專利名稱：細(xì)胞及細(xì)胞爬片集成制備盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種體外細(xì)胞培養(yǎng)及相關(guān)研究所需的實(shí)驗(yàn)用具，尤其是一種高效 率、高質(zhì)量、操作簡(jiǎn)便的細(xì)胞及細(xì)胞爬片集成制備盒。
背景技術(shù)：
用體外培養(yǎng)的細(xì)胞作為研究對(duì)象可以排除體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的諸多干擾因素的影響，應(yīng)用 各種處理因素對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行處理也變得容易，同時(shí)，采用各種技術(shù)和方法來對(duì)細(xì)胞 進(jìn)行觀察和分析也更方便。因此，細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生物學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域 研究的重要技術(shù)之一。隨著研究的深入，細(xì)胞研究方法及細(xì)胞檢測(cè)指標(biāo)日漸豐富，對(duì) 體外培養(yǎng)制備的細(xì)胞及細(xì)胞爬片的需求逐漸增大；同時(shí)，為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的客觀性， 常常需要在相同的條件下制備細(xì)胞及細(xì)胞爬片，使細(xì)胞性狀均一、同一性好，實(shí)驗(yàn)結(jié) 果之間更具有可比性。但是，目前此領(lǐng)域采用的方法存在不同程度的缺陷。
通常的方法是把多個(gè)細(xì)胞爬片直接置于培養(yǎng)皿底，細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后，收集細(xì)胞爬 片及培養(yǎng)皿底生長(zhǎng)的細(xì)胞，用于不同的研究方法和不同的指標(biāo)檢測(cè)。但是，這種方法
有以下缺點(diǎn)①細(xì)胞爬片容易在光滑的培養(yǎng)皿底滑動(dòng)和重疊，使細(xì)胞在細(xì)胞爬片上的
生長(zhǎng)條件不能統(tǒng)一；②為了減少細(xì)胞爬片之間的重疊，細(xì)胞爬片需要分散放置，同時(shí)， 細(xì)胞爬片占據(jù)了一部分培養(yǎng)皿底，因此，制備的細(xì)胞及細(xì)胞爬片都不多，難以滿足實(shí) 驗(yàn)需要；③由于細(xì)胞爬片直接和培養(yǎng)皿底接觸，細(xì)胞可以粘附在細(xì)胞爬片的背面，導(dǎo) 致細(xì)胞在細(xì)胞爬片雙面生長(zhǎng)，影響觀察和后續(xù)實(shí)驗(yàn)處理；④細(xì)胞爬片直接置于培養(yǎng)皿 底導(dǎo)致細(xì)胞爬片與底部嚴(yán)密結(jié)合，很難分開，細(xì)胞爬片夾取非常困難。
也有的方法是將培養(yǎng)皿底制出多個(gè)有序的槽，或在培養(yǎng)皿中放置具有多個(gè)有序槽 的載片板(CN1928063A)，這些槽可以生長(zhǎng)細(xì)胞或者容納細(xì)胞爬片。這樣，可以同時(shí) 制備細(xì)胞及細(xì)胞爬片，部分解決了細(xì)胞爬片滑動(dòng)及重疊的問題。但是，也存在以下不 足①所制備的細(xì)胞及細(xì)胞爬片數(shù)量也有限；②細(xì)胞爬片由于背面和培養(yǎng)皿底或載片 板直接接觸，細(xì)胞同樣會(huì)雙面生長(zhǎng)；③細(xì)胞爬片又小又輕，加培養(yǎng)液時(shí)可能會(huì)被沖出 所在的槽或漂浮起來，也有可能產(chǎn)生爬片重疊及細(xì)胞生長(zhǎng)不均的問題；④細(xì)胞爬片直 接置于培養(yǎng)皿底或載片板上也同樣導(dǎo)致細(xì)胞爬片夾取困難。因此，這種方法的好處不多，實(shí)際意義并不太大。
另外，用細(xì)胞爬片進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，由于要對(duì)每一張細(xì)胞爬片單獨(dú)處理，比較浪費(fèi)實(shí) 驗(yàn)材料和試劑；細(xì)胞爬片尺寸一般較小，取放、轉(zhuǎn)移、觀察等須精神集中，操作小心， 防止掉落、夾碎、顛倒正反面等，實(shí)驗(yàn)操作過程復(fù)雜，難度較大，耗時(shí)費(fèi)力；制備的 細(xì)胞爬片儲(chǔ)存時(shí)，為防止重疊、翻轉(zhuǎn)、刮傷刮花，常需專門的存放裝置，也增大了實(shí) 驗(yàn)成本。因此，這些問題也需要解決。

實(shí)用新型內(nèi)容
本實(shí)用新型的目的是針對(duì)上述技術(shù)中的問題而提供一種可同時(shí)制備大量性質(zhì)均 一、高質(zhì)量的細(xì)胞及細(xì)胞爬片集成制備盒，以使實(shí)驗(yàn)效率更高，效果更好，材料和試 劑更為節(jié)約，操作也更簡(jiǎn)便，顯著降低操作人員的勞動(dòng)強(qiáng)度。
本新型的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的 一種細(xì)胞及細(xì)胞爬片集成制備盒，包括培養(yǎng)盒，細(xì) 胞爬片，還具有用作放置于所述培養(yǎng)盒內(nèi)的爬片支架方框形的支架底座的底部設(shè)置 有支腳，支架底座上等間距、平行地固定有多根爬片固定條，該固定條的"工"字形 截面的縮窄部分形成爬片放置槽，相鄰兩固定條上的爬片放置槽為放置細(xì)胞爬片的部 位。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本新型的有益效果是
1、 可以同時(shí)大量制備性質(zhì)均一、質(zhì)量可靠的不同處理的細(xì)胞及細(xì)胞爬片。同一 個(gè)制備盒中制備的細(xì)胞和細(xì)胞爬片由于培養(yǎng)、處理過程集成在一起同時(shí)進(jìn)行，所處環(huán) 境及操作過程等各種影響因素一致，因此性質(zhì)均一，各種研究方法及指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果具 有更好的可比性；
2、 細(xì)胞爬片由于在培養(yǎng)中處于懸空狀態(tài)，細(xì)胞無法粘附于其背面(下面)而生 長(zhǎng)，因此，只有其正面(上面)可以生長(zhǎng)細(xì)胞，解決了以往的細(xì)胞雙面生長(zhǎng)的問題。 同時(shí)，也解決了以往細(xì)胞爬片因與培養(yǎng)皿底或培養(yǎng)皿底的載片板嚴(yán)密結(jié)合難以分開， 細(xì)胞爬片夾取困難的問題；
3、 由于培養(yǎng)過程中，細(xì)胞爬片被有序地排放于爬片支架上，消除了以往細(xì)胞爬 片容易在操作中相互重疊，細(xì)胞生長(zhǎng)不均勻，性質(zhì)差異大的問題；
4、 細(xì)胞爬片的培養(yǎng)、固定、儲(chǔ)存都一直在爬片支架上，減少了細(xì)胞爬片取放、 移動(dòng)等操作，減少了以往細(xì)胞爬片操作繁瑣、容易重疊、刮傷、弄碎、混淆正反面、 浪費(fèi)實(shí)驗(yàn)材料和試劑等弊??；
45、 多種不同處理的細(xì)胞爬片可一起粘附在普通載玻片或?qū)ｉT的爬片實(shí)驗(yàn)板上， 集成為細(xì)胞爬片陣列，同時(shí)進(jìn)行染色、雜交等處理。與以往的單片處理相比，統(tǒng)一了 操作過程，使每張細(xì)胞爬片所受到的處理更為一致，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為客觀；同時(shí)，也簡(jiǎn) 化了操作，節(jié)約了抗體、染色劑等試劑及相關(guān)材料的消耗，經(jīng)濟(jì)高效；
6、 制備盒構(gòu)造簡(jiǎn)單，功能齊全，制作工藝成熟，耗材少，成本低；制備盒同時(shí) 也是細(xì)胞爬片的儲(chǔ)存盒，不再需要專門的儲(chǔ)存盒；制備盒可以反復(fù)使用，節(jié)約資源。


圖1是本新型細(xì)胞及細(xì)胞爬片集成制備盒的剖面圖； 圖2是圖1的俯視圖(剖切盒蓋)； 圖3是圖1所示爬片支架的立體圖。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
圖1圖2示出，本新型包括培養(yǎng)盒，細(xì)胞爬片4，還具有用作放置于所述培養(yǎng)盒 內(nèi)的爬片支架方框形的支架底座2的底部設(shè)置有支腳2a，支架底座2上等間距、平 行地排列有多根爬片固定條l，該固定條的"工"字形截面的縮窄部分形成的凹槽為 爬片放置槽3，相鄰兩固定條上的爬片放置槽3為放置細(xì)胞爬片4的部位。
細(xì)胞爬片可為正方形或圓形等形狀，厚0. 1 0. 2mm。細(xì)胞爬片大小可按實(shí)驗(yàn)所需 制成各種尺寸規(guī)格，邊長(zhǎng)或直徑為4 8mm等各種規(guī)格。所述爬片支架為多個(gè)截面為
"工"字形的爬片固定條并列在有四只腳的方框形的支架底座上。爬片固定條"工" 字形上下部分(上、下部分都為一板條)各寬2ram，厚1面，中間縮窄部分寬lmm，厚 0.2誦。爬片固定條縮窄部分形成的凹槽為爬片放置槽，槽深0.5mm，寬0.2mm(深指
"工"字形的X向，寬指Y向)，兩個(gè)爬片固定條相對(duì)的爬片放置槽為水平放置細(xì)胞 爬片的部位，槽間的寬度以剛好能放入細(xì)胞爬片為宜。細(xì)胞爬片間留lmm空隙，方便 細(xì)胞爬片的取放，同時(shí)，也使細(xì)胞爬片上下方的培養(yǎng)液能流通，保證培養(yǎng)液的性質(zhì)均 一。爬片放置槽為磨砂表面，使細(xì)胞爬片放置進(jìn)去后位置固定，防止滑動(dòng)。爬片固定 條"工"字形截面上部分板條兩端各有30-60度內(nèi)向斜角8，可方便細(xì)胞爬片的取放。 方框形支架底座高1 2mm，四只支腳位于底座的四個(gè)角上，高1 3mm。支架底座方 框可依據(jù)一次制備的細(xì)胞、細(xì)胞爬片的量制成邊長(zhǎng)4 10cm (高l 2mm，寬2 3mm) 等各種尺寸規(guī)格。爬片支架可用模具一次整體澆注而成。爬片支架放置在一個(gè)如普通培養(yǎng)皿一樣的正方形或者圓形培養(yǎng)盒內(nèi)，培養(yǎng)盒由邊長(zhǎng)4 10cm培養(yǎng)盒體和培養(yǎng)盒蓋 組成，盒體與爬片支架相適應(yīng)，正方形培養(yǎng)盒邊長(zhǎng)比所放置的細(xì)胞爬片支架邊長(zhǎng)大6 10mm，圓形培養(yǎng)盒以能夠剛好放下爬片支架為宜，這樣可以方便爬片支架的取放。盒 體的底厚l 2mm。培養(yǎng)盒蓋的邊長(zhǎng)或直徑比培養(yǎng)盒體的大6 10皿。圓形培養(yǎng)盒可用 現(xiàn)有的培養(yǎng)皿代替，這樣可充分利用現(xiàn)有資源。細(xì)胞爬片、爬片支架及培養(yǎng)盒由耐高 溫、耐酸堿、耐有機(jī)溶劑的透明材料制成。
上述方案中，所述的細(xì)胞爬片制備完成后，可置于普通載玻片或一種爬片實(shí)驗(yàn)板 上進(jìn)行HE染色、免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistry， ICC)、原位雜交(In situ hybridization, ISH)、熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization, FISH) 等各種實(shí)驗(yàn)處理。爬片實(shí)驗(yàn)板按實(shí)驗(yàn)所需制成長(zhǎng)6 9cm，寬2 4cm各種規(guī)格，正面 (上面) 一端2cm寬的部分制成用于標(biāo)記的磨砂面，其余部分制成與細(xì)胞爬片相適應(yīng) 的多個(gè)有序排列的細(xì)胞爬片粘附槽。爬片粘附槽底平面處于或低于實(shí)驗(yàn)板平面，槽底 面處于或低于實(shí)驗(yàn)板平面，槽深與細(xì)胞爬片厚度相同，槽形狀及大小與細(xì)胞爬片相同， 槽間隔0.2 0.3mm。此爬片實(shí)驗(yàn)板由耐高溫、酸堿、有機(jī)溶劑的透明材料制成。
實(shí)施例1:
圖1、 2所示，將細(xì)胞爬片4放置于爬片支架的爬片放置槽內(nèi)，爬片支架放入相 適應(yīng)的培養(yǎng)盒體6中，加入適量細(xì)胞懸液，蓋上培養(yǎng)盒蓋5，細(xì)胞由于重力作用，可 鋪在細(xì)胞爬片4正面(上面)及培養(yǎng)盒底7上，然后貼壁生長(zhǎng)。多個(gè)培養(yǎng)盒中的細(xì)胞 可施加不同的處理。培養(yǎng)結(jié)束后，將爬片支架從培養(yǎng)盒體6中取出，置于另外的正方 形培養(yǎng)盒中，加入沒過細(xì)胞爬片支架的細(xì)胞固定液固定細(xì)胞爬片4上的細(xì)胞，細(xì)胞固 定結(jié)束后，棄去細(xì)胞固定液，將正方形培養(yǎng)盒做好標(biāo)記，低溫保存，供服染色、ICC、 ISH、 FISH等各種實(shí)驗(yàn)處理使用。原來的培養(yǎng)盒底7生長(zhǎng)的細(xì)胞可按常規(guī)的方法消化 收集起來，進(jìn)入核酸、蛋白質(zhì)制備等實(shí)驗(yàn)流程，供各種相應(yīng)的研究方法及指標(biāo)檢測(cè)實(shí) 驗(yàn)所用。
實(shí)施例2:
以ICC實(shí)驗(yàn)流程為例講解一下細(xì)胞爬片4的具體的使用方法。如圖4所示，在普 通載玻片或爬片實(shí)驗(yàn)板上滴加一小滴膠水(無色透明、黏著牢固、黏著時(shí)間短、耐酸 堿及有機(jī)溶劑等的腐蝕的膠水，如UV膠)，取實(shí)施例l制備的不同處理組的細(xì)胞爬片 4，正面(上面)朝上粘附到載玻片或爬片實(shí)驗(yàn)板上，濾紙吸去多余的膠水。細(xì)胞爬
6片4集成為陣列，按常規(guī)組織切片免疫組織化學(xué)染色(IHC)的方法流程對(duì)此細(xì)胞爬 片陣列整體地進(jìn)行處理、封片，然后鏡下觀察、拍照，即可高質(zhì)量、高通量、迅速簡(jiǎn) 便地完成大量不同處理的細(xì)胞爬片4的ICC實(shí)驗(yàn)。
權(quán)利要求1、一種細(xì)胞及細(xì)胞爬片集成制備盒，包括培養(yǎng)盒，細(xì)胞爬片(4)，其特征是，還具有用作放置于所述培養(yǎng)盒內(nèi)的爬片支架方框形的支架底座(2)的底部設(shè)置有支腳(2a)，支架底座(2)上等間距、平行地排列有多根爬片固定條(1)，該固定條的“工”字形截面的縮窄部分形成爬片放置槽(3)，相鄰兩固定條上的爬片放置槽(3)為放置細(xì)胞爬片(4)的部位。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述細(xì)胞及細(xì)胞爬片集成制備盒，其特征是所述爬片 固定條(1)"工"字形截面上部分板條兩端各有30 60。內(nèi)向斜角。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述細(xì)胞及細(xì)胞爬片集成制備盒，其特征是所述爬片 固定條(1)上的爬片放置槽(3)深0.5mm，寬0. 2mra，為磨砂表面。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述細(xì)胞及細(xì)胞爬片集成制備盒，其特征是所述支架 底座(2)的邊長(zhǎng)4 10cm，高1 2腿，寬2 3mm，支架底座四角上有四支腳(2a)， 支腳高1 3國(guó)。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述細(xì)胞及細(xì)胞爬片集成制備盒，其特征是所述細(xì)胞 爬片(4)為正方形或圓形，厚O. 1 0.2mm，細(xì)胞爬片邊長(zhǎng)或直徑為4 8mm。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述細(xì)胞及細(xì)胞爬片集成制備盒，其特征是培養(yǎng)盒為 正方形或圓形，并由培養(yǎng)盒體(6)和培養(yǎng)盒蓋(5)組成；正方形培養(yǎng)盒體邊長(zhǎng) 比爬片支架邊長(zhǎng)大6 10mm，圓形培養(yǎng)盒體剛好能放入爬片支架，培養(yǎng)盒體底部 厚度1 2mm，培養(yǎng)盒蓋的邊長(zhǎng)或直徑比培養(yǎng)盒體的大6 10mm。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1 6任一權(quán)利要求所述細(xì)胞及細(xì)胞爬片集成制備盒，其特 征是所述培養(yǎng)盒、細(xì)胞爬片(4)以及爬片支架均由耐高溫、耐酸堿、耐有機(jī) 溶劑的透明材料制成。
專利摘要一種細(xì)胞及細(xì)胞爬片集成制備盒，包括培養(yǎng)盒，細(xì)胞爬片，還具有用作放置于所述培養(yǎng)盒內(nèi)的爬片支架方框形的支架底座的底部設(shè)置有支腳，支架底座上等間距、平行地排列有多根爬片固定條，該固定條的“工”字形截面的縮窄部分形成爬片放置槽，相鄰兩固定條上的爬片放置槽為放置細(xì)胞爬片的部位。它能使實(shí)驗(yàn)效率高、效果更好、材料和試劑更節(jié)約、操作簡(jiǎn)便、顯著降低操作人員的勞動(dòng)強(qiáng)度。
文檔編號(hào)C12M3/04GK201424477SQ200920080719

公開日2010年3月17日 申請(qǐng)日期2009年5月8日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月8日
發(fā)明者洪 李, 燁 楊, 毛櫻逾, 波 羅, 鄭小莉 申請(qǐng)人:瀘州醫(yī)學(xué)院