專利名稱：海洋膠原肽在制備糖尿病傷口愈合藥物、食品中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及海洋膠原肽的一種新用途，具體來說指海洋膠原肽在制備糖尿病傷口 愈合藥物、食品的用途，屬醫(yī)藥和食品保健領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
慢性傷口愈合不良是糖尿病非常常見的并發(fā)癥，臨床上會導(dǎo)致嚴(yán)重的病死率。糖 尿病人無論是長了小癤子或有小傷口，都很難愈合，大多數(shù)糖尿病人的傷口不愈合反倒越 來越大，形成潰瘍、感染，甚至截肢。近年來，盡管促進(jìn)糖尿病傷口愈合的研究非常多，但糖 尿病的截肢率仍非常高，同時由于許多新開發(fā)的促糖尿病傷口愈合藥物有很多毒副作用和 不良反應(yīng)，實際上效果甚微。因此，人類迫切需要尋找新的真正有效而且安全的方法來促進(jìn) 糖尿病傷口的愈合率。WHO向全世界提出的糖尿病“現(xiàn)代綜合療法(五駕馬車)”中飲食控制排在第一位， 因此具有調(diào)節(jié)血糖作用、促進(jìn)傷口愈合的保健食品成為糖尿病傷口愈合不良防治領(lǐng)域的研 究熱點(diǎn)。在天然動植物蛋白的資源寶庫中，對食源性生物活性肽的保健功能的研究引起了 眾多學(xué)者的關(guān)注。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，蛋白質(zhì)經(jīng)消化道酶促水解后，主要以10個或10個以 下氨基酸組成的寡肽形式被吸收。寡肽比單個氨基酸的吸收更有效，并能直接參與蛋白質(zhì) 的合成，因此提高了機(jī)體對蛋白質(zhì)的利用率。此外，每一種活性肽都具有獨(dú)特的組成結(jié)構(gòu)， 不同活性肽的組成結(jié)構(gòu)決定了其功能。在各種來源的生物活性肽中，海洋膠原肽是一類從海洋魚皮膠原及明膠蛋白中利 用生物酶解技術(shù)而提取的低分子寡肽，分子量在200 lOOODa。自從1979年日本學(xué)者大島 等確認(rèn)明膠多肽具有降血壓作用以來，相繼有許多研究表明膠原多肽具有很多獨(dú)特生理功 能如保護(hù)胃粘膜以及抗?jié)冏饔?，降血壓，促進(jìn)骨形成，促進(jìn)皮膚膠原代謝，及對關(guān)節(jié)炎等 膠原病具有很好的預(yù)防及治療作用等。而在膠原蛋白的研究領(lǐng)域，來源于海洋生物的膠原 蛋白在一些方面明顯優(yōu)于豬、牛皮膠原蛋白，比如低抗原性、低過敏性、分子結(jié)構(gòu)較脆弱導(dǎo) 致酶解較容易等。此外，由于海洋生物的生活環(huán)境與陸地生物迥異，海洋生物具有多樣性、 復(fù)雜性和特殊性，如高壓、低溫、高溫和高鹽等極端環(huán)境，從而使源于其中的海洋天然產(chǎn)物 與陸地天然產(chǎn)物不同，海洋生物蛋白質(zhì)無論氨基酸的組成還是氨基酸的序列都與陸地生物 蛋白有很大的不同。因此，海洋膠原肽因其獨(dú)特的生理功能和理化特性而成為膠原肽領(lǐng)域 研究的熱點(diǎn)。另一方面，海洋水產(chǎn)品在加工后會產(chǎn)生大量的廢棄物，而這些廢棄物以富含膠 原蛋白的魚皮和魚骨為主，是制備膠原肽的優(yōu)良原料，開發(fā)利用魚皮廢棄物也有利于提高 水產(chǎn)品的附加值。研究表明，從海洋魚皮膠原中得到的活性肽具有獨(dú)特的生理功能，如保護(hù) 胃粘膜及抗?jié)儭⒖惯^敏、降血壓、降膽固醇、增強(qiáng)骨強(qiáng)度和預(yù)防骨質(zhì)疏松、預(yù)防關(guān)節(jié)炎等多 種生理活性功能。但是，迄今為止，還沒有海洋膠原肽在糖尿病傷口愈合的藥品、保健食品 以及食品中應(yīng)用的任何報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是，提供一種易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好且成本低的低分子 量海洋膠原肽在制備糖尿病傷口愈合的藥物、食品中的用途，為通過飲食促進(jìn)糖尿病傷口 愈合及降低相關(guān)疾病的發(fā)生率提供一種新途徑。其中所述的藥物為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑、口服液、外用敷料。其中所述的食品為淀粉制品、奶粉及奶制品、豆制品、烘焙制品。本發(fā)明是發(fā)現(xiàn)了現(xiàn)有物質(zhì)-海洋膠原肽具有促進(jìn)糖尿病傷口愈合的功能，發(fā)明了 海洋膠原肽在制備糖尿病傷口愈合的藥物、食品的用途。具體實施方案下面結(jié)合具體實施方案對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，這些實例應(yīng)被理解為僅是舉例 說明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。以下通過動物實驗來闡明本發(fā)明所述海洋膠原肽在糖尿病傷口愈合方面的作用 效果。1.材料和方法1. 1樣品海洋膠原肽(Marine Collagen Peptides, MCPs)，以深海鮭魚、羅非魚 的魚皮為原料，經(jīng)過清洗勻漿一復(fù)合偶聯(lián)酶解一酶失活一脫脂一多級膜分離一滲透精制一 濃縮一脫色一造粒干燥等工藝制成。1. 2實驗動物清潔級Sprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，體重200 250g，由北京 大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物中心提供，批準(zhǔn)號為SCXKl 1-00-0004，清潔級動物房飼養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境溫 度21 23°C，濕度50 60% RH。1.3實驗方法1. 3. 1動物模型建立方法動物禁食M小時后，腹腔注射四氧嘧啶(170mg/kg)， 3 5小時后灌胃給予50%葡萄糖灌胃。7天后，禁食3-5小時，取尾靜脈血測定血糖，血 糖值大于lOmmol/L者為高血糖模型成功動物。大鼠經(jīng)1 %戊巴比妥鈉麻醉后，剃去背部皮 膚，常規(guī)皮膚消毒，背部兩側(cè)分別切一個直徑為2cm的圓形切口，深達(dá)筋膜。手術(shù)當(dāng)天計為 術(shù)后第0天，以此類推。1. 3. 2實驗動物分組選高血糖模型動物按血糖水平隨機(jī)分為4組，包括空白對 照組和MCPs低、中、高3個劑量組。MCPs組灌胃給予不同濃度MCPs，分別為0. 667g/kg. bw、 2. Og/kg. bw、6. Og/kg. bw，相當(dāng)于人體推薦劑量的3. 3倍、10倍和30倍，空白對照組灌胃給 予等體積溶劑。手術(shù)當(dāng)天開始，每日灌胃。分別于第7、14天處死大鼠，每個時間點(diǎn)各8只 動物。1.3. 3傷口愈合觀察1.3.3.1傷口愈合肉眼觀察每隔2日將愈合傷口邊緣描繪于透明紙上，算出每 日面積與原始面積比較得出傷口愈合率。1. 3. 3. 2傷口愈合的組織病理學(xué)觀察各組大鼠分別于術(shù)后第7、14天于傷口邊 緣約0. 5cm處取全層皮膚組織。左側(cè)傷口所取組織用4%多聚甲醛固定，保存待做石蠟切片 及HE、MaSSOn染色，右側(cè)傷口皮膚用于羥脯氨酸測定和其他指標(biāo)的檢測。1. 3. 3. 3膠原纖維染色(Masson染色)組織切片脫蠟至蒸餾水，蘇木素染色5 10分鐘，鹽酸酒精分化，流水藍(lán)化，蒸餾水洗，麗春紅酸性品紅液中染5 8分鐘，蒸餾水， 磷鉬酸中染1 3分鐘，直接入苯胺藍(lán)液或亮綠液5分鐘，水速洗，置60°C溫箱中烘干， 二甲苯透明，封固。結(jié)果膠原纖維綠色，肌纖維、纖維素紅色。1.3.4傷口組織VEGF表達(dá)情況傷口組織切片經(jīng)常規(guī)的透明、水化后，微波爐進(jìn) 行抗原修復(fù)，0.3% H2O2處理15分鐘去除內(nèi)源性過氧化物酶活性，1 300稀釋的VEGF多 克隆抗體4°C孵育過夜，辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔抗體孵育室溫1小時，顯色。二甲苯 透明，封片。1. 3. 5傷口組織微血管密度測定傷口組織切片經(jīng)常規(guī)的透明、水化后，微波爐進(jìn) 行抗原修復(fù)，0.3% H2O2處理15分鐘去除內(nèi)源性過氧化物酶活性，1 300稀釋的⑶-31多 克隆抗體4°C孵育過夜，辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔抗體孵育室溫1小時，顯色。二甲苯 透明，封片。觀察5個視野計數(shù)⑶31的表達(dá)情況。1.3.6羥脯氨酸測定切取大鼠傷口周圍2-3毫米的皮膚用于測定羥脯氨酸，方 法依據(jù)南京建成生物工程公司的羥脯氨酸檢測試劑盒進(jìn)行操作。1. 4統(tǒng)計方法數(shù)值以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，應(yīng)用SPSS統(tǒng)計分析軟件，采用單因素方差分析比較各 項指標(biāo)在實驗組與對照組之間的差異。2 結(jié)果2.1 MCPs對糖尿病大鼠傷口愈合的影響肉眼觀察顯示，術(shù)后第7天MCPs2. Og/kg. bw和6. Og/kg. bw組傷口面積與對照組 比較分別小16%和20%，術(shù)后第14天(表1)，術(shù)后第14天，MCPs2. Og/kg. bw和6. Og/kg. bw 組傷口面積與對照組比較分別小38%和45%，該作用具有劑量-反應(yīng)關(guān)系。表1不同濃度MCPs對糖尿病大鼠傷口愈合的影響(^tSD)
權(quán)利要求
1.海洋膠原肽在制備糖尿病傷口愈合藥物、食品中的用途。
2.按權(quán)利要求1，其中所述的藥物為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑、口服液、外用敷料。
3.按權(quán)利要求1，其中所述的食品為淀粉制品、乳及乳制品、豆制品、烘焙制品。
全文摘要
本發(fā)明公開一種海洋膠原肽在制備糖尿病傷口愈合的藥物、食品中的用途。海洋膠原肽具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特點(diǎn)，服用海洋膠原肽都能夠提高糖尿病傷口愈合程度、肉芽組織形成、膠原纖維沉積和血管形成，具有促進(jìn)糖尿病傷口愈合的功能。將其應(yīng)用于制備促進(jìn)糖尿病傷口愈合的藥物、食品，具有重要的科學(xué)價值和經(jīng)濟(jì)效益，為通過飲食促進(jìn)糖尿病傷口愈合提供一種新途徑。
文檔編號A23C9/00GK102049037SQ20091021071
公開日2011年5月11日 申請日期2009年11月6日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月6日
發(fā)明者張召鋒, 李勇, 王軍波 申請人:李勇