專利名稱：一種利用沼液生產(chǎn)一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種發(fā)酵培養(yǎng)基生產(chǎn)方法，更具體地說(shuō)，涉及一種利用沼液生產(chǎn)一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基的方法。

背景技術(shù)：
一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌(Carboxydotrophic bacteria)，一類既能利用CO作為唯一碳源和能源，又能以CO2和H2分別作為碳源和能源，通過(guò)獨(dú)特的Wood-Ljungdahl途徑進(jìn)行自養(yǎng)生長(zhǎng)代謝的細(xì)菌。當(dāng)以CO2和H2作為代謝底物時(shí)，代謝過(guò)程中會(huì)形成CO中間體，因此，該類細(xì)菌統(tǒng)稱為一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌。大部分一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌為嚴(yán)格厭氧菌，對(duì)氧氣極為敏感，該類細(xì)菌以CO、CO2和H2為底物進(jìn)行自養(yǎng)生長(zhǎng)的同時(shí)能夠生成乙酸、丁酸、乙醇、丁醇和氫氣等重要的化工品和清潔能源，見(jiàn)反應(yīng)式(1-9)；少部分一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌為好氧菌或耐氧菌，對(duì)氧氣不敏感，該類細(xì)菌能夠利用CO和O2合成細(xì)胞，并將部分CO轉(zhuǎn)化為CO2，見(jiàn)反應(yīng)式(10)，這類細(xì)菌可用于處理汽車尾氣中的CO以及其它含CO廢氣。因此，一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌在能源和環(huán)境領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。
6CO+3H2O→CH3CH2OH+4CO2(1) 2CO2+6H2→CH3CH2OH+3H2O(2) 4CO+2H2O→CH3COOH+2CO2 (3) 4H2+2CO2→CH3COOH+2H2O (4) 10CO+4H2O→CH3CH2CH2COOH+6CO2 (5) 12CO+5H2O→CH3CH2CH2C H2OH+86CO2 (6) 10H2+4CO2→CH3CH2CH2COOH+6H2O (7) 12H2+4CO2→CH3CH2CH2CH2OH+7H2O(8) CO+H2O→H2+CO2(9) 2.19CO+O2→1.83CO2+0.36C細(xì)胞 (10) 然而，微生物的生長(zhǎng)代謝，除了碳源(CO或CO2)和能源(CO或H2)外，還需要氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子。無(wú)機(jī)鹽包括P、S、K、Na、Mg、Fe等大量元素以及Cu、Zn、Mn、Co、Ni、Se等微量元素，生長(zhǎng)因子主要為各類維生素。由于一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌的底物為無(wú)機(jī)物(CO、CO2和H2)，因此生長(zhǎng)代謝所需的大量元素、微量元素以及各類維生素均必須額外補(bǔ)充。
以嚴(yán)格厭氧一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌Clostridium ljungdahlii(菌種保藏編號(hào)為ATCC 55383或DSM 13528)為例，該菌能夠利用合成氣的主要成分(CO、CO2和H2)進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)并發(fā)酵產(chǎn)乙醇和乙酸。ATCC(美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏所)提供該菌的發(fā)酵培養(yǎng)基配方如下NH4Cl 1g，KClO.1g，MgSO4·7H2O 0.2g，NaCl 0.8g，KH2PO4 0.1g，CaCl2·2H2O 20mg，酵母膏1g，微量元素溶液10mL，維生素溶液10mL，還原劑溶液10mL，蒸餾水980mL。
上述微量元素溶液配方為次氨基三乙酸2g，MnSO4·H2O 1g，F(xiàn)e(SO4)2(NH4)2·6H2O 0.8g，CoCl2·6H2O 0.2g，ZnSO4·7H2O 0.2g，CuCl2·2H2O 20mg，NiCl2·6H2O 20mg，Na2MoO4·2H2O20mg，Na2SeO4 20mg，Na2WO4 20mg，蒸餾水1L。
上述維生素溶液配方為生物素2mg，葉酸2mg，維生素B6 10mg，維生素B1 5mg，核黃素5mg，煙酸5mg，泛酸鈣5mg，維生素B12 0.1mg，氨基苯酸5mg，硫辛酸5mg，蒸餾水1L。
上述還原劑溶液配方為NaOH 0.9g，半胱氨酸·H2O 4g，NaS·9H2O 4g，蒸餾水100mL。
從上述配方可以看出，雖然用量很少，但是所需添加的營(yíng)養(yǎng)成分較多，造成培養(yǎng)基配制程序較為繁雜，且某些微量元素和維生素的市場(chǎng)價(jià)格較為昂貴。因此，開發(fā)配制程序簡(jiǎn)單且成本低廉的一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基，對(duì)于該類細(xì)菌在能源與環(huán)境領(lǐng)域的大規(guī)模工業(yè)應(yīng)用，是必須解決的技術(shù)關(guān)鍵之一。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種利用沼液生產(chǎn)一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基的方法，以簡(jiǎn)化培養(yǎng)基配制程序和降低培養(yǎng)基生產(chǎn)成本。
為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明通過(guò)以下兩種技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。
第一種技術(shù)方案為，利用沼液生產(chǎn)嚴(yán)格厭氧型一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基，其流程如圖1所示，包括以下步驟 (1)取正常運(yùn)行的沼氣池的沼液，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾去除大顆粒固體雜質(zhì)，獲得濾液，；濾液離心后獲得上清液； 優(yōu)選的篩網(wǎng)孔徑小于2mm (2)根據(jù)不同的嚴(yán)格厭氧一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌所需的pH值將上述上清液進(jìn)行pH調(diào)節(jié)；表1列舉了部分嚴(yán)格厭氧一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌的最佳pH值，表1的內(nèi)容為本技術(shù)領(lǐng)域公知技術(shù)，但一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌不局限于這些細(xì)菌。
表1 部分一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌的最佳pH值 (3)對(duì)完成pH調(diào)節(jié)的上清液進(jìn)行氮?dú)獯得?，以減少上清液中的溶解氧；將完成氮?dú)獯得摰纳锨逡涸跓o(wú)氧氣氛下進(jìn)行分裝；將完成分裝的上清液滅菌，滅菌完成后取出冷卻至室溫； 上述無(wú)氧氣氛指在100％的N2或CO2氣體環(huán)境中。
(4)在無(wú)氧氣氛下配制還原劑溶液，所述還原劑溶液配方為NaOH 9g，半胱氨酸·H2O40g，NaS·9H2O 40g，蒸餾水1L； (5)將還原劑溶液加入到已滅菌的上清液內(nèi)，并搖勻，添加量為1L上清液添加10mL還原劑溶液； (6)至此獲得成品瓶裝厭氧型一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基，將其在0℃~4℃條件下冷藏備用。當(dāng)使用時(shí)，可根據(jù)需要用無(wú)菌水進(jìn)行稀釋。
第二種技術(shù)方案為，利用沼液生產(chǎn)好氧或耐氧型一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基，其流程如圖2所示，包括以下步驟 (1)取正常運(yùn)行的沼氣池的沼液，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾去除大顆粒固體雜質(zhì)，獲得濾液，濾液經(jīng)離心獲得上清液； 優(yōu)選的篩網(wǎng)孔徑小于2mm； (2)將上述上清液根據(jù)不同的一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌所需的pH值進(jìn)行pH調(diào)節(jié)； (3)將完成pH調(diào)節(jié)的上清液在常規(guī)條件(空氣氣氛下)進(jìn)行分裝，將分裝后的瓶裝上清液滅菌； (4)至此獲得成品瓶裝好氧或耐氧型一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基，將其在0℃~4℃條件下冷藏備用。當(dāng)使用時(shí)，可根據(jù)需要用無(wú)菌水進(jìn)行稀釋。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是 (1)本發(fā)明所用的沼液來(lái)源廣泛，且含有豐富的氮、磷、硫、鉀、鈉、鎂、鈣、鐵等氮源和大量元素，銅、鋅、鈷、鎳、鉬、錳、鎢、硒等微量元素，以及各種氨基酸和維生素等生長(zhǎng)因子，非常適合一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌的生長(zhǎng)代謝需求。采用沼液生產(chǎn)一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基，可以節(jié)省培養(yǎng)基配制所需的各類化學(xué)藥品，降低生產(chǎn)成本。
(2)與傳統(tǒng)的一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基生產(chǎn)方法相比，利用沼液生產(chǎn)一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基，方法簡(jiǎn)單、步驟較少、容易操作。
(3)以沼液作為生產(chǎn)一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，能夠變廢為寶，提高沼液的附加值，實(shí)現(xiàn)物盡其用，從而使整個(gè)沼氣工程系統(tǒng)更具經(jīng)濟(jì)性。



圖1是本發(fā)明利用沼液生產(chǎn)嚴(yán)格厭氧型一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基的流程圖 圖2是本發(fā)明利用沼液生產(chǎn)好氧或耐氧型一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基的流程圖
具體實(shí)施例方式 以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明。
實(shí)施例1 利用畜禽養(yǎng)殖廢棄物沼氣池的沼液生產(chǎn)嚴(yán)格厭氧型一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，具體過(guò)程如下 (1)取正常運(yùn)行的畜禽養(yǎng)殖廢棄物厭氧消化沼氣池的沼液，利用孔徑為1mm的篩網(wǎng)過(guò)濾去除大顆粒固體雜質(zhì)，獲得濾液； (2)將上述濾液于離心機(jī)內(nèi)進(jìn)行離心并獲得上清液，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為5000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為20分鐘； (3)將上述上清液的pH調(diào)節(jié)為6.0； (4)對(duì)pH為6.0的上清液進(jìn)行氮?dú)獯得?，?00％的N2從上清液儲(chǔ)罐底部通入并從頂部排出，氮?dú)獯得撘詼p少上清液中的溶解氧； (5)經(jīng)氮?dú)獯得摵蟮纳锨逡涸趨捬醪僮飨鋬?nèi)進(jìn)行分裝，上清液被分裝在500mL密封瓶中，裝填量為250mL，并用丁基橡膠塞塞住瓶口，再用鋁封蓋或螺旋蓋封住瓶口，得到瓶裝上清液； (6)將瓶裝上清液置于高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌，控制滅菌溫度為121℃，滅菌時(shí)間為15分鐘，滅菌完成后取出冷卻至室溫； (7)在厭氧操作箱內(nèi)配制還原劑溶液，并利用孔徑為0.45μm的無(wú)菌過(guò)濾器過(guò)濾，將過(guò)濾后的還原劑溶液裝入帶密封塞的1L無(wú)菌無(wú)氧瓶，并用丁基橡膠塞塞住瓶口，再用鋁封蓋或螺旋蓋封住瓶口，得到瓶裝還原劑溶液； 上述還原劑溶液配方為NaOH 9g，半胱氨酸·H2O 40g，NaS·9H2O 40g，蒸餾水1L。
(8)利用一次性無(wú)菌注射器取2.5mL瓶裝還原劑溶液加入到瓶裝上清液內(nèi)，并攪拌均勻，至此獲得成品瓶裝厭氧型培養(yǎng)基，并在0℃~4℃條件下冷藏備用。
利用實(shí)施例1獲得的成品瓶裝培養(yǎng)基，以CO、CO2和H2作為嚴(yán)格厭氧型一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌(Clostridium ljungdahlii，菌種編號(hào)為ATCC 55383或DSM13528)的底物，進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)及產(chǎn)乙酸和乙醇發(fā)酵。
在無(wú)菌厭氧操作箱內(nèi)，采用一次性無(wú)菌注射器將5mL的Clostridium ljungdahlii菌種液接種到具體實(shí)施例1獲得的成品瓶裝培養(yǎng)基中，搖勻后取2mL液樣進(jìn)行細(xì)菌濃度和乙酸、乙醇濃度檢測(cè)。接種后充入混合氣(10％N2+90％(CO+CO2+H2))，并在37℃的恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15天，取氣樣和液樣檢測(cè)氣體成分及液體中的細(xì)菌濃度和乙酸、乙醇濃度。培養(yǎng)前后的細(xì)菌濃度、氣體成分比例及乙酸和乙醇濃度見(jiàn)表2。
表2 Clostridium ljungdahlii培養(yǎng)前后的細(xì)菌濃度、氣體成分比例及乙酸和乙醇濃度 實(shí)施例2 利用城市生活有機(jī)垃圾厭氧消化沼氣池的沼液生產(chǎn)嚴(yán)格厭氧型一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，具體過(guò)程如下 (1)取正常運(yùn)行的城市生活有機(jī)垃圾厭氧消化沼氣池的沼液，利用孔徑為1.5mm的篩網(wǎng)過(guò)濾去除大顆粒固體雜質(zhì)，獲得濾液； (2)將上述濾液于離心機(jī)內(nèi)進(jìn)行離心并獲得上清液，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為6000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為15分鐘； (3)將上述上清液的pH調(diào)節(jié)為6.2； (4)對(duì)pH為6.2的上清液進(jìn)行氮?dú)獯得摚?00％的N2從上清液儲(chǔ)罐底部通入并從頂部排出，氮?dú)獯得撘詼p少上清液中的溶解氧； (5)經(jīng)氮?dú)獯得摵蟮纳锨逡涸趨捬醪僮飨?上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司生產(chǎn))內(nèi)進(jìn)行分裝，上清液被分裝在500mL密封瓶中，裝填量為200mL，并用丁基橡膠塞塞住瓶口，再用鋁封蓋或螺旋蓋封住瓶口，得到瓶裝上清液； (6)將瓶裝上清液置于高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌，控制滅菌溫度為115℃，滅菌時(shí)間為20分鐘，滅菌完成后取出冷卻至室溫； (7)在厭氧操作箱內(nèi)配制還原劑溶液，并利用孔徑為0.45μm的無(wú)菌過(guò)濾器過(guò)濾，將過(guò)濾后的還原劑溶液裝入帶密封塞的1L無(wú)菌無(wú)氧瓶，并用丁基橡膠塞塞住瓶口，再用鋁封蓋或螺旋蓋封住瓶口，得到瓶裝還原劑溶液； 上述還原劑溶液配方為NaOH 9g，半胱氨酸·H2O 40g，NaS·9H2O 40g，蒸餾水1L。
(8)利用一次性無(wú)菌注射器取2mL瓶裝還原劑溶液加入到瓶裝上清液內(nèi)，并攪拌均勻，至此獲得成品瓶裝厭氧型培養(yǎng)基，并在0℃~4℃條件下冷藏備用。
利用實(shí)施例2獲得的成品瓶裝培養(yǎng)基，以CO、CO2和H2作為嚴(yán)格厭氧型一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌(Clostridium carboxidivorans，菌種編號(hào)為ATCC BAA-624或DSM 15243)的底物，進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)及產(chǎn)乙酸、乙醇、丁酸和丁醇發(fā)酵。
在無(wú)菌厭氧操作箱內(nèi)，采用一次性無(wú)菌注射器將4mL的Clostridium carboxidivorans菌種液接種到實(shí)施例2獲得的成品瓶裝培養(yǎng)基中，搖勻后取2mL液樣進(jìn)行細(xì)菌濃度和乙酸、乙醇、丁酸、丁醇濃度檢測(cè)。接種后充入混合氣(10％N2+90％(CO+CO2+H2))，并在38℃的恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20天，取氣樣和液樣檢測(cè)氣體成分及液體中的細(xì)菌濃度和乙酸、乙醇、丁酸、丁醇濃度。培養(yǎng)前后的細(xì)菌濃度、氣體成分比例、乙酸、乙醇、丁酸、丁醇濃度見(jiàn)表3。
表3 Clostridium carboxidivorans培養(yǎng)前后的 細(xì)菌濃度、氣體成分比例、乙酸、乙醇、丁酸、丁醇濃度 實(shí)施例3 利用來(lái)源于市政污水污泥厭氧消化沼氣池的沼液生產(chǎn)嚴(yán)格厭氧型一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，具體過(guò)程如下 (1)取正常運(yùn)行的市政污水污泥厭氧消化沼氣池的沼液，利用孔徑為1mm的篩網(wǎng)過(guò)濾去除大顆粒固體雜質(zhì)，獲得濾液； (2)將上述濾液于離心機(jī)內(nèi)進(jìn)行離心并獲得上清液，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為8000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為15分鐘； (3)將上述上清液的pH調(diào)節(jié)為6.8~7.0； (4)對(duì)pH為6.8~7.0的上清液進(jìn)行氮?dú)獯得?，?00％的N2從上清液儲(chǔ)罐底部通入并從頂部排出，氮?dú)獯得撘詼p少上清液中的溶解氧； (5)經(jīng)氮?dú)獯得摵蟮纳锨逡涸?00％的N2氣氛下進(jìn)行分裝，上清液被分裝在500mL密封瓶中，裝填量為250mL，并用丁基橡膠塞塞住瓶口，再用鋁封蓋或螺旋蓋封住瓶口，得到瓶裝上清液； (6)將瓶裝上清液置于高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌，控制滅菌溫度為121℃，滅菌時(shí)間為20分鐘，滅菌完成后取出冷卻至室溫； (7)在100％的N2氣氛下配制還原劑溶液，并利用孔徑為0.45μm的無(wú)菌過(guò)濾器過(guò)濾，將過(guò)濾后的還原劑溶液裝入帶密封塞的1L無(wú)菌無(wú)氧瓶，并用丁基橡膠塞塞住瓶口，再用鋁封蓋或螺旋蓋封住瓶口，得到瓶裝還原劑溶液； 上述還原劑溶液配方為NaOH 9g，半胱氨酸·H2O 40g，NaS·9H2O 40g，蒸餾水1L。
(8)利用一次性無(wú)菌注射器取2.5mL瓶裝還原劑溶液加入到瓶裝上清液內(nèi)，并攪拌均勻，至此獲得成品瓶裝厭氧型培養(yǎng)基，并在0℃~4℃條件下冷藏備用。
利用實(shí)施例3獲得的成品瓶裝培養(yǎng)基，以CO作為嚴(yán)格厭氧型一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌(Carboxydothermus hydrogenoformans，菌種編號(hào)為ATCC BAA-161或DSM 6008)的底物，進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)及一氧化碳產(chǎn)氫發(fā)酵。
在無(wú)菌厭氧操作箱內(nèi)，采用一次性無(wú)菌注射器將5mL的Carboxydothermushydrogenoformans菌種液接種到具體實(shí)施例3獲得的成品瓶裝培養(yǎng)基中，并取2mL液樣進(jìn)行細(xì)菌濃度檢測(cè)。接種后充入混合氣(10％N2+90％CO)，并在70℃的恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10天，取氣樣和液樣檢測(cè)氣體成分及液體中的細(xì)菌濃度。培養(yǎng)前后的細(xì)菌濃度和氣體成分比例見(jiàn)表4。
表4 Carboxydothermus hydrogenoformans培養(yǎng)前后的細(xì)菌濃度和氣體成分比例 實(shí)施例4 利用城市生活有機(jī)垃圾厭氧消化沼氣池的沼液生產(chǎn)好氧型一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，具體過(guò)程如下 (1)取正常運(yùn)行的城市生活有機(jī)垃圾厭氧消化沼氣池的沼液，利用孔徑為1.5mm的篩網(wǎng)過(guò)濾去除大顆粒固體雜質(zhì)，獲得濾液； (2)將上述濾液于離心機(jī)內(nèi)進(jìn)行離心并獲得上清液，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為6000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為15分鐘； (3)將上述上清液的pH調(diào)節(jié)為7.0； (4)將pH為7.0的上清液在常規(guī)條件(空氣氣氛下)進(jìn)行分裝，上清液被分裝在500mL密封瓶中，裝填量為250mL，并用丁基橡膠塞塞住瓶口，再用鋁封蓋或螺旋蓋封住瓶口，得到瓶裝上清液； (5)將分裝后的瓶裝上清液置于滅菌鍋內(nèi)滅菌，控制滅菌溫度為120℃，滅菌時(shí)間為15分鐘； (6)滅菌完成后取出冷卻至室溫，至此獲得成品瓶裝好氧型培養(yǎng)基，并在0℃~4℃條件下冷藏備用； 利用實(shí)施例4獲得的成品瓶裝培養(yǎng)基，以CO為好氧型一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌(Oligotrophacarboxidovorans，菌種編號(hào)為ATCC 49405或DSM 1227)的底物，進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)及CO轉(zhuǎn)變?yōu)镃O2的生化反應(yīng)。
在無(wú)菌超凈工作臺(tái)內(nèi)，采用一次性無(wú)菌注射器將5mL的Oligotropha carboxidovorans菌種液接種到具體實(shí)施例4獲得的成品瓶裝培養(yǎng)基中，搖勻后取2mL液樣進(jìn)行細(xì)菌濃度檢測(cè)。接種后充入混合氣(10％N2+70％CO+20％O2)，并在30℃的恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱中培養(yǎng)25天，取氣樣和液樣檢測(cè)氣體成分及液體中的細(xì)菌濃度。培養(yǎng)前后的細(xì)菌濃度和氣體成分比例見(jiàn)表5。
表5 Oligotropha carboxidovorans培養(yǎng)前后的細(xì)菌濃度和氣體成分比例 最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的具體實(shí)施例子。顯然，本發(fā)明不限于以上實(shí)施例子，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種利用沼液生產(chǎn)一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基的方法，其特征在于包括如下步驟
(1)取正常運(yùn)行的沼氣池的沼液，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾去除大顆粒固體雜質(zhì)，獲得濾液；濾液離心后獲得上清液；
(2)根據(jù)不同的嚴(yán)格厭氧一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌調(diào)節(jié)所需的pH值將上述上清液進(jìn)行pH調(diào)節(jié)；
(3)對(duì)完成pH調(diào)節(jié)的上清液進(jìn)行氮?dú)獯得?，以減少上清液中的溶解氧；將完成氮?dú)獯得摰纳锨逡簻缇?，滅菌完成后取出冷卻至室溫；將完成氮?dú)獯得摰纳锨逡涸跓o(wú)氧氣氛下進(jìn)行分裝；
(4)在無(wú)氧氣氛下配制還原劑溶液；
(5)將還原劑溶液加入到已滅菌的上清液內(nèi)，并搖勻，添加量為1L上清液添加10mL還原劑溶液；
(6)至此獲得成品瓶裝厭氧型一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基，將其在0℃~4℃條件下冷藏備用。
2.如權(quán)利要求1所述的利用沼液生產(chǎn)一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基的方法，其特征在于，所述還原劑溶液配方為NaOH 9g，半胱氨酸·H2O 40g，NaS·9H2O 40g，蒸餾水1L。
3.一種利用沼液生產(chǎn)一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基的方法，其特征在于包括如下步驟
(1)取正常運(yùn)行的沼氣池的沼液，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾去除大顆粒固體雜質(zhì)，獲得濾液；濾液經(jīng)離心獲得上清液；
(2)將上述上清液根據(jù)不同的一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌調(diào)節(jié)所需的pH值進(jìn)行pH調(diào)節(jié)；
(3)將完成pH調(diào)節(jié)的上清液在常規(guī)條件(空氣氣氛下)進(jìn)行分裝，將分裝后的瓶裝上清液滅菌；
(4)至此獲得成品瓶裝好氧或耐氧型一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基，將其在0℃~4℃條件下冷藏備用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種利用沼液生產(chǎn)一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基的方法，以簡(jiǎn)化培養(yǎng)基配制程序和降低培養(yǎng)基生產(chǎn)成本。取正常運(yùn)行的沼氣池的沼液，經(jīng)過(guò)濾、離心后獲得上清液，根據(jù)不同的一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌所需的pH值進(jìn)行pH調(diào)節(jié)，然后分別在無(wú)氧或有氧氣氛下加入還原劑，分別得到厭氧型或耐氧型一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基。本發(fā)明采用沼液生產(chǎn)一氧化碳營(yíng)養(yǎng)菌發(fā)酵培養(yǎng)基，可以節(jié)省培養(yǎng)基配制所需的各類化學(xué)藥品，降低生產(chǎn)成本。方法簡(jiǎn)單、步驟較少、容易操作，能夠變廢為寶，提高沼液的附加值，實(shí)現(xiàn)物盡其用，從而使整個(gè)沼氣工程系統(tǒng)更具經(jīng)濟(jì)性。
文檔編號(hào)C12N1/20GK101768563SQ20101010947
公開日2010年7月7日 申請(qǐng)日期2010年2月5日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月5日
發(fā)明者李 東, 孫永明, 袁振宏, 孔曉英, 李連華 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院廣州能源研究所