專利名稱：一種純化被細(xì)菌污染的絲狀真菌的裝置和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種真菌的純化裝置和方法，特別涉及一種純化被細(xì)菌污染的真菌的
裝置和方法。
背景技術(shù)：
在自然界中，微生物經(jīng)常是混生的，包括真菌與細(xì)菌的混生，但在科學(xué)研究和生產(chǎn) 上需要單一的微生物的純培養(yǎng)物。對(duì)于被細(xì)菌污染的真菌菌絲體，現(xiàn)有的去除細(xì)菌的方法 有兩類，第一類，可在培養(yǎng)基中加入抗生素等以化學(xué)方法抑制細(xì)菌。第二類，可使用一定的 裝置去除真菌上的細(xì)菌，方法有3個(gè)，1、先將真菌接在瓊脂平板上，然后加上一層瓊膠培養(yǎng) 基，菌絲體可以穿透這層瓊膠培養(yǎng)基在表面生長(zhǎng)。這樣可以把細(xì)菌和真菌分開。2、將真菌接 種在瓊膠平板上，然后在上面加一片滅菌的蓋玻片稍微向下壓緊，使蓋玻片和培養(yǎng)基之間 沒有空隙，真菌的菌絲體可以穿過瓊膠培養(yǎng)基而在蓋玻片四周生長(zhǎng)。3、利用玻璃環(huán)使真菌 和細(xì)菌分開，即用一般孢子萌發(fā)實(shí)驗(yàn)使用的玻璃環(huán)，用三根細(xì)短玻璃棒架空在培養(yǎng)皿的中 央，真菌的菌絲就從玻環(huán)的下面穿過培養(yǎng)基而生長(zhǎng)到外面來，細(xì)菌則限制在環(huán)內(nèi)(方中達(dá) 《植病研究法》)。 但上述方法對(duì)于嚴(yán)重污染和與真菌結(jié)合緊密的細(xì)菌的去除，效果不好。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的對(duì)嚴(yán)重污染和與真菌結(jié)合緊密的細(xì)菌的去除效 果差的問題，本發(fā)明提供了一種純化被細(xì)菌污染的絲狀真菌的裝置和方法，可以有效、簡(jiǎn)便 的純化被細(xì)菌嚴(yán)重污染的絲狀真菌。 本發(fā)明的技術(shù)方案為一種純化被細(xì)菌污染的絲狀真菌的裝置，該裝置由封口膜、 純化杯、純化真菌收集層和生物純化柱組成，封口膜覆蓋在純化杯的上口，純化杯中懸掛設(shè) 有生物純化柱，純化杯的底部設(shè)有純化真菌收集層；所述的生物純化柱與純化杯的側(cè)璧、純 化真菌收集層、生物封口膜之間留有0. 5 2cm的間隙。純化杯可以采用燒杯、玻璃杯或耐 高溫塑料杯等容器。 所述的封口膜是由防塵膜和一層中間設(shè)有接種口的耐高溫塑料薄膜組成，接種口 直徑小于純化杯上口的直徑，比如為直徑1 3cm的小孔。所述的防塵膜可以為組織培養(yǎng) 封口膜或6 8層的紗布或6 8層的無紡布。 所述的生物純化柱由基材和真菌培養(yǎng)液組成，基材為多孔材料，基材與真菌培養(yǎng) 液按照l : 1 2(W/W)的比例混合。所述的真菌培養(yǎng)液為植物組織浸出液、水、糖的混合 物。制成后盡快滅菌，112 115t:，滅菌30min待用，或短時(shí)冷藏(1 5tO，備用。所述 的基材為干燥樹枝、珍珠巖、耐高溫海綿或木屑中的一種。若用干燥樹枝作為基材，則將干 燥樹枝浸入真菌培養(yǎng)液10 24小時(shí)后即可，樹枝的縱向垂直純化杯底面。若采用珍珠巖、 海綿或木屑制備生物純化柱時(shí)，則按基材與真菌培養(yǎng)液的l : 1 2(W/W)的比例將基材和 真菌培養(yǎng)液混合。
所述的純化真菌收集層為植物組織浸出液、水、瓊脂和/或糖組成。植物組織浸出 液可以是植物浸提或榨汁得到。將植物組織浸出液加入水、瓊脂和/或糖制成。植物材料 可選用植物的塊根、塊莖、果實(shí)、莖葉等。所用糖為葡萄糖或蔗糖。純化真菌收集層制成后 盡快滅菌，112 115t:，滅菌30min待用，或短時(shí)冷藏(1 5°C )，備用。
所述的純化裝置裝配完成后，須立即將以112 115t:，滅菌30min，滅菌時(shí)純化裝 置豎放于滅菌鍋內(nèi)，滅菌完畢冷卻備用。 使用所述的純化被細(xì)菌污染的絲狀真菌的裝置純化絲狀真菌的方法，步驟為 第一步，以無菌操作方式，打開防塵膜，將被污染的絲狀真菌從接種口接種入生物
純化柱的頂端，重新蓋上防塵膜，將接種了真菌的純化裝置在20 25t:下培養(yǎng)； 第二步，待真菌從生物純化柱長(zhǎng)出并在純化真菌收集層上生長(zhǎng)出時(shí)，以無菌操作
方式打開封口膜，將生物純化柱取走或保留，將純化真菌收集層上的真菌接種入斜面或平
板，完成絲狀真菌的純化。 原理本發(fā)明利用絲狀真菌和細(xì)菌在對(duì)培養(yǎng)基養(yǎng)料的選擇性利用和在物料間生長(zhǎng) 特性的差異，將絲狀真菌及其所帶的細(xì)菌一同接種于特制的生物純化柱上，通過一段時(shí)間 的生長(zhǎng)，細(xì)菌留在生物純化柱，而真菌長(zhǎng)出生物純化柱并生長(zhǎng)于純化真菌收集層，從而達(dá)到 方便有效的純化被細(xì)菌污染的真菌的目的。
有益效果 (1)被細(xì)菌污染的真菌用本發(fā)明的方法和裝置純化后可達(dá)到完全無菌，特別適合 被細(xì)菌嚴(yán)重污染的真菌的純化。
(2)純化裝置制作方法簡(jiǎn)單，制作材料價(jià)廉易得。
(3)對(duì)大批量真菌樣品的純化更能體現(xiàn)高效。


圖1為本發(fā)明的純化裝置示意圖， 其中1封口膜，2接種口 ， 3接種口外密封圈，4接種口內(nèi)密封圈，5生物純化柱吊 線，6生物純化柱，7純化杯，8純化真菌收集層。
具體實(shí)施例方式
以下通過具體的實(shí)施例子結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述。
實(shí)施例1
1制作純化裝置 (1)制取純化真菌收集層選用馬鈴薯制取植物組織浸出液。將馬鈴薯去皮， 切成約1.0cmX1.0cm的小丁，按馬鈴薯與自來水以1 : 5 10 (W/W)的比例，加水煎 煮，沸騰30min，用紗布過濾煎出液，加水至原來水量，再按馬鈴薯煎出液蔗糖瓊脂以
ioo : 2 : i.5(w/w)的比例混合溶化，即成固體真菌培養(yǎng)基，也就是純化真菌收集層。配制
完成后盡快滅菌，115t:滅菌30min即可待用，或短時(shí)冷藏(1 5°C )，備用。 (2)制取真菌培養(yǎng)液與固體真菌培養(yǎng)基相比，只是不需要加入瓊脂，也就是按馬
鈴薯煎出液蔗糖以IOO : 2(W/W)的比例配制即得到真菌培養(yǎng)液，滅菌后備用。 (3)制作生物純化柱取直徑1. 5 3cm長(zhǎng)2 4cm的樹段，若為活樹段或潮濕的，則先行烘干，浸沒入真菌培養(yǎng)液中10 24h，為防治微生物生長(zhǎng)，可冷藏浸液。
(4)取直徑5cm、高7cm的玻璃杯用作純化杯7，放入厚約0. 5 2cm的純化真菌收 集層8，用市售20 22號(hào)鍍鋅細(xì)鐵絲作為生物純化柱吊線5繞于生物純化柱6上，將生物 純化柱6懸掛于純化杯7中，縱向豎立懸掛于純化杯7中，生物純化柱6距離純化杯7的側(cè) 璧、純化真菌收集層8的表面和純化杯口 0. 5 2cm，以耐高溫的塑料薄膜如市售保鮮袋的 薄膜包蓋在純化杯口 ，用橡皮圈作為接種口內(nèi)密封圈4將口扎緊，在純化柱上方剪出或燙 出小孔形成接種口 2，再覆蓋以6 8層的紗布或6 8層的無紡布或組織培養(yǎng)封口膜作為 防塵膜，用橡皮圈作為接種口外密封圈3將防塵膜扎緊在純化杯7的口上。裝配好的純化 裝置盡快滅菌，112 115t:滅菌30min，滅菌時(shí)純化裝置豎放于滅菌鍋內(nèi)，滅菌完畢冷卻備 用。 2純化方法 取上述制成的純化裝置，打開防塵膜，將待純化的真菌培養(yǎng)物從接種口處接種于 生物純化柱上，再次蓋上防塵膜，將純化杯放于20 25t:下培養(yǎng)。待真菌從生物純化柱底 端伸出，并在純化真菌收集層上長(zhǎng)出后，打開封口膜1 ，將生物純化柱取走或保留，將純化真 菌收集層上的真菌接種入斜面或平板，完成絲狀真菌的純化。采用上述方法可以方便有效 的獲得純化的真菌。
實(shí)施例2 與實(shí)施例1類似，其不同的是，生物純化柱6的制作方法。選用珍珠巖自來水煮沸 IO分鐘后烘干或晾干，加入1 : 1(W/W)的真菌培養(yǎng)液，塞入1.5 2.5cm粗的耐高溫塑料 管，管底一端以耐高溫的塑網(wǎng)包住，防止珍珠巖流出，采用這一方法可以獲得純化的真菌。
實(shí)施例3 與實(shí)施例1類似，其不同的是，固體真菌培養(yǎng)基和真菌培養(yǎng)液的制作方法。取黃豆
芽研磨，用布擠出豆芽汁，按i : 5 : 100的比例加入豆芽汁、糖和自來水制成真菌培養(yǎng)液，
選用普通食用蔗糖。在真菌培養(yǎng)液中加入2% (W/W)瓊脂制成固體真菌培養(yǎng)基。采用這一
方法可以獲得純化的真菌。 實(shí)施例4 與實(shí)施例1類似，其不同的是，固體真菌培養(yǎng)基和真菌培養(yǎng)液的制作方法。取蘋果
或梨榨汁，紗布過濾后，按i : io的比例加入蘋果汁或梨汁和自來水制成真菌培養(yǎng)液，不加
糖。在真菌培養(yǎng)液中加入2% (W/W)瓊脂制成固體真菌培養(yǎng)基。采用這一方法可以獲得純
化的真菌。 實(shí)施例5 與實(shí)施例1類似，其不同的是，真菌純化裝置的封口膜8選用8層紗布。采用這一 方法可以獲得純化的真菌。
權(quán)利要求
一種純化被細(xì)菌污染的絲狀真菌的裝置，其特征在于，該裝置由封口膜(1)、純化杯(7)、純化真菌收集層(8)和生物純化柱(6)組成，封口膜(1)覆蓋在純化杯(7)的上口，純化杯(7)中懸掛設(shè)有生物純化柱(6)，純化杯(7)的底部設(shè)有純化真菌收集層(8)；所述的封口膜(1)是由防塵膜和一層中間設(shè)有接種口(2)的耐高溫塑料薄膜組成，接種口直徑(2)小于純化杯(7)上口的直徑；所述的純化真菌收集層(8)為植物組織浸出液、水、瓊脂和/或糖組成。所述的生物純化柱(6)由基材和真菌培養(yǎng)液組成，基材與真菌培養(yǎng)液按照1∶1～2(W/W)的比例混合，所述的基材為多孔材料。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種純化被細(xì)菌污染的絲狀真菌的裝置，其特征在于，所述的 基材為干燥樹枝、珍珠巖、耐高溫海綿或木屑中的任意一種。
3. 如權(quán)利要求1所述的一種純化被細(xì)菌污染的絲狀真菌的裝置，其特征在于，所述的 防塵膜為組織培養(yǎng)封口膜或6 8層的紗布或6 8層的無紡布。
4. 如權(quán)利要求1所述的一種純化被細(xì)菌污染的絲狀真菌的裝置，其特征在于，所述的 生物純化柱(6)與純化杯(7)的側(cè)璧、純化真菌收集層(8)、生物封口膜(1)之間留有O. 5 2cm的間隙。
5. 使用如權(quán)利要求1所述的純化被細(xì)菌污染的絲狀真菌的裝置純化絲狀真菌的方法， 其特征在于，步驟為第一步，以無菌操作方式，打開防塵膜，將被污染的絲狀真菌從接種口 (2)接種入生物 純化柱(6)的頂端，重新蓋上防塵膜，將接種了真菌的純化裝置在20 25t:下培養(yǎng)；第二步，待真菌從生物純化柱(6)長(zhǎng)出并在純化真菌收集層(8)上生長(zhǎng)出時(shí)，以無菌操 作方式打開封口膜(l)，將生物純化柱(6)取走或保留，將純化真菌收集層(8)上的真菌接 種入斜面或平板，完成絲狀真菌的純化。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種純化被細(xì)菌污染的絲狀真菌的裝置和方法。該裝置由封口膜和純化杯將真菌純化層和生物純化柱包裝構(gòu)成。其步驟為以多孔材料加入真菌培養(yǎng)液后制作生物純化柱，以真菌固體培養(yǎng)基制作純化真菌收集層，將被細(xì)菌污染的真菌接種于生物純化柱上，利用絲狀真菌和細(xì)菌在對(duì)培養(yǎng)基養(yǎng)料的選擇性利用和在物料間生長(zhǎng)特性的差異，將細(xì)菌滯留于生物純化柱，而真菌長(zhǎng)出生物純化柱并生長(zhǎng)于純化真菌收集層，從而對(duì)被細(xì)菌污染的真菌實(shí)現(xiàn)方便有效的純化。
文檔編號(hào)C12R1/645GK101701179SQ20091023508
公開日2010年5月5日 申請(qǐng)日期2009年11月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月13日
發(fā)明者張建平 申請(qǐng)人:江蘇科技大學(xué)