專利名稱：一種急性出血性結(jié)膜炎檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及體外診斷試劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種與急性出血性結(jié)膜炎相關(guān)的腸 道病毒70型(EV70)和柯薩奇A24型病毒變異株(CA24v)的檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
急性出血性結(jié)膜炎俗稱紅眼病，是《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》規(guī)定報(bào)告的丙 類傳染病之一。該病發(fā)病率高，傳播迅速，波及范圍廣，傳染性極強(qiáng)，潛伏期很短，接觸傳染 源后12 48小時(shí)內(nèi)雙眼即發(fā)病，給人們的生產(chǎn)和生活帶來較大影響。人群普遍易感，成人 較兒童發(fā)病人數(shù)多。世界上很多地區(qū)都報(bào)道過急性出血性結(jié)膜炎的暴發(fā)和流行，在世界范圍內(nèi)暴發(fā)過的急性出血性結(jié)膜炎疫情，主要病原為EV70和CA24，繼而 1970年在新加坡，急性出血性結(jié)膜炎首次被證實(shí)由CA24v(CA24病毒變異株)所引起。在我 國(guó)，急性出血性結(jié)膜炎曾經(jīng)有兩次大的流行，分別是1971年和1988年，其致病原均為EV70 和CA24v。由于該病極強(qiáng)的傳染性，暴發(fā)后感染人數(shù)眾多，給經(jīng)濟(jì)和醫(yī)療資源帶來巨大的損 失。腸道病毒EV70和柯薩奇病毒都屬于小核糖核酸病毒科，病毒呈球形，電子顯微鏡 觀察直徑為23 30nm，病毒衣殼呈二十面立體對(duì)稱。一般鑒定病毒的方法主要有以下幾種 方法(1)電子顯微鏡鑒定，病毒體的負(fù)染和超薄切片。該方法可以直接利用顯微鏡觀察病 毒顆粒，但是對(duì)操作者要求比較高；(2)免疫熒光鑒定，該方法是利用熒光素特異性標(biāo)記來 觀察著色熒光，根據(jù)抗體特異性來判斷病原體。免疫熒光法具有快速，特異的優(yōu)點(diǎn)。(3)血 清學(xué)方法鑒定等手段，也是病毒鑒定的常規(guī)手段，通過血清學(xué)鑒定從而判斷病毒的種屬和 亞型。除了以上幾種方法外，現(xiàn)在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)來進(jìn)行病毒的鑒定。 EV70和CA24v病毒都是單鏈的RNA，因此采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)進(jìn)行病毒核酸的擴(kuò)增。實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)是一種直接檢測(cè)核酸并進(jìn)行核酸定量的分子生物學(xué)技術(shù)，具有 靈敏度高，特異性好，簡(jiǎn)單，廉價(jià)等優(yōu)點(diǎn)。它在一種在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒 光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)進(jìn)程，通過結(jié)果數(shù)據(jù)分析對(duì)起始模板進(jìn)行定量。本發(fā)明采用 實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)中的雙色熒光PCR方法，即對(duì)兩個(gè)目的病毒核酸(EV70和CA24v)進(jìn)行擴(kuò) 增，根據(jù)標(biāo)記的雙色熒光，判斷病毒核酸擴(kuò)增的情況。本發(fā)明涉及的試劑盒可廣泛地運(yùn)用于 由EV70和CA24v引起的急性出血性結(jié)膜炎的檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題之一是提供一種對(duì)與急性出血性結(jié)膜炎相關(guān)的腸道 病毒70型(EV70)和柯薩奇A24型病毒變異株(CA24v)進(jìn)行檢測(cè)的試劑盒，所述試劑盒靈 敏度高，特異性好，便于檢測(cè)。本發(fā)明在對(duì)GENBANK上所有已知的EV70和CA24v病毒株的核酸序列進(jìn)行比對(duì)的 基礎(chǔ)上，尋找EV70和CA24v核酸序列的特異性保守區(qū)，并針對(duì)保守區(qū)設(shè)計(jì)EV70和CA24v的 靶核苷酸引物和探針。這些引物探針在含有耐熱DNA聚合酶，高質(zhì)量的脫氧核糖核苷三磷酸(dNTPs)以及Mg2+等的PCR反應(yīng)緩沖液中，通過熒光PCR擴(kuò)增儀實(shí)現(xiàn)體外核酸的循環(huán)擴(kuò)
+飽
+曰o本發(fā)明所提供的EV70和CA24v病毒株檢測(cè)試劑盒，包括下列組成(1) RT-PCR反應(yīng)緩沖液由Tris-HCl、MgCl2、KC1鹽緩沖液組成；(2)引物探針混合液為PCR擴(kuò)增時(shí)必需的特異正反向引物和熒光探針，序列選自 EV70和CA24v的高度保守區(qū)域，；熒光探針為雙色標(biāo)記；(3) RT-PCR反應(yīng)酶系由dNTPs、熱啟動(dòng)Taq酶和MMLV酶及穩(wěn)定劑組成；(4) DEPC H20 ；(5)EV70和CA24v陽(yáng)性質(zhì)控品為MS2載體假病毒；(6)EV70和CA24v陰性質(zhì)控品為生理鹽水。RT-PCR 反應(yīng)緩沖液優(yōu)選由 Tris-HCl (50mmol/L, pH8. 0)、MgCl2 (8mmol/L)、 KC1 (250mmol/L)組成。EV70靶多核苷酸擴(kuò)增的正向和反向引物的序列分別是5’ -CAACAAGTACCTCATCCAT TCAAAAG-3，(SEQ ID NO 1)和 5，-GTAAACAATTCCATCTTCCTCCT-3，(SEQ ID NO :2)，所述的用 于熒光PCR擴(kuò)增和檢測(cè)體系的EV70寡核苷酸探針，其序列是5，-TTCTTCATCTGGACTTTGAACA CCAGAGAACT-3’ (SEQ ID NO :3)，探針的兩端分別結(jié)合有熒光發(fā)生基團(tuán)FAM和熒光淬滅基團(tuán) BHQ1 ；用于CA24v靶多核苷酸擴(kuò)增的正向和反向引物的序列分別是 5‘-GAGTGCTTGCCCAGATTTTAG-3‘(SEQ ID NO 4)和 5，-ATAACGGTGTCAATGGTCTCCTC-3，(SEQI D NO 5)，用于熒光PCR擴(kuò)增和檢測(cè)體系的CA24v寡核苷酸探針，其序列是5，-CGTGCGTCTGT TGAGAGACACCAAC-3，(SEQ ID NO :6)，探針的兩端分別結(jié)合有熒光發(fā)生基團(tuán)HEX和熒光淬滅 基團(tuán)BHQ1。組成(2)中所述的引物濃度均優(yōu)選為0.2mmol/L，所述的探針濃度均優(yōu)選為 0.lmmol/L0RT-PCR反應(yīng)酶系是由熱啟動(dòng)Taq酶、MMLV、dNTPs組成，可采用市售的熱啟動(dòng)酶、 MMLV、dNTPs產(chǎn)品，如Qiagen公司產(chǎn)品，其中每人份試劑熱啟動(dòng)Taq酶的用量為5U、MMLV用 量為 10U、dNTPs 為 lOmmolo本發(fā)明試劑盒中進(jìn)行待檢標(biāo)本檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行兩種質(zhì)控品的檢測(cè)，僅當(dāng)EV70、CA24v 陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)呈陽(yáng)性，陰性質(zhì)控品檢測(cè)呈陰性時(shí)，待檢標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果才有效。本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題是提供一種檢測(cè)急性出血性結(jié)膜炎核酸的檢測(cè) 方法，包括如下步驟(1)標(biāo)本前處理；(2)核酸提取；(3)根據(jù)本發(fā)明的試劑盒進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增及檢測(cè)a.試劑準(zhǔn)備按比例取相應(yīng)量的引物探針混合液、RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR反應(yīng)酶 系充分混勻后按30 u 1/管分裝成PCR反應(yīng)管，備用。b.加樣向PCR反應(yīng)管中，分別加入提取后的陰、陽(yáng)性質(zhì)控品、樣本RNA溶液 20 yl，蓋緊管蓋，放入儀器樣品槽。c. PCR 擴(kuò)增；
(4)結(jié)果分析。本發(fā)明的PCR擴(kuò)增的條件優(yōu)選為50°C 15分鐘，95°C 15分鐘；94°C 15秒，55°C 45 秒，40個(gè)循環(huán)(55°C 45秒退火階段收集熒光信號(hào))。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)①可對(duì)EV70和CA24v病毒核酸擴(kuò)增水平 進(jìn)行檢測(cè)，可同時(shí)反映出患者體內(nèi)EV70和CA24v病毒感染的狀態(tài)，有助于疾病的早期診斷 和治療，并可用于監(jiān)測(cè)治療效果和評(píng)估患者預(yù)后；②熒光PCR技術(shù)針對(duì)該病毒核酸特異性 序列設(shè)計(jì)引物、探針，具有更高的特異性，具有操作簡(jiǎn)便、價(jià)格低廉的優(yōu)點(diǎn)，更適用于大多數(shù) 患者檢測(cè)；③閉管檢測(cè)不需PCR后處理，避免了由于樣本間的交叉污染引起的假陽(yáng)性和環(huán) 境污染。本發(fā)明的試劑盒在擴(kuò)增待檢標(biāo)本時(shí)，檢測(cè)過程由市售的熒光定量PCR儀自動(dòng)完 成，操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)少，且最大限度地減少了污染的發(fā)生。檢測(cè)結(jié)果可用于由于EV70和 CA24v病毒引起的急性出血性結(jié)膜炎的檢測(cè)、藥物治療及預(yù)后等多個(gè)領(lǐng)域研究。


圖1實(shí)施例1中PCR擴(kuò)增的反應(yīng)條件；圖2實(shí)施例2中試劑盒陰性質(zhì)控品的擴(kuò)增曲線；圖中沒有S型擴(kuò)增曲線，說明檢測(cè)樣本中沒有EV70和CA24v病毒核酸的擴(kuò)增；圖3實(shí)施例2中試劑盒陽(yáng)性質(zhì)控品的擴(kuò)增曲線；圖中FAM通道的擴(kuò)增曲線為S型，說明檢測(cè)樣本中有EV70病毒核酸的擴(kuò)增；圖4實(shí)施例2中試劑盒陽(yáng)性質(zhì)控品的擴(kuò)增曲線；圖中HEX通道的擴(kuò)增曲線為S型，說明檢測(cè)樣本中有CA24v病毒核酸的擴(kuò)增；圖5實(shí)施例2中3例陰性樣本的擴(kuò)增曲線；圖中沒有S型擴(kuò)增曲線，說明檢測(cè)樣本中無EV70和CA24v病毒核酸的擴(kuò)增；圖6實(shí)施例2中1例陽(yáng)性眼結(jié)膜囊淚液樣本的擴(kuò)增曲線；圖中FAM標(biāo)記的擴(kuò)增曲線為S型，說明檢測(cè)樣本中有EV70病毒核酸的擴(kuò)增。表示 樣本中存在EV70病毒感染；圖7實(shí)施例中1例陽(yáng)性眼結(jié)膜拭子樣本的擴(kuò)增曲線；圖中HEX擴(kuò)增曲線為S型，說明檢測(cè)樣本中有CA24v病毒核酸的擴(kuò)增。表示樣本 中存在CA24v病毒感染；圖8實(shí)施例2中1例陽(yáng)性樣本的擴(kuò)增曲線；圖中FAM通道和HEX通道的擴(kuò)增曲線均為S型，說明檢測(cè)樣本中有EV70和CA24v 病毒核酸的擴(kuò)增。表示存在EV70和CA24v病毒的混合感染。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人 員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定 的范圍。實(shí)施例1
急性出血性結(jié)膜炎檢測(cè)試劑盒及其使用1、制備包括下列組成成分的試劑盒引物探針混合液(25iU/管)1管EV70靶多核苷酸擴(kuò)增的正向和反向引物 的序列分另IJ 是 5，-CAACAAGTACCTCATCCATTCAAAAG-3，(SEQ ID NO 1)禾P 5，-GTAAACAA TTCCATCTTCCTCCT-3，(SEQ ID NO :2)，EV70 寡核苷酸探針，其序列是 5，-TTCTTCATCTGG ACTTTGAACACCAGAGAACT-3，(SEQ ID NO 3)，探針的兩端分別結(jié)合有熒光發(fā)生基團(tuán)FAM 和熒光淬滅基團(tuán)BHQ1 ；用于CA24v靶多核苷酸擴(kuò)增的正向和反向引物的序列分別是 5，-GAGTGCTTGCCCAGATTTTAG-3，(SEQ ID NO 4)和 5，-ATAACGGTGTCAATGGTCTCCTC-3，(SEQ ID NO 5)，用于熒光PCR擴(kuò)增和檢測(cè)體系的CA24v寡核苷酸探針，其序列是5，-CGTGCGTCTG TTGAGAGACACCAAC-3，(SEQ ID NO :6)，探針的兩端分別結(jié)合有熒光發(fā)生基團(tuán)HEX和熒光淬滅 基團(tuán)BHQ1 ；RT-PCR 反應(yīng)緩沖液(250 ii 1/ 管)1 管由 Tris-HCl (50mmol/L，pH8. 0)、 MgCl2 (8mmol/L)、KC1 (250mmol/L)組成；RT-PCR反應(yīng)酶系(75 ill/管)1管Taq酶、MMLV、dNTPs組成，其中每人份試劑熱 啟動(dòng)Taq酶的用量為5U、匪LV用量為10U、dNTPs為lOmmol ；陽(yáng)性質(zhì)控品(200 ill/管)1管:MS2載體假病毒；陰性質(zhì)控品(200 ill/管)1管生理鹽水；DEPC H20 (2000 y 1/ 管)1 管。2、標(biāo)本的采集、保存和運(yùn)輸2. 1適用標(biāo)本類型眼結(jié)膜囊淚液、眼結(jié)膜拭子或刮取物。2. 2標(biāo)本采集、保存和運(yùn)送標(biāo)本應(yīng)在起病1 3天以內(nèi)采集。具體方法用滅 菌棉拭子涂擦翻轉(zhuǎn)的上、下瞼結(jié)膜并拭取淚液立即投入裝有滅菌生理鹽水或Eagle液 或0.5%水解乳蛋白Hanks液2mL的小試管中，貼好標(biāo)簽，置冰壺內(nèi)攜至實(shí)驗(yàn)室或低溫 (_20°C _70°C )凍存。標(biāo)本長(zhǎng)途運(yùn)送采用干冰。3、核酸提取使用QIAamp Viral RNA Mini Kit 提取試劑盒。按照 QIAamp Viral RNA Mini Kit 說明書進(jìn)行，最后收集到50 yl RNA溶液，直接進(jìn)行檢測(cè)或保存于-20°C。4、實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增及檢測(cè)4. 1試劑準(zhǔn)備按比例取相應(yīng)量的引物探針混合液、RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR反應(yīng) 酶系(引物探針混合液1 P 1+PCR反應(yīng)液10 u 1/人份+RT-PCR酶系3 ill/人份+DEPC H20 16ul),充分混勻后按30 u 1/管分裝成PCR反應(yīng)管，備用。4. 2加樣向PCR反應(yīng)管中，分別加入提取后的陰、陽(yáng)性質(zhì)控品、樣本RNA溶液 20 yl，蓋緊管蓋，放入儀器樣品槽。4. 3 編輯(ABI Prism 7500 熒光定量 PCR 儀)打開Setup窗口，按對(duì)應(yīng)順序設(shè)置陰、陽(yáng)性質(zhì)控品和待測(cè)標(biāo)本，并在Name欄中 設(shè)置樣品名稱。選中所有設(shè)置樣品孔，雙擊，選擇Add Detector，選擇R印orter為FAM 和Quencher為BHQ1，再選擇Importer為HEX和Quencher為BHQ1后關(guān)閉窗口。在 PassiveReference中選擇(none)。打開instrument窗口設(shè)置循環(huán)條件50°C 15分鐘， 95°C 15分鐘；94°C 15秒，55°C 45秒，40個(gè)循環(huán)。(見附圖1)。所有設(shè)置完成后保存文件，運(yùn)行。4. 4結(jié)果分析反應(yīng)結(jié)束后保存檢測(cè)數(shù)據(jù)文件。在Results下打開Amp plot窗口。選擇分析的目 的樣品所在位置。將Baseline數(shù)值改為start :3，stop 10，并打開manual設(shè)定Threshold 1.5 士 100000。雙擊 Rn 坐標(biāo)上數(shù)值打開 Graph settings 窗 口，將 Post Run Settings 中 Log 改為 Linear, OK 后打開 Analysis preferences 窗□,在 Analysis 菜單下選擇 Analyze 自動(dòng)分析結(jié)果。實(shí)施例2應(yīng)用急性出血性結(jié)膜炎檢測(cè)試劑盒檢測(cè)臨床樣品選取3例經(jīng)過血清學(xué)方法鑒定為EV70和CA24v病毒陰性，3例經(jīng)過血清學(xué)方法鑒 定為EV70和CA24v病毒陽(yáng)性的標(biāo)本，標(biāo)本核酸提取，PCR擴(kuò)增及結(jié)果分析參照實(shí)施例1進(jìn) 行，同時(shí)進(jìn)行陰，陽(yáng)性質(zhì)控品的檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果解釋陰性質(zhì)控品的擴(kuò)增曲線不規(guī)則或無CT值，(見附圖2)陽(yáng)性質(zhì)控品 的擴(kuò)增曲線為明顯S型曲線(見附圖3，4)，在試劑盒質(zhì)控范圍內(nèi)，說明檢測(cè)體系可以有效地 檢測(cè)到EV70和CA24v病毒核酸的擴(kuò)增(見附圖5，6，7，8).陰陽(yáng)性質(zhì)控品在同以實(shí)驗(yàn)中均 符合試劑盒的質(zhì)控要求。本次試驗(yàn)中6例標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果與血清學(xué)鑒定結(jié)果完全吻合，說明利用本試劑盒 檢測(cè)標(biāo)本中EV70和CA24v病毒核酸擴(kuò)增水平是可行的。本試劑盒操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)時(shí)間短， 可實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)，加之其價(jià)格低廉，能夠被大多數(shù)急性出血性結(jié)膜炎患者所承受。
權(quán)利要求
一種急性出血性結(jié)膜炎核酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于包括下列組成(1)RT-PCR反應(yīng)緩沖液由Tris-HCl、MgCl2、KCl鹽緩沖液組成；(2)引物探針混合液為PCR擴(kuò)增時(shí)必需的腸道病毒70型(EV70)和柯薩奇A24型病毒變異株(CA24v)特異性正反向引物和熒光探針，序列選自EV70和CA24v的高度保守區(qū)域，熒光探針為雙色標(biāo)記；(3)RT-PCR反應(yīng)酶系由dNTPs、熱啟動(dòng)Taq酶和MMLV酶及穩(wěn)定劑組成；(4)DEPC H2O；(5)EV70和CA24v陽(yáng)性質(zhì)控品為MS2載體假病毒；(6)EV70和CA24v陰性質(zhì)控品為生理鹽水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述急性出血性結(jié)膜炎核酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的 RT-PCR 反應(yīng)緩沖液中 Tris-HCl 為 50mmol/L、pH8. 0，MgCl2 為 8mmol/L，KC1 為 250mmol/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述急性出血性結(jié)膜炎核酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的 EV70PCR 擴(kuò)增特異正向引物序列是 5，-CAACAAGTACCTCATCCATTCAAAAG-3，(SEQ ID NO 1), 反向引物序列是 5，-GTAAACAATTCCATCTTCCTCCT-3，(SEQ ID NO :2)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述急性出血性結(jié)膜炎核酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的EV70 熒光探針序列是 5，-TTCTTCATCTGGACTTTGAACACCAGAGAACT-3，(SEQ ID NO :3)，探針的兩端 分別結(jié)合有熒光發(fā)生基團(tuán)FAM和熒光淬滅基團(tuán)BHQ1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述急性出血性結(jié)膜炎核酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的 CA24vPCR 擴(kuò)增特異正向引物序列是 5，-GAGTGCTTGCCCAGATTTTAG-3，(SEQ ID N0:4)，反向 引物序列是 5，-ATAACGGTGTCAATGGTCTCCTC-3，(SEQ ID NO :5)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述急性出血性結(jié)膜炎核酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的CA24v 熒光探針序列是5，-CGTGCGTCTGTTGAGAGACACCAAC-3，(SEQ ID NO :6)，探針的兩端分別結(jié) 合有熒光發(fā)生基團(tuán)HEX和熒光淬滅基團(tuán)BHQ1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述急性出血性結(jié)膜炎核酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的PCR 擴(kuò)增引物濃度為0. 2mmol/L，所述的探針濃度為0. lmmol/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述急性出血性結(jié)膜炎核酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的 RT-PCR反應(yīng)酶系中每人份試劑熱啟動(dòng)Taq酶的用量為5U、MMLV用量為10U、dNTPs為 lOmmol。
9.一種檢測(cè)急性出血性結(jié)膜炎核酸的檢測(cè)方法，其特征在于包括如下步驟(1)標(biāo)本前處理；(2)核酸提?。?3)根據(jù)權(quán)利要求1的試劑盒進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增及檢測(cè)a.試劑準(zhǔn)備按比例取相應(yīng)量的引物探針混合液、RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR反應(yīng)酶系充 分混勻后按30 u 1/管分裝成PCR反應(yīng)管，備用；b.加樣向PCR反應(yīng)管中，分別加入提取后的陰、陽(yáng)性質(zhì)控品、樣本RNA溶液20yl，蓋 緊管蓋，放入儀器樣品槽；c.PCR擴(kuò)增；(4)結(jié)果分析。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述急性出血性結(jié)膜炎核酸檢測(cè)方法，其其特征在于所述的PCR擴(kuò)增條件為50°C 15分鐘，95°C 15分鐘；94°C 15秒，55°C 45秒，40個(gè)循環(huán)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種與急性出血性結(jié)膜炎相關(guān)的腸道病毒70型(EV70)和柯薩奇A24型病毒變異株(CA24v)的檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法，本發(fā)明試劑盒包含RT-PCR反應(yīng)緩沖液、為PCR擴(kuò)增時(shí)必需的腸道病毒70型(EV70)和柯薩奇A24型病毒變異株(CA24v)特異性正反向引物和熒光探針混合液、RT-PCR反應(yīng)酶系、DEPC H2O、EV70和CA24v陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品。本發(fā)明結(jié)果可靠穩(wěn)定，操作簡(jiǎn)單，快速，能夠迅速檢測(cè)出由腸道病毒70型和柯薩奇A24型病毒變異株所引起的急性出血性結(jié)膜炎，從而做好早期防疫工作。
文檔編號(hào)C12Q1/70GK101864496SQ20101014574
公開日2010年10月20日 申請(qǐng)日期2010年4月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月12日
發(fā)明者何宇平, 何瓊, 張琳, 方筠, 曹敏, 王健, 田楨干, 章琪, 簡(jiǎn)大釗, 董瑞華, 陳華云, 高秀潔 申請(qǐng)人:中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司;中華人民共和國(guó)上海出入境檢驗(yàn)檢疫局