專利名稱：一種絲狀真菌傳代培養(yǎng)包裹保存方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物保藏方法，具體地說是一種絲狀真菌傳代培養(yǎng)包裹保存方法。
在現(xiàn)有技術(shù)中，純培養(yǎng)狀態(tài)下的絲狀真菌，分為形成孢子和不形成孢子兩種類型。形成孢子的絲狀真菌，其保藏方法也比較廣泛，多達七種以上，而不形成孢子的絲狀真菌(擔子菌和子囊菌類等)，其保藏方法就比較局限。常見比較好的保藏方法有液氮保存方法、傳代培養(yǎng)保存法、液體石臘覆蓋保存法，其中液氮保存法往往受設(shè)備和維持經(jīng)費的限制，以至于一般的研究和生產(chǎn)單位沒有一定的經(jīng)濟實力，無力開展該項保存工作；傳代培養(yǎng)保存法，雖然簡便易行，適合各類菌種和有培養(yǎng)微生物條件的單位均可保藏，但其不足的是，保存周期短，需設(shè)專人負責定期接種，則消耗原材料隨保藏周期縮短而增大；液體石臘覆蓋保存法，是變相的傳代培養(yǎng)保存方法，能夠適當延長保存時間，不需要特殊裝置，費用少，但礦物油的滅菌麻煩，操作中的污染也難免，況且，不是所有絲狀真菌都適合該方法進行保藏，如菌根真菌用該方法保藏時，復蘇情況就不是很好，成活率極低，因此，該方法不能得到廣泛應(yīng)用。
為了克服上述不足，本發(fā)明的目的是提供一種成本低，不需要增設(shè)特殊設(shè)備，原材料來源廣泛，又簡便易行、復蘇效果好、應(yīng)用廣泛的絲狀真菌傳代培養(yǎng)包裹保存方法。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是培養(yǎng)菌種基質(zhì)的分裝量足夠多而斜面小，然后置放、包裹保藏，具體按以下步驟操作前期處理按常規(guī)方法培養(yǎng)菌種的基質(zhì)制備，定量分裝，蒸汽滅菌；所述定量分裝量為20×2cm試管15～18ml，18×1.8cm試管12～15ml，試管15×1.5cm試管5～10ml；制斜面接種制成小斜面，然后按常規(guī)方法接種；所述小斜面的斜度范圍20×20cm試管為2～6cm，18×1.8cm試管為2～4cm，15×1.5cm試管為2～3cm。
溫度控制將接好的斜面菌種按常規(guī)方法進行恒溫培養(yǎng)，將培養(yǎng)好的斜面菌種移置至室溫放置3～10天；
包裝將紙、聚炳烯膜蒸汽滅菌后，先用紙包裹緊培養(yǎng)好的斜面菌種，再用聚炳烯膜包嚴扎緊；保藏將包扎好的菌種置于室溫或溫度T為0＞T≤10℃的冰箱內(nèi)保存。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點1．成本低。本發(fā)明不需增設(shè)任何新的設(shè)備，且培養(yǎng)好的菌種的保藏材料如包裹紙，在有條件的情況下可以購置，否則可從日常生活中和其它工作系統(tǒng)的廢物回收利用中搜集而來；另外，接種時間間隔長，以本發(fā)明2年接種一次與常規(guī)的半年接種一次比，其經(jīng)濟效益是原來的3倍。
2．簡便易行，工作效率高。本發(fā)明操作簡單；不需特殊培養(yǎng)；不僅節(jié)省人力、物力，還減少了傳代次數(shù)，以達到盡量不改變菌種性狀之目的，菌種保存時間由原來的半年延長至1.5年或2年以上。
3．復蘇效果好，應(yīng)用范圍廣。經(jīng)本發(fā)明保藏的菌種，轉(zhuǎn)接后其復蘇和生長情況與以往用常規(guī)保藏方法保存的菌種復蘇和生長情況一致，本發(fā)明可應(yīng)用于所有微生物菌種的保藏，特別是絲狀真菌。
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明。
本發(fā)明培養(yǎng)菌種基質(zhì)的分裝量足夠多而斜面小，然后置放、包裹保藏，具體按以下步驟操作1．前期處理按常規(guī)方法培養(yǎng)菌種的基質(zhì)制備，定量分裝，蒸汽滅菌；所述定量分裝量為20×2cm試管15～18ml，18×1.8cm試管12～15ml，試管15×1.5cm試管5～10ml；2．制斜面接種制成小斜面，然后按常規(guī)方法接種；所述小斜面的斜度范圍20×2cm試管為2～6cm，18×1.8cm試管為2～4cm，15×1.5cm試管為2～3cm3．溫度控制將接好的斜面菌種按常規(guī)方法進行恒溫培養(yǎng)，將培養(yǎng)好的斜面菌種移置至室溫放置3～10天；4．包裝將紙、聚炳烯膜蒸汽滅菌后，先用紙包裹緊培養(yǎng)好的斜面菌種，再用聚炳烯膜包嚴扎緊；5．保藏將包扎好的菌種置于室溫或溫度T為0＞T≤10℃的冰箱內(nèi)保存。
在定量分裝上，如果量裝的多，污染機會就多，如果量裝的少，基質(zhì)干的快，所以定量分裝是一個不可忽視的問題，這不同于以往每3、4個月一接種使用大約的量分裝的情況，以18×1.8cm試管為例，分裝量從10ml調(diào)整到15ml；
關(guān)于斜面制作上，掌握以小斜面為原則，斜面太大菌絲體的表面積就大，干的快，尤其在上部；但斜面不能太小，太小會限制菌絲體生長，所以斜面斜度范圍從5～6cm(以18×1.8試管為例)調(diào)整到2～4cm；在溫度控制上，一種是室溫保存，另一種是冰箱內(nèi)保存，后者屬低溫保藏，本發(fā)明對低溫保藏的溫度T限制在0＞T≤10℃，是因為大于10℃接近于室溫，不屬低溫保藏，小于等于0℃時，菌絲體易受凍，復蘇效果不好。
實施例1本發(fā)明按以下步驟操作前期處理按常規(guī)方法培養(yǎng)菌種的基質(zhì)制備，定置分裝，采用20×2cm試管，分裝量為17ml，蒸汽滅菌；制斜面接種制成小斜面，所述小斜面的斜度為4cm，然后按常規(guī)方法接種；強度控制將接好的斜面菌種按常規(guī)25℃方法進行恒溫培養(yǎng)，將培養(yǎng)好的斜面菌種移置至室溫放置7天；包裝將牛皮紙、聚炳烯膜蒸汽滅菌后，先用牛皮紙包裹緊培養(yǎng)好的斜面菌種，再用聚炳烯膜包嚴扎緊；保藏將包扎好的菌種置于室溫保存。
經(jīng)驗證從1997.12～1999.10月份保藏的菌種，轉(zhuǎn)接后其復蘇和生長情況與以往用常規(guī)保藏方法保存的菌種復蘇和生長情況一致，其保存期達1年零10個月。
實施例2本發(fā)明按以下步驟操作前期處理按常規(guī)方法培養(yǎng)菌種的基質(zhì)制備，定量分裝，采用18×1.8cm試管，分裝量為14ml，蒸汽滅菌；制斜面接種制成小斜面，所述小斜面的斜度為3cm，然后按常規(guī)方法接種；溫度控制將接好的斜面菌種按常規(guī)26℃方法進行恒溫培養(yǎng)，將培養(yǎng)好的斜面菌種移置至室溫放置10天；包裝將普通白紙、聚炳烯膜蒸汽滅菌后，先用普通白紙包裹緊培養(yǎng)好的斜面菌種，再用聚炳烯膜包嚴扎緊；保藏將包扎好的菌種置于溫度為5℃的冰箱內(nèi)保存。
經(jīng)驗證從1997.5～1999.10月份保藏的菌種，轉(zhuǎn)接后其復蘇和生長情況與以往用常規(guī)保藏方法保存的菌種復蘇和生長情況一致，其保存期達2年零5個月。
實施例3本發(fā)明按以下步驟操作前期處理按常規(guī)方法培養(yǎng)菌種的基質(zhì)制備，定量分裝，采用20×2cm試管，分裝置為15ml，蒸汽滅菌；制斜面接種制成小斜面，所述小斜面的斜度為3cm，然后按常規(guī)方法接種；溫度控制將接好的斜面菌種按常規(guī)28℃方法進行恒溫培養(yǎng)，將培養(yǎng)好的斜面菌種移置至室溫放置10天；包裝將牛皮紙、聚炳烯膜蒸汽滅菌后，先用牛皮紙包裹緊培養(yǎng)好的斜面菌種，再用聚炳烯膜包嚴扎緊；保藏將包扎好的菌種置于室溫保存。
經(jīng)驗證從1997.7～1999.2月份保藏的菌種，轉(zhuǎn)接后其復蘇和生長情況與以往用常規(guī)保藏方法保存的菌種復蘇和生長情況一致，其保存期這1年零6個月。
實施例4本發(fā)明按以下步驟操作前期處理按常規(guī)方法培養(yǎng)菌種的基質(zhì)制備，定量分裝，采用18×1.8cm試管，分裝量為12ml，蒸汽滅菌；制斜面接種制成小斜面，所述小斜面的斜度為4cm，然后按常規(guī)方法接種；溫度控制將接好的斜面菌種按常規(guī)27℃方法進行恒溫培養(yǎng)，將培養(yǎng)好的斜面菌種移置至室溫放置4天；包裝將硫酸紙、聚炳烯膜蒸汽滅菌后，先用硫酸紙包裹緊培養(yǎng)好的斜面菌種，再用聚炳烯膜包嚴扎緊；保藏將包扎好的菌種置于溫度為2℃的冰箱內(nèi)保存。
經(jīng)驗證從1997.5～1999.10月份保藏的菌種，轉(zhuǎn)接后其復蘇和生長情況與以往用常規(guī)保藏方法保存的菌種復蘇和生長情況一致，其保存期達2年零5個月。
本發(fā)明也適用于15×1.5cm試管。
權(quán)利要求
1．一種絲狀真菌傳代培養(yǎng)包裹保存方法，其特征在于培養(yǎng)菌種基質(zhì)的分裝量足夠多而斜面小，然后置放、包裹保藏，具體按以下步驟操作前期處理按常規(guī)方法培養(yǎng)菌種的基質(zhì)制備，定量分裝，蒸汽滅菌；所述定量分裝量為20×2cm試管15～18ml，18×1.8cm試管12～15ml，試管15×1.5cm試管5～10ml。制斜面接種制成小斜面，然后按常規(guī)方法接種；所述小斜面的斜度范圍20×2cm試管為2～6cm，18×1.8cm試管為2～4cm，15×1.5cm試管為2～3cm。溫度控制將接好的斜面菌種按常規(guī)方法進行恒溫培養(yǎng)，將培養(yǎng)好的斜面菌種移置至室溫放置3～10天；包裝將紙、聚炳烯膜蒸汽滅菌后，先用紙包裹緊培養(yǎng)好的斜面菌種，再用聚炳烯膜包嚴扎緊；保藏將包扎好的菌種置于室溫或溫度T為0＞T≤10℃的冰箱內(nèi)保存。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種絲狀真菌傳代培養(yǎng)包裹保存方法。操作步驟是:培養(yǎng)菌種的基質(zhì)制備,定量分裝,蒸氣滅菌;制成小斜面,然后接種;將接好的斜面菌種進行恒溫培養(yǎng),將培養(yǎng)好的斜面菌種移置至室溫放置3～10天;將紙、聚丙烯膜蒸汽滅菌后,先用紙包裹緊培養(yǎng)好的斜面菌種,再用聚丙烯膜包嚴扎緊;將包扎好的菌種置于室溫或溫度T為0>T≤10℃的冰箱內(nèi)保存。本發(fā)明成本低,不需要增設(shè)特殊設(shè)備,原材料來源廣,又簡便易行、復蘇效果好、應(yīng)用廣泛。
文檔編號C12N1/14GK1295125SQ9911339
公開日2001年5月16日 申請日期1999年11月3日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月3日
發(fā)明者韓桂云, 張成剛, 葛英華, 何興元, 田春杰, 吳清風 申請人:中國科學院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所