固態(tài)果膠酶；9)、復溶將固態(tài)果膠酶加入溶劑中進行復溶，即得酸性果膠酶液體酶制劑；所述溶劑由甘油、山梨醇、聚乙二醇和山梨酸鉀組成，與固態(tài)果膠酶的重量比分別為20%、12%、0.5%禾卩0.1%。所說蘋果渣由蘋果經(jīng)20目粉碎而成。實施例2根據(jù)實施例l，所述溶劑由甘油、山梨醇和聚乙二醇組成，與固態(tài)果膠酶的重量比分別為25%、12%和0.5%，復溶時，用鹽酸在快速攪拌的狀態(tài)下調整pH至3.8。為了表明本發(fā)明酸性果膠酶液體酶制劑的保存穩(wěn)定性，將該酸性果膠酶液體酶制劑裝入瓶中密封室溫儲存，6個月后測試其酶活力下降1%，12個月后測試其酶活力下降2%。本發(fā)明連續(xù)生產(chǎn)3批酸性果膠酶液體酶制劑，在其平均酶活測定結果見表2:表2:連續(xù)3批發(fā)酵酶活測定結果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注酶活測定方法按QB1502-92果膠酶制劑中酶活測定方法進行酶活的測定，單位u/gc本發(fā)明方法制備的酸性果膠酶液體酶制劑，其活力高、保質期長。權利要求1、一種酸性果膠酶液體制劑的生產(chǎn)方法，其特征是按下述工藝步驟進行1)、斜面菌種的制備以黑曲霉為菌種，用麩皮、瓊脂、蘋果渣按重量比20∶2∶1的比例制成斜面培養(yǎng)基，121℃高壓滅菌30min，冷卻后劃線接種于30℃恒溫培養(yǎng)72h；2)、搖瓶菌種的制備按麩皮100g、硫酸銨2g、葡萄糖1g、水200ml的配比配料，裝入3L三角瓶中，121℃高壓滅菌30min，冷卻后接種，接種重量比為1％～5％，30℃恒溫培養(yǎng)48h；3)、發(fā)酵制備熟曲按麩皮100、蘋果渣20、葵盤粉20、硫酸銨2、葡萄糖1和水300的重量配比稱好原料，混合拌勻后，121℃滅菌1h，冷卻后接種搖瓶菌種，接種重量比為3％，控制發(fā)酵室溫度為28～32℃，濕度80～100％，發(fā)酵84～96h，即得熟曲；4)、浸提以0.02mol的磷酸氫二鈉溶液與0.01mol的檸檬酸溶液配制成pH為3.8的浸提液，熟曲與浸提液按1∶3的重量比混合拌勻，浸提30min；5)、固液分離浸提后經(jīng)壓榨得混汁，在混汁中加入重量比為1％的氧化鋁，再經(jīng)板框過濾得清汁；6)、去渣澄清清汁經(jīng)超濾膜微濾；7)、乙醇沉淀將微濾后的清汁，在攪拌的狀態(tài)下按80％的重量比加入體積比為95％的乙醇，靜置沉淀10h；8)、固液分離將步驟7)的沉淀物壓濾，除去乙醇，制得固態(tài)果膠酶；9)、復溶將固態(tài)果膠酶加入溶劑中進行復溶，即得酸性果膠酶液體酶制劑；所述溶劑由甘油、山梨醇、聚乙二醇和山梨酸鉀組成，與固態(tài)果膠酶的重量比分別為20％、12％、0.5％和0.1％。2、根絕去來要求1所述的酸性果膠酶液體制劑的生產(chǎn)方法，其特征是所說溶劑由甘油、山梨醇和聚乙二醇組成，與固態(tài)果膠酶的重量比分別為25%、12%和0.5%，復溶時，用鹽酸在快速攪拌的狀態(tài)下調整pH至3.8。全文摘要本發(fā)明公開了一種酸性果膠酶液體制劑的生產(chǎn)方法，以蘋果渣為誘導物，以黑曲霉為菌種，經(jīng)過發(fā)酵、浸提、固液分離、去渣澄清、乙醇沉淀、固液分離、復溶工序制得液體酸性果膠酶酶制劑，解決了現(xiàn)有技術液體酸性果膠酶在常溫下保存酶活損失快、保質期短的問題。文檔編號C12N9/96GK101684462SQ20091016078公開日2010年3月31日申請日期2009年7月10日優(yōu)先權日2009年7月10日發(fā)明者于瑞鳳,劉安邦,劉魯民,彭虹旎,李紅軍,楊曉英,范志恒,剛陳,陳亮珍,黃炳亮申請人:山東康地恩生物科技有限公司