專利名稱：：使用來自枯草桿菌的果膠酸裂合酶酶促處理紡織品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本文描述包括枯草桿菌(Bacillussubtilis)的果膠酸裂合酶(pectatelyase)的化合物及組合物、其在生物煮練、漂白、染色、退漿、纖維素纖維處理和清潔組合物及其組合中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：果膠聚合物是植物細(xì)胞壁的組成成分。果膠是一種主鏈由交替的同型半乳糖醛酸聚糖(平滑區(qū))和鼠李糖半乳糖醛酸聚糖(毛狀區(qū))組成的雜多糖，所述平滑區(qū)由1，4連接的ot-D-半乳糖醛酸的直鏈聚合物形成。半乳糖醛酸殘基可以在g基團(tuán)上被不同程度地甲基酯化，通常是以非隨機(jī)的方式將聚半乳糖醛酸嵌段完全甲酯化?？梢詫⒐z酶根據(jù)其優(yōu)選底物(即，高度甲酯化的果膠或低甲酯化的果膠和聚半乳糖醛酸(果膠酸))分類。也可以根據(jù)其反應(yīng)機(jī)制(即，P-消除或水解)進(jìn)行分類。果膠酶可以主要是內(nèi)切作用，即在鏈內(nèi)隨機(jī)位置切割聚合物產(chǎn)生寡聚物混合物?；蛘撸z酶可以是外切作用，從果膠的一端起始進(jìn)行攻擊。由EnzymeNomenclature(1992)給出的酶分類中包括了幾種作用于果膠平滑區(qū)的果膠酶活性，例如果膠酸裂合酶(EC4.2.2.2)、果膠裂合酶(EC4.2.2.10)、多聚半乳糖醛酸酶(EC3.2丄15)、果膠酯酶(EC3.2丄11)、半乳聚糖酶(EC3.2.1.89)、阿拉伯聚糖酶(arabinase)(EC3.2.1.99)7和甘露聚糖酶(EC3.2.1.78)。已從不同細(xì)菌屬中克隆了果膠酸裂合酶。迄今，多數(shù)被純化的果膠酸裂合酶具有8或更高的pH最適活性，通常具有5(TC或更高的最適溫度范圍，且需要二價(jià)陽離子以達(dá)到最大活性，其中鈣離子是刺激作用最大的。需要能夠?qū)嵭型藵{、漂白、煮練、染色及其一步組合的組合物，也需要清潔劑。在天然纖維、紗和織物的紡織品加工中，通常需要預(yù)處理或前處理步驟以適當(dāng)?shù)仡A(yù)備這些天然材料以備進(jìn)一步的使用，尤其是用于商品通常所需的染色和/或整理(finishing)階段。這些紡織品處理步驟除去天然存在的或在紡和織步驟加入到纖維和/或織物中的雜質(zhì)和發(fā)色體。盡管紡織品處理可包括許多不同的處理和階段，但最常見的包括退漿——通過除&的、堿性的或氧化的浸漬(soak)，除去上漿料，例如淀粉；煮練一一通過在接近沸騰的溫度下與氫氧化鈉溶液接觸而除去油脂、油狀物、蠟狀物、果膠物質(zhì)、塵屑、蛋白質(zhì)及脂肪；和漂白一一通過通常使用氧化劑(例如過氧化氫、次氯酸鹽和二氧化氯)或通過使用還原劑(例如二氧化硫或亞硫酸氫鹽)從紡織品中除去發(fā)色體和使發(fā)色體褪色。商業(yè)酶促紡織品加工通常需要將這些預(yù)處理步驟分開，因?yàn)楦鞑襟E的條件有大的差異。然而，處理步驟的這種分離，將由于需要多個(gè)在各階段之間的漂洗步驟而使得整個(gè)處理工藝增加了沉重的額外成本，并由于高于95。C的高加工溫度而造成高能耗。該額外的漂洗和/或干燥步驟使得該處理工藝平添了巨大的額外成本、時(shí)間和廢料。因此，將多個(gè)預(yù)處理階段合并成一步處理，與通常使用的商業(yè)工藝相比，由于降低成本和減少廢料，而將具有顯著的環(huán)境益處并對(duì)商業(yè)紡織品處理產(chǎn)生顯著的影響。然而，盡管之前曾進(jìn)行過研究，但這三個(gè)通常步驟的組合一直不令人滿意。當(dāng)前使用的漂白技術(shù)涉及在超過95。C的溫度使用堿性過氧化氫漂白。該高溫和強(qiáng)漂白體系與退漿操作中利用的許多酶完全不相容。因此，在超過95。C的溫度將退漿和漂白技術(shù)組合，將導(dǎo)致退漿酶的破環(huán)以及不令人滿意的退漿結(jié)果。替代的退漿技術(shù)，例如堿性或氧化浸漬，涉及使用會(huì)導(dǎo)致纖維損壞的侵蝕性化學(xué)品。另一方面，在降低的溫度下進(jìn)行一步處理以允許有效的酶促退漿，將導(dǎo)致不可接受的不良漂白，白度值低于商業(yè)可接受的限值。此外，這種沒有煮練酶參與的低溫工藝產(chǎn)生具有低潤濕性的織物，這對(duì)于進(jìn)一步的染色、印花和整理工藝是不可接受的。清潔污垢涉及除去包含污垢的有色物質(zhì)。常見類型的污垢起源自植物材料，例如來自草、蔬菜(菠菜、甜菜、胡蘿卜、番茄、水果如漿果類和葡萄)，以及源自植物的材料，如酒、啤酒、果汁、番茄沙司等等。色素通常通過共價(jià)鍵或通過物理結(jié)合("粘著，，)而附著在纖維材料上。除去這些色素可能是非常困難的，因?yàn)橄礈靹缀醪荒軓男枰鍧嵉谋砻娉ダw維-色素團(tuán)。研究顯示，植物細(xì)胞壁由纖維物質(zhì)的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)組成。細(xì)胞壁的組成根據(jù)植物材料的來源而有相當(dāng)大的變化。然而，一般地，植物的組成中包含非淀粉多糖。這些多糖以多種形式存在，包括例如纖維素、半纖維素和果膠。因此，持續(xù)需要鑒定可以用于生物煮練、漂白、退漿、染色步驟及其組合，以及用于洗滌劑組合物、清潔組合物中的果膠酸裂合酶，該酶具有10-50。C(例如20-30。C)的最適溫度，在酸性至弱堿性環(huán)境下(pH<8.5)操作最佳，且不依賴于二價(jià)陽離子，尤其是鈣的存在。發(fā)明概述因此，本文提供了化合物、組合物及使用其進(jìn)行纖維素纖維的生物煮練、漂白、退漿和/或染色、以及清潔硬底物和紡織品的方法。本文描述的方法和組合物避免了因本領(lǐng)域現(xiàn)有的局限性和缺點(diǎn)而帶來的一個(gè)或多個(gè)問題。因此，一方面提供包含SEQIDNO:1的多肽的果膠酸裂合酶。還提供獲自枯草桿菌的果膠酸裂合酶，其在還原性SDS-PAGE條件下分子量約43kD，以及pl約7丄對(duì)于原棉的最適pH為約6.0至8.0，然而這將在使用另一底物時(shí)變化。另一實(shí)施方式提供編碼SEQIDNO:1的核酸，例如SEQIDNO:2。本發(fā)明還考慮包含與其有效連接的所述核酸的栽體以及包含該載體并表達(dá)由該核酸編碼的多肽的宿主細(xì)胞。宿主細(xì)胞可以是任何原核或真核宿主細(xì)胞，例如芽孢桿菌屬(Bacillus)物種。又一方面考慮在水性溶液中包括一種所述果膠酸裂合酶的生物煮練組合物。該生物煮練組合物可以進(jìn)一步包括漂白試劑或漂白組合物。漂白試劑包括^f旦不限于氧化漂白劑、過氧化鈉、次氯酸鈉、次氯酸鈣、二氯異氰脲酸鈉或其組合。漂白組合物可以是例如，酯源、酰基轉(zhuǎn)移酶和過氧化氫源。生物煮練組合物和/或生物煮練和漂白組合物可以進(jìn)一步包括退漿劑。該生物煮練組合物可以進(jìn)一步包括其它生物煮練酶，例如果膠酶、角質(zhì)酶、纖維素酶、半纖維素酶、蛋白酶、脂肪酶，或其組合。再又一實(shí)施方式中，考慮用于紡織品的一步處理組合物。該組合物包括(a)獲自枯草桿菌的果膠酸裂合酶，其在還原性SDS-PAGE條件下具有分子量約43kD，pl約7,3;(b)—或多種退漿酶；和(c)一或多種漂白試劑和/或漂白組合物。很顯然，漂白和染色不在同一步驟中發(fā)生，但是它們可以與煮練和退漿組合。該組合物也可以進(jìn)一步包括選自果膠酶、角質(zhì)酶、纖維素酶、半纖維素酶、蛋白酶、脂肪酶及其組合的生物煮練酶。該一步處理組合物可以還包括一或多種輔助組分，其中所述輔助組分是表面活性劑、乳化劑、螯合劑和/或穩(wěn)定劑，或其組合。該組合物可以進(jìn)一步包括漂白活化劑。用于所述一步處理組合物中的漂白試劑包括但不限于氧化漂白劑、過氧化鈉、次氯酸鈉、次氯酸鉤、二氯異氰脲酸鈉或其組合。用于所述一步處理組合物中的表面活性劑可以包括但不限于非離子型表面活性劑、陰離子型表面活性劑、陽離子型表面活性劑、兼性離子表面活性劑，或其組合。另一方面考慮用于煮練和漂白紡織品的方法，包括在適宜使紡織品增白的條件和一段時(shí)間下，使紡織品與包括漂白劑和果膠酸裂合酶的水性溶液接觸，該果膠酸裂合酶獲自枯草桿菌，其在還原性SDS-PAGE條件下具有分子量約43kD,pl為約7.3。允許增白的適宜條件包括pH為約5至約11;時(shí)間為約2分鐘至約24小時(shí)，更優(yōu)選約15分鐘至12小時(shí)；和更優(yōu)選10約30分鐘至6小時(shí)；溫度為約15。C至90°C?？梢愿鶕?jù)用于處理的工藝確定適宜的溫度。用于冷軋巻堆煮練和漂白的適宜溫度是約15。C至約45。C,并優(yōu)選約25。C至約35。C。用于連續(xù)、半連續(xù)和其它分批(batch)工藝的溫度包括約15。C至約90。C，優(yōu)選約2(TC至約75。C，和更優(yōu)選約25。C至約60°C。漂白試劑可以是過氧化氫并且以約100ppm至5000ppm之間的量存在。因此所考慮的一組示例性條件包括pH為約6至8，時(shí)間長度為約2分鐘至24小時(shí)，溫度為約25。C至60°C,且其中漂白劑是過氧化氫并且以約1000ppm至3000ppm的量存在。再又一方面考慮用于紡織品的一步加工的方法，包括(a)提供一步紡織品加工組合物和需要加工的紡織品，其中所述一步紡織品加工組合物包括獲自枯草桿菌的果膠酸裂合酶，其在還原性SDS-PAGE條件下具有分子量約43kD，pI為約7J;(b)在足以允許退漿、煮練和漂白紡織品的條件和一段時(shí)間下，使所述紡織品與所述一步紡織品加工組合物接觸。該一步紡織品加工組合物可以進(jìn)一步包括(a)—或多種生物煮練酶；(b)一或多種漂白試劑和/或漂白組合物；和(c)一或多種退漿劑。一或多種生物煮練酶可以包括但不限于果膠酶、角質(zhì)酶、蛋白酶、纖維素酶、半纖維素酶、脂肪酶，或其組合。退漿劑可以包括但不限于淀粉酶、纖維素酶、甘露聚糖酶，或其組合。該一步紡織品加工組合物可以還包括選自表面活性劑、乳化劑、螯合劑、穩(wěn)定劑，或其組合的輔助組分。用于所考慮的一步紡織品加工組合物中的漂白試劑包括但不限于酶促漂白體系和化學(xué)漂白劑，例如但不限于氧化漂白劑、過氧化鈉、次氯酸鈉、次氯酸鉤、二氯異氰脲酸鈉或其組合。進(jìn)行處理的紡織品是包含纖維素的或含纖維素的材料的那些，例如棉。用于進(jìn)行該一步加工的條件可以是溫度約15。C至約90。C，優(yōu)選約20。C至約75。C,和更優(yōu)選約25。C至約60°C，以及pH為約5至11，更優(yōu)選約6至約10，和更優(yōu)選pH為約6至約8，進(jìn)行約2分鐘至24小時(shí)。可以才艮據(jù)選用于該處理的工藝確定適宜的處理溫度和pH。又一方面考慮紡織品前處理的方法，其包括同時(shí)或相繼地進(jìn)行生物煮練和漂白，其中所述煮練步驟包括將所述紡織品與包括枯草桿菌的果膠酸裂合酶的水性組合物接觸，該果膠酸裂合酶在還原性SDS-PAGE條件下具有約"kD的分子量和約7.3的pl，且其中所述接觸在適于生物煮練的條件下發(fā)生。再又一方面考慮生物煮練和染色紡織品的方法，包括(a)制備包括枯草桿菌的果膠酸裂合酶的水性溶液，該果膠酸裂合酶在還原性SDS-PAGE條件下具有約43kD的分子量和約7.3的pi,并具有最適pH為約6.0至8.0，且其中所述果膠酸裂合酶以約10至500mol/min/kg紡織品的量存在于pH約5至11,優(yōu)選pH約5至9，和更優(yōu)選pH約6至約8，以及溫度約15。C至卯°。(或約2(TC至約75°C,或更優(yōu)選約25°〇至約60°C)且具有小于2mM二價(jià)陽離子的條件下；(b)在該水性溶液中孵育該紡織品足夠生物煮練的一段時(shí)間；和(c)向該水性溶液補(bǔ)充染色體系并孵育該紡織品足以獲得染色的紡織品的一段時(shí)間。又一方面提供洗滌劑組合物，其包括(a)表面活性劑；(b)枯草桿菌果膠酸裂合酶，在還原性SDS-PAGE條件下，其分子量為約43kD，pl為約7，3;和(c)任選地，洗滌劑添加劑，其中所述洗滌劑候選物是助洗劑、漂白試劑、消泡劑、磨料、懸浮劑、污垢釋放劑、殺細(xì)菌劑、潤滑劑或其組合。所考慮的洗滌劑組合物還可以包括半纖維素酶，例如但不限于木聚糖酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、乙酰木聚糖酯酶、葡糖醛酸糖苷酶、阿魏酸酯酶、香豆酸酯酶、內(nèi)切-半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、地衣多糖酶、內(nèi)切-阿拉伯聚糖酶、外切-阿拉伯聚糖酶、外切-半乳聚糖酶或其組合。洗滌劑組合物還可以包括蛋白酶、纖維素酶、脂肪酶或其組合。再又一方面考慮清潔紡織品的方法，包括將需要清潔的紡織品暴露于洗滌劑組合物，該組合物包括(a)表面活性劑；(b)在還原性SDS-PAGE條件下分子量為約43kD、pl為約7.3的枯草桿菌果膠酸裂合酶；和(c)任選地，洗滌劑添加劑，其中所述洗滌劑候選物是助洗劑、漂白試劑、消泡劑、磨料、懸浮劑、污垢釋放劑、殺細(xì)菌劑、潤滑劑或其組合。洗滌劑組合物還可以包括蛋白酶、纖維素酶、脂肪酶，或其組合。又一方面提供清潔硬表面的組合物和方法。所述組合物可以包括包含12有枯草桿菌果膠酸裂合酶的水性溶液，該果膠酸裂合酶在還原性SDS-PAGE條件下分子量為約43kD，pi為約7.3，且具有最適pH約6.0至8.0。對(duì)于清潔和洗滌劑組合物，該范圍可以更大，例如，從約pH5至11。應(yīng)理解前述一般描述和下述詳細(xì)說明是示例性和解釋性的，旨在進(jìn)一步對(duì)所公開的化合物、組合物和方法提供解釋。附圖簡述本說明書包括附圖，其組成本說明書的一部分。附圖與說明書一起用于闡明所討論的組合物及方法的各方面。圖1顯示枯草桿菌果膠酸裂合酶Exp.B.subtilis在果膠去除上的pH范圍，y軸為pH而x軸為溫度(°C)。將該枯草桿菌果膠酸裂合酶(左圖)和市售可得的Bioprep3000L(右圖)的果膠酸裂合酶活性進(jìn)行比較。在不同pH(5.9-9.8)和溫度(30-60。C)條件下，將2ppm的每種酶各與未經(jīng)煮練的棉織品(Testfabrics，428U)孵育1小時(shí)來比較枯草桿菌果膠酸裂合酶和Bioprep3000L的初步pH和溫度曲線。使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件程序進(jìn)行實(shí)騶"沒計(jì)和數(shù)據(jù)分析。酶處理及徹底漂洗棉織物后，用釕紅染料對(duì)經(jīng)處理的織物盤染色以量化處理后留在織物中的果膠的量。然后徹底漂洗染色的織物并且風(fēng)干，之后使用MinoltaCR-200分光光度計(jì)測量CIELMt。較低的CIEI^表示較高的果膠結(jié)合。果膠結(jié)合越高，酶的煮練性能越低。圖中，較暗的陰影對(duì)應(yīng)于較少的果膠去除。圖2顯示從原棉織物中除去果膠的劑量反應(yīng)。對(duì)枯草桿菌果膠酸裂合酶(GCOR)在55。C、pH7.5進(jìn)行本實(shí)驗(yàn)20分鐘。對(duì)于Bioprep3000L,該試驗(yàn)再次于55。C進(jìn)行20分鐘，但pH增至8.2以在該酶的最適pH檢測該酶。X軸表示總蛋白質(zhì)濃度(ppm)。Y軸是CIE1^單位。CIE是CommissionInternationaledePEclairage。L是光密度參數(shù)。"a"是綠到紅參數(shù)而"b"是藍(lán)到黃參數(shù)。圖3顯示枯草桿菌果膠酸裂合酶在O.lppm(左圖)、0.5ppm(中圖)和lppm(右圖)跨pH(y軸)和溫度(°C)(x軸)的果膠去除性能?？莶輻U菌果膠酸裂合酶具有寬的溫度譜(即25-65°C)和寬的pH譜。圖4闡述枯草桿菌果膠酸裂合酶相比于市售可得的果膠酸裂合酶在不同溫度和不同過氧化氫濃度下的穩(wěn)定性。圖4A顯示在55。C且過氧化氫為0、500、2500和5000ppm時(shí)該酶的穩(wěn)定性，并將枯草桿菌果膠酸裂合酶(GCOR)和Bioprep3000L比較。圖4B闡述過氧化氫為0ppm和2500ppm時(shí)在25。C以相同量的果膠酸裂合酶隨時(shí)間檢測所獲得的結(jié)果。在25。C，枯草桿菌果膠酸裂合酶(GCOR)的活性實(shí)際上隨時(shí)間增加。圖5闡述存在螯合劑EDTA或不存在該螯合劑下，在室溫(RT)或55'C下，果膠酸裂合酶的穩(wěn)定性?；钚詼y量為在1小時(shí)時(shí)活性損失的百分?jǐn)?shù)(％)。比較了枯草桿菌果膠酸裂合酶(GCOR)和Biopr印3000L的活性。圖6:使用MES電泳緩沖液以及NuPAGE4-12%Bis-Tris膠，闡明枯草桿菌果膠酸裂合酶的純度及其相對(duì)于對(duì)照的分子量。圖7A和7B:圖A和B示出在0.15mL/LAATCCWOB2003強(qiáng)效型液體洗滌劑中，lOppm的枯草桿菌果膠酸裂合酶對(duì)新鮮污垢的清潔。圖8A和8B:圖A和B示出在1.5mL/LAATCCWOB2003強(qiáng)效型液體洗滌劑中，lppm的枯草桿菌果膠酸裂合酶對(duì)新鮮污垢的清潔。圖9闡述在標(biāo)準(zhǔn)AATCCWOB2003強(qiáng)效型液體洗滌劑中，枯草桿菌果膠酸裂合酶與地衣芽孢桿菌(B.licheniformis)淀粉酶相比對(duì)新鮮污垢的清潔性能。圖10闡述在標(biāo)準(zhǔn)AATCCWOB液體洗滌劑中，枯草桿菌果膠酸裂合酶與地衣芽孢桿菌淀粉酶相比對(duì)陳化的技術(shù)性污垢(agedtechnicalstains)的清潔性能。圖11闡述在市售液體洗滌劑中，枯草桿菌果膠酸裂合酶與芽孢桿菌屬物種707淀粉酶相比對(duì)新鮮污垢的清潔性能。圖12闡述在市售液體洗涂劑中，枯草桿菌果膠酸裂合酶與芽孢桿菌屬物種707淀粉酶相比對(duì)陳化的技術(shù)性污垢的清潔性能。14優(yōu)選實(shí)施方式的詳述現(xiàn)在僅為參考目的，使用下面的定義和實(shí)施例，詳細(xì)描述本發(fā)明組合物、化合物和方法。本文提及的所有專利和出版物，包括該專利和出版物中公開的所有序列，在此通過整體引用的方式明確地為所有目的而并入本文。數(shù)值范圍涵蓋限定該范圍的數(shù)值。除非另有指明，核酸以5，到3，的方向從左至右書寫；氨基酸序列以氨基至羧基的方向從左至右書寫。在此提供的標(biāo)題不構(gòu)成對(duì)所公開化合物、組合物和方法的各個(gè)方面或?qū)嵤┓绞降南拗?，所述方面和?shí)施方式以通過參考說明書整體而得。因此，緊接下面定義的術(shù)語將基于整個(gè)說明書作更全面地定義。1、縮寫和定義1.1定義除非本文另有定義，本文^f吏用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解的含義相同的含義。例如，Singleton和Sainsbury，DICTIONARYOFMICROBIOLOGYANDMOLECULARBIOLOGY(第二版，JohnWileyandSons,NY，1994);以及Hale和Marham，THEHARPERCOLLINSDICTIONARYOFBIOLOGY(HarperPerennial,NY,1991)為本領(lǐng)域技術(shù)人員提供了本文所用許多術(shù)語的一般性字典。此外，如本文所使用，除非上下文另有明確指明，否則單數(shù)術(shù)語"一"和"該，，涵蓋復(fù)數(shù)形式。除非另有指明，分別地，核酸以5，到3，的方向從左至右書寫；氨基酸序列以氨基至氯基的方向從左至右書寫。應(yīng)理解，本發(fā)明組合物、化合物和方法不限于所描述的具體方法學(xué)、操作方案和試劑，本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)它們所用的上下文而改變它們。本說明書中給出的每一個(gè)最大數(shù)值限定均旨在包括每一個(gè)較小的數(shù)值限定，就如同本文明確書寫了該較小的數(shù)值限定一樣。本說明書中給出的每一個(gè)最小數(shù)值限定均包括每一個(gè)較大的數(shù)值限定，就如同本文明確書寫了該較大的數(shù)值限定一樣。本說明書中給出的每個(gè)數(shù)值范圍將包括落入該較寬數(shù)值范圍內(nèi)的每個(gè)較窄的數(shù)值范圍，就如同本文明確書寫了該較窄的數(shù)值范圍一樣。如本文所使用，術(shù)語"漂白"意指處理諸如纖維、紗、織物、衣服和非織造布等紡織品材料以在所述纖維、紗、織物、衣服或非織造布中產(chǎn)生較淺顏色的工藝。例如，如本文所用的漂白意指通過在纖維素的或其它的紡織品材料中除去、修飾或掩蓋生色化合物而增白織物。因此，"漂白，，指以足夠長的時(shí)間和在適宜的pH和溫度條件下處理紡織品以實(shí)現(xiàn)紡織品的增白(即，變白)。可使用化學(xué)漂白劑和/或齊冗產(chǎn)生的漂白試劑進(jìn)行漂白。適合的漂白試劑的實(shí)例包括但不限于C102、H202、過酸類化合物、N02等。本工藝、方法和組合物中，優(yōu)選酶促產(chǎn)生過氧化物諸如11202和過酸類化合物。如本文使用的術(shù)語"漂白試劑"涵蓋任何能夠漂白織物的結(jié)構(gòu)部分。"化學(xué)漂白試劑，，是在沒有酶存在時(shí)能夠漂白紡織品的實(shí)體。它們可能需要漂白活化劑的存在。適合用于本文所述工藝、方法和組合物的化學(xué)漂白試劑的實(shí)例是過氧化鈉、過硼酸鈉、高錳酸鉀、其它過酸類化合物。在一些方面，當(dāng)11202非原位1^1產(chǎn)生時(shí)，可以將它視為化學(xué)漂白試劑。術(shù)語"一步紡織品加工組合物"指包括至少一種生物煮練酶和至少一種齊&產(chǎn)生的漂白試劑、退漿劑和/或染色劑的制劑。因此，一些實(shí)施方式中，該加工組合物還包括至少一種退漿酶。該一步紡織品加工組合物將含有足夠的酶，以4更在處理液(即水性介質(zhì))中提供本文所述的酶水平。用于本文的酶可以是野生型酶及其變體。優(yōu)選地，該變體#:改造為氧化穩(wěn)定的，例如在存在過氧化氫和/或不存在二價(jià)離子時(shí)是穩(wěn)定的。措詞"酶促漂白體系"意指能夠酶促產(chǎn)生漂白試劑的酶和底物。降&漂白體系可包括酯源、?；D(zhuǎn)移酶(或過水解酶(perhydrolase))和過氧化氫源。"酯源"指含有酯鍵的過水解酶底物?？梢詫ㄓ兄咀搴?或芳香族16羧酸及醇的酯與過水解酶一起使用。優(yōu)選實(shí)施方式中，酯源是醋酸酯。一些優(yōu)選實(shí)施方式中，酯源選自二乙酸丙二醇酯、二乙酸乙二醇酯、三醋精、乙酸乙酯和三丁精中的一或多種。一些優(yōu)選實(shí)施方式中，酯源選自下述一或多種酸的酯曱酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、辛酸、壬酸、癸酸、十二烷酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸和油酸。術(shù)語"過氧化氫源"意指這樣的過氧化氫，其自外源(即外界或外部)來源加入紡織品處理浴中，或者由產(chǎn)生過氧化氫的氧化酶對(duì)其底物的作用而原位產(chǎn)生。術(shù)語"產(chǎn)生過氧化氫的氧化酶"意指催化涉及分子氧(02)作為電子受體的氧化/還原反應(yīng)的酶。這些反應(yīng)中，氧被還原為水(H20)或過氧化氫(H202)。適合本文使用的氧化酶是在其底物上產(chǎn)生過氧化氫(而非水)的氧化酶。適合本文使用的產(chǎn)生過氧化氫的氧化酶及其底物的實(shí)例是葡萄糖氧化酶和葡萄糖。其它可以產(chǎn)生過氧化氫的酶(例如，醇氧化酶、乙二醇氧化酶、甘油氧化酶、氨基酸氧化酶等)也可與過水解酶和酯底物組合應(yīng)用以產(chǎn)生過酸。一些實(shí)施方式中，產(chǎn)生過氧化氫的氧化酶是碳水化合物氧化酶。如本文所使用，"紡織品"指纖維、紗、織物、衣服和非織造布。該術(shù)語包括由天然的、合成的(例如人造的)、以及各種天然和合成的混合物(blends)制成的紡織品。因此，術(shù)語"紡織品，，指未經(jīng)加工的和經(jīng)加工的纖維、紗、織造或編織的紡織品、非織造布和衣服。本說明書中，除非明確說明，否則"紡織品"、"織物"和"衣服"將可互換。術(shù)語"需要加工的紡織品"指需要進(jìn)行退漿和/或煮練和/或漂白或可能需要其它處理(如生物拋光)的紡織口Po術(shù)語"需要漂白的紡織品"指不論其它可能處理如何，需要漂白的紡織品。這些紡織品可能已經(jīng)進(jìn)行了其它處理或者可能沒有。類似地，這些紡織品可能需要或者可能不需要隨后的處理。如本文所使用，"紡織品材料"是纖維、紡紗半制品、紗、織物，由織物制成的產(chǎn)品(例如，衣服和其它制品)和非織造布的總稱。17如本文所使用，術(shù)語"相容的，，意指一步紡織品加工組合物中的組分不使果膠酸裂合酶或其它可能存在于該組合物中的酶的SI^活性降低至該果膠酸裂合酶不能如在正常使用狀態(tài)期間所期望的一樣有效的程度。下文詳細(xì)示例了具體組合物物質(zhì)。如本文所使用，"有效量的果膠酸裂合酶"指實(shí)現(xiàn)本文所述工藝或方法中所需的除&活性必需的果膠酸裂合酶的量。該有效量是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易確定的且取決于許多因素，例如所用的具體酶變體、所用的pH、所用的溫度等等，以及所需的結(jié)果(例如，白度水平、可染性、退漿能力)。如本文所使用，"氧化(性)化學(xué)品"指具有漂白紡織品的能力的化學(xué)品。該氧化化學(xué)品以適合于漂白的量、pH和溫度存在。該術(shù)語包括但不限于過氧化氫、氯漂白劑和過酸。如本文所使用，術(shù)語"酶促轉(zhuǎn)化"指通過使底物或中間體與酶接觸，將底物#"飾成中間體或?qū)⒅虚g體修飾成終產(chǎn)物。一些實(shí)施方式中，通過將底物或中間體直接暴露于合適的酶進(jìn)行接觸。如本文所使用，措詞"蛋白水解穩(wěn)定性"指蛋白質(zhì)(例如酶)抵抗蛋白水解的能力。該術(shù)語不旨在局限于使用任何特定蛋白酶來評(píng)估蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。如本文所使用，"氧化穩(wěn)定性"指蛋白質(zhì)在氧化條件下發(fā)揮功能的能力。特別地，該術(shù)語指蛋白質(zhì)在各種濃度的11202和/或過酸存在下發(fā)揮功能的在各種氧化條件下的穩(wěn)定性。氧化穩(wěn)定性的實(shí)質(zhì)性改變可以通過相比于沒有氧化化合物時(shí)表現(xiàn)出的酶促活性，酶促活性的半衰期至少約5%或更大的增加或降低(多數(shù)實(shí)施方式中，優(yōu)選增加)來反映。如本文所使用，"pH穩(wěn)定性"指蛋白質(zhì)在特定pH下發(fā)揮功能的能力。一般地，多數(shù)酶具有有限的pH范圍供其發(fā)揮功能。除了在中間范圍的pH(即，約pH7)發(fā)揮功能的酶以外，還存在能夠在極高或極低pH條件下工作的酶。可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)程序和/或本文所述的方法測量在各種pH下的穩(wěn)定性。pH穩(wěn)定性的實(shí)質(zhì)性改變可以通過相比于在酶的最適pH時(shí)表現(xiàn)出的酶促活性，S^波活性的半衰期至少約5。/。或更大的增加或降低(多數(shù)實(shí)施方式中，優(yōu)選增加)來反映。然而，本文所述的本發(fā)明工藝、方法和/或組合物不旨在局限于任何pH穩(wěn)定性水平及pH范圍。如本文所使用，"熱穩(wěn)定性"指蛋白質(zhì)在特定溫度下發(fā)揮功能的能力。一般地，多數(shù)酶具有有限的溫度范圍供其發(fā)揮功能。除了在中間范圍的溫度(即，室溫)發(fā)揮功能的酶以外，還存在能夠在極高或極低溫度下工作的酶?？梢酝ㄟ^已知的程序或本文所述的方法測量熱穩(wěn)定性。熱穩(wěn)定性的實(shí)質(zhì)性改變可以通過與酶促活性的最適溫度相比，當(dāng)突變體暴露于不同溫度(即較高或較低)時(shí)，催化活性的半衰期至少約5%或更大的增加或降低(多數(shù)實(shí)施方式中，優(yōu)選增加)來反映。然而，本文所述的工藝、方法和/或組合物不旨在局限于任何溫度穩(wěn)定性水平及溫度范圍。如本文所使用，術(shù)語"化學(xué)穩(wěn)定性"指蛋白質(zhì)(例如酶)針對(duì)負(fù)面影響其活性的化學(xué)品表現(xiàn)出的穩(wěn)定性。一些實(shí)施方式中，該化學(xué)品包括但不限于過氧化氫、過酸、陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑、非離子型表面活性劑、螯合劑等。然而，本文所述的工藝、方法和/或組合物不旨在局限于任何特定的化學(xué)穩(wěn)定性水平和化學(xué)穩(wěn)定性范圍。如本文所使用，術(shù)語"純化的，，和"分離的"指從樣品中除去雜質(zhì)。例如，純化果膠酸裂合酶。一些實(shí)施方式中，在細(xì)菌或真菌宿主細(xì)胞中表達(dá)重組的果膠酸裂合酶并且通過除去其它宿主細(xì)胞組分純化這些重組的果膠酸裂合酶；由此樣品中的重組果膠酸裂合酶多肽的百分?jǐn)?shù)增加。如本文所使用，多肽(例如酶)的"純化的制品"或"基本上純的制品"意指已從與其一起天然存在的其它蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸中分離出來的多肽。優(yōu)選地，該多肽也與用于純化它的物質(zhì)諸如抗體或凝膠基質(zhì)(例如聚丙烯酰胺)分離。優(yōu)選地，該多肽占純化制品的干重的至少10、20、50、70、80或95%。在一些實(shí)施方案中，酶可以以例如純化制品的形式使用或供應(yīng)。如本文所使用，"蛋白質(zhì)"指由氨基酸組成并被本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)可為蛋白質(zhì)的任何組合物。術(shù)語"蛋白質(zhì)"、"肽，，和"多肽，，可在本文互換使用。當(dāng)肽是蛋白質(zhì)的一部分時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員將在上下文中理解該術(shù)語的用法。如本文所使用，功能上和/或結(jié)構(gòu)上相似的蛋白質(zhì)被認(rèn)為是"相關(guān)蛋白質(zhì)"。一些實(shí)施方式中，這些蛋白質(zhì)源自不同屬和/或物種，包括生物類別之間的不同(例如細(xì)菌蛋白質(zhì)和真菌蛋白質(zhì))。一些實(shí)施方式中，這些蛋白質(zhì)源自不同的屬和/或物種，包括生物類別之間的不同(例如，細(xì)菌酶和真菌酶)。其它實(shí)施方式中，從相同物種提供相關(guān)蛋白質(zhì)。事實(shí)上，本文所述的工藝、方法和/或組合物并不旨在局限于任何特定來源的相關(guān)蛋白質(zhì)。此外，術(shù)語"相關(guān)蛋白質(zhì)，，包括三級(jí)結(jié)構(gòu)同源物和一級(jí)序列同源物(homolog)。再一些實(shí)施方式中，該術(shù)語包括免疫學(xué)上交叉反應(yīng)的蛋白質(zhì)。如本文所使用，術(shù)語"衍生物"指這樣的蛋白質(zhì)，其源自通過向蛋白質(zhì)的C末端和N末端之一或兩者添加一或多個(gè)氨基酸、在氨基酸序列中的一個(gè)或數(shù)個(gè)不同位點(diǎn)置換一或多個(gè)氨基酸、和/或在蛋白質(zhì)的任一端或兩端或在氨基酸序列中的一或多個(gè)位點(diǎn)缺失一或多個(gè)氛基酸，和/或在M酸序列中的一或多個(gè)位點(diǎn)插入一或多個(gè)氨基酸?？梢酝ㄟ^改變編碼天然蛋白質(zhì)的I)NA序列，將該DNA序列轉(zhuǎn)化到適宜宿主中并表達(dá)該改變的DNA序列以形成衍生蛋白質(zhì)來實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)衍生物的制備。相關(guān)的(和衍生的)蛋白質(zhì)包括"變體蛋白質(zhì)"。一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，變體蛋白質(zhì)與親本蛋白質(zhì)，如野生型蛋白質(zhì)不同，且相互之間相差小數(shù)目的氨基酸殘基。不同的氨基酸殘基的數(shù)目可以是一或多個(gè)，優(yōu)選l、2、3、4、5、10、15、20、30、40、50或更多氨基酸殘基。變體之間的不同to酸的數(shù)目可以為1至10。一些方面，相關(guān)蛋白質(zhì)，尤其是變體蛋白質(zhì)包括至少35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、卯％、95%、97%、98。/。或99。/o的^J^酸序列同一性。此外，如本文所使用的相關(guān)蛋白質(zhì)或變體蛋白質(zhì)還可以指與另一相關(guān)蛋白質(zhì)或親本蛋白質(zhì)在主要區(qū)域(prominentregions)的數(shù)目上不同的蛋白質(zhì)。例如，一些實(shí)施方式中，變體蛋白質(zhì)具有l(wèi)、2、3、4、5或IO個(gè)相應(yīng)的主要區(qū)域與親本蛋白質(zhì)不同。本領(lǐng)域已知若干方法適用于產(chǎn)生本文所述酶的變體，包括但不限于位點(diǎn)飽和誘變、掃描誘變、插入誘變、隨機(jī)突變、定點(diǎn)突變和定向進(jìn)化、以及多種其它重組手段。在尤其優(yōu)選的實(shí)施方式中，改造同源性蛋白質(zhì)以產(chǎn)生具有一種或多種期望活性的酶。如本文所使用，術(shù)語"類似序列"指蛋白質(zhì)中提供與目的蛋白質(zhì)(即，通常地目的原始蛋白質(zhì))類似的功能、三級(jí)結(jié)構(gòu)和/或保守殘基的序列。例如，在含有a螺旋或(3片層結(jié)構(gòu)的表位區(qū)中，類似序列中的替代M酸優(yōu)選保持相同的特定結(jié)構(gòu)。該術(shù)語也指核苷酸序列，以及氨基酸序列。一些實(shí)施方式中，產(chǎn)生類似序列以便替代氨基酸導(dǎo)致顯示相似或改良的功能的變體酶。一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，在目的蛋白質(zhì)中這些氨基酸的三級(jí)結(jié)構(gòu)和/或保守殘基位于或鄰近于目的區(qū)段或片段。因此，當(dāng)目的區(qū)段或片段含有例如a-螺旋或(5-片層結(jié)構(gòu)時(shí)，替代M酸優(yōu)選保持該特定結(jié)構(gòu)。如本文所使用，"同源性蛋白質(zhì)"指蛋白質(zhì)(例如果膠酸裂合酶)與目的蛋白質(zhì)(例如來自另一來源的果膠酸裂合酶)具有相似作用和/或結(jié)構(gòu)。同源物并不旨在必需是進(jìn)化上相關(guān)的。因此，該術(shù)語旨在包括獲自不同物種的相同或相似酶(即，就結(jié)構(gòu)和功能而言)。一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，可能期望鑒定與目的蛋白質(zhì)具有類似的四級(jí)、三級(jí)和/或一級(jí)結(jié)構(gòu)的同源物，因?yàn)橛脕碜栽撏次锏念愃茀^(qū)段置換目的蛋白質(zhì)中的該區(qū)段或片段將降低該改變的破壞性。一些實(shí)施方式中，同源性蛋白質(zhì)誘導(dǎo)與目的蛋白質(zhì)相似的免疫應(yīng)答。如本文所使用，"野生型，，和"天然"蛋白質(zhì)是自然界中存在的那些蛋白質(zhì)。術(shù)語"野生型序列，，和"野生型基因，，可在本文互換使用，指宿主細(xì)胞中天然的或自然存在的序列。一些實(shí)施方式中，野生型序列指作為蛋白質(zhì)改造工程起點(diǎn)的目的序列?？砂凑毡绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的一般方法獲得編碼該天然蛋白質(zhì)的基因。該方法通常包括合成具有編碼目的蛋白質(zhì)的區(qū)域的推定序列的標(biāo)記探針、從表達(dá)該蛋白質(zhì)的生物制備基因組文庫以及通過與21探針雜交從該文庫篩選目的基因。然后對(duì)陽性雜交克隆作圖并測序?？墒褂帽绢I(lǐng)域已知的任何適當(dāng)方法確定序列間的同源性程度(參見例如，Smith和Waterman,2ADV.APPL.MATH.482(1981);Needleman和Wunsch，48J.MOL.BiOL.443(1970);Pearson和Lipman，85PROC.NAT'L.ACAD.SCI,USA2444(1988);程序例如WisconsinGeneticsSoftwarePackage(GeneticsComputerGroup,Madison,WI)中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA;以及Devereux等人，12NUCL.ACIDRES.387-395(1984))。例如，PILEUP是確定序列同源性水平的有用程序。PILEUP使用漸進(jìn)式兩兩序列比對(duì)從一組相關(guān)序列建立多序列比對(duì)。其也可以繪出顯示用于建立該比對(duì)的聚類關(guān)系的樹。PILEUP使用對(duì)Feng和Doolittle的漸進(jìn)式比對(duì)方法的簡化(Feng和Doolittle,35J.MOL.EvOL.351-360(1987))。該方法與Higgins和Sharp(Higgins和Sharp,5CABIOS151-153(1989))所述的方法類似。有用的PILEUP參數(shù)包括默認(rèn)空位權(quán)重3.00，默認(rèn)空位長度權(quán)重0.10和加權(quán)的末端空位。另一有用的算法實(shí)例是Altschul等人，(Altschul等人，215J.MOL.BIOL.403-410(1990);以及Karlin等人，PROC.NAT'L.ACAD.SCI.USA90:5873-5787(1993))所述的BLAST算法。一尤其有用的BLAST程序是WU-BLAST-2程序(參見，Altschul等人，266METH.ENZYMOL.460-480(1996))。參數(shù)"W"、"T"和"X"確定比對(duì)的靈敏度和速度。該BLAST程序使用字長(W)為11,BLOSUM62打分矩陣(參見，Henikoff和Henikoff，89PROC.NAT'L.ACAD.SCI.USA10915(1989))，比對(duì)(B)為50，期望值(E)為10,M'5，N'-4以及兩鏈比較作為默認(rèn)值。與至少兩種核酸或多肽相關(guān)的措詞"基本上相似"和"基本上相同"通常意指多核苷酸或多肽與參照(即野生型)序列相比，包含具有至少約40%同一性，更優(yōu)選至少約50%同一性，還更優(yōu)選至少約60%同一性，優(yōu)選至少約75%同一性，更優(yōu)選至少約80%同一性，還更優(yōu)選至少約卯％,再更優(yōu)選約95%,最優(yōu)選約97。/。同一性，有時(shí)高達(dá)約98%和約99%序列同一性的序列?？墒褂靡阎某绦?，例如BLAST、ALIGN和CLUSTAL,使用標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)確定序列同一性(參見，例如Altschul等人，215J.MOL.BiOL.403-410(1990);Henikoff等人，89PROC.NAT'L.ACAD.SCI.USA10915(1989);Karin等人，90PROC.NAT，L.ACAD.SCI.USA90:5873(1993);和Higgins等人，73GENE73:237-244(1988))。執(zhí)行BLAST分析的軟件是可通過美國國家生物技術(shù)信息中心公眾獲得的?？墒褂肍ASTA(Pearson等人，85PROC.NAT'L.ACAD.SCI.USA2444-2448(1988))檢索數(shù)據(jù)庫。兩多肽基本上相同的一個(gè)指標(biāo)為第一多肽與第二多肽是免疫學(xué)上交叉反應(yīng)的。通常，因保守氨基酸置換而不同的多肽;U^疫學(xué)上交叉反應(yīng)的。因此，例如，當(dāng)一條多肽與第二多肽僅因保守性置換而不同時(shí)，兩肽基本上相同。兩核酸序列基本上相同的另一指標(biāo)為兩分子在嚴(yán)緊條件下(例如，在中度至高嚴(yán)緊的范圍內(nèi))相互雜交。術(shù)語"同時(shí)地"或"同時(shí)"或"一步"旨在指在單個(gè)操作中進(jìn)行退漿、煮練、漂白和染色(及這些步驟的組合)的至少一部分(例如，優(yōu)選約75。/?；蚋啵鼉?yōu)選約90%或更多)。該術(shù)語并不旨在意指由本發(fā)明方法和組合物處理的紡織品不能被處理一次以上。相反，該術(shù)語意指對(duì)于每個(gè)處理周期，在紡織品加工中同時(shí)使用多個(gè)組分，如本申請(qǐng)它處詳述的。同樣地，該處理的組分可一次加入一種、同時(shí)加入所有或者分組加入，只要對(duì)于該處理周期的至少一部分而言，所有組分都存在即可。處理周期中所有組分都存在的那部分可因處理周期的總長度而異。術(shù)語"同時(shí)地"在一些實(shí)施方式中也旨在指在單個(gè)操作中進(jìn)行生物煮練和酶促漂白的至少一部分。這具有不再需要通常在分開進(jìn)行的煮練、漂白和/或染色步驟之間進(jìn)行的清洗及其它處理的明顯優(yōu)點(diǎn)。因而，水、時(shí)間和能量需求以及對(duì)在每個(gè)工藝中使用不同的設(shè)備的需求顯著減少。此外，根據(jù)待處理的紡織品的類型以及其上存在的雜質(zhì)的性質(zhì)，在本文所討論的工藝的實(shí)施期間可獲得退漿效果。因而，在此類情況下，不需要進(jìn)行額外的退漿處理。盡管優(yōu)選所有退漿與漂白步驟聯(lián)合進(jìn)行，但本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到退漿的一些部分可與漂白步驟分開來進(jìn)行。術(shù)語"上漿"或"漿紗，，指用于紡織品工業(yè)中通過增加紗的耐磨牢度和強(qiáng)度來提高織造性能的化合物。例如，漿料通常由淀粉或淀粉樣化合物制成。如本文所使用的術(shù)語"退漿，，或"進(jìn)行退漿"指通常在施用特定的整理、染色或漂白之前，從紡織品中除去漿料，通常是淀粉的工藝。如本文所^使用的術(shù)語"退漿酶"指用于酶促除去漿料的酶。示例性酶是淀粉酶和甘露聚糖酶。如本文所使用，術(shù)語"生物煮練"意指將在棉或其它紡織品中天然存在的雜質(zhì)，例如多數(shù)非纖維素化合物(例如果膠、蛋白質(zhì)、蠟和塵屑等)除去。除了天然非纖維素雜質(zhì)，一些實(shí)施方式中，煮練還可以除去殘留的由工藝引入的物質(zhì)，例如紡紗、絡(luò)筒或經(jīng)紗上漿潤滑劑。煮練包括生物煮練，但也可以包括使用苛刻的化學(xué)煮練劑，例如氫氧化鈉。術(shù)語"生物煮練酶"因此指能夠除去棉或其它紡織品中的至少一部分雜質(zhì)的酶。術(shù)語"塵屑"指不想要的雜質(zhì)，例如棉籽碎片、葉、莖和其它植物部分，其甚至在^/L械軋棉工藝后仍粘在纖維上。如本文所使用，術(shù)語"原坯(greige)"(發(fā)音同gray)紡織品指在生產(chǎn)后沒有經(jīng)過任何漂白、染色或整理處理的紡織品。例如，尚未被整理(退漿、煮練等)、漂白或染色的任何離開織機(jī)的織造或編織紡織品都被定義為原坯紡織品。下文實(shí)施例中使用的紡織品是原坯紡織品。如本文所使用，術(shù)語"染色"指尤其是通過在染色溶液中浸漬，向例如，紡織品上色。術(shù)語"非棉纖維素，，纖維、紗或織物意指主要由非棉的基于纖維素的組合物組成的纖維、紗或織物。該組合物的實(shí)例包括亞麻(linen)、宇麻、黃麻、亞麻(flax)、人造絲、lyocell、醋酸纖維素和其它源自非棉纖維素的類似組合物。術(shù)語"蛋白酶"意指源自諸如真菌、細(xì)菌等微生物或源自植物或動(dòng)物的蛋白質(zhì)或多肽的蛋白質(zhì)或多肽結(jié)構(gòu)域，其具有在蛋白質(zhì)的碳水化合物骨架的一個(gè)或多個(gè)不同位點(diǎn)催化斷裂肽鍵的能力。24"角質(zhì)酶，，(cutinase)指用于紡織品加工中的源自植物、細(xì)菌或真菌的酶。角質(zhì)酶是能夠水解底物角質(zhì)的脂解酶。角質(zhì)酶可以降解需要在紡織品加工(例如，煮練)中除去的脂肪酸酯和其它基于油的組合物。"角質(zhì)酶"意指具有顯著的植物角質(zhì)水解活性的酶。特別地，角質(zhì)酶將對(duì)植物葉上的生物聚酯聚合物角質(zhì)具有水解活性。適合的角質(zhì)酶可分離自許多不同植物、真菌和細(xì)菌源。LIPASES:STRUCTURE,MECHANISMANDGENETICENGINEERING,71-77(VCHPublishers,Alberghina編，Schmid&Verger,1991);LIPASES,471-77(Elsevier,Borgstrom&Brockman編，1984);和Sebastian等人，169丄BACTERIOLOGY131-136(1987)提供了角質(zhì)酶的實(shí)例。如本文所使用，術(shù)語"果膠酸裂合酶"指這樣一類果膠酶，其切割果膠酸以產(chǎn)生在非還原端具有4-脫氧-a-D-葡糖-4-烯醛酸基(D-gluc-4-enuronosyl)基團(tuán)的寡糖。"果膠酶"是一組切割果膠物質(zhì)，主要是聚(1，4-a-D-半乳糖醛酸糖苷)(poly(l，4-a-D-galacturonide))及其衍生物，的泮唐香鍵的酶(參見Sakai等人，"Pectin,pectinaseandprotopectinase:production,propertiesandapplications"in39ADVANCESINAPPLIEDMICROBIOLOGY213-294(1993))。果膠酸裂合酶也稱作多聚半乳糖醛酸裂合酶(EC4.2.2.2)(PGL)和聚(1，4普D-半乳糖醛酸糖苷)裂合酶。"枯草桿菌果膠酸裂合酶"旨在包括SEQIDNO:1的多肽，以及其變體，其中該變體的特征在于當(dāng)使用原棉作為底物時(shí)具有約6至約8的pH范圍、且其具有pl約7.3、溫度范圍約15。C至約卯。C及約43kD。應(yīng)注意該pH范圍可以因所用底物而變。其它可以使用的溫度范圍包括從約20°C至約"。C，更優(yōu)選從約25。C至約60°C。因此，變體可以包括獲自其它枯草桿菌林系的果膠酸裂合酶。術(shù)語"果膠"指可被較高或較低程度地酯化的果膠酸、多聚半乳糖醛酸和果膠。用，術(shù)語"a-淀粉酶，，指切割直鏈淀粉的a(1-4)糖苷鍵以產(chǎn)生麥芽糖分子((X-葡萄糖的二糖)的酶。淀粉酶是在唾液中發(fā)現(xiàn)的消化性酶，其也由許多植物產(chǎn)生。淀粉酶將長鏈碳水化合物(例如淀粉)降解為較小的單位。"氧化穩(wěn)定的，，a-淀粉酶是當(dāng)與非氧化穩(wěn)定的a-淀粉酶相比，尤其是與該氧化穩(wěn)定的a-淀粉酶所源自的非氧化穩(wěn)定的a-淀粉酶形式相比時(shí)，能抵抗氧化手段的降解作用的a-淀粉酶。如本文所使用，"微生物"指細(xì)菌、真菌、病毒、原生動(dòng)物和其它微生物或微Jf見生物。如本文所使用，"源自，，微生物的物質(zhì)(例如多核苷酸或蛋白質(zhì))意指該物質(zhì)是孩吏生物天然的。1.2縮寫本文中使用下面的縮寫且涉及相關(guān)單詞和措詞AATCC美國紡織化學(xué)師與印染師協(xié)會(huì)APSU堿性果膠酶標(biāo)準(zhǔn)單位ATCC美國典型培養(yǎng)物保藏中心bp堿基對(duì)CBG纖維二糖水解酶CMC羧曱基纖維素CWDE細(xì)胞壁降解酶EC酶分類ECU內(nèi)纖維素酶單元EDTA乙二胺四乙酸EGTA乙二醇-O，-O'-雙(2-氨基-乙基)-N,N，N'，N'-四乙酸FPLC快速蛋白質(zhì)液相色譜HPLC高效液相色譜kl)a千道爾頓KmMichaelis-Menten常數(shù)pi等電點(diǎn)ppm百萬分之PVA聚乙烯醇RAU基準(zhǔn)淀粉酶單位SDS-PAGE十二烷基琉酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳sp.物種(當(dāng)在微生物中時(shí))TAU熱穩(wěn)定性淀粉酶單位TSAU紡織品嗜熱脂肪芽孢桿菌淀粉酶(stearothermophilusamylase)單位TTAU紡織品熱穩(wěn)定性淀粉酶單位Vmax表示酶反應(yīng)的最大速度(即限制速度)的符號(hào)w/v物質(zhì)重量與總體積的百分比w/w按重量計(jì)。2、分離并表征枯草桿菌果膠酸裂合酶從枯草桿菌亞種subtilis菌林168獲得果膠酸裂合酶(pel)。然后在枯草桿菌中過表達(dá)該蛋白質(zhì)。表達(dá)的蛋白質(zhì)具有SEQIDNO:1的^J^酸序列。該枯草桿菌果膠酸裂合酶由pel基因(SEQIDNO:2)編碼GATAACGTCATTATTCGCAACATTGAATTCCAGGATGCCTATGACTATTTTCCGCAA27CAAATTAAAAATTACGCTGCATCATAACCGCTATAAAAATATTGTCCAGCGCGCGCTATGCCCAAAACAATGTCATTGACGTACCGGGACTGTCAGCTGCTAAAACGATCAGAGATCAACGCATCGGCTGCAAACGGGCTGAGCTCTTCTGTCGGCTGGACGCCGTCTCGTGCGGGTAAATTAAAT-3，.該420個(gè)氮基酸的果膠酸裂合酶將可能歸類于酶類EC4.2.2.2。其具有下面的特性氛基酸，DNA420個(gè)殘基；1260個(gè)4lJ^對(duì)分子量45,497功能果膠酸裂合酶(EC4.2.2.2)蛋白蔟IG假定的16615根據(jù)還原性SDS-PAGE凝膠分析，成熟的蛋白質(zhì)具有43.4kDa的計(jì)算分子量，以及pl7.3。該成熟的蛋白質(zhì)具有下面的序列(以氨基到氛基的方向顯示)ADLGHQTLGSNDGWGAYSTGTTGGSKASSSNVYTVSNRNQLVSALGKETNTTPKIIYIKGTID畫VDDNIKPLGLNDYKDPEYDLDKYLKAYDPSTWGKKEPSGTQEEARARSQKNQKARVM窗PANmVGSGTNAKVVGGNFQIKSDVI翻IEFQDAYDYFPQWDPTDGSSGNWNSQU蘭T歸GTHIWIDHCTFNDGSRPDSTSPKYYGRKYQHHDGQTDASNGANYITMSYNYYHDHDKSSIFGSSDSKTSDDGKLKITLHHNRYKNIVQRAPRVRFGQVHVYNNGTQ脆SAANGLSSSVGWTPSLHGSIDASANVKSNVINQAGAGKLN(SEQIDNO:I).該蛋白質(zhì)表達(dá)為與AprE信號(hào)序列融合的融合蛋白質(zhì)。然后該信號(hào)序列在蛋白質(zhì)分泌期間被切除。可以用其它信號(hào)序列替代。該枯草桿菌pel基因被克隆到作為宿主細(xì)胞的枯草桿菌抹系BG3594comK中。其它細(xì)胞可以替代用于表達(dá)該基因。由枯草桿菌抹系BG3594comK產(chǎn)生的成熟蛋白質(zhì)具有43.4kDa的計(jì)算分子量和pi為7.3。該蛋白質(zhì)具有寬的pH范圍和寬的溫度范圍。圖3。該公開的果膠酸裂合酶的最適pH低于Biopr印TM3000L的(Novozymes,pH范圍7.5-8.5)。參見圖1。另外，與Bioprep3000L在窄溫度范圍中起作用不同，本文公開的果膠酸裂合酶的最適pH活性具有跨寬的溫度范圍(即20。C至65。C)的活性。本文公開的果膠酸裂合酶具有大大超過由BkprepTM3000L所獲得的果膠去除劑量反應(yīng)。參見圖2。相比于BioprepTM3000L，該公開的果膠酸裂合酶在55。C具有較低的熱穩(wěn)定性。然而，該酶最佳在室溫下使用。在室溫下檢測時(shí)，該公開的果膠酸裂合酶具有比Bh)prq)TM3000L提高的EDTA穩(wěn)定性。表達(dá)。優(yōu)選地，表達(dá)SEQIDNO:1或其變體的宿主細(xì)胞具有適于大,表達(dá)該多肽的增加的表達(dá)。可以通過如下方式測量變體的果膠酸裂合酶活性向瓊脂板(例如，LB瓊脂)中打出的4mm孑L(含有0.7%w/v聚半乳糖醛酸鈉(SigmaP1879))施加受試溶液。然后在特定溫度(例如75°C)孵育板6h。然后(i)在1MCaCl2中浸漬該板0.5h或在(ii)1。/?；旌系匿寤榛谆@(MTAB，SigmaM-7635)中浸漬該板1h。這些程序都造成聚半乳糖醛酸在瓊脂內(nèi)的沉淀?？梢酝ㄟ^在沉淀的聚半乳糖醛酸背景中透明區(qū)的出現(xiàn)檢測果膠酸裂合酶活性，"胡里貼祐刻3、包括果膠酸裂合酶的組合物本文提供的一個(gè)方面是包括枯草桿菌的純化的果膠酸裂合酶或其變體的酶組合物或制劑。該果膠酸裂合酶可以單獨(dú)使用或與其它具有酶活性的多肽組合使用。優(yōu)選的組合物包括生物煮練、漂白、退漿和/或染色組合物。更優(yōu)選的是在一個(gè)步驟中實(shí)現(xiàn)紡織品的生物煮練、漂白、退漿和/或染色及其組合的一步組合物。其它組合物包括含有果膠酸裂合酶的清潔組合物，例如用于清潔紡織品的洗滌劑。所公開的果膠酸裂合酶也可以在纖維素材料的準(zhǔn)備中用于酶促煮練(生物煮練)工藝，例如以為了在后續(xù)的漂白和/或染色操作中獲得合適的反應(yīng)。該酶也可以用于除去洗滌物上存在的某些污垢或污漬，尤其是由例如含半乳聚糖或阿拉伯半乳聚糖的食品、植物等造成的污垢和污點(diǎn)。該果膠酸裂合酶也可以用于清潔溶液和清潔劑中以通過從硬表面除去或輔助除去某些污垢或污漬來清潔硬表面。因而，組合物尤其可以包括退漿酶、生物煮練酶(除果膠酸裂合酶之外附加的)、漂白試劑和染色劑。3.1退漿酶本文所述的組合物可以包括退漿酶與果膠酸裂合酶的組合。退漿劑可以與漂白劑、除果膠酸裂合酶之外附加的其它生物煮練酶以及生物拋光酶、和/或染色劑一起使用?？墒褂萌魏芜m合的退漿酶。優(yōu)選地，退漿酶是淀粉分解酶。甘露聚糖酶和葡糖淀粉酶也可用于此處。更優(yōu)選地，退漿酶是a或(3淀粉酶及其組合。3.1.1淀粉酶可以使用a-和p-淀粉酶，其包括那些細(xì)菌或真菌來源的。也考慮該淀粉酶的化學(xué)或遺傳修飾的突變體。優(yōu)選的a-淀粉酶包括，例如可獲自芽孢桿菌屬物種的a-淀粉酶。有用的淀粉酶包括但不限于Optisize40、Optisize160、OptisizeHT260、OptisizeHT520、OptisizeHTPlus、OptisizeFLEX(全部來自GenencorInt.Inc.)、DuramylTM、TermamylTM、FungamylTM和BA『M(全部可獲自NovozymesA/S，Bagsvaerd，Denmark)。其它優(yōu)選的淀粉分解酶是CGTases(環(huán)糊精葡聚糖轉(zhuǎn)移酶，EC2.4.1.19)，例如獲自芽孢桿菌屬、高溫厭氧桿菌屬(Thermoanaerobacter)或高溫厭氧芽孢桿菌屬(Thermoanaerobacterium)物種的那些。以基準(zhǔn)淀粉酶單位(RAU)每克產(chǎn)品(RAU/g)表示Optisize40和Optisize160的活性。一RAU是在標(biāo)準(zhǔn)條件下，1小時(shí)內(nèi)將lg淀粉轉(zhuǎn)化成可溶性糖的酶量。OptisizeHT260、OptisizeHT520和OptisizeHTPlus30的活性以紡織品熱穩(wěn)定性淀粉酶單位每克(TTAU/g)表示。一TTAU是在標(biāo)準(zhǔn)條件下，每小時(shí)將100mg淀粉水解為可溶性糖所需的酶量。OptisizeFLEX的活性以紡織品嗜熱脂肪芽孢桿菌淀粉酶單位(TSAU/g)每克來定義。一TSAU是在標(biāo)準(zhǔn)條件下，一分鐘內(nèi)將lmg淀粉轉(zhuǎn)化成可溶性糖所需的酶量。淀粉酶的劑量因工藝類型而變。較小劑量將比較大劑量的相同酶需要更多的時(shí)間。然而，除了可能受溶液的物理特征控制外，退漿淀粉酶的量沒有上限。過量的酶不會(huì)損傷織物；其允許較短的工藝時(shí)間。4艮據(jù)前述以及所使用的酶，建議下述最小劑量用于退漿<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>退漿酶也可優(yōu)選源自上迷列舉的酶，其中一或多個(gè)氨基酸已被添加、缺失或置換，包括雜種多肽，條件是生成的多肽展現(xiàn)退漿活性?？梢允褂贸Ｒ?guī)誘變程序產(chǎn)生該變體并使用例如高通量篩選扶術(shù)如瓊脂板篩選法進(jìn)行鑒定。以可以有效地^f吏紡織品材料退漿的量將退漿酶加入水性i^液(即，所述處理組合物)中。通常，退漿酶(例如a-淀粉酶)以按重量計(jì)織物的0.00001%至2%的酶蛋白量加入處理組合物中，優(yōu)選按重量計(jì)織物的0.0001%至1%的酶蛋白量，更優(yōu)選按重量計(jì)織物的0.001%至0.5%的酶蛋白量，及甚至更優(yōu)選按重量計(jì)織物的0.01%至約0.2%的酶蛋白量。3.2生物煮練酶一方面考慮使用果膠酸裂合酶作為唯一的生物煮練劑。另一方面考慮其與一或多種其它生物煮練酶組合使用。這些生物煮練酶可以包括在適合的生物煮練組合物，或進(jìn)行生物煮練、漂白、退漿和/或染色中的一或多種的一步組合物中。可以與所公開的果膠酸裂合酶及其變體結(jié)合使用的其它生物煮練酶，包括但不限于，其它果膠酶，包括其它果膠酸裂合酶，和角質(zhì)酶、蛋白酶、脂肪酶和纖維素酶。生物煮練酶可以與緩沖液，包括但不限于磷酸鹽、硅酸鹽、碳酸鹽或檸檬酸鹽緩沖液，以及其它輔助化學(xué)品，例如但不限于，潤濕劑、表面活性劑、乳化劑和螯合劑，一起使用來增強(qiáng)紡織品的潤濕性。根據(jù)所選用于處理的工藝，可以使用不同的溫度。對(duì)于冷軋巻堆工藝，煮練處理可以例如在約15。C至約45°C，和優(yōu)選約25。C至約35。C進(jìn)行；對(duì)于連續(xù)、半連續(xù)和其它分批工藝，工藝可以在約15。C至約卯。C,優(yōu)選約2(TC至75。C，及更優(yōu)選約25。C至約60。C進(jìn)行。為了提高煮練性能，可單獨(dú)使用包括但不限于潤濕劑、表面活性劑、乳化劑、螯合劑的助劑或?qū)⑵渑c其它試劑組合使用。3.2.1果膠酶可使用任何具有降解諸如植物細(xì)胞壁的果膠組合物的能力的果膠分解酶。適合的果膠酶包括但不限于真菌或細(xì)菌來源的那些。也包括化學(xué)或遺傳修飾的果膠酶。優(yōu)選地，果膠酶是重組產(chǎn)生的或是天然來源的。它們可為單組分酶?？梢愿鶕?jù)果膠酶的優(yōu)選底物，即，高甲基酯化的果膠或低曱基酯化的果膠和聚半乳糖醛酸(果膠酸)，以及它們的反應(yīng)機(jī)制，即P-消除或水解，將果膠酶分類。果膠酶可以主要是內(nèi)切作用，在鏈內(nèi)隨機(jī)位點(diǎn)切斷聚合物得到寡聚物的混合物，或者它們可為外切作用，從聚合物的一端起始攻擊并產(chǎn)生單體或二聚體。由EnzymeNomenclature(1992)提供的酶分類中包括了作用于果膠平滑區(qū)的幾種果膠酶活性，例如，果膠酸裂合酶(EC4.2.2.2)、果膠裂合酶(EC4.2.2.10)、多聚半乳糖醛酸酶(EC3.2.1.15)、外切-多聚半乳糖醛酸酶(EC3.2.1.67)、外切-多聚半乳糖醛酸-裂合酶(EC4.2.2.9)和外切-聚-a-半乳糖醛酸糖苷酶(EC3.2.1.82)。優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明方法利用果膠酸裂合酶。如本文所使用的果膠酸裂合酶酶促活性指催化果膠酸(也稱作多聚半32乳糖醛酸)中a-l，4-糖苷鍵通過反式消除而隨機(jī)斷裂。果膠酸裂合酶也稱作多聚半乳糖醛酸裂合酶和聚(1，4-D-半乳糖醛酸糖苷)裂合酶。出于本文的目的，果膠酸裂合酶酶促活性是可以通過測量在pH10的0.1M甘氨酸緩沖液中0.1%w/v多聚半乳糖醛酸鈉溶液的235nm吸光度增力口而確定的活性(參見Collmer等人，"Assaymethodsforpecticenzymes,"in161METHODSENZYMOL.329-335(1988))。酶活性通常表示為xmol/分鐘，即，催化形成x摩爾產(chǎn)物/分鐘的酶量。替代的檢測法測量在pH10的0.1M甘氨酸緩沖液中5%w/v多聚半乳糖醛酸鈉溶液的粘度降低，如通過振動(dòng)粘度計(jì)所測的(APSU單位)。APSU單位檢測法是使用底物多聚半乳糖醛酸的粘度測量法且可以按照例如WO2006/002034所討論的來進(jìn)行。可以與枯草桿菌果膠酸裂合酶及其變體一起使用的其它果膠酸裂合酶包括已從不同細(xì)菌屬克隆出的果膠酸裂合酶，例如歐文氏菌屬(Erwinia)、假單胞菌屬(Pseudomonas)，其它芽孢桿菌屬物種和菌林，克雷伯氏菌屬(Klebsiella)，和黃單胞菌屬(Xanthomonas)。適合此處使用的果膠酸裂合酶可以來自枯草桿菌(Nasser等人，335FEBSLETTS.319-326(1993))和芽孢桿菌屬物種YA-14(Kim等人，58Biosci.BIOTECH.BI()CHEM.947-949(1994))。可以考慮的其它果膠酸裂合酶包括由短小芽胞桿菌(Bacilluspumilus)(Dave和Vaughn,108J.BACTERIOL.166-174(197")、多粘芽孢桿菌(B.polymyxa)(Nagel和Vaughn,93ARCH.BIOCHEM.BIOPHYS.344-352(1961))、嗜熱脂肪芽孢桿菌(B.stearothermophilus)(Karbassi和Vaughn,26CAN.J.MICROBIOL.26:377-384(1980))、芽孢桿菌屬物種(Hasegawa和agel，31J，F(xiàn)OODSCI.838-845(1966))以及芽孢桿菌屬物種RK9(Kelly和Fogarty，24CAN.丄MICROBIOL.1164-1172(1978))產(chǎn)生的那些，這些果膠酸裂合酶已被描述，可以考慮將其與本文公開的枯草桿菌果膠酸裂合酶及其變體組合用于本發(fā)明的組合物和方法中?？梢钥紤]組合使用的其它果膠酸裂合酶包括WO04/090099(Diversa)和WO03/095638(Novozymes)中公開的那33些。待使用的果膠分解酶的有效量取決于許多因素，但可以包括水性介質(zhì)中按織物重量計(jì)約0.0001%至約1%的微克酶蛋白質(zhì)，優(yōu)選按織物重量計(jì)0.0005%至0.2%的酶蛋白質(zhì)，更優(yōu)選按織物重量計(jì)0.001%至約0.05%的酶蛋白質(zhì)的果膠分解酶濃度。3.2.2角質(zhì)酶可用于本文組合物和方法的任何適合的角質(zhì)酶包括，例如，源自特異腐質(zhì)霉(Humicolainsolens)角質(zhì)酶林系DSM1800的角質(zhì)酶，(如在美國專利號(hào)4,810,414的實(shí)施例2中所述(在此引入作為參考))，或在優(yōu)選實(shí)施方式中，美國專利號(hào)5,512,203所述的來自門多薩假單胞菌(Pseudomonasmendocina)的微生物角質(zhì)酶，其變體和/或等效物。適合的變體描述于，例如WO03/76580。合適的細(xì)菌角質(zhì)酶可源自假單胞菌屬(Pseudomonas)或不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)物種，優(yōu)選來自施氏假單胞菌(P.stutzeri)、產(chǎn)堿假單胞菌(P.alcaligenes)、類產(chǎn)堿假單胞菌(P.pseudoalcaligenes)、銅綠假單胞菌(P.aeruginosa)或醋酸釣不動(dòng)桿菌(A.calcoaceticus)，最優(yōu)選來自施氏假單胞菌林ThaiIV17-1(CBS461.85)、PG-1-3(CBS137.89)、PG-1-4(CBS138.89)、PG-II-11.1(CBS139.89)或PG-II-11.2(CBS140.89)、銅綠假單胞菌PAO(ATCC15692)、產(chǎn)堿假單胞菌DSM50342、類產(chǎn)堿假單胞菌INII-5(CBS468.85)、類產(chǎn)堿假單胞菌M-l(CBS473.85)或醋酸鉤不動(dòng)桿菌GrV-39(CBS460.85)。對(duì)于來自植物的角質(zhì)酶的使用，已知角質(zhì)酶在許多植物的花粉中存在。因此，所公開的方法和組合物中可以考慮使用源自植物的角質(zhì)酶。角質(zhì)酶也可源自真菌，例如犁頭霉屬(Absidiaspp.);枝頂孢屬(Acremoniumspp.);蘑蒜屬(Agaricusspp);Anaeromycesspp.;曲霉屬(Aspergillusspp.)，包括棘孢曲霉(A.auculeatus)、泡盛曲霉(A.awamori)、黃曲霉(A.flavus)、臭曲霉(A.foetidus)、A.fumaricus、煙曲霉(A.fumigatus)、構(gòu)巢曲霉(A.nidulans)、黑曲審(A.niger)、米曲審(A.oryzae)、土曲霉(A.terreus)和雜色曲霉(Aeurobasidiumspp.);頭孢屬(Cephalosporumspp.);毛殼屬(Chaetomiumspp.);鬼傘屬(Coprinusspp.);才旨孢屬(Dactyllumspp.);鐮孢屬(Fusariumspp.)，包括F.conglomerans、多隔鐮孢(F.decemcellulare)、爪哇鐮孢(F.javanicum)、亞麻錄抱(F.lini)、尖鐮孢(F.oxyspor函)和腐皮鐮孢(F.solani);粘帚霉屬(Gliocladi腿spp.);腐質(zhì)霉屬(Humicolaspp.),包括特異腐質(zhì)霉(H.i畫lens)和疏毛腐質(zhì)霉(H.lanuginosa);毛霉屬(Mucorspp.);脈孢菌屬(Neurosporaspp.)，包括粗糙脈孢菌(N.crassa)和好食脈孢菌(N.sitophila);Neocallimastixspp.;Orpinomycesspp.;青霉屬(Penicilliumspp.);原毛平革屬(Phanerochaetespp.);射脈菌屬(Phlebiaspp.);Piromycesspp.;假單胞菌屬(Pseudomonasspp.);根霉屬(Rhizopusspp.);裂褶菌屬(Schizophyllumspp.);檢菌屬(Trametesspp.);木霉屬(Trichodermaspp.)，包括里氏木霉(T.reesei)、長梗木霉(T.reesei(Iongibrachiatum))和綠色木霉(T.viride);以及接霉屬(Zygorhynchusspp.)。類似地，預(yù)期可在細(xì)菌，例如芽孢桿菌屬；纖維單胞菌屬(Celhilomonasspp.);.梭菌屬(Clostridiumspp.);毀絲霉屬(Myceliophthoraspp.);假單胞菌屬，包括門多薩假單胞菌和惡臭假單胞菌(P.putida);高溫單孢菌屬(Thermomonosporaspp.);嗜熱絲孢菌屬(Thermomycesspp)，包括疏棉狀嗜熱絲孢菌(T.lanuginose);鏈霉菌屬(Streptomycesspp.)，包括橄欖色鏈霉菌(S.olivochromogenes);和在降解纖維的瘤胃細(xì)菌中，例如Fibrobactersuccinogenes;和在酵母中，包括，假絲酵母屬(Candidaspp.)，包括南極假絲酵母(C.Antarctica),皺落假絲酵母(C.rugosa)、C.to園ii;近平滑假絲酵母(C.parapsllosis);清酒假絲酵母(C.sake);涎沫假絲酵母(C.zeylanoides);Pichiaminuta;紅酵母(Rhodotomlaglutinis);膠紅酵母(R.mucilagi謹(jǐn)a);和不對(duì)稱擲孢酵母(Sporobolomycesholsaticus),發(fā)現(xiàn)角質(zhì)酶。優(yōu)選地，角質(zhì)酶以按織物重量計(jì)0,00001%至2%的酶蛋白量，優(yōu)選以按織物重量計(jì)0.0001%至1%的酶蛋白量，更優(yōu)選按織物重量計(jì)0.005%至350.5%的酶蛋白量，及甚至更優(yōu)選按織物重量計(jì)0.001%至0.5%的酶蛋白量，加入水性酶溶液中。3.2.3纖維素酶也考慮將纖維素酶與本文所述的枯草桿菌果膠酸裂合酶及其變體組合用于本發(fā)明方法和組合物中進(jìn)行生物煮練。纖維素酶坤皮分類為一系列酶家族，涵蓋內(nèi)切和外切活性以及纖維二糖水解能力。用于組合物和工藝的纖維素酶可源自已知能夠產(chǎn)生纖維素分解酶的孩i生物，例如腐質(zhì)霉屬、嗜熱絲孢菌屬、芽孢桿菌屬，木霉屬、鐮孢屬、毀絲霉屬、原毛平革屬、耙菌屬(Irpex)、柱頂孢屬(Scytalidium)、裂褶菌屬、青霉屬、曲霉屬、或地霉屬(Geotricum)的物種。能夠產(chǎn)生纖維素分解酶的已知物種包括特異腐質(zhì)霉、尖鐮孢或里氏木霉。美國專利號(hào)4,435,307;歐洲專利申請(qǐng)No.O495257;PCT專利申請(qǐng)No.WO91/17244;和歐洲專利申請(qǐng)No.EP-A2-271004公開了合適的纖維素酶的非限制性實(shí)例，這些文獻(xiàn)全部在此整體并入作為參考。纖維素酶也可以用于紡織品的生物拋光?？梢酝ㄟ^稱作"生物拋光"的酶促處理改良棉和基于纖維素的其它天然纖維(例如，亞麻，大麻)。這一處理賦予織物更平滑及更有光澤的外觀?？梢允褂迷撎幚沓?絨毛"-從紗表面突出的微小纖維束。絨毛球在紡織品行業(yè)中被稱作"起球，，(pill)。生物拋光以后，絨毛和起球減少。除去絨毛的其它益處在于更柔軟和更平滑的手感以及出眾的色澤亮度。一個(gè)實(shí)施方式中，纖維素酶可以以按織物重量計(jì)0.0001%至1%的酶蛋白質(zhì)，優(yōu)選按織物重量計(jì)0.0001%至0.05%的酶蛋白質(zhì)，特別是按織物重量計(jì)0.001%至約0,01%的酶蛋白質(zhì)的濃度使用。纖維素酶活性(ECU)的確定可通過測量酶降低羧甲基纖維素(CMC)溶液粘度的能力以內(nèi)纖維素酶單位(ECU)確定。ECU檢測法通過測量樣品降低羧曱基纖維素(CMC)溶液粘度的能力來量化樣品中存在的催化活性的量。以40。C;pH7.5;0.1M磷酸鹽緩沖液；時(shí)長30分鐘，使用降低CH1C底物粘度的相對(duì)酶標(biāo)準(zhǔn)(Hercules7LED),大約0.15ECU/ml的酶濃度)，于振動(dòng)粘度計(jì)(例如來自Sofraser，F(xiàn)rance的MIVI3000)中實(shí)施該檢測法。此ArchStandard定義為8200ECU/g。一ECU是在這些條件下將粘度降至一半的酶量。3.2.4其它生物煮練酶L討煮練酶與本文公開的枯草桿菌果膠酸裂合酶及其變體組合用于生物煮練。其它酶可單獨(dú)使用或者相互地或與上面列舉的酶相組合使用。例如，蛋白酶可用作生物煮練劑。適合的蛋白酶包括那些動(dòng)物、植物或^:生物來源的，優(yōu)選孩i生物來源的。蛋白酶可為絲氨酸蛋白酶或金屬蛋白酶，優(yōu)選堿性微生物蛋白酶或胰蛋白酶樣蛋白酶。蛋白酶的實(shí)例包括氨肽酶，包括脯氨酰氨肽酶(3.4.11.5)、X-pro氨肽酶(3.4.11.9)、細(xì)菌亮氨酰氨肽酶(3.4.11.10)、耐熱氨肽酶(3.4.11.12)、賴氨酰氨肽酶(3.4.11.15)、色氨酰氨肽酶(3.4.11.17)和曱硫氨酰氨肽酶(3.4.11.18);絲氨酸內(nèi)肽酶，包括糜蛋白酶(3.4.21.1)、胰蛋白酶(3.4.21.4)、黃瓜素(cucumisin)(3,4.21.25)、brachyurin(3.4.21.32)、cerevisin(3.4.21.48)和枯草桿菌蛋白酶(3.4.21.62);半胱氨酸內(nèi)肽酶，包括木瓜蛋白酶(3.4.22.2)、無花果蛋白酶(3.4.22.3)、木瓜凝乳蛋白酶(3.4.22.6)、蘿摩蛋白酶(3.4.22.7)、獼猴桃蛋白酶(actinidain)(3.4.22.14)、番木瓜蛋白酶(3.4.22.30)和ananain(3.4.22.31);天冬氨酸內(nèi)肽酶，包括胃蛋白酶A(3.4.23.1)、曲霉天冬酰蛋白酶(Aspergillop印sin)I(3.4.23.18)、青霉天冬酰蛋白酶(3.4.23.20)和酵母天冬酰蛋白酶(Saccharopepsin)(3.4.23.25);以及金屬內(nèi)肽酶，包括芽孢桿菌溶素(Bacillolysin)(3.4.24.28)。枯草桿菌蛋白酶的非限制性實(shí)例包括枯草桿菌蛋白酶BPN'、枯草桿菌蛋白酶amylosacchariticus、枯草桿菌蛋白酶168、枯草桿菌蛋白酶mesentericopeptidase、枯草桿菌蛋白酶Carlsberg、枯草桿菌蛋白酶DY、枯草桿菌蛋白酶309、枯草桿菌蛋白酶147、thermitase、aqualysin、芽孢桿菌PB92蛋白酶、蛋白酶K、蛋白酶TW7和蛋白酶TW1市售可得的蛋白酶包括AlcalaseTM、SavinaseTM、PrimaseTM、37I)uralaseTM、EsperaseTM、KannaseT,DurazymTM(NovoNordiskA/S)、MaxataseTM、MaxacalTM、MaxapemTM、ProperaseTM、PurafectTM、P眼fectOxPTM、F醇m和FN3(GenencorInternationalInc.)。考慮用于本公開的組合物的其它蛋白酶包括變體，例如在專利或公布的專利申請(qǐng)EP130,756(Genentech)、EP214,435(Henkd)、WO87/04461(Amgen)、WO87/05050(Genex)、EP251,446(Genencor)、EP260,105(Genencor)、WO88/08028(Genex)、WO88/08033(Amgen)、WO89/06279(NovoNordiskA/S)、WO91/00345(NovoNordiskA/S)、EP525610(Solvay)、WO94/02618(Gist-BrocadesN.V.)、Thomas等人，318NATURE375-376(1985)、Russel等人，328NATURE496-500(1987)、Thomas等人，193丄MOL.BIOL.803-813(1987)中公開的那些，這些文獻(xiàn)全部通過引用并入此處?？梢园凑誐ETHODSOFENZYMATICANALYSISvol.5(第三版，VerlagChemie，Weinheim，1985)所述確定蛋白酶的活性。另一方面考慮脂肪酶與本公開的果膠酸裂合酶及其變體組合用于生物煮練。適合的脂肪酶(也稱作羧酸酯水解酶)包括但不限于細(xì)菌或真菌來源的那些，包括三酰甘油脂肪酶(3.1.1.3)和磷脂酶A2(3丄1.4.)?？梢钥紤]的脂肪酶包括但不限于來自腐質(zhì)霉屬(與嗜熱絲孢菌屬同義)的脂肪酶，例如專利或7>布的專利申請(qǐng)EP258,068和EP305,216所述來自疏毛腐質(zhì)霉(T.lanuginosus)，或WO96/13580所述來自特異腐質(zhì)霉的脂肪酶;假單胞菌脂肪酶，例如來自產(chǎn)堿假單胞菌或類產(chǎn)堿假單胞菌(EP"8,272)、洋蔥假單胞菌(P.cepacia)(EP331,376)、施氏假單胞菌(GB1,372,034)、熒光假單胞菌(P.fluorescens)、假單胞菌屬物種林系SD705(WO95/06720和WO96/27002)、P.wisconsiiieiisis(WO96/12012)的脂肪酶；芽孢桿菌脂肪酶，例如來自枯草桿菌(Dartois等人，1131BiOCHEM.BIOPHYS.ACTA253-360(1993));嗜熱脂肪芽孢桿菌(JP64/744992)或短小芽胞桿菌(WO91/16422)的脂肪酶，所有文獻(xiàn)在此通過整體引用而并入。其它實(shí)例是脂肪酶變體，例如WO92/05249、WO94/01541、EP407225、38EP260105、WO95/35381、WO96/00292、WO95/30744、WO94/25578、WO95/14783、WO95/22615、WO97/04079和WO97/07202中所述的那些，所有文獻(xiàn)在此通過整體引用而并入。優(yōu)選的市售可得的脂肪酶包括LipolaseTM、LipolaseUltraTM、LipozymeTM、PalataseTM、NovozymTM435和LecitaseTM(均可獲自NovoNordiskA/S)?？梢园碝ETHODSOFENZYMATICANALYSISvol.4(第三版，VeiiagChemie，Weinhein，1984)所述確定脂肪酶的活性。應(yīng)理解任何展示生物煮練活性的酶均可以用于本公開的組合物中。也就是說，可使用源自其它生物的生物煮練酶、或者源自上面列舉的酶且其中一或多個(gè)氨基酸已發(fā)生添加、缺失或置換的生物煮練酶，包括雜種多肽，條件是生成的多肽展現(xiàn)生物煮練活性?？梢允褂贸Ｒ?guī)誘變法產(chǎn)生變體并使用例如高通量篩選技術(shù)如瓊脂板篩選法進(jìn)行鑒定。3.3化學(xué)漂白試劑和^^漂白體系另一方面考慮將漂白試劑與枯草桿菌果膠酸裂合酶及其變體組合用于處理坊織品o只要漂白試劑和體系不使組合物的酶失活，則對(duì)該漂白試劑或體系沒有限制。示例性的漂白試劑包括，例如過氧化氫、過氧化脲、過氧化碳酸鈉、過氧化鈉、過硼酸鈉、次氯酸鈉、次氯酸4丐、高錳酸鹽和二氯異氰脲酸鈉。優(yōu)選實(shí)施方式中，使用過氧化氫作為漂白試劑。另一實(shí)施方式中，S^l生物漂白試劑單獨(dú)使用或與非酶促漂白試劑一起使用。生物漂白試劑的非限制性實(shí)例是過氧化物酶(Colonna等人，"Recentbiologicaldevelopmentsintheuseofperoxidases,"17TIBTECH163-168(1999))和氧化還原酶(例如，葡糖氧化酶)(Pramod，"Liquidlaundrydetergentscontainingstabilizedglucose-glucoseoxidativesystemforhydrogenperoxidegeneration，"美國專利No.5,288,746)。漂白化合物可以以約0.01至約10g/L水性溶液或洗液，更優(yōu)選約0.1至5g/L，和更優(yōu)選約0.5至約2.5g/L的量存在于水性溶液中。另一方面考慮將過水解酶與其它化學(xué)漂白試劑例如過碳酸鈉、過硼酸鈉、硫酸鈉/過氧化氫加合物和氯化鈉/過氧化氫加合物和/或光敏漂白染料39例如磺化酞菁的鋅或鋁鹽組合使用以進(jìn)一步提高漂白效果。其它實(shí)施方式中，可以加入進(jìn)一步與漂白增效劑(例如，TAED、NOBS)組合的過水解酶。漂白增效劑也可以在沒有過水解酶的情況下與本/^開的果膠酸裂合酶和漂白試劑相組合使用。3.3.1酶促漂白體系通過酶促過水解(perhydrolysis)進(jìn)行過酸生產(chǎn)的關(guān)鍵組分是酶、酯底物和過氧化氫。3.3.1.1過氧化氫過氧化氫可以直接地分批加入，或者原位持續(xù)產(chǎn)生。例如，在2004年12月3日遞交的題為"perhydrolase，，的PCT/US2004/040438(在此通過引用并入)中描述的乙酰轉(zhuǎn)移酶也可以與任何其它合適的Kb02源，包括由化學(xué)、電化學(xué)和/或除&手段產(chǎn)生的11202源，一起使用?；瘜W(xué)來源的實(shí)例是過碳酸鹽和過硼酸鹽，而電化學(xué)來源的實(shí)例是氧氣和氫氣供料的燃料電池，以及降冗實(shí)例包括從葡萄糖與葡糖氧化酶的反應(yīng)生產(chǎn)11202。下式提供了可以使用的偶聯(lián)體系的實(shí)例葡糖氧化酶葡萄糖+H20---------------------->葡糖酸+H202+過水解酶H202+酯底物--------------------->醇+過酸與適合的底物產(chǎn)生H202的其它酶也可以與本文所述的組合物和方法組合使用。例如，來自已知從乳酸和氧氣產(chǎn)生H202的乳桿菌屬物種(lactobacillus)的乳酸氧化酶。事實(shí)上，該方法的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于酸(例如，上例中的葡糖酸)的產(chǎn)生將使堿性溶液的pH降至對(duì)于過酸在漂白中最為有效的pH范圍(即，為pKa或低于pKa)。其它可以產(chǎn)生過氧化氫的酶(例如乙醇氧化酶、乙二醇氧化酶、丙三醇氧化酶、氨基酸氧化酶等)也可與酯底物及過水解酶組合用于產(chǎn)生過酸。一些優(yōu)選實(shí)施方式中，酯底物選自一或多種下述酸甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、辛酸、壬酸、癸酸、十二烷酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸和油酸。因此，如本文所述，本公開的組合物和工藝比當(dāng)前用于紡織品漂白的方法和組合物，可以提供明確的優(yōu)點(diǎn)。3.3.2漂白活化劑本發(fā)明可使用任何適合的漂白活化劑。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選使用的漂白活化劑包括，例如屬于下類物質(zhì)的化合物多?；奶腔蚓哂蠧l-10-?；鶊F(tuán)的糖f汴生物，所述?；鶅?yōu)選乙?；?、丙?；?、辛酰基、壬?；虮郊柞；绕鋬?yōu)選乙?；?，它們可以用作漂白活化劑?？梢允褂玫奶腔蛱茄苌锸菃翁腔蚨羌捌溥€原的或氧化的衍生物，優(yōu)選葡萄糖、甘露糖、果糖、蔗糖、木糖或乳糖。這類物質(zhì)中尤其適合的漂白活化劑是例如，五乙?；咸烟?、木糖四乙酸酯、l-苯甲?；?2，3，4，6-四乙?；咸烟呛?-辛酰基-2，3,4，6-四乙?；咸烟?。另一類優(yōu)選用作漂白活化劑的物質(zhì)包括例如?；趸ц峒捌鋲A金屬和堿土金屬鹽，例如Cw4-?；鶊F(tuán)。優(yōu)選乙酰基、丙酰基、辛酰基、壬?；捅郊柞；?，尤其是乙酰基和壬?；?。這類物質(zhì)中尤其適合的漂白活化劑是乙酰氧基苯磺酸和苯甲酰氧基苯磺酸。它們優(yōu)選地以其鈉鹽的形式使用。組合或與TAED組合)；O-?；鶎Ⅴィ绫狾-乙?；?、丙酮O-苯曱?；弧⒍?丙基亞氨基)碳酸酯、二(環(huán)己基亞M)碳酸酯作為漂白活化劑。根據(jù)本發(fā)明可以用作漂白活化劑的?；棵枋鲇冢鏓P-A-O028432。才艮據(jù)本發(fā)明可以用作漂白活化劑的肟酯描述于，例如EP-A-0267046。其它優(yōu)選的漂白活化劑包括N-酰基己內(nèi)酰胺，例如N-乙酰基己內(nèi)酰胺、N-苯甲酰己內(nèi)酰胺、N-辛酰基己內(nèi)酰胺和羰基雙己內(nèi)酰胺；N，N-二?；暮蚇，N，N'，N'-四?；陌?，例如N，N，N'，N，-四乙?；锥泛?乙二胺(TAED)、N，N-二乙?；桨?、N，N-二乙?；?對(duì)-甲苯胺或1，3-二酰化乙內(nèi)酰脲例如1，3-二乙酰基-5，5-二甲基乙內(nèi)酰脲；N-烷基-N-磺?；０防鏝-曱基-N-甲磺?；阴０坊騈-曱基-N-甲磺酰基苯甲酰胺;N-?；h(huán)酰肼、酰化三唑或尿唑，例如單乙?；R來酰肼；O，N，N-三取代的羥胺，例如O-苯甲?；?N,N-琥珀酰基-羥胺、O-乙?；?N，N-琥珀酰基羥胺或O,N，N-三乙?；u胺；N,N，-二?；酋０?，例如N，N'-二甲基-N，N'-二乙?；酋０坊騈，N'-二乙基-N，N'-二丙酰基磺酰胺；三酰基氰脲酸酯例如三乙?；桦逅狨セ蛉郊柞；桦逅狨?；羧酸酐例如苯甲酸酐、間-氯苯甲酸酐或鄰苯二甲酸酐；1，3-二酰基-4，5-二酰基氧基咪唑啉，例如1,3-二乙?；?4，5-二乙酰氧基咪唑啉；四乙?；孰搴退谋；孰?；二?；?，5-二酮哌嗪例如1，4-二乙?；?2，5-二酮哌噪；亞丙基雙脲和2，2-二曱基亞丙基雙脲的?；a(chǎn)物例如四乙?；鶃啽p脲；a-酰氧基多?；０防鏰-乙酰氧基-N，N，-二乙?；０?；二?；醮鶜?l，3,5-三嗪例如1，5-二乙?；?2，4-二氧代六氫-l，3，5-三嗪；2-烷基-或2-芳基-(4H)-3，1-苯并喁嗪-4-酮如EP-B1-0332294和EP-B0502013所述，和2-苯基-(4H)-3,1-苯并嗜、嗪-4-酮和2-甲基-(4H)-3，1-苯并噴、嚷-4-酮、陽離子亞硝酸鹽，如EP303520和EP458396Al所述，例如三甲基銨基乙腈、N，N-二甲基-N-辛基銨基乙腈、2-(三甲基銨基)丙腈、2-(三甲基銨基)-2-甲基丙腈的甲磺酸鹽或甲#^酸鹽。還適合的是N-甲基哌嗪基-N，N'-二乙腈和N-甲基嗎啉基乙腈(MMA)的甲磺酸鹽?；蚨；^M羧酸酯類及其前體。漂白活化劑通常以約0.1至30g/l,更優(yōu)選0.5至10g/l的量添加。3.3.2漂白穩(wěn)定劑本發(fā)明另一優(yōu)選實(shí)施方式中，漂白體系還含有一或多種漂白穩(wěn)定劑。漂白穩(wěn)定劑包括能吸附、結(jié)合或絡(luò)合痕量重金屬的添加劑。根據(jù)本發(fā)明可以使用的具有漂白穩(wěn)定作用的添加劑的實(shí)例包括但不限于多陰離子化合物，例如多磷酸鹽、多羧酸鹽、多羥基多羧酸鹽，完全或部分中和的堿金屬或堿土金屬鹽形式的可溶性硅酸鹽，尤其是中性Na或Mg鹽，其是相對(duì)弱的漂白穩(wěn)定劑。根據(jù)本發(fā)明可以使用的強(qiáng)漂白穩(wěn)定劑的實(shí)例是*劑例如，乙二胺四乙酸(EDTA)、二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)、次氮基三乙酸(NTA)、甲基-甘氨酸二乙酸(MGDA)、卩-丙氨酸二乙酸(ADA)、乙二胺-N,N'-二琥珀酸(EDDS)和膦酸例如乙二胺四亞曱基膦酸、二亞乙基三胺五亞甲基膦酸(DTMPA)或羥基亞乙基-l，l-二膦酸(以酸的形式或以部分或全部中和的堿金屬鹽的形式)。漂白穩(wěn)定劑通常以約0.1至約5g/L處理組合物，更優(yōu)選約0.5至約2g/L，和最優(yōu)選約lg/L的量加入處理組合物。根據(jù)本發(fā)明的漂白組合物優(yōu)選含有至少一種漂白穩(wěn)定劑，和更優(yōu)選至少一種上述強(qiáng)漂白穩(wěn)定劑。有效漂白通常導(dǎo)致一或多個(gè)下述特性(i)期望的白度(使用例如Macbeth色目機(jī)通過Ganz白度測量確定)；(ii)令人滿意的塵屑去除均一性(肉眼觀察評(píng)估)；優(yōu)選地，織物的白度為50Ganz單位或更高，和最優(yōu)選60Ganz單位或更高。因此，優(yōu)選實(shí)施方式中，一浴工藝包括酶體系，例如果膠酸裂合酶、過氧化氬、漂白活化劑(例如TAED)和漂白穩(wěn)定劑。3.4染色體系果膠酸裂合酶組合物可以與多種如下染色體系一起使用，所迷染色體系與下述條件相容(i)用于生物煮練的條件，如果生物煮練和染色同時(shí)進(jìn)行的話，或(ii)在生物煮練之后調(diào)整的條件，如果染色在生物煮練之后進(jìn)行的話。該染色體系包括但不限于(a)常規(guī)染色體系，包括下述中的一或多種(i)直接染料，例如，C.I.直接紅81;黃U和28;橙39;紅76;藍(lán)78，86，106，107和108;黑22;(ii)活性染料，例如，C.I.活性紅1，3,6，17，120，194;藍(lán)4，19,171和182;黑5;紫5;(Hi)還原染料，例如，C.I.還原黃28;橙11和15;藍(lán)6,16和20;綠1和3,8;棕1;黑9和27;(iv)硫化染料，例如，C.I.硫化黑l和ll;棕l;紅10;和(v)偶氮染料，例如，C.I.偶合組分5和U與C.I.偶氮染料重43氮組分44和45的組合。此類常規(guī)染色體系是本領(lǐng)域已知的且描述于，例如Shore編，CELLULOSICDYEING(SocietyofDyersandColorists，AldenP固，1995)和COLOURINDEXvol.1-8Supplements(SocietyofDyersandColoristsandAmericanAssociationofTextileChemistsandColorists,1977-1988)。3.5輔助組分組合物也可包括各種輔助組分，本文中也將其稱作輔助化學(xué)品。此類組分包括但不限于多價(jià)螯合或螯合劑，潤濕劑、乳化劑、pH控制劑(例如緩沖液)、漂白催化劑、穩(wěn)定劑、分歉劑、消泡劑、去污劑及其混合物。應(yīng)理解該輔助組分是除酶、漂白試劑和退漿劑之外附加的。3.5.1潤濕劑潤濕劑通常選自表面活性劑且尤其是非離子型表面活性劑。當(dāng)使用時(shí)，通常以每升浴約0.1至約20g，更優(yōu)選約0.5至約10g/L,和更優(yōu)選0.5至約5g/L的水平包括潤濕劑。出于多種原因，包括緩沖能力、螯合、*以及還有增強(qiáng)表面活性劑的性能，可以使用穩(wěn)定劑。穩(wěn)定劑可以減慢過氧化物分解的速度，并且可以與可催化過氧化物分解并誘發(fā)纖維損壞的金屬雜質(zhì)結(jié)合或中和該金屬雜質(zhì)。穩(wěn)定劑是眾所周知的，其中無機(jī)的以及有機(jī)的種類均是7〉知的，而且硅酸鹽或有機(jī)磷酸酯贏得了最廣泛的接受，穩(wěn)定劑如果存在則可以以每升浴(bath)約0.01至約30g，更優(yōu)選約0.01至約10g/L，和最優(yōu)選約0.01至約5g/L的水平使用。3.5.2表面活性劑適合使用的表面活性劑包括但不限于非離子型(參見例如美國專利No.4，565，647，其在此通過引用并入)；陰離子；陽離子和兼性離子表面活性劑(參見例如美國專利No.3,929，678，其在此通過引用并入)；其通常以按重量計(jì)約0.2%至約15%,優(yōu)選按重量計(jì)約1%至約10%的濃度存在。陰離子表面活性劑包括但不限于，線性烷基M酸鹽、a-烯烴磺酸鹽、烷基硫酸酯鹽(脂肪醇硫酸酯鹽)、醇乙氧J^危酸酯鹽、仲烷基磺酸鹽、a-磺基脂肪酸甲酯鹽、烷基-或鏈烯基琥珀酸和急。非離子型表面活性劑包括但不限于，醇乙氧基化物、壬基酚乙氧基化物、烷基多糖苷、烷基二曱基胺氧化物、乙氧基化脂肪酸單乙醇酰胺、脂肪酸單乙醇酰胺、多羥基烷基脂肪酸酰胺和葡糖胺的N-?；鵑-烷基衍生物("葡糖酰胺類")。優(yōu)選用于實(shí)施方式中的表面活性劑是非離子型表面活性劑或非離子型和陰離子型的混合物。3.5.3螯合劑也可以使用螯合劑且螯合劑可選自M羧酸鹽、氨基膦酸鹽、多官能取代的芳香族螯合劑及其混合物，所有這些全部在下文進(jìn)行定義。用作可選的螯合劑的氨基羧酸鹽包括乙二胺四乙酸鹽、N-羥乙基乙二胺三乙酸鹽、次氮基三乙酸鹽、乙二胺四丙酸鹽、三亞乙基四胺六乙酸鹽、不含具有大于約6個(gè)碳原子的烷基或鏈烯基的膦酸鹽。多官能取代的芳族螯合劑也可以用于本文的組合物。參見例如US專利No.3812044。酸形式的該類型優(yōu)選化合物是二羥基二磺基苯，例如1,2-二羥基-3，5-二磺基苯二亞乙基三胺五乙酸，和乙醇二甘氨酸、其中的堿金屬、銨和取代的銨的鹽，和它們的混合物。當(dāng)允許至少低水平的總磷時(shí)，氨基膦酸鹽也適用在本公開的組合物中用作螯合劑。優(yōu)選的用于本文的可生物降解的螯合劑是乙二胺二琥珀酸("EDDS")，尤其是如授予Hartman和Perkins的US專利No.4,704,233中所述的[S，S1異構(gòu)體?？梢钥紤]的其它螯合劑包括EDTA和EGTA。當(dāng)螯合劑存在時(shí)，其以約0.01至約10g/L,更優(yōu)選約0.1至約5g/L，和最優(yōu)選約0.2至約2g/L的水平使用。4.用于單獨(dú)的或與漂白、退漿和/或染色組合的生物煮練的工藝含酶和漂白體系的水性溶液與紡織品材料接觸的方式將取決于該加工方案是連續(xù)的、半連續(xù)的、還是不連續(xù)的軋堆(pad-batch)、堆置(batch)(或連續(xù)流)。例如，對(duì)于連續(xù)或不連續(xù)的軋堆工藝，該水性酶溶液優(yōu)選包含在飽和器浴(saturatorbath)中且隨紡織品材料經(jīng)過此浴而連續(xù)地施加至45紡織品材料上，該工藝期間，紡織品材料通常以例如其重量0.5-1.5倍的量吸收該加工液。在堆置操作中，以液體-織物比率為5:1-50:1將織物暴露于酶溶液約2分鐘至24小時(shí)。這些是一般參數(shù)。一些實(shí)施方式中，通過使用更濃的酶和其它化合物的溶液，可縮短該時(shí)間。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠確定最適于其自身需要的參數(shù)?？稍诒葌鹘y(tǒng)煮練、退漿和漂白技術(shù)更低的溫度，進(jìn)行本文公開的方法。一個(gè)實(shí)施方式中，在低于95°C，優(yōu)選約2(TC至75。C之間進(jìn)行該方法。更優(yōu)選的實(shí)施方式中，在約25。C至60。C之間進(jìn)行該方法?？稍诒葌鹘y(tǒng)退漿、煮練或漂白技術(shù)更接近中性的pH范圍進(jìn)行本發(fā)明方法。盡管可在pH約5至ll之間使用本發(fā)明的方法，但優(yōu)選pH低于9。一個(gè)實(shí)施方式中，該方法在pH約6至9之間，和優(yōu)選地6至8之間實(shí)施。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到可以選擇待使用的工藝條件，以便匹配期望使用的特定設(shè)備或特定工藝類型。例如，雖然需要處理的紡織品優(yōu)選在約15。C至約95。C的溫度保持與處理溶液接觸對(duì)于處理該紡織品而言適宜的一段時(shí)間，其中該時(shí)間為至少約2分鐘至24小時(shí)，更優(yōu)選約30分鐘至約12小時(shí)，優(yōu)選約30分鐘至約6小時(shí)和最優(yōu)選約30至約卯分鐘，其中所述溫度優(yōu)選在約15。C至約65°C，最優(yōu)選約WC至約45°C。但是，當(dāng)然，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到諸如時(shí)間和溫度的反應(yīng)條件將根據(jù)所用的設(shè)備和/或工藝及處理的織物而變化。待使用的工藝類型的優(yōu)選實(shí)例包括但不限于Jet、Jigger/Winch、Pad-Roll和Pad-Steam類型?？墒褂闷艋蚶?漂原理，按分批、半連續(xù)或連續(xù)工藝進(jìn)行該組合的工藝。作為實(shí)例，該工藝可包括下述步驟(a)將織物浸漬在如本文所述的煮練和漂白浴中，之后壓軋出過量液體以維持實(shí)施該反應(yīng)所需的液體量(通常為干織物重量的60%至120%);(b)對(duì)該浸漬的織物進(jìn)行汽蒸，以l更使織物達(dá)到期望的反應(yīng)溫度，通常約加。C至約80。C之間；和(c)通過在J-Box、U-Box、地趁機(jī)等中巻起或打褶織物而保持足夠長時(shí)間以允許發(fā)生煮練和漂白。如它處所提及，退漿可能是想要的結(jié)果。因此，對(duì)于某些類型的織物，將該紡織品進(jìn)行退漿處理以便獲得具有期望品質(zhì)的終產(chǎn)物，可能是有利的和/或必需的。該情況下，可在該紡織品上利用工藝的組合，例如組合的退漿、漂白和煮練工藝，或組合的退漿和漂白工藝，或組合的退漿和煮練工藝這些方法可以涉及向所述處理溶液中提供未經(jīng)整理的紡織品組分。該紡織品組分可包括纖維、紗、織物，包括織造物、編織物、衣服和非織造布。"未經(jīng)整理"旨在指紡織品組分是尚未進(jìn)行過退漿、煮練、漂白、染色、印花，或者未經(jīng)過可提供整理步驟的其它處理，例如耐久壓燙的材料。當(dāng)然，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到該紡織品尚未經(jīng)過涉及該材料的剪裁和縫合的制衣工藝或其它制作工藝。本發(fā)明的工藝可用于任何紡織品材料，包括纖維素材料(cellulosics)，例如棉、亞麻、苧麻、大麻、人造絲、lyocell、醋酸纖維素、和三醋酸纖維素，以及合成材料，包括但不限于聚酯、尼龍、斯潘德克斯(spandex)、萊克拉(lycra)、聚丙烯腈系纖維和各種其它天然和合成材料的混合物。天然材料可包括蛋白質(zhì)纖維，例如羊毛、蠶絲、羊絨、以及此處所述的纖維素材料。本發(fā)明的工藝可用于漂白，而不會(huì)對(duì)可能易4皮堿水解和降解的幾種類型的合成紡織品和其混合物，包括但不限于，聚酯、AJt絲、醋酸纖維素、尼龍、棉/聚酯、棉/萊克拉等，造成明顯的纖維或織物破壞。該方法可以在處理步驟后進(jìn)一步包括燒毛工藝和絲光工藝步驟。雖然可在單獨(dú)的步驟中使用退漿，但在優(yōu)選的實(shí)施方式中，通過在處理浴中包括退漿酶從而將漂白、退漿和煮練組合成一個(gè)單步驟，可以將退漿步驟包括在一步處理中。當(dāng)然，在該優(yōu)選的應(yīng)用中，本工藝在本文提供的一步處理方法后可以包括一個(gè)清洗步驟或一系列的清洗步驟。經(jīng)處理的紡織品的清洗是眾所周知的且在本領(lǐng)域技術(shù)人員的水平內(nèi)。清洗階段通常存在于退漿、煮練和漂白步驟(當(dāng)存在時(shí))之每一個(gè)之后，以及存在于本發(fā)明處理步驟后。也可在染色步驟后進(jìn)行清洗。此外，本發(fā)明處理步驟，不管它們的順序和/或組47合，均可在優(yōu)選的實(shí)施方式中包括浸濕(wet-ont)或預(yù)濕步驟以保證紡織品中均勻或均一的濕潤。紡織品的潤濕性對(duì)于任何紡織品的染色和/或整理均是重要的。潤濕性導(dǎo)致染料或整理劑對(duì)紡織品的出色滲透和出色的染色和/或整理結(jié)果。因此，紡織品的潤濕性可以指示處理工藝的有效程度。較高的潤濕性意味著更有效和出色的處理工藝，即用于潤濕的時(shí)間更短。常規(guī)紡織品過氧(peroxygen)漂白只在超過95°C的溫度提供可接受的潤濕性質(zhì)，而較低溫度的漂白(70°C)導(dǎo)致大于約40%的潤濕性。用于吸濕性檢測的一種方法是AATCCTestMethod79-1995，其可以用于快速檢測處理后的潤濕性。可以通過涉及在銅乙二胺(CP)中+狀纖維的AATCC檢測法82-1996測量基于流度的纖維損傷。切下約1.5mm的代表性纖維樣品并在具有若干玻璃球的樣本瓶中將其溶解在按公式CP=120x(樣品重量)xO.98的定義的CP中，置于氮?dú)庀虏⒄袷幦芙饨?小時(shí)。加入按公式CP=80x(樣品重量)x(0.98)定義的額外的CP并在氮?dú)庀略僬袷?小時(shí)。持續(xù)攪拌下放置溶液以防止^t體分離。然后可以在校準(zhǔn)的OswaldCanonFenske粘度計(jì)中，于25。C恒溫浴中測量該溶液以確定流出時(shí)間。由公式F=100/ctd計(jì)算流度，其中c^粘度計(jì)常數(shù)，t-流出時(shí)間，而d二溶液密度l.O52。4.1工業(yè)應(yīng)用4^>開的方法和組合物在工業(yè)上具有許多實(shí)際應(yīng)用，如本文所考慮的，且本說明書旨在舉例說明而非囊括一切。一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物、化合物和方法可以用于纖維、紗、織物、衣服和非織造布的加工。主要應(yīng)用包括涉及紡織品的煮練和漂白的紡織品一步^加工。紡織品的退漿也可以與煮練、漂白、以及與煮練、漂白和/或生物拋光同時(shí)進(jìn)行。組合物中酶組分的給定劑量(即水平)取決于比活性、工藝條件和想要的結(jié)果。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定該劑量水平。相比于傳統(tǒng)的基于化學(xué)的處理，例如堿性煮練、漂白等，本文描述的組合物和方法在降低強(qiáng)度損失的同時(shí)提供有效的紡織品處理。不受任何理論限制，相信與常規(guī)化學(xué)處理相比，該組合物和方法對(duì)纖維損壞更小并因此降低強(qiáng)力損失。可通過本領(lǐng)域/^知的技術(shù)測量強(qiáng)力損失，例如ASTMD5034(抓樣試驗(yàn))、ASTMD5035(織物條樣強(qiáng)力試驗(yàn))、ASTMD3787(鋼球式頂破強(qiáng)力試驗(yàn))和/或ASTMD3786(編織產(chǎn)品和非織造織物的液壓法頂-皮強(qiáng)力)。本發(fā)明煮練劑可以單獨(dú)使用，或與其它煮練劑、退漿劑、漂白試劑和染色劑及其組合進(jìn)行聯(lián)用。為了保證酶與紡織品之間的良好接觸，應(yīng)利用潤濕劑?？梢栽谑┯妹钢盎蛲瑫r(shí)施用潤濕劑。由于本/^開的生物煮練酶非鉀依賴型，故可以使用弱和強(qiáng)螯合劑。因此，可以使用弱螯合劑例如但不限于多膦酸鹽、葡糖酸和檸檬酸以及強(qiáng)螯合劑例如EDTA。螯合劑的使用可以根據(jù)組合物中存在的其它酶的需要而變。然而，鉤去除有助于蠟去除和避免漂白損壞。4.2—浴退漿和煮練的方法一方面提供一步或一浴退漿和煮練，其發(fā)生在與退漿或煮練相同的條件下。用水、退漿酶，和生物煮練酶的組合處理紡織品，優(yōu)選還聯(lián)合一或多種試劑，例如但不限于穩(wěn)定劑、表面活性劑、潤濕劑、M劑、螯合劑和乳化劑，以及其混合物。允許已上漿的織物在加工液中停留足夠長的保留時(shí)間來實(shí)現(xiàn)退漿和煮練。該保留時(shí)間取決于工藝方案的類型和使用的溫度，并且可以從約15分鐘至約2小時(shí)及高達(dá)24小時(shí)之間變化。加工可以是分批、半連續(xù)或連續(xù)的，其中紡織品與液體加工流以平幅或以繩狀方式接觸。連續(xù)的操作通常使用飽和器，從而將每織物重量大約相等重量的加工液施加于織物上，隨后使用熱堆置室，于其中發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。然后于清洗區(qū)準(zhǔn)備用于下一加工步驟的織物。為了保證高白度和良好的潤濕性和由此保證染色，必須從紡織品中徹底除去退漿和煮練酶及其它試劑。連續(xù)工藝可以在約15。C至約95°C,pH約5至約11進(jìn)行約5分鐘至約1小時(shí)。分批工藝通常在一個(gè)加工浴(即單浴)中發(fā)生，其中紡織品與近8-15倍其重量的加工液接觸。反應(yīng)期后，排干加工液，漂洗紡織品并進(jìn)行下一49步驟。對(duì)于不連續(xù)的軋堆工藝，使用飽和器，其中將每織物重量大約相等重量的加工液施加至織物上，1^是停留期，這在冷軋堆工藝的情況下可能是一或多天。例如，冷軋堆工藝可以在約20-40。C之間，pH在約5和11之間，進(jìn)行8-24小時(shí)或更長時(shí)間。軋堆工藝可以在約25-85。C和在類似的pH進(jìn)行約1-6小時(shí)。對(duì)于退漿酶，例如堿性a-淀粉酶(例如AQUAZY1VFM120L,Novozymes或PurastarTMOxAm，Genencor)可以以約180-240KNU/L或約180-240KNU/kg紡織品存在。退漿酶的其它范圍包括但不限于l-100KNU/kg紡織品或2-20KNU/kg紡織品。KNU是a-淀粉酶活性且可以按照WO2006/002034所討論的來計(jì)算。通常，向工藝中加入表面活性劑來增強(qiáng)疏水化合物的溶解性和/或防止它們重沉積回紡織品上。因而，這一上下文中，洗滌劑與表面活性劑是同義的。洗滌劑可以是非離子型表面活性劑、陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑、兩性表面活性劑、兼性離子表面活性劑和半極性表面活性劑或其混合物。用于組合的煮練和退漿的表面活性劑通常以按重量計(jì)約0.1%至約60%的量存在。選擇的表面活性劑應(yīng)與組合物中存在的酶組分相容。液體和凝膠組合物中，以至少不降低存在的酶的穩(wěn)定性的方式配制表面活性劑?？梢园幢绢I(lǐng)域的教導(dǎo)配制表面活性劑。參見例如，國際PCT申請(qǐng)WO2006/002034。4.3用于組合的漂白、煮練和/或退漿的方法一方面，考慮-使用本公開裂合酶的組合的煮練和漂白。因而，考慮在酶促漂白體系和過氧化物存在下用該酶進(jìn)行煮練和漂白，其中對(duì)于去除果膠，最適pH范圍為約6至約8。優(yōu)選的酶促漂白體系是酰基轉(zhuǎn)移酶的體系。對(duì)于冷軋堆工藝，溫度優(yōu)選約15"至45。C并更優(yōu)選約25。C至約35°C。對(duì)于非冷軋堆工藝，可使用不超過95。C的較高溫度。水性溶液或洗液通常具有pH約5至約11。優(yōu)選地，處理組合物的pH是約5至約9，并且更優(yōu)選約6至約8。一個(gè)實(shí)施方式中，不加堿的情況下進(jìn)行該用于處理紡織品的一浴法。優(yōu)選地，這一處理用于處理對(duì)堿敏感的紡織品，例如但不限于蠶絲、羊毛、尼龍、聚酯、萊克拉、醋酸纖維素及混紡織物。另一實(shí)施方式中，在pH低于9，更優(yōu)選低于8，并且甚至更優(yōu)選低于7，進(jìn)行該用于處理紡織品的一浴法。另一實(shí)施方式中，在添加堿的情況下進(jìn)行用于處理紡織品的一浴法。優(yōu)選地，在pH約8至約11進(jìn)行接觸。例如可通過添加堿性試劑如NaOH控制pH。根據(jù)需要，可以以按重量計(jì)織物的約0.1至約10%的量添加堿性試劑以獲得想要的pH。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員將明了，加入的堿性試劑的量取決于所用漂白化合物的量。應(yīng)理解酶、漂白化合物、漂白穩(wěn)定劑以及堿性試劑(如使用)的最佳劑量和濃度、水性溶液或洗液的體積、以及pH和溫度將根據(jù)下述內(nèi)容而變化(i)纖維的性質(zhì)，即天然纖維、紗或紡織品；(ii)是否同時(shí)或順序進(jìn)行煮練和漂白；(iii)所用的具體酶，以及酶的比活性；(iv)工藝進(jìn)行時(shí)的溫度、pH、時(shí)間等條件；(v)洗液中其它組分的存在；和(vi)所用工藝方案的類型，即連續(xù)、不連續(xù)的軋堆或堆置。可以使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定工藝條件的優(yōu)化，例如，通過建立條件矩陣并檢測該矩陣中不同的點(diǎn)。例如，可以改變酶量、發(fā)生接觸時(shí)的溫度、以^i。工的總時(shí)間，這之后評(píng)估得到的纖維素材料或紡織品的(a)果膠去除；(b)煮練后的性質(zhì)(scouredpr叩erty)，諸如潤濕性；和(c)漂白的質(zhì)量，例如白度。優(yōu)選實(shí)施方式中，可調(diào)整條件或處理組合物以利于退漿、煮練或漂白工藝，例如，通過調(diào)整pH、潤濕劑濃度、或二價(jià)陽離子螯合劑(例如乙二胺四乙酸)濃度，以便進(jìn)一步促進(jìn)漂白工藝。優(yōu)選實(shí)施方式中，順序模式可進(jìn)一步包括在步驟(ii)和(iii)之間調(diào)節(jié)水性溶液或洗液的組成的一或多個(gè)特性。例如，可在步驟(ii)和(iii)之間調(diào)節(jié)pH、潤濕劑濃度或二價(jià)陽離子螯合劑(例如乙二胺四乙酸)的濃度以進(jìn)一步促進(jìn)漂白工藝。就溫度、攪拌、時(shí)間等而言，第一和第二孵育的條件也可不同。4.4用于一浴生物前處理和染色的方法51一方面考慮在一浴中進(jìn)行生物前處理(或煮練)和染色。至少有兩種實(shí)踐該方法的模式。一方面，將生物煮練酶和染色體系加入與纖維素纖維或織物接觸的水性溶液或洗液中，并且在合適的條件下醉育足夠長的時(shí)間以實(shí)現(xiàn)有效煮練和有效染色。替代方法中，(i)將生物煮練酶加入洗液；(ii)在合適條件下進(jìn)行第一孵育足夠長的時(shí)間以至少引起，且優(yōu)選實(shí)現(xiàn)有效煮練；(iii)然后向含有生物煮練酶的洗液補(bǔ)入染色體系；和(iv)在合適條件下進(jìn)行第二孵育持續(xù)足夠長的時(shí)間以實(shí)現(xiàn)有效染色。應(yīng)理解所述的第二方法可進(jìn)一步包括在步驟(ii)和(iii)之間調(diào)節(jié)洗液的組成的一或多個(gè)特性(例如pH、離子強(qiáng)度、濃度或潤濕劑或二價(jià)陽離子螯合劑如EDTA或EGTA的濃度)，而且第一和第二孵育在溫度、攪拌、pH、時(shí)間等方面也可具有不同的條件?？梢哉{(diào)節(jié)水性溶液中的酶濃度以便加入到給定量的纖維中的酶劑量為約0.1至約10000mol/min/kg纖維，優(yōu)選約1至約2000mol/min/kg纖維，及最優(yōu)選約10至約500mol/min/kg纖維。使用不同的計(jì)量單位，酶劑量因此可以是例如約250至12000APSU/kg纖維(APSU意指堿性果膠酶標(biāo)準(zhǔn)單位)，優(yōu)選約500至卯OOAPSU/kg纖維，最優(yōu)選約1000至6000APSU/kg纖維。含生物煮練酶的水性溶液具有pH約5至約11，和更優(yōu)選約6-10。優(yōu)選的pH將取決于是否同時(shí)或順序進(jìn)行煮練和染色。如果同時(shí)進(jìn)行煮練和染色，洗液優(yōu)選具有pH約5至約8,5，且最優(yōu)選約7至約8。當(dāng)順序進(jìn)行這些步驟時(shí)，步驟(i)和(ii)中的洗液可優(yōu)選具有pH約6至9，例如約7.0至約8.5，而步驟(iii)和(v)中具有約6至約9的pH。此外，洗液優(yōu)選含有低濃度的添加的鈣(即小于2mMCa2+)或完*乏添加的Ca2+或其它二價(jià)陽離子。當(dāng)同時(shí)生物煮練和染色時(shí)，進(jìn)行組合的煮練和染色工藝的溫度可在約15。C和約95。C之間，更優(yōu)選約20。C和80。C之間，并最優(yōu)選約40。C和70°C之間。當(dāng)順序發(fā)生生物煮練和染色步驟時(shí)，可以利用類似的溫度，或者可以改變溫度以包括約25。C至約50。C用于煮練步驟；而進(jìn)行隨后的染色的溫52度可在約30。C和約IOO'C之間，優(yōu)選低于50。C。應(yīng)理解溫度的選擇將取決于(i)纖維性質(zhì)，即天然纖維、紗或紡織品；(ii)用于煮練的具體酶，以及具體氧化酶(如果用于染色的活)；和(iii)具體染料或染料類型。例如，通常在約60。C和95。C之間進(jìn)行浸染。例如在60。C至80。C進(jìn)行活性染色和直接染色而在約95。C附近進(jìn)行硫化染色。另外，硫化和直接染色(例如Ciba染料，例如Solophenyl)需要高鹽濃度(例如NaCl)?；钚院椭苯尤旧残枰獌?yōu)選在約pH6至8的范圍的pH，本文公開的果膠酸裂合酶在該pH工作良好。當(dāng)按照AATCCTestMethod39-1980使用液滴試驗(yàn)(droptest)測量時(shí)，有效的煮練通常導(dǎo)致小于約IO秒，優(yōu)選小于約5秒，和最優(yōu)選小于約2秒的潤濕性。通常，有效煮練需要消化纖維中相當(dāng)大比例的果膠，優(yōu)選按重量計(jì)至少30%、更優(yōu)選按重量計(jì)至少50%，和最優(yōu)選至少70%。果膠消化指斷裂果膠中a-l，4-糖苷鍵以便可以通過例如，漂洗或任何其它常規(guī)分離方法從纖維中除去消化產(chǎn)物。用于測量纖維的果膠消化程度的方法包括但不限于，例如Luft,171THEANATOMICALRECORD347(1971)所述的釕紅染色方法。有效染色通常導(dǎo)致下述特性中的一或多個(gè)(i)期望的色澤和顏色深度(使用例如Mecbeth色目機(jī)通過CIE1^*3*13*測量來確定)；(ii)滿意的勻染度(目視評(píng)價(jià))；和(iii)色牢度特性，例如耐洗牢度、耐光牢度和耐(濕和干)摩擦色牢度至少約3.0,優(yōu)選高于3.5,和最優(yōu)選高于4.0(使用AATCCTECHNICALMANUAL,vol.7，350(1995)中公開的MethodEP1在灰度色標(biāo)上測量)。此外，使用帶有枯草桿菌果膠酸裂合酶的組合物的方法可導(dǎo)致進(jìn)行單缸(single-vat)生物煮練和染色的纖維相比于只進(jìn)行染色的纖維具有增強(qiáng)的染料攝取。優(yōu)選地，染料攝取的增強(qiáng)為至少約10%?？赏ㄟ^例如(i)測量染料溶液的上染率，或(ii)測量織物中顏色強(qiáng)度(L*a*bMi)來測量染料攝取。為了實(shí)現(xiàn)有效煮練，酶劑量(mol/min/kg纖維)、洗液中的酶濃度(mol/min/L洗液)、施用于給定量的纖維的洗液的總體積(L/kg纖維)，將根據(jù)下述而變化(i)纖維的性質(zhì)，即天然纖維、紗或紡織品；(ii)是否同時(shí)或順序進(jìn)行煮練和染色；(iii)所用的具體酶，以及酶的比活性；(iv)進(jìn)行該工藝的溫度、pH、時(shí)間等條件；和(v)洗液中其它組分的存在?？梢酝ㄟ^建立條件矩陣并檢測該矩陣中不同的點(diǎn)，使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定合適的條件，包括，例如酶劑量、酶濃度(或酶混合物中的酶濃度)、溶液體積和待使用的溫度。例如，可以改變酶量、發(fā)生接觸的溫度、以M口工的總時(shí)間，這之后評(píng)估得到的纖維或紡織品的(a)果膠去除；(b)煮練后的性質(zhì)諸如潤濕性；和(c)染色的質(zhì)量。同時(shí)煮練和染色時(shí)，纖維與果膠酸裂合酶(任選地存在其它酶)和纖維素染料，例如C丄活性藍(lán)184可以在下述條件下接觸(i)約45。C的溫度；(ii)pH約7.0-8.0;(iii)沒有加入二價(jià)陽離子；(iv)洗液:織物比率約0.5至約50;和(v)生物煮練酶劑量約10至約500mol/min/kg纖維。下面的實(shí)施例中證實(shí)可以使用公開的果膠酸裂合酶或果膠酸裂合酶制劑在50。C或更低(但高于0°C)的溫度且最佳在室溫下進(jìn)行煮練步驟。組合的漂白生物煮練反應(yīng)的pH可以為約6至約11，且最佳為約6.0至85。5、清潔組合物除去源自植物、食品和水果的污垢對(duì)于清潔行業(yè)，不管是清潔紡織品還是其它物質(zhì)來講是一項(xiàng)挑戰(zhàn)。這些污垢通常含有(主要基于碳水化合物及其衍生物的)纖維性材料的復(fù)雜混合物纖維和細(xì)胞壁組分。果膠聚合物是植物細(xì)胞壁的重要組分且與源自植物或水果的污垢相關(guān)。該污垢通常見于污染的織物中。例如，在污染的織物上可以發(fā)現(xiàn)這些污垢。通常難于從污染的栽污體上有效除去這些污垢。源自水果和/或蔬菜汁的重度有色或"干涸"污垢尤其難于除去。對(duì)于清潔此類污垢而言，具體實(shí)例包括植物污垢，例如源自菠菜、甜菜根、胡蘿卜和番茄；水果例如櫻桃、漿果、芒果、桃、杏、香蕉和葡萄的那些。此外，果膠和果膠酸組分也用于食品添加劑，例54如水激淋、番茄沙司、果凍、果醬和嬰兒食品中。因此，另一方面是清潔因帶有此類食品添加劑的食物污染紡織品或表面而造成的污漬。因此，在洗滌劑組合物或清潔組合物中包括果膠酸裂合酶，可以通過將果膠和果膠酸切割成較易于除去的組分，而有助于分解存在于污垢中的果膠和果膠酸?；谥参锛?xì)胞壁降解酶的總量(w/w)，清潔組合物可以包括至少50%，優(yōu)選至少75。/。的果膠酸裂合酶，該組合物可以進(jìn)一步包括半纖維素酶。一些實(shí)施方式中，該組合物可包括90%(w/w)或更多的果膠酸裂合酶作為;ti物細(xì)胞壁降解酶活性。另一方面，該組合物可以包括其它酶。可以以一或多種組合方式考慮的其它酶類包括但不限于蛋白酶、淀粉酶、p-葡聚糖酶、脂肪酶、半纖維素酶、角質(zhì)酶、果膠酶和其它果膠酸裂合酶。纖維素、半纖維素和果膠在細(xì)胞壁中存在高度相互作用。將這些相當(dāng)強(qiáng)烈交聯(lián)的多糖結(jié)構(gòu)酶促降解并不簡單。已知大量的酶參與植物細(xì)胞壁降解。廣義上可以將它們分為纖維素酶、半纖維素酶和果膠酶(Ward和Young,8CRCCRITICALREV.INBIOTECH.237-274(1989))。纖維素是植物細(xì)胞壁的主要多糖組分。其由p-l，4-連接的葡萄糖聚合物組成。纖維素可以被纖維素酶(也稱作纖維素分解酶)分解。傳統(tǒng)將纖維素分解酶分為了三類內(nèi)切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶或纖維二糖水解酶(CBG)、和p-葡糖苷酶(J.Knowles等人，5TRENDSINBIOTECH.TECH，255-261(1987))。與所有細(xì)胞壁降解酶類似，可以通過大量細(xì)菌、酵母和真菌產(chǎn)生纖維素酶。果膠是水杲和蔬菜可食用部分的細(xì)胞壁的主要組分。位于兩個(gè)細(xì)胞壁之間的胞間層主要由原果膠構(gòu)成，其是不溶形式的果膠。果膠被認(rèn)為是細(xì)胞內(nèi)膠粘劑且由于其膠體性質(zhì)，它們在植物的水分調(diào)節(jié)系統(tǒng)中起重要作用。植物中果膠的量可以非常高。例如，據(jù)報(bào)導(dǎo)檸檬皮中含有高達(dá)其干重30%的果膠，橘皮含有15-20%，而蘋果皮含有約10%(K,Norz,ZUCKERUNDSUSSWARENWIRTSCHAFT38:5-6(1985))。果膠由鼠李糖半乳糖醛酸聚糖骨架構(gòu)成，其中通過間隔地插入1，2-連接的(a-L-吡喃鼠李糖基)殘基中斷1,4連接的((x-D-半乳糖醛酸聚糖)鏈(W.Pilnik等人，INTHEBIOCHEMISTRYOFFRUITSANDTHEIRPR()DUCTS,vol.l,Chapter3，(AcademicPress,1970))。其它糖，例如D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-木糖作為側(cè)鏈存在。許多半乳糖醛酸聚糖殘基在C2和C3位置被曱基基團(tuán)酯化。已知大量酶可以降解果膠。該酶的實(shí)例是果膠酯酶、果膠裂合酶(也稱作果膠反式消除酶)、果膠酸裂合酶和內(nèi)切或外切多聚半乳糖酪酸酶(Pilnik和Voragen,4FOODBIOTECH319-328(1990))。除了降解平滑區(qū)的酶，也發(fā)現(xiàn)了降解毛狀區(qū)的酶例如鼠李糖半乳糖醛酸酶和輔助酶(Schols等人，206CARBOHYDRATERES.105-115(1990);SearleVanLee匿n等人，38APPL.MICROBIOL.BIOTECHNOL.347-349(1992))。半纖維素是植物細(xì)胞壁中一類復(fù)雜的非淀粉多糖。它們由木糖、阿拉伯糖、半乳糖或甘露糖的聚合物組成，其通常高度分支并且連接到其它細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)上。因此，多種酶可以用于降解這些結(jié)構(gòu)。木聚糖酶、半乳聚糖酶、阿拉伯聚糖酶、地衣多糖酶和甘露聚糖酶是用于降解這些結(jié)構(gòu)的一些半纖維素降解酶。因而，清潔組合物可以組合地包括這些半纖維素降解酶中的一或多種與果膠酸裂合酶。因此，所選用于所考慮的組合物的酶將最佳地在約15。C-5(TC的溫度范圍和pH約6.0至約8.0起作用。例如，Kormelink(1992，博士論文,UniversityofWageningen，TheNetherlands)討論了內(nèi)切和外切木聚糖酶和輔助酶例如葡糖醛酸糖苷酶、阿拉伯吹喃糖苷酶、乙酰木聚糖酯酶和阿魏酸酯酶或香豆酸酯酶。這些酶由多種微生物產(chǎn)生并具有各不相同的最適溫度和pH。與其它細(xì)胞壁降解酶(CWDE)相似，許多微生物合成半乳聚糖酶(參見例如Dekker和Richards,32ADV.CARBOHYDRAT.CHEM.BIOCHEM.278-319(1976))。植物細(xì)胞壁中，存在兩類阿拉伯半乳聚糖I型一一1，4-|5-半乳聚糖和II型一一具有分支主鏈的1，3/1，6-p-半乳聚糖(Stephen,THEPOLYSACCHARIDES97-193(G.O.Aspinael(編)"AcademicPress,NewYork,1983))。兩種類型的半乳聚糖各自需要相應(yīng)類型的內(nèi)切酶來實(shí)現(xiàn)降解?？梢灶A(yù)期其它酶，例如阿拉伯聚糖降解酶和外56切半乳聚糖酶可以在阿拉伯半乳聚糖降解上起作用。地衣多糖酶(EC3.2.1/73)水解含1，3-和1，4-鍵的p-D-葡聚糖中的1,4-p-D-糖苷鍵。例如在纖維素中，地衣多糖酶作用于只含1,4-鍵的P-D-葡聚糖。因此，地衣多糖酶的應(yīng)用不會(huì)損壞織物中的纖維素纖維。地衣多糖酶由細(xì)菌例如淀粉液化芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens)、環(huán)狀芽胞桿菌(B.circulans)、地衣芽胞桿菌，和植物產(chǎn)生(參見例如，S.Bielecki等人，10CRIT.REV.INBIOTECHN.275-304(1991))。阿拉伯聚糖具有由相互通過a-(1—5)鍵連接的a-L-阿拉伯糖單位組成的主鏈。側(cè)鏈通過a-(1—3)或有時(shí)通過a-(1—2)連接到a-(1—5)-L阿拉伯聚糖主鏈上。蘋果中，例如，總阿拉伯糖的三分之一存在于側(cè)鏈中。阿拉伯聚糖的分子量通常約15kDa。已知多種植物和^L生物生產(chǎn)阿拉伯聚糖降解酶。已經(jīng)通過分子生物學(xué)技術(shù)克隆了可以獲自黑曲霉的三種酶(參見例如，歐洲專利申請(qǐng)0506190)。并且，克隆了細(xì)菌諸如擬桿菌屬(Bacteroides)細(xì)菌的阿拉伯糖苷酶(參見例如，Whitehead和Hespell172丄BACTERIOL.2408(1990))。半乳甘露聚糖是在豆科(Leguminosae)種子中發(fā)現(xiàn)的貯存性多糖。半乳甘露聚糖具有線性(1—4)-p-甘露聚糖主鏈，且由(1—6)-a-半乳糖單殘基取代。例如，瓜爾豆膠中，甘露糖/半乳糖的比率是約2比l。半乳甘露聚糖在諸如調(diào)味品和湯類等食品產(chǎn)品中用作增稠劑。例如，國際PCT申請(qǐng)WO93/24622描述了甘露聚糖酶。葡甘露聚糖由葡萄糖和甘露糖的主鏈組成。該主鏈可被半乳糖及乙?；鶊F(tuán)取代；可以由許多微生物，包括細(xì)菌和真菌生產(chǎn)甘露聚糖酶。另一類可包括的酶是纖維素酶。有時(shí)加入纖維素酶來作為抗起球組分、提高柔軟度或用于額外的清潔效果。纖維素酶不能大量使用，因?yàn)樵S多紡織品纖維包括高百分比的纖維素纖維。纖維素纖維易于^皮纖維素酶降解。因此，纖維素酶自身并不特別適合用于紡織品和織物的清潔，因?yàn)樗鼈儾荒芤宰阋猿ピ从谥参锏奈蹪n的量加入而不損壞紡織品。纖維素酶可以與其它能夠分解植物細(xì)胞壁的酶一起加入洗滌劑或紡織品清潔組合物中。由于酶混合物對(duì)纖維性物質(zhì)及其污垢具有協(xié)同作用，因此酶組合可以包括較低濃度的每種酶。因而，當(dāng)纖維素酶量降至低于組合物中存在的植物細(xì)胞壁降解酶總量(w/w)的50%，優(yōu)選低于25%和最優(yōu)選{氐于10%時(shí)，細(xì)胞壁降解酶的使用可以產(chǎn)生最佳清潔條件而不損壞紡織品纖維?；蛘?，清潔組合物中可以不存在纖維素酶?？偟膩碇v，存在由不同生物產(chǎn)生的大量植物細(xì)胞壁降解酶。根據(jù)它們的來源，這些酶的底物特異性、最適pH和溫度、Vmax、Km等是不同的。酶的復(fù)雜性反映了植物細(xì)胞壁的復(fù)雜性質(zhì)，其在植物物種之間以及物種內(nèi)的植物組織之間有強(qiáng)烈不同?？梢愿鶕?jù)植物材料的來源、應(yīng)用的目的以及具體應(yīng)用條件(例如pH、溫度、底物、二價(jià)離子和過氧化物的存在)制備適合用于清潔、生物煮練和漂白組合物中的酶混合物。近年來，這些細(xì)胞壁降解酶的可得性和種類顯著增加，這開啟了使用這些酶的選擇的組合在洗滌劑和清潔組合物中作為添加劑的可能性。這些洗滌劑和清潔組合物尤其適于除去植物污垢。由于許多研究的細(xì)胞壁降解酶產(chǎn)生自真菌并展現(xiàn)酸性pH范圍內(nèi)的最適pH，故鑒定在酸性pH下工作的果膠酸裂合酶(例如本文討論的)對(duì)于制備新型洗滌劑和清潔組合物是有益的。許多情況下，所公開的酶可以通過培養(yǎng)生產(chǎn)它的微生物并從培養(yǎng)物或肉湯培養(yǎng)物分離該酶而獲得。也可以通過重組DNA才支術(shù)獲得該酶，其中提供具有編碼所需酶的遺傳信息和適用于表達(dá)該遺傳信息的元件的宿主細(xì)胞。宿主細(xì)胞可為同源微生物或異源微生物，其二者均可包括但不限于細(xì)菌、桿菌、酵母和真菌；然而它們也可以包括高等真核生物細(xì)胞，例如植物或動(dòng)物細(xì)胞。其在提供具有編碼一種以上的酶或一種以上的酶活性(例如雜種酶)的遺傳信息的宿主細(xì)胞方面也可能是非常有用的。盡管已經(jīng)一定程度地強(qiáng)調(diào)了微生物作為便利的酶源，但應(yīng)理解可使用來自任何來源的酶，只要它們具有能夠分解至少部分的植物細(xì)胞壁的活性即可。由于這一活性是最相關(guān)的特性，故很顯然，也可以使用與枯草桿菌果膠酸裂合酶具有相同或相似活性的衍生物、片段或其組合且它們包括在酶的定義中。衍生物包括突變體以及化學(xué)修飾的酶，該突變體中已添加、缺失或置換一或多個(gè)氨基酸來保持或提高酶的某些特性。組合物可包括單個(gè)酶，果膠酸裂合酶。更優(yōu)選地，其將是不同酶的混合物，其中這些酶優(yōu)選能夠降解植物細(xì)胞壁的不同部分、有助于漂白、煮練或除去污垢組分(例如，存在植物細(xì)胞壁組分作為增稠劑或凝膠劑等的食品組合物的污垢)。本公開的酶是外切多聚半乳糖醛酸裂合酶，其優(yōu)選底物為多聚半乳糖醛酸。該酶將多聚半乳糖醛酸切割為A4:5不飽和的半乳糖醛酸。產(chǎn)物通常是從底物的還原端分離開的不飽和A4:5雙半乳糖醛酸。直到最近，對(duì)于4艮道的所有酶，除了歐文氏菌屬物種的那些酶外，最適pH都被指示為在8.0和9.5之間且4丐離子被認(rèn)為是絕對(duì)必需的。參見例如，JohnR.Whitaker,"MicrobialPectolyticEnzymes,"rNMICROBIALENZYMESANDBIOTECHNOLOGY158(第二版W.M.Fogarty和C.T.Kelly,1990，ElsevierSciencePub.Co.,Inc，)?？梢钥紤]與枯草桿菌的果膠酸裂合酶組合使用的酶的非限制性列表包括下述?？梢允褂玫矸勖盖移浒?，例如細(xì)菌或真菌來源的a-或P-淀粉酶。也可以考慮該淀粉酶的化學(xué)或遺傳修飾的突變體。a-淀粉酶的示例性列表包括例如可以獲自芽孢桿菌屬物種，尤其是地衣芽胞桿菌的特定抹系(英國申請(qǐng)No.1296839)的a-淀粉酶。相關(guān)的市售可得的淀粉酶包括INatalaseTM、Stainzyme、Duramy、Termamyl、TermamylTMUltra、Fungamyl⑧和BAN(可獲自NovozymesA/S，Bagsvaerd，Denmark)，和Rapidasem及MaxamyITM(可獲自DSM，Holland)。或者，a畫淀粉酶可以源自芽孢桿菌屬物種林系NCIB12289、NCIB12512、NCIB12513和DSM9375。其它a-淀粉酶包括如在WO00/60060(在此通過引用并入)公開的源自芽孢桿菌屬物種DSM12649的a-淀粉酶以及其變體。其它有用的淀粉酶是CGTases(環(huán)糊精葡聚糖轉(zhuǎn)移酶，EC2.4丄19)，例如，可59獲自芽孢桿菌屬、高溫厭氧桿菌屬或高溫厭氧芽孢桿菌屬物種的那些。內(nèi)切葡聚糖酶也可以與果膠酸裂合酶和/或其它酶一起使用。蛋白酶包括動(dòng)物、植物或微生物來源的那些。優(yōu)選微生物來源的蛋白酶。在這方面包括蛋白酶的化學(xué)或遺傳修飾的突變體。蛋白酶可為絲氨酸蛋白酶，優(yōu)選堿性微生物蛋白酶或胰蛋白酶樣蛋白酶。堿性蛋白酶的實(shí)例是枯草桿菌蛋白酶，尤其是源自芽孢桿菌屬的那些，例如枯草桿菌蛋白酶Novo、枯草桿菌蛋白酶Carlsberg、枯草桿菌蛋白酶309、枯草桿菌蛋白酶147和枯草桿菌蛋白酶168(描述于，例如WO89/06279)。胰蛋白酶樣蛋白酶的實(shí)例是描述于如WO89/06270的胰蛋白酶(例如，源自豬或牛的)和鐮孢屬(Fusarium)蛋白酶。這些酶也可以與半纖維素酶組合以對(duì)含有半纖維素和類似多糖的污垢提供提高的去污性能。該半纖維素酶包括木聚糖酶、木葡聚糖酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、乙酰木聚糖酯酶、葡糖酪酸糖苷酶、阿魏酸酯酶、香豆酸酯酶、內(nèi)切-半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、內(nèi)切-或外切-阿拉伯聚糖酶、外切-半乳聚糖酶。適合的甘露聚糖酶包括細(xì)菌或真菌來源的那些。包括化學(xué)或遺傳修飾的突變體。例如，組合物可以包括甘露聚糖酶，例如源自芽孢桿菌屬，尤其是WO99/64619公開的芽孢桿菌屬物種l633或Bacillusagaradhaerens，例如來自DSM8721抹系的甘露聚糖酶。適合的甘露聚糖酶是由NovozymesA/S生產(chǎn)的Mannaway⑧。酶組合物也可以考慮使用P-葡聚糖酶(EC3.2.1.6)以對(duì)含有P-葡聚糖的污垢提供提高的去污性能。其它優(yōu)選的(3-葡聚糖酶包括地衣多糖酶和昆布多糖酶。例如，果膠酸裂合酶可以與其它果膠分解酶例如原果膠酶，其它果膠酶，多聚半乳糖醛酸酶或其它果膠酸裂合酶組合來對(duì)含果膠的污垢提供提高的去污性能。適合的果膠分解酶包括例如WO"/27083、WO99/27084、WO00/55309和WO02/092741所述的那些。本文討論的果膠酸裂合酶還可以與果膠裂合酶(EC4,2.2.10)、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖裂合酶(EC未定)、內(nèi)切1，4-半乳聚糖酶(EC3.2.1.89)、木葡聚糖酶(EC未定)、木聚糖酶(EC3.2.1.8)、阿拉伯聚糖酶(EC603.2.1.99)、a-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(EC3.2.1.55)、甘露聚糖內(nèi)切1，4-甘露糖苷酶(EC3.2.1.78)、(5-甘露糖苷酶(EC3.2丄25)、卩-l，3-l，4-葡聚糖酶(EC3.2丄73)、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖水解酶、外切多聚半乳糖醛酸酶(EC3.2.1.67)、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖酶(EC未定)、葡聚糖l，3-ji-葡糖苦酶(EC3.2.1.58)、葡聚糖內(nèi)切l(wèi)，6-P-葡糖苷酶(EC3.2,1.75)、甘露聚糖內(nèi)切1，4-P-甘露糖苷酶(EC3.2丄78)、內(nèi)切1，4-卩-木聚糖酶(EC3.2.1.8)、纖維素1，4-纖維二糖苷酶(EC3.2.1.91)、纖維二糖水解酶(EC3.2.1.91)、多聚半乳糖醛酸酶(EC3.2.1.15)、乙?；图谆ッ?例如鼠李糖半乳糖醛酸聚糖甲基酯酶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖乙?；ッ?、果膠甲基酯酶(EC3丄1.11)、果膠乙?；ッ?EC未定)、木聚糖曱基酯酶、乙酰木聚糖酯酶(EC3.1.1.72)、阿魏酸酯酶(EC3.1.1.73)、肉桂酸酯酶(EC3.1.1.73))組合，以對(duì)相應(yīng)的污垢提供提高的去污性能。為了增強(qiáng)污漬去除，可以包括具有內(nèi)切-活性的酶。這些酶將聚合纖維化合物切成較小的片段，并因此提高纖維物質(zhì)及其結(jié)合的色素的溶解性。組合物可以具體調(diào)整以適應(yīng)其預(yù)期用途。例如，用于手工或自動(dòng)清潔紡織品的組合物通常將與用于清潔廚具(刀具或陶器)、地板和瓷磚的組合物包括不同成分。該清潔組合物也將與預(yù)備用作在清潔污垢或載污體前或在使用第二洗滌劑之前施用的"pre-spotter，，的組合物不同。用于組合物的通常成分包括表面活性劑、助洗劑、漂白試劑、酶例如淀粉酶和蛋白酶，等?？蓪⑾礈靹┙M合物配制為清潔粉或清潔液。它們可以用作洗衣用洗滌劑、餐具洗滌組合物、家用或家務(wù)(例如地板和瓷磚)清潔劑、預(yù)洗組合物、和/或其它紡織品，織物和衣服洗滌組合物。5.1.1紡織品表面活性劑另一實(shí)施方式涉及含枯草桿菌果膠酸裂合酶的水性組合物，其還包括展示相容的或協(xié)同的反應(yīng)的表面活性劑，該組合物具有提高的漂白和/或煮練效果。表面活性劑強(qiáng)化組合物可以以與果膠酸裂合酶組合的形式包括表面活性劑體系，其中表面活性劑可以選自非離子型和/或陰離子和/或陽離子和/或兼性和/或兩性離子和/或半極性表面活性劑。該組合物中也可以包括其它酶。表面活性劑通常以按重量計(jì)0.1%至60%(更優(yōu)選0.2%-15%)的水平存在，且最優(yōu)選以其促進(jìn)或至少不降低這些組合物中的任何酶的穩(wěn)定性的方式來配制。可以使用的優(yōu)選體系包括非離子和/或陰離子表面活性劑。烷基酚的聚氧乙烯、聚氧丙烯、和聚氧丁烯縮合物適合用作表面活性劑體系中的非離子表面活性劑，優(yōu)選聚氧乙烯縮合物。脂族伯和仲醇與約1至約25摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物適用作非離子表面活性劑體系中的非離子表面活性劑。烷基多糖苷也可以用作非離子型表面活性劑，例如US專利No.4,565,647所述。環(huán)氧丙烷與丙二醇縮合形成的疏7jc基和環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物也是適用的。其它可以用于所述組合物中的非離子型表面活性劑包括環(huán)氯乙烷與環(huán)氧丙烷和乙二胺的反應(yīng)產(chǎn)物的縮合產(chǎn)物、以及醇乙氧基化物、壬基酚乙氧基化物、烷基多苷、烷基二曱基胺氧化物、乙氧基化脂肪酸單乙醇酰胺、脂肪酸單乙醇酰胺、多羥基烷基脂肪酸酰胺，和葡糖胺的N-?；鵑-烷基衍生物("葡糖酰胺類，，)。優(yōu)選的陰離子表面活性劑包括烷基烷氧基化硫酸酯鹽表面活性劑和類似的磷酸酯。適合使用的陰離子表面活性劑是烷基酯磺酸鹽表面活性劑、烯烴磺酸鹽、烷基琉酸酯鹽(脂肪醇硫酸酯鹽)、醇乙氧基硫酸鹽、仲烷基磺酸鹽、a-磺基脂肪酸甲酯、烷基或鏈烯基琥珀酸，和皂，包括C8-C20羧酸(即脂肪酸)的線性酯(其可以用氣態(tài)S03磺化)。水性酶組合物也可以包括其它可用于紡織品清潔的陰離子表面活性劑。水性酶組合物也可以含有陽離子、兩性、兼性離子和半極性表面活性劑，以及除本文已經(jīng)公開的那些以外的非離子和/或陰離子表面活性劑。當(dāng)表面活性劑被包括時(shí)，水性酶組合物通常包括按重量計(jì)約1%至約40%和更優(yōu)選按重量計(jì)約3%至約20。/。的表面活性劑。5.1.2消泡劑紡織品清潔、漂白和煮練組合物中的另一可選成分可以是泡沫抑制劑或消泡劑。示例性的消泡劑包括聚硅氧烷、DC-S44(DowCorning)和二氧化硅-聚珪氧烷混合物。消泡劑通常以按重量計(jì)組合物的0.001%至2%,優(yōu)選按重量計(jì)0.01%至1%的水平使用。參見例如，US專利No.3,933,622。5.1.3蛋白酶適合用于所述組合物中的蛋白酶包括動(dòng)物、植物或微生物來源的那些。優(yōu)選地，蛋白酶是微生物來源的。該蛋白酶可為絲氨酸蛋白酶或金屬蛋白酶，例如堿性微生物蛋白酶或胰蛋白酶樣蛋白酶。蛋白酶的實(shí)例包括但不限于(a)氨肽酶，包括但不限于脯氨酰氨肽酶(3.4.11.5)、X-pro氨肽酶(3.4.11.9)、細(xì)菌亮氨酰氨肽酶(3.4.11.10)、耐熱氨肽酶(3.4,11.12)、賴氨酰氨肽酶(3.4.11.15)、色氨酰氨肽酶(3.4.11.17)和甲硫氨酰氨肽酶(3.4.11.18);(b)絲氨酸內(nèi)肽酶，包括但不限于糜蛋白酶(3.4.21.1)、胰蛋白酶(3.4.21.4)、黃瓜素(cucumisin)(3.4.21.25)、brachyurin(3.4.21.32)、cerevisin(3.4.21.48)和枯草桿菌蛋白酶(3.4.21.62);(c)半胱氨酸內(nèi)肽酶，包括但不限于木瓜蛋白酶(3.4.22.2)、無花果蛋白酶(3.4.22.3)、木瓜凝享L蛋白酶(3.4.22.6)、蘿摩蛋白酶(3.4.22,7)、獼猴桃蛋白斷3.4,22.14)、番木瓜蛋白酶(3.4.22.30)和ananain(3.4,22.31);(d)天冬氨酸內(nèi)肽酶，包括但不限于胃蛋白酶A(3.4,23.1)、曲霉天冬酰蛋白酶I(3.4.23.18)、青霉天冬酰蛋白酶(3.4.23,20)和酵母天冬酰蛋白酶(3.4.23.25);以及(e)金屬內(nèi)肽酶，例如芽孢桿菌溶素(3.4.24.28)?？莶輻U菌蛋白酶的非限制性實(shí)例包括枯草桿菌蛋白酶BPN'、枯草桿菌蛋白酶amylosacchariticus、枯草桿菌蛋白酶168、枯草桿菌蛋白酶mesentericopeptidase、枯草桿菌蛋白酶Carlsberg、枯草桿菌蛋白酶DY、枯草桿菌蛋白酶309、枯草桿菌蛋白酶147、thermitase、aqualysin、芽孢桿菌PB92蛋白酶、蛋白酶K、蛋白酶TW7和蛋白酶TW3。市售可得的蛋白酶包括AlcalaseTM、SavinaseTM、PrimaseTM、l)uralaseTM、EsperaseTM、KannaseT,DurazymTM(NovoNordiskA/S)、MaxataseTM、MaxacaFM、MaxapemTM、ProperaseTM、PurafectTM、PurafectOxPTM、FN2tm和FN3TM(GenencorInternationalInc.)。也可以用于組合物和方法中的是蛋白酶變體，例如歐洲專利申請(qǐng)No.130756(Genentech);EP260105(Ge歸cor);EP251446(Genencor);歐洲申請(qǐng)525610(Solvay);和EP214435(Henkel);國際PCT申請(qǐng)No.WO87/04461(Amgen);WO87/05050(Genex);WO88/08028(Genex);WO88/08033(Amgen);WO89/06279(NovoNordiskA/S);WO91/00345(NovoNordiskA/S);和WO94/02618(Gist-BrocadesN.V.);和Thomas等人，318NATURE375-376(1985);Thomas等人，193丄MOL.BIOL.193:803-813(1987);Russel等人，328NATURE496-500(1987)中z〉開的那些?？梢岳缤ㄟ^METHODSOFENZYMATICANALYSIS,vol.5(第三版，VerlagChemie，Weinheim1984)所述確定蛋白酶的活性。5丄4脂肪酶在包括枯草桿菌果膠酸裂合酶的組合物中也可以考慮包括脂肪酶。適合的脂肪酶(也稱作羧酸酯水解酶)包括但不限于細(xì)菌或真菌來源的那些，包括三酰甘油脂肪酶(3.1.1.3)和磷脂酶A2(3丄1.4.)。其它脂肪酶包括但不限于來自腐質(zhì)霉屬(與嗜熱絲孢菌屬同義)的脂肪酶，例如歐洲專利申請(qǐng)?zhí)?58,068和305,216所述來自疏毛腐質(zhì)霉(T.lanuginosus)，或如國際PCT申請(qǐng)WO96/13580所述來自特異腐質(zhì)霉的脂肪酶；假單胞菌脂肪酶，例如來自產(chǎn)堿假單胞菌或類產(chǎn)堿假單胞菌(歐洲專利號(hào)218,272)、洋蔥假單胞菌(歐洲專利號(hào)331,376)、施氏假單胞菌(英國專利號(hào)1,372,034)、熒光假單胞菌、假單胞菌屬物種林系SD705(參見例如國際PCT申請(qǐng)WO95/06720和WO96/27002)、P.wisconsi固sis(國際PCT申請(qǐng)WO96/12012)的脂肪酶；芽孢桿菌脂肪酶，例如來自枯草桿菌(參見例如Dartois等人，1131BiOCHEM.BIOPHYS.ACTA253-360(1993));嗜熱脂肪芽孢桿菌(曰本申請(qǐng)?zhí)?4/744992)或短小芽胞桿菌(國際PCT64申請(qǐng)?zhí)朩O91/16422)的脂肪酶。其它實(shí)例可以包括脂肪酶變體，例如國際PCT中請(qǐng)WO92/05249、WO94/01541、WO95/35381、WO96/00292、WO95/30744、WO94/25578、WO95/14783、WO95/22615、WO97/04079和WO97/07202;和歐洲專利號(hào)407225和260105中所述的那些。優(yōu)選的市售可得的脂肪酶包括但不限于LipolaseTM、LipolaseUltraTM、LipozymeTM、PalataseTM、NovozymTM435和LecitaseTM(均可獲自NovoNordiskA/S)?？梢园碝ETHODSOFENZYMATICANALYSISvol,4(第三版，VeiiagChemie，Weinhein,1984)所述確定組合物中脂肪酶的活性。其它生物煮練酶可以與果膠酸裂合酶一起使用。該其它生物煮練酶可以源自其它微生物，或是源自上述列舉的酶經(jīng)添加、缺失或置換了一或多個(gè)氨基酸而得的生物煮練酶，包括雜種多肽?？墒褂迷撗苌锖碗s種多肽，只要所得的多肽展示生物煮練活性即可?？梢允褂贸Ｒ?guī)誘變法產(chǎn)生此類變體并且使用例如高通量篩選技術(shù)如瓊脂板篩選法進(jìn)行鑒定。例如，可以通過如下方式測量果膠酸裂合酶活性向瓊脂板(例如，LB瓊脂)中打出的4mm孔(含有0.7%w/v聚半乳糖醛酸鈉(SigmaP1879))施加受試溶液。然后在特定溫度(例如25-40。C)孵育板6小時(shí)。然后(O在lMCaCI2中浸漬該板0.5小時(shí)或在(ii)l。/?；旌系匿寤榛谆@(MTAB，SigmaM-7635)中浸漬該板lh。這些程序都造成聚半乳糖趁酸在瓊脂內(nèi)的沉淀?？梢酝ㄟ^在沉淀的聚半乳糖醛酸背景中透明區(qū)的出現(xiàn)檢測果膠酸裂合酶活性。使用果膠酸裂合酶標(biāo)準(zhǔn)制劑的稀釋液校準(zhǔn)該檢測法的靈敏度?？梢允褂贸Ｒ?guī)方法確定分離的生物煮練酶的溫度、pH和二價(jià)陽離子依賴性。例如，可在一個(gè)溫度和pH范圍以及在存在和不存在不同濃度的Ca2+下進(jìn)行酶促活性檢測試驗(yàn)，并定量最適溫度和pH以及二價(jià)陽離子的影響(如果有)。然后確定溫度、pH和陽離子依賴性，建立特定果膠酸裂合酶在本發(fā)明所考慮的組合物和方法中使用的適宜性。這些也可以在一系列底物上進(jìn)行檢測。生物煮練酶可源自其來源細(xì)胞或者可為重組產(chǎn)生的，且可純化或分離。65如本文所使用，"純化的"或"分離的"酶是這樣的酶，其已經(jīng)經(jīng)處理除去了源自合成它的細(xì)胞的、可干擾其iHl活性的非酶物質(zhì)。通常，生物煮練酶與作為內(nèi)源性組分或作為重組產(chǎn)物產(chǎn)生它的細(xì)菌或真菌^:生物分離。如果酶分泌到培養(yǎng)基中，純化可包括使用常規(guī)方法，通過離心、過濾或沉淀從生物質(zhì)中分離培養(yǎng)基?；蛘?，酶可經(jīng)細(xì)胞破壞從宿主細(xì)胞釋放然后自生物質(zhì)分離。一些情況下，可以通過常規(guī)蛋白質(zhì)純化方法實(shí)現(xiàn)進(jìn)一步純化，該方法包括但不限于硫酸銨沉淀；酸或離液劑提??；離子交換；分子篩；和疏水色譜，例如FPLC和HPLC;制備性等電聚焦和制備性聚丙烯酰胺凝膠電泳。或者可使用親和色譜如免疫親和色譜實(shí)現(xiàn)純化。例如，可使用具有用作親和"標(biāo)簽"的額外氨基酸序列的雜種重組果膠酸裂合酶，該標(biāo)簽有利于使用適合的固相基質(zhì)進(jìn)行的純化?？苫瘜W(xué)修飾生物煮練酶來增強(qiáng)提供有利特征的一或多個(gè)特性，例如，增加溶解性、減小不穩(wěn)定性或二價(jià)離子依賴性等。修飾包括但不限于磷酸化、乙?；?、疏酸化、酰化或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它蛋白質(zhì)修飾。5.1.5助洗劑體系根據(jù)本發(fā)明的組合物可以進(jìn)一步包含助洗劑體系。任何常規(guī)的助洗劑體系都適合用于這里，包括硅鋁酸鹽材料、硅酸鹽、多羧酸(鹽)和脂肪酸、如乙二胺四乙酸鹽等材料、金屬離子螯合劑如氨基多膦酸，尤其是乙二胺四亞甲基膦酸和二亞乙基三胺五亞甲基膦酸。盡管由于明顯的環(huán)境原因較不優(yōu)選磷酸鹽助洗劑，但其仍可以用在此處。適當(dāng)?shù)闹磩┛梢允菬o機(jī)離子交換材料，通常是無機(jī)水合硅鋁酸鹽材料，更特別的是水合的合成沸石，如水合沸石A、X、B、HS或MAP。另一適合的無機(jī)助洗劑材料為層狀珪酸鹽，例如SKS-6(Hoechst)。SKS-6是由硅酸鈉(Na2Si;j05)組成的晶體層狀硅酸鹽。適宜的含有一個(gè)羧基基團(tuán)的多羧酸鹽包括乳酸、甘醇酸和其醚衍生物。包含兩個(gè)羧基基團(tuán)的多羧酸鹽包括琥珀酸、丙二酸、(亞乙二氧基)雙乙酸、馬來酸、二甘醇酸、酒石酸、丙醇二酸和富馬酸的水溶性鹽，以及在例如US3,935,257中公開的醚羧酸鹽和亞硫?；人猁}。含有三個(gè)羧酸基團(tuán)的多羧酸鹽包括尤其是水溶性檸檬酸鹽、烏頭酸鹽和檸康酸鹽以及琥珀酸鹽衍生物，如羧曱基氧基琥珀酸鹽，2-羥基丙氧基琥珀酸鹽(lactoxysuccinates)，和氧基多羧酸鹽材料如2-氧雜-l，l，3-丙烷三羧酸鹽。包含四個(gè)羧基基團(tuán)的多羧酸鹽包括氧基雙琥珀酸鹽、含有磺基取代基的1,1，3，3-丙烷四羧酸鹽(參見例如美國專利號(hào)3,936,448)、1，1，2，2,-乙烷四羧酸鹽、磺化熱解的檸檬酸鹽，及包含膦取代基的多羧酸鹽。脂環(huán)族的和雜環(huán)的多羧酸鹽包括環(huán)戊烷-順,順，順-四羧酸鹽、環(huán)戊二烯五羧酸鹽、2，3，4，5-四氫呋喃-順，順，順-四羧酸鹽、2，5-四氫呋喃-順-二羧酸鹽、2，2，5，5,-四氫呋喃四羧酸鹽、1，2，3，4，5，6-己烷-六羧酸鹽和多元醇如山梨醇、甘露糖醇和木糖醇的羧甲基衍生物。芳族多羧酸鹽包括苯六甲酸、苯四酸和鄰苯二曱酸衍生物。優(yōu)選的多羧酸鹽包括每個(gè)分子包含不超過3個(gè)羧基基團(tuán)的羥基-羧酸鹽，更優(yōu)選的是檸檬酸鹽。洗劑如沸石A或?qū)訝罟杷猁}(SKS-6)和水溶性羧酸螯合劑如檸檬酸的混合物。適合包含在本發(fā)明洗滌劑組合物中的螯合劑是乙二胺-N，N'-二琥珀酸(EDDS)或其堿金屬、堿土金屬、銨或取代的銨鹽，或它們的混合物。優(yōu)選的EDDS化合物是游離酸形式和其鈉或鎂鹽。這些優(yōu)選的EDDS鈉鹽的實(shí)例包括Na2EDDS和Na4EDDS。優(yōu)選的EDDS鎂鹽的實(shí)例包括MgEDDS和Mg2EDDS。鎂鹽最優(yōu)選包含在本發(fā)明組合物中。也可以考慮可以形成粒狀組合物中使用的助洗劑體系的一部分的助洗劑材料，包括但不限于，無機(jī)材料如堿金屬碳酸鹽、碳酸氫鹽、硅酸鹽，和有機(jī)材料如有機(jī)膦酸鹽、氨基聚亞烷基膦酸鹽和氛基多羧酸鹽。其它適宜的水溶性有機(jī)鹽是均聚物酸或共聚物酸或它們的鹽，其中多羧酸包含至少兩個(gè)被不多于兩個(gè)的碳原子相互隔開的氣基基團(tuán)。聚丙烯酸鹽包括分子量2000-5000道爾頓的那些和它們與馬來酸酐的共聚物，該共聚物的分子量是20,000到70,000，尤其約40,000。67組合物中通常包括5%到80。/。重量的洗滌助洗劑鹽。液體洗滌劑中優(yōu)選包括5%到30%的助洗劑。5.1.6漂白劑另外可選的可包括在本發(fā)明洗滌劑組合物中的洗滌劑組分包括漂白劑如過硼酸鹽PB1、PB4和過碳酸鹽。這些漂白劑成分可以包括一種或多種氧漂白劑(oxygenbleachingagent)和，才艮據(jù)選擇的漂白劑，一種或多種漂白活化劑。目前的氧漂白化合物通常以約1%至約25%的水平存在。通常，漂白化合物是非液體制劑，例如粒狀洗滌劑中的任選加入組分。其也可以包括本文所討論的漂白體系。包括氧漂白劑以及其它本領(lǐng)域已知的漂白劑。適用于本發(fā)明的漂白劑可以是活化的或未活化的漂白劑。一種可用的氧漂白劑包括過羧酸漂白劑和其鹽。此類漂白劑的適宜實(shí)例包括單過氧鄰苯二甲酸鎂六水合物、間氯過苯甲酸鎂，4-壬氨基-4-氧代過氧丁酸和雙過氧十二烷二酸。美國專利號(hào)4，483，781、EP0133354和美國專利號(hào)4,412,934中公開了這些漂白劑。非常優(yōu)選的漂白劑也包括在美國專利號(hào)4,634,551中公開的6-壬氨基-6-氧代過氧己酸。另一類漂白劑包括卣素漂白劑。次鹵酸鹽漂白劑的實(shí)例包括例如三氯異氰脲酸，二氯異氰脲酸鈉和鉀及N-氯和N-溴烷烴磺酰胺。這些材料通常占成品的0.5-10%重量，優(yōu)選1-5%重量。此類鹵素漂白劑一般不太優(yōu)選用于酶促洗滌劑中。過氧化氫釋放劑可與漂白活化劑結(jié)合使用，漂白活化劑如四乙?；叶?TAED)，壬酰基氧基苯磺酸鹽(NOBS,見例如美國專利號(hào)4,412,934)，3，5-三甲基-hexsanoloxy苯磺酸鹽(ISONOBS，見例如EP120591)或五乙?；咸烟?PAG)，它們在過水解后形成作為活性漂白物的過酸，從而使漂白效果得到提高。另夕卜，非常適合的漂白活化劑是C8(6-辛酰氨基-己酰基)氧基笨璜酸鹽，C9(6-壬酰氨基己?；?氧基笨璜酸鹽和C10(6-癸酰氨基己酰基)氧基^t酸鹽或其混合物。同樣適當(dāng)?shù)幕罨瘎┦酋；瘷幟仕狨?，如在歐洲專利申請(qǐng)?zhí)?1870207.7中公開的?；瘷幟仕狨?。在本發(fā)明的清潔組合物中有用的漂白劑(包括過氧酸)和漂白體系(包含漂白活化劑和過氧漂白化合物)。過氧化氫也可以通過添加能夠在洗滌和/或漂洗開始或其過程中產(chǎn)生過氧化氫的S^體系(即酶及其底物)而存在。這種^體系公開于歐洲專利申請(qǐng)EP0537381中。氧漂白劑以外的其它漂白劑也是本領(lǐng)域已知的并可在此利用。一種特別有意義的非氧漂白劑包括光活化漂白劑如磺化酞菁鋅和/或鋁。這些材料在洗滌過程中可以沉積到載污體(substrate)上。在光照下，在氧氣存在時(shí)，如在白天通過懸掛衣物干燥，此磺化酞菁鋅將被活化，導(dǎo)致載污體被漂白。優(yōu)選的酞菁鋅和光活化漂白方法公開于例如美國專利號(hào)4,033,718。通常，洗滌劑組合物包含約0.025%至約1.25%重量的磺化酞菁鋅。漂白劑也可包含錳催化劑。錳催化劑可以是例如在"對(duì)于低溫漂白有效的錳催化劑"，Nature369,1994，pp.637-639中描述的化合物之一。5.1.7其它成分可以以各種組合形式用于洗滌劑組合物中的其它成分包括污物懸浮劑或抗再沉積劑、污垢釋放劑、熒光增白劑、磨料、殺細(xì)菌劑、晦暗抑制劑、著色劑和/或包嚢化或未包嚢化的香料。特別適合的包嚢化材料是由具有多糖和多羥基化合物的基質(zhì)組成的水溶性嚢。其它適合的水溶性包嚢化材料包括衍生自取代的二羧酸的未糊化淀粉酸酯的糊精(參見例如美國專利號(hào)US3,455,838)。這些酸-酯糊精優(yōu)選制備自淀粉如蠟質(zhì)種玉米、蠟質(zhì)種高梁、西米、木薯和馬鈴薯。所述包嚢化材料的適當(dāng)實(shí)例包括NationalStarch生產(chǎn)的N-Lok。N-Lok包嚢化材料由改性玉米淀粉和葡萄糖組成。淀粉通過添加單官能取代的基團(tuán)如辛烯基丁二酸酐改性。用于洗滌劑中的典型抗再沉積劑包括水溶性的，通常是有機(jī)的膠體，包括例如聚合羧酸如聚丙烯酸或聚馬69來酸或其共聚物的水溶性鹽、膠、凝膠、淀粉或纖維素的醚羧酸或醚磺酸的鹽或纖維素或淀粉的硫酸酯的鹽。含有酸性基團(tuán)的水溶性聚酰胺也可以用作抗再沉積劑。也可使用可溶性淀粉制劑以及除了上述那些以外的其它淀粉產(chǎn)品，例如部分水解的淀粉。優(yōu)選使用曱基纖維素、羥乙基纖維素、甲基羥乙基纖維素、羧曱基纖維素鈉及其混合物。這些物質(zhì)通常組合物的0.05%至10%重量，更優(yōu)選0.2%至8%重量，最優(yōu)選0.5%至6%重量的水平使用。也可以考慮4吏用熒光增白劑。優(yōu)選的熒光增白劑在性質(zhì)上是陰離子的，其例子是4，4'-二-(2-二乙醇氨基-4-苯絲-s-三溱-6-基絲)二苯乙烯-2，2'二磺酸二鈉、4，4，-二-(2-嗎啉代-4-苯氨基-s-三"秦-6-基氨基)-二苯乙烯-2，2，-二磺酸二鈉、4，4'-二-(2，4-二苯氨基-s-三溱-6-基氨基)二苯乙烯-2，2'-二磺酸二鈉、4'，4"-二-(2，4-二^^基-s-三溱-6-基JL&)二苯乙烯-2-磺酸一鈉、4，4'-二-(2-苯氨基-4-(N-曱基-N-2-羥基乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-2,2'-二磺酸二鈉、4，4'-二-(4-苯基-2，1，3-三唑-2-基)-二苯乙烯-2，2，-二磺酸二鈉、4，4'-二-(2-苯氨基-4-(1-甲基-2-羥基乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-2，2'-二磺酸二鈉、2-(二苯乙烯基-4"-(萘并-l'，2':4，5)-l,2，3-三唑-2"-磺酸鈉和4，4'-二-(2-磺基苯乙烯基)聯(lián)苯。其它可用的聚合材料有聚乙二醇，特別是分子量1000-10000道爾頓，更特別是大約2000到8000且最優(yōu)選約4000的聚乙二醇。這些材料以0.20%到5%，更優(yōu)選0.25%到2.5%重量使用。這些聚合物和在前提到的均聚-或共聚-多羧酸鹽對(duì)于改善在過渡金屬雜質(zhì)存在時(shí)粘性、蛋白質(zhì)性和可氧化的污物上的清潔性能、白度保持、織物灰沉積是有價(jià)值的。也可以考慮在提出的洗滌劑和清潔組合物中使用污垢釋放劑。這些可以包括具有各種排列的乙二醇和/或丙二醇單元與對(duì)苯二酸的常規(guī)共聚物或三元共聚物。此聚合物的實(shí)例公開于例如美國專利號(hào)4,116,885和4，711，730和EP0272033。另外非常有用的是形式為對(duì)苯二曱酸二甲酯、磺基間苯二甲酸二曱酯、乙二醇和l，2-丙二醇的隨機(jī)共聚物的改性聚酯，其中端基主要由磺基苯甲酸酯以及其次由乙二醇和/或1，2-丙二醇的單酯構(gòu)成。目標(biāo)是得到一種兩端都被磺基苯甲酸酯基團(tuán)封端的聚合物，在本上下文中，"主要"是指大部分所述共聚物被磺基苯甲酸酯基團(tuán)封端。然而，有些共聚物未被完全封端，因此它們的端基可由乙二醇和/或1,2-丙二醇的單酯構(gòu)成，即"其次"由該類物質(zhì)構(gòu)成。也可以考慮在洗滌劑組合物中使用軟化劑。這些軟化劑可以是無機(jī)或有機(jī)類型。無機(jī)軟化劑可舉例的有如在GB-A-1400898和美國專利號(hào)5,019,292中公開的綠土粘土(smectiteclay)。有機(jī)織物軟化劑包括在GB-A1514276和EP0011340中公開的水不溶性叔胺和在EP-B-0026528中公開的它們同單C,2-Cw季銨鹽的聯(lián)合和在EP0242919中公開的雙長鏈酰胺。其它可用的織物軟化體系的有機(jī)成分包括在EP0299575和0313146中公開的高分子量聚環(huán)氧乙烷材料。綠土粘土的水平通常是5%到15%，更優(yōu)選約8%到12%重量，該材料以干燥混合成分形式加入到制劑的剩余組分中。有機(jī)織物軟化劑如水不溶性叔胺或雙長鏈酰胺材料的摻入水平為約0.5%到5%重量，通常為約1%到3%重量，而高分子量聚環(huán)氧乙烷材料和水溶性陽離子材料的加入水平為約0.1%到2%，通常為約0.15%到1.5%重量。這些材料通常加入到組合物的噴霧干燥部分中，盡管在一些情況下可能更適合將它們以干燥混合顆粒形式添加到其中，或?qū)⑺鼈円匀刍后w形式噴到組合物的其它固體組分上?？梢杂糜谙礈靹┙M合物中的另一成分是聚合物染料轉(zhuǎn)移抑制劑。本發(fā)明洗滌劑組合物可以包含約0.001%到10%，優(yōu)選約0.01%到2%，更優(yōu)選約0.05%到1%重量的聚合物染料轉(zhuǎn)移抑制劑。所述聚合物染料轉(zhuǎn)移抑制劑通常混合到洗滌劑組合物中用以抑制染料從有色織物轉(zhuǎn)移到同時(shí)洗滌的其它織物上。這些聚合物能夠在從染色的織物洗出的易褪色染料有機(jī)會(huì)接觸洗滌中的其它物件之前結(jié)合或吸收該染料。特別適合的聚合物染料轉(zhuǎn)移抑制劑是多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯基-吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯吡咯烷酮聚合物，聚乙烯基口惡唑烷酮和聚乙烯咪唑或它們的混合物。添加這些聚合物也可提高本發(fā)明酶的性能。71本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，可以對(duì)本文所述的組合物、化合物和方法進(jìn)行多種修改或改變。實(shí)施例實(shí)施例1、酶的合成與純化使用高效轉(zhuǎn)錄基因的aprE啟動(dòng)子和使果膠酸裂合酶高效分泌到培養(yǎng)基中的AprE信號(hào)序列在枯草桿菌中生產(chǎn)來自枯草桿菌亞種subtilis菌林168之衍生物的果膠酸裂合酶。使用正向寡核苷酸引物5，-CGTTGGG-3'(SEQIDNO:3)和反向引物5-TTTTCAAAGCTTTAATTTAATTTACCCGCACCCGCTTGATTT-3'(SEQIDNO:4)，利用PCR從染色體DNA(利用標(biāo)準(zhǔn)酚提取技術(shù)分離自枯草桿菌亞種subtms菌林168的衍生物)擴(kuò)增/7e/基因。正向引物將AprE信號(hào)序列的編碼序列在讀框內(nèi)融合到成熟/7e/基因的編碼序列上。正向引物還包括BbsI限制性位點(diǎn)，其在切割后產(chǎn)生與BssHII位點(diǎn)相容的突出序列。反向引物將HindIII限制性位點(diǎn)引入/^/基因編碼區(qū)的終止密碼子后。使用Herculase聚合酶(Stratagene，LaJolla，CA)，基本上按照生產(chǎn)商的推薦進(jìn)行PCR反應(yīng)。純化近1.2千堿基對(duì)(kb)的PCR片段(PCRPurificationKit,QiagenInc.，Valencia,CA)并用Bbsl和HindIII消化。用BssHII和HindIII消化表達(dá)載體(p2JM103的衍生物)，分離載體條帶并隨后將其與攜帶/7e/基因的經(jīng)消化的PCR片段連接。生成的表達(dá)載體p2JM103pel具有近^0bp的aprE啟動(dòng)子和信號(hào)序列(參見，F(xiàn)errari等人，170丄BACT.170:289-295(1988);和Henner等人，170丄BACT.170:296-300(1988))，其自aprE啟動(dòng)子上游的EcoRI位點(diǎn)起始而終止于引入aprE信號(hào)序列中的BssHH位點(diǎn)處。該aprEDNA片段的該EcoRI位點(diǎn)早先已被克隆到pJM103整合質(zhì)粒的EcoRI位點(diǎn)中(Perego，"用于枯草桿菌中遺傳操作的整合栽體"，BACILLUSSUBTILISANDOTHERGRAM-POSITIVEBACTERIA:BIOCHEMISTRY,PHYSIOLOGY,ANDMOLECULARGENETICS615-624(Sonenshdn,Hoch,和Losick(編)，AmericanSocietyforMicrobiology,WashingtonD.C，1993)。自該EcoRI至BssHII限制性位點(diǎn)的該aprE片段的DNA序列為5，-GAATTCTCCATTTTCTTCTGCTATCAAAATAACAGACTCGTGATTTTCCAAACGAGCTTTCAAAAAAGCCTCTGCCCCTTGCAAATCGGATGCCTGTCTATAAAATTCCCGAT丁CATCTTA丁TTCTTCCTCCCTCTCAATAATTTTTTCATTCTATCCCTTTTCTGTAAAGT丁丁A丁TTTTCAGAATACTTTTA丁CATCATGCTTTGAAAAAATATCACGATAATATCCATTGT丁CTCACGGAAGCACACGCAGGTCATTTGAACGAATTnTTCGACAGGAATTTGCGTCTACTCTGAATTTTTTTAAAAGGAGAGGGTAAAGAGTGAGAAGCAAAAAATTGTGCGCGC-3'(SEQIDNO:5).使用在LAT終止子(來自地衣芽胞桿菌a-淀粉酶基因，Yuuki等人，98J.BIOCHEM(TOKYO)1147-56(1985))的5，端引入的HindIII位點(diǎn)，將/^/基因的3，端克隆到該終止子上游。該LAT終止子的3，端早先已以寡核苷酸形式克隆到pJM103質(zhì)粒的Hindlll位點(diǎn)中，連接后質(zhì)粒中的原始Hindlll位點(diǎn)被除去。pJM103中，從該Hindlll位點(diǎn)到該失去的Hindlll位點(diǎn)的LAT終止子區(qū)的DNA序列為AATCCGTTTTTTTATTTTTAATTAAGAGCTT-3，(SEQIDNO:6)。為了構(gòu)建生產(chǎn)宿主，使用pJM103pel轉(zhuǎn)化枯草桿菌BG3594comK(degUHy32，oppA,AspoIIE，AaprE,AnprE,amyE::xylRPxylAcomK-phleo)。通過用木糖誘導(dǎo)由xylA啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的comK基因，制造感受態(tài)細(xì)胞(Hahn等人，21MOL.MICROBIOL.763-75(1996))。在具有5pg/mL氯霉素的LB瓊脂板上選擇轉(zhuǎn)化體并且在具有25ng/mL氯霉素的LB瓊脂板上對(duì)經(jīng)選擇的菌落進(jìn)行連續(xù)劃線培養(yǎng)直到獲得快速的菌落生長以便選摔73具有較高基因拷貝數(shù)的克隆。對(duì)于Pel生產(chǎn)，在14L發(fā)酵罐中生長培養(yǎng)物。果膠酸裂合酶的生產(chǎn)可以部分地基于本領(lǐng)域已知的芽孢桿菌發(fā)酵、回收和配制來進(jìn)行，且可以相應(yīng)地進(jìn)行調(diào)整。為了生長接種物，用P/。葡萄糖補(bǔ)充LuriaBroth(LB)肉湯并向肉湯中添加25ppm氯霉素抗生素(用作菌林標(biāo)記物)。類似的營養(yǎng)富集培養(yǎng)基可以替代LB肉湯。用在液氮罐中凍存于甘油貯存物中的細(xì)胞接種培養(yǎng)基。在2L含有600ml該預(yù)備的培養(yǎng)基的三角瓶中生長種子，在37。C以200rpm振蕩。然后當(dāng)550nm處光密度(OD)約為1時(shí)，將培養(yǎng)的接種物轉(zhuǎn)移到發(fā)酵罐?；?+，以如下提供的濃度向發(fā)酵罐中批投入培養(yǎng)基組分(接種物轉(zhuǎn)移后的批量大小)。<table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>用如上表所示的纖維素酶、半纖維素酶和果膠酶的工業(yè)混合物處理發(fā)酵培養(yǎng)基以使溶液粘性較小。為了向該批補(bǔ)料，使用每千克滅菌溶液600g葡萄糖。保持有限的葡萄糖和過量的溶解氧(DO)水平直到收獲。使用氨溶液控制pH為7.4。冷卻發(fā)酵罐以保持溫度為37°C?？偟陌l(fā)酵時(shí)間為36小時(shí)。收獲后，冷卻發(fā)酵肉湯。然后用鹽和絮凝劑處理肉湯并過濾以除去細(xì)胞。然后將該材料超濾以濃縮果膠酸裂合酶。用40%丙二醇和0.25%Proxel的穩(wěn)定劑將濃縮的果膠酸裂合酶配制為pH6.25。用MES電泳緩沖液在NuPAGE4-12%Bis-Tris膠上電泳濃縮的果膠酸裂合酶。Markl2標(biāo)準(zhǔn)分子量(MW)標(biāo)記物與樣品(泳道1-10)—起跑膠。圖6示出該膠，泳道2具有2.5pg總蛋白質(zhì)的牛血清白蛋白(BSA)(對(duì)照)。泳道3具有5ngBSA。泳道4具有按上述獲得的、用HC1稀釋的、每泳道5照濃度的、濃縮果膠酸裂合酶。泳道5具有按上述獲得的、用去離子(DI)水稀釋的、每泳道5嗎濃度的、濃縮果膠酸裂合酶。泳道6具有5pg的NovozymesBioprep3000L。泳道7具有10pg的BSA。泳道8具有10pg按上述獲得的用HC1稀釋的果膠酸裂合酶。泳道9具有10fig的NovozymesBioprep3000L。實(shí)施例2、果膠酸裂合酶的表征在下述條件下，將枯草桿菌果膠酸裂合酶(SEQIDNO:1)的果膠去除性能與市售可得的果膠酸裂合酶，Bioprep3000L(Novozymes)的進(jìn)行比較。<table>tableseeoriginaldocumentpage75</column></row><table>"*"該結(jié)果是根據(jù)6.35&蛋白質(zhì)^氮換算的。此外，該結(jié)果是總蛋白質(zhì)估算。材料所用栽污體為來自Testfabrics的退漿但未漂白的織物ArmyCardedCottonSateen(Style#428)。以2ppm總蛋白質(zhì)來利用實(shí)施例1的枯草桿菌果膠酸裂合酶和NovozymesBiopr印3000L果膠酸裂合酶。分析多種pH的50mMBIS-TRIS丙烷(BTP)緩沖液。使用HC1調(diào)整該緩沖液。使用在50mM磷酸緩沖液中的0.005%釕紅染料。程序?yàn)榱诉M(jìn)行pH和溫度曲線繪圖，進(jìn)行下述。通過在12-孔微滴定板中孵育5/8英寸一片的棉織物(Testfabricsstyle#428)盤，獲得酶進(jìn)行果膠去除的初步pH和溫度曲線。12孔微滴定板的每個(gè)孔中加入2ml總終體積的BTP/HC1緩沖液和酶以及一個(gè)織物盤。用板密封劑緊密密封板后，將124Ul^"振蕩孵育箱并在靶溫度下以250rpm孵育60分鐘。用去離子水徹底漂洗這些盤。漂洗后，將1.5ml在pH6的50mM磷酸鈉緩沖液中的0.05。/。釕紅染料^/v含織物盤的每個(gè)孔中。然后放在振蕩孵育箱中于250rpm再次孵育該板15分鐘。然后將織物盤從釕紅染料溶液中拿出并用去離子水漂洗及風(fēng)干。為了量化由酶實(shí)現(xiàn)的果膠去除，使用分光光度計(jì)(MinoltaCR-200)測量每個(gè)染色的織物盤的CIELMt。也使用Launder-Ometer檢測實(shí)施例1的枯草桿菌果膠酸裂合酶和NovozymesBioprep3000L在果膠去除上的劑量反應(yīng)活性。為了檢查果膠去除效力，對(duì)于實(shí)施例的杲膠酸裂合酶，在55°C，pH7.5,于Launder-Ometer中，在50mMBTP/HC1緩沖液中處理三塊4英寸x3英寸的ArmyCardedCottonSateen織物樣布(Testfabrics#428型，退漿但未漂白)，歷時(shí)20分鐘。在pH8.2,在50mMBTH/HCI中用同等的樣布檢測Bioprcp3000L。孵育后，用水徹底漂洗所有的織物樣布，然后在釕紅染色前風(fēng)干。從每個(gè)經(jīng)處理的織物樣布剪切下3個(gè)5/8英寸的織物盤。然后用0.05%釕紅染料對(duì)這些盤染色。于pH6，在50mM磷酸鈉溶液中進(jìn)行染色。按照上面用于pH和溫度曲線的程序量化每個(gè)處理的果膠去除。結(jié)果圖2提供了在初步pH和溫度曲線上的果膠去除。通過釕紅染料染色測量杲膠去除。使用枯草桿菌果膠酸裂合酶的果膠去除性能證實(shí)如圖1所示的寬的溫度鐠和約6至8的最適pH范圍。越低的CIELMi指示越高的果膠結(jié)合。果膠結(jié)合越高表明酶的果膠去除性能越低?？梢允褂闷渌缶氃囼?yàn)，例如描述于ArneSolbak等人，"Discoveryofpectin-degradingenzymesanddirectedevolutionofanovelpectatelyaseforprocessingcottonfabric，"280J.BIOL爭CHEM.9431-9438(2005)中所述的。也使用Launder-Ometer檢測了實(shí)施例1的果膠酸裂合酶的果膠去除76劑量反應(yīng)。結(jié)果如圖3所顯示。為了比較枯草桿菌果膠酸裂合酶和NovozymesBiopr印3000L果膠酸裂合酶的果膠去除效力，進(jìn)行下述實(shí)驗(yàn)。在Launder-Ometer中，用不同濃度的果膠酸裂合酶于55。C處理3片4英寸x3英寸退漿的ArmyCardedCottonSateen織物(Testfabrics#428型)，歷時(shí)20分鐘。為了比較處于最適pH的果膠酸裂合酶，對(duì)GCOR果膠酸裂合酶使用pH7.5而對(duì)Bioprep3000L使用pH8.2。處理20分鐘后，用去離子水徹底漂洗織物樣布并風(fēng)干。從每塊織物樣布切下5/8英寸的織物盤。然后如之前所述的用0.05%釕紅染料對(duì)這些織物盤染色以量化果膠去除。也在25X:和55r評(píng)估實(shí)施例1的果膠酸裂合酶的過氧化物穩(wěn)定性。在25。C的較低溫度時(shí)果膠酸裂合酶活性比在較高溫度時(shí)其的活性以及Bioprep3000L的活性高。使用0.2%(w/v)多聚半乳糖醛酸在25mMTris/HCl，25mM甘氨自aOH，pH9緩沖液中測量果膠酸裂合酶活性。通過^f吏用分光光度計(jì)測量235nm處吸光度的線性增加，歷時(shí)5分鐘，以確定活性。一單位的酶活性定義為每分鐘產(chǎn)生相當(dāng)于lpmol不飽和的雙半乳糖醛酸糖苷的lnmol不飽和寡聚半乳糖酪酸糖苷(oligogalacturonide)的蛋白質(zhì)的量，其中，對(duì)于雙半乳糖醛酸苷二聚體，在235nm使用拍00M"cm—1的分子消光系數(shù)。通過測量280nm處的吸光度確定蛋白質(zhì)濃度，其中使用基于實(shí)施例1的果膠酸裂合酶的M酸序列的消光系數(shù)。按單位/mg純化的果膠酸裂合酶確定比活性。該果膠酸裂合酶活性檢測法如ArneSolbak等人，"Discoveryofpectin-degradingenzymesanddirectedevolutionofanovelpectatelyaseforprocessingcottonfabric,'"280J.BIOL.CHEM.9431-9438(2005)所述。在存在遞增數(shù)量的過氧化物下使用所述的果膠酸裂合酶活性檢測法評(píng)估酶穩(wěn)定性。該檢測的結(jié)果如圖4A和4B所展示。也使用如Solbak等人，(2005)所述的果膠酸裂合酶活性檢測法，檢測了實(shí)施例1的果膠酸裂合酶在螯合劑EDTA存在下的酶穩(wěn)定性。洗滌組合物優(yōu)選地缺乏二價(jià)陽離子例如鈣。然而，最佳酶促活性通常需要陽離子的存在。圖5顯示當(dāng)在室溫比較帶有EDTA和沒有EDTA的樣品時(shí)，實(shí)施例1的果膠酸裂合酶的酶促活性幾乎無損失。然而，相比于檢測的其它酶，當(dāng)將溫度取至55。C時(shí)，該酶的功能有顯著損失?；谶@些結(jié)果，另一方面考慮取實(shí)施例1的純化的果膠酸裂合酶并用過氧化物例如過氧化氫在回收期間處理它以生產(chǎn)具有比未處理的果膠酸裂合酶具有顯著更高活性的果膠酸裂合酶產(chǎn)物。例如，用過氧化氫處理，該杲膠酸裂合酶可獲得比活性10%的增加。然后可以在本申請(qǐng)描述的各種組合物和一步工藝中使用該經(jīng)處理的果膠酸裂合酶。實(shí)施例3使用乙酸，配制具有丙二醇(40%)、Proxel(0.25%)(1，2-苯并異參唑|3-酮)、和pH6.25±0.1的實(shí)施例1的果膠酸裂合酶。在37。C孵育20分鐘進(jìn)行該試驗(yàn)。使用具有CaCl2和多聚半乳糖醛酸底物的甘氨酸緩沖'液進(jìn)4于該終點(diǎn)測量。<table>tableseeoriginaldocumentpage78</column></row><table>使用下面公式計(jì)算終APSU/ml:樣品中的APSU/m—來自標(biāo)準(zhǔn)曲線的APSU/mlxKxF/a，其中K是稀釋該樣品的稀釋倍數(shù)；F是2，因?yàn)槭褂?:1的酶和底物混合物；a是稀釋前酶樣品的吸樣體積，以mL計(jì)。一旦已知樣品密度，可以將APSU/ml單位換算成APSU/g。這些計(jì)算是基于具有3000APSU/g的Bioprep3000L樣品進(jìn)行的，并從該樣品產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線。來自Bioprep3000L樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線具有斜率為0.:215793，截距為0.010572和RSQ0.9982。如果酶在長期儲(chǔ)存期間活性損失，比如10倍，以致Bioprep3000L只具有300APSU/g，那么在含有來自枯草桿菌果膠酸裂合酶的樣品中所有活性數(shù)值也將降低10倍。該終點(diǎn)檢測試驗(yàn)需要具有已知活性的標(biāo)準(zhǔn)來測量未知樣品的活性。實(shí)施例4、包括果膠酸裂合酶的清潔組合物和活性枯草桿菌果膠酸裂合酶在北美洗衣M下展現(xiàn)出對(duì)多種含有碳水化合物的污垢的清潔。在實(shí)際尺寸的上開門洗衣機(jī)和小型Tergotometer中，在AATCC標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)效型液體洗滌劑(HDL)和Dial的商品化Purex液體洗滌劑中，以亞ppm的濃度檢測實(shí)施例1的果膠酸裂合酶。將果膠酸裂合酶的清潔性能與來自地衣芽孢桿菌和芽孢桿菌屬物種707的淀粉酶進(jìn)行比較。在兩個(gè)尺寸的洗衣才幾，即，Tergotometer(UnitedStatesTestingCo.Inc.,Hoboken，NJ，美國專利號(hào)A)和上開門US洗衣機(jī)(KenmoreElitemodel110.26962503，SearsRoebuck和Co"HoffmanEstates,IL，美國專利號(hào)A)，中進(jìn)行試驗(yàn)。從CenterforTestmaterialsBV(CFT，Vlaardingen，Netherlands)、EMPATestmaterialsAG(St.Gallen-Winkeln，Switzerland)和Warwick誦Equest(Consett，UnitedKingdom)獲得污染的樣布。獲得自CFT和EMPA的陳化的技術(shù)性污垢是CFTCS-2可可、CFTCS-20番茄、CFTCS-6色拉調(diào)料加中性黑、EMPA160巧克力水激凌、EMPAl61棉上的淀粉、EMPA163粥、以及EMPA164草。來自Warwick-Equest的受試新鮮污染的織物是ScrubbedGrass和由多種含碳水化合物的污垢組成的4x4多重污祐組(multi-stainpanel),所述含碳水化合物的污垢包括MixedBerries(什錦莓)、TomatoSo叩(番癡湯)、RaguTraditionalPastaSauce(Ragu傳統(tǒng)意大利面醬)、CurryBIend(咖噪摻混物)、C&GCheeseandBroccoliBabyFood(C&G干酪嫩莖花椰菜嬰兒食品)、HeinzVegetableandTurkeySauce(Heinz蔬菜火雞肉醬)、Coleman'sMustard(CoIeman芥末)、Coleman'sGravy(Coleman洗鹵)、BistoGravy(Bisto免鹵)、Kellogg'sCocoaPops(Kellogg可可汽水)、FreshBa隨a(新鮮香蕉)、BlackOlives(油橄欖)、HPBBQSauce(HPBBQ醬)、HPBrownSauce(HP面醬)、HomeprideChilliConCarne、TomatoKetch叩(調(diào)味番癡醬)、StrawberryIceCream(草莓冰激淋)、NutellaChocolateSpread(Nutella巧克力醬)、SchwartzPaprika(Schwartz辣椒粉)、EconaHotPepperSauce(Econa辣椒醬)、Coleman'sSausageCasserole(Coleman香腸烤面)、Patak'sDoplaza、Patak'sVindaloo、UncleBen'sMadras、FrijjChocolateMilkshake(Frijj巧克力奶昔)、PecBilberries(Pec越橘提取物)、JWBlackcurrantJuice(JW,紫、茶簾子'汁)、Robertson'sBlackberryJam(Robertson,繁、莓醬)、HeinzAppleandBananaBabyFood(Heinz蘋果香蕉嬰兒食品)、Coleman'sBeefCasserole(Coleman牛肉烤面)、HeinzChocolatePuddingBabyFood(Heinz巧克力布丁嬰兒食品)、Cadbury'sChocolateMousse(Cadbury巧克力木斯)、St.Dalfour'sBlueberryMarmalade(St.Dalfour藍(lán)莓馬茉蘭)、Morton'sRedCherryPieFilling(Morton紅櫻桃餡餅餡)、FreshPlums(新鮮李子)、AsdaPrunes(Asda李脯)、AsdaCurryKetchup(Asda咖鬼番癡沙司)、Apple(蘋果)、Orange(橙子)、Banana(香蕉)、RuskBabyFood(Rusk嬰兒食品)、HeinzSunDriedTomatoSauce(Heinz番茄干醬汁)、FrijjStrawberryMilkshake(Frijj草莓奶昔)、V8VegetableJuice(V8蔬菜汁)、Tea(茶)、Coffee(咖啡)、MeriotRedWine(Merlot紅酒)、Baxter'sBeetroot(Baxter甜菜根)、Welch'sPurpleGrapeJuice(Welch紫葡萄汁)、J.WestBlackBerry(J.West黑莓)、NapolinaChoppedTomato(Napolina切塊番茄)、HomeprideTikka和QuinkBlueInk(QuinkBlue墨水)。對(duì)于多重污垢，4吏用MinoltaReflectometerCR-400，而對(duì)于4支術(shù)性污祐用CR-410,在處理之前和之后通過光反射測量每種污垢。按CIE-LAB色空間所定義的，將L、a、b值上的差異轉(zhuǎn)換成總色差(dE)。通過用初始污垢與清潔后的污垢之間的色差除于初始污垢和未經(jīng)污染的織物之間的色差，取比值，以去污指數(shù)百分?jǐn)?shù)(％SRI)表示污垢的清潔。通常，在Tergotometer規(guī)模下檢測9個(gè)重復(fù)，一式三份樣布在一式三份洗滌桶(pot)80中進(jìn)行檢測，而在實(shí)際尺寸中檢測8個(gè)重復(fù)，一式四份樣布在一式兩份洗衣機(jī)中進(jìn)行檢測。在Tergotometer中進(jìn)行小規(guī)^莫清潔實(shí)驗(yàn)。向每個(gè)洗涂桶中加入近1LMilli-Q反滲透7JC，并且還向其中加入1.5g/LAATCCHDLWOB2003液體洗滌劑、5mMHEPESpH8.0、每加侖水6^4^的石級(jí)(Ca:Mg比為3:1)，允許溫度達(dá)到平衡至77下(25°C)。當(dāng)向每個(gè)洗滌桶中加入的3塊多重污垢樣布超過40g時(shí)，有時(shí)調(diào)整溶液體積來保持每升洗液40g織物。在臨開始洗滌前加入酶和污垢，在77。F(25°C)以100rpm攪拌12分鐘。清洗后，以自來水漂洗樣布3分鐘，甩干以除去過量水并允許過夜晾干。通過上面描述的反射計(jì)法評(píng)估污垢去除并以去污指數(shù)百分?jǐn)?shù)(％SRI)表示。數(shù)據(jù)也以A。/。SRI表示，其中從酶處理中減去對(duì)照處理(單獨(dú)洗滌劑)的。/oSRI。在KenmoreEliteKingSize洗衣機(jī)中進(jìn)行實(shí)尺清潔，將該洗衣機(jī)設(shè)置為超清潔循環(huán)(UltraCleanCylce)(15分鐘)，小負(fù)載(48L)，冷/冷自動(dòng)溫度補(bǔ)償(Cold/ColdAutotemp)，一次漂洗，緩慢攪拌，快速甩干。當(dāng)向洗衣機(jī)投料時(shí)，加入1.5g/LAATCCWOB2003強(qiáng)效型液體洗滌劑以及5mMHEPESpH8.0或1.5g/LPurex液體洗滌劑并一^口入每加侖水6格令的硬度(Ca:Mg比為3:1)。一旦完成向洗衣機(jī)的投料，通過按需添加熱水或水控制溫度為70°F。然后向洗衣機(jī)中加入酶、污染的樣布和增載織物并允許進(jìn)行所述循環(huán)。完成清潔循環(huán)后，將樣布過夜風(fēng)干。通過反射計(jì)評(píng)估污垢去除并以上述去污指數(shù)百分?jǐn)?shù)(％SRI)和A。/。SRI表示。證明了枯草桿菌果膠酸裂合酶可以有效地清潔許多新鮮的與消費(fèi)者相關(guān)的污垢以及陳化的技術(shù)性污垢(參見圖7-12)。果膠酸裂合酶對(duì)清潔的貢獻(xiàn)在pH8.0的AATCCHDL中比在pH9.6的Purex液體洗滌劑中顯著得多。低至0.5ppm其仍顯示出顯著的清潔作用，并且其自身顯示了清潔作用，并展示出與淀粉酶協(xié)同地清潔一些污垢(這種協(xié)同作用不能歸因于酶組合的加性效應(yīng))。上面描述的所有參考文獻(xiàn)在此整體并入用于所有目的。8權(quán)利要求1、一種在水性溶液中包括純化的枯草桿菌果膠酸裂合酶的生物煮練組合物，其中該果膠酸裂合酶具有SEQIDNO1的氨基酸序列或與其有95％同一性。2、權(quán)利要求1的生物煮練組合物，還包括S^漂白體系或化學(xué)漂白試劑。3、權(quán)利要求2的生物煮練組合物，其中該化學(xué)漂白試劑是氧化漂白劑、過氧化鈉、次氯酸鈉、次氯酸H二氯異氰脲酸鈉，或其組合。4、權(quán)利要求l的生物煮練組合物，還包括退漿劑。5、權(quán)利要求1的生物煮練組合物，還包括生物拋光劑。6、權(quán)利要求1的生物煮練組合物，還包括染料。7、權(quán)利要求l的生物煮練組合物，還包括生物拋光劑和染料。8、權(quán)利要求2的生物煮練組合物，還包括退漿劑。9、權(quán)利要求2的生物煮練組合物，其中該iW漂白體系包括酯源、過水解酶和過氧化氫源。10、權(quán)利要求1的生物煮練組合物，還包括第二酶，其選自果膠酶、角質(zhì)酶、纖維素酶、半纖維素酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶及其組合。11、一種用于處理紡織品的一步處理組合物，包括(a)獲自枯草桿菌的果膠酸裂合酶，在還原性SDS-PAGE條件下，其分子量約43kD，pl約7.3,并且其最適pH為約5.0至約11.0;(b)—或多種退漿酶；和(c)一或多種化學(xué)漂白試劑和/或,漂白體系。12、權(quán)利要求U的一步處理組合物，包括第二酶，其選自第二果膠酶、角質(zhì)酶、纖維素酶、半纖維素酶、蛋白酶、脂肪酶、及其組合。13、權(quán)利要求11的一步處理組合物，還包括一或多種輔助組分，其中所述輔助組分是表面活性劑、乳化劑、螯合劑和/或穩(wěn)定劑，或其組合。14、權(quán)利要求ll的一步處理組合物，還包括漂白活化劑。15、權(quán)利要求11的一步處理組合物，其中該化學(xué)漂白試劑是氧化漂白劑、過氧化鈉、次氯酸鈉、次氯酸釣、二氯異氰脲酸鈉，或其組合。16、權(quán)利要求13的一步處理組合物，其中所i^面活性劑是非離子型表面活性劑、陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑、兼性離子表面活性劑，或其組合。17、一種煮練和漂白紡織品的方法，包括在適宜允許紡織品增白的條件和一段時(shí)間下，使紡織品與包括化學(xué)漂白試劑或S^漂白體系、以及獲自枯草桿菌的果膠酸裂合酶的水性溶液接觸，其中該果膠酸裂合酶在還原性SI)S-PAGE條件下具有約43kD分子量，約7.3的pl，并且具有約5.0至11.0的最適pH。18、權(quán)利要求17的方法，其中該適宜條件包括約6至約8的pH。19、權(quán)利要求17的方法，其中所述適宜條件包括約2分鐘至24小時(shí)的一段時(shí)間。20、權(quán)利要求19的方法，其中該一段時(shí)間為約15分鐘至12小時(shí)。21、權(quán)利要求19的方法，其中該一段時(shí)間為約30分鐘至6小時(shí)。22、權(quán)利要求17的方法，其中所述適宜條件包括約15。C至95。C的溫度。23、權(quán)利要求22的方法，其中所述溫度為約20。C至80。C。24、權(quán)利要求22的方法，其中所述溫度為約25。C至60。C。25、權(quán)利要求17的方法，其中該化學(xué)漂白試劑是過氧化氫且以約100ppm至5000ppm的濃度存在。26、權(quán)利要求25的方法，其中該化學(xué)漂白試劑是過氧化氫且以約500ppm至4000ppm的濃度存在。27、權(quán)利要求25的方法，其中該化學(xué)漂白試劑是過氧化氫且以約1000ppm至3000ppm的濃度存在。28、權(quán)利要求17的方法，其中該適宜條件包括pH約6至8、約2分鐘至24小時(shí)的一段時(shí)間、溫度約25。C至60。C,且其中該化學(xué)漂白試劑是過氧化氫且以約1000ppm至3000ppm的量存在。29、一種一步加工紡織品的方法，包括(a)提供一步紡織品加工組合物和需要加工的紡織品，且其中所述一步紡織品加工組合物包括獲自枯草桿菌的果膠酸裂合酶，所述果膠酸裂合酶在還原性SDS-PAGE條件下具有分子量約43kD，pi約7.3，并具有最適pH約6.0至8.0。(b)在足以允許紡織品退漿、煮練和漂白的條件和一段時(shí)間下，使所述紡織品與所迷一步紡織品加工組合物接觸。30、權(quán)利要求29的方法，其中該一步紡織品加工組合物進(jìn)一步包括(a)—或多種生物煮練酶；(b)—或多種化學(xué)漂白試劑和/或^漂白體系；和(c)一或多種退漿劑。31、權(quán)利要求30的方法，其中該生物煮練酶是果膠酶、角質(zhì)酶、蛋白酶、纖維素酶、半纖維素酶、脂肪酶，或其組合。32、權(quán)利要求30的方法，其中該退漿劑是淀粉酶、纖維素酶、甘露聚糖酶、或其組合。33、權(quán)利要求29的方法，其中該一步紡織品加工組合物還包括選自表面活性劑、乳化劑、螯合劑、穩(wěn)定劑，或其組合的輔助組分。34、權(quán)利要求30的方法，其中該化學(xué)漂白試劑是氧化漂白劑、過氧化鈉、次氯酸鈉、次氯酸鉤、二氯異氰脲酸鈉或其組合。35、權(quán)利要求29的方法，其中所述紡織品包括纖維素的或含纖維素的材料。36、權(quán)利要求35的方法，其中所述纖維素的或含纖維素的材料包括棉。37、權(quán)利要求29的方法，其中該一步紡織品加工組合物還包括染料。38、權(quán)利要求29的方法，其中所述足以允許生物煮練、漂白、和退漿的條件為溫度約15。C至65°C、pH約6至8，持續(xù)時(shí)間約2分鐘至24小時(shí)。39、一種紡織品前處理的方法，包括將所述紡織品同時(shí)或相繼地進(jìn)行生物煮練和漂白，其中所述煮練步驟包括將所述紡織品與包括枯草桿菌果膠酸裂合酶的水性組合物接觸，其中該果膠酸裂合酶在還原性SDS-PAGE條件下具有分子量約"kD，pl約7.3,并具有最適pH約6.0至8.0，并且其中所述接觸在適于生物煮練的條件下發(fā)生。40、權(quán)利要求39的方法，其中煮練和漂白步驟同時(shí)發(fā)生。41、一種生物煮練和染色紡織品的方法，包括(a)制備包括枯草桿菌果膠酸裂合酶的水性溶液，該果膠酸裂合酶在還原性SDS-PAGE條件下具有分子量約43kD，pl約7.3，并具有最適pH約6.0至8.0,且其中所述果膠酸裂合酶以約10至500mol/min/kg紡織品的量存在于pH約6至8，溫度約20。C至40。C以及具有小于2mM二價(jià)陽離子的條件下；(b)在該水性溶液中孵育該紡織品足以生物煮練的一段時(shí)間；和(c)向該水性溶液補(bǔ)充染色體系并孵育該紡織品足以獲得染色的紡織品的一段時(shí)間。42、一種洗滌劑組合物，包括(a)表面活性劑；(b)枯草桿菌果膠酸裂合酶，其在還原性SDS-PAGE條件下具有分子量約43kD，pl約7.3，并具有最適pH約6.0至8.0;和(c)任選地，洗滌劑添加劑，其中所述洗滌劑候選物是助洗劑、化學(xué)漂白試劑、消泡劑、磨料、懸浮劑、污垢釋^L劑、殺細(xì)菌劑、潤滑劑或其組合。43、權(quán)利要求42的洗滌劑組合物，還包括半纖維素酶，其選自木聚糖酶、阿拉伯吹喃糖苷酶、乙酰木聚糖酯酶、葡糖醛酸糖苷酶、阿魏酸酯酶、香豆酸酯酶、內(nèi)切-半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、地衣多糖酶、內(nèi)切-阿拉伯聚糖酶、外切-阿拉伯聚糖酶、外切-半乳聚糖酶，或其組合。44、權(quán)利要求42的洗滌劑組合物，還包括蛋白酶、纖維素酶、脂肪酶或其組合。45、一種清潔紡織品的方法，包括將需要清潔的紡織品暴露于洗滌劑組合物，該組合物包括(a)表面活性劑；(b)枯草桿菌果膠酸裂合酶，其在還原性SDS-PAGE條件下具有分子量為約43kD，以及pl為約7.3;和(c)任選地，洗滌劑添加劑，其中所述洗滌劑候選物是助洗劑、化學(xué)漂白試劑、消泡劑、磨料、懸浮劑、污垢釋》文劑、殺細(xì)菌劑、潤滑劑或其組合。46、權(quán)利要求45方法，其中所述洗滌劑組合物還包括蛋白酶、纖維素酶、脂肪酶，或其組合。47、一種清潔硬表面的方法，包括用包括有純化的枯草桿菌果膠酸裂合酶的清潔溶液處理硬表面。48、一種生物煮練紡織品的方法，包括(a)制備在水性溶液中包括純化的枯草桿菌果膠酸裂合酶的水性溶液，其中該果膠酸裂合酶具有SEQIDNO:l的M酸序列或與其有95%同一性；和(b)在該水性溶液中孵育該紡織品足以生物煮練的一段時(shí)間。49、一種生物煮練紡織品的方法，包括(a)制備在水性溶液中包括純化的枯草桿菌果膠酸裂合酶的水性溶液，其中該果膠酸裂合酶具有SEQIDNO:l的M酸序列或與其有95%同一性；(b)向該水性溶液補(bǔ)充退漿酶；和(c)在該水性溶液中孵育該紡織品足以生物煮練和退漿的一段時(shí)間。全文摘要本發(fā)明公開用于纖維素的和含纖維素的紡織品的酶促一步預(yù)處理的組合物和方法，該組合物和方法使用來自枯草桿菌的果膠酸裂合酶。預(yù)處理包括紡織品的煮練和漂白及任選地退漿的各種組合。該一步預(yù)處理也可以與染色步驟組合。本發(fā)明還公開用于清潔和污垢去除的組合物，例如洗滌劑組合物。文檔編號(hào)D06M16/00GK101517156SQ200780035180公開日2009年8月26日申請(qǐng)日期2007年9月20日優(yōu)先權(quán)日2006年9月22日發(fā)明者A·J·普洛斯,B·施密特,F·J·C·萬加斯特爾,M-Y·允申請(qǐng)人:丹尼斯科美國公司