專利名稱：微生物制劑菌體的濃縮方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于應(yīng)用微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種水產(chǎn)養(yǎng)殖、畜牧養(yǎng)殖、污水凈化應(yīng)用的 微生物制劑菌體的濃縮方法。
背景技術(shù)：
微生物制劑由于具有無毒副作用，無殘留污染，不產(chǎn)生抗性等優(yōu)點(diǎn)，在水產(chǎn)養(yǎng)殖， 畜牧養(yǎng)殖及環(huán)境保護(hù)方面起著越來越重要的作用。隨著微生物制劑的普及和升溫，人們?yōu)?了降低運(yùn)輸儲(chǔ)藏成本和使用成本，提高制劑濃度，提高使用效果，對(duì)發(fā)酵所得菌體進(jìn)行了不 同方式和不同程度的濃縮。目前微生物制劑的濃縮方法主要有兩種一是物理方法，包括離心法和過濾法，這 種濃縮方法設(shè)備投入高，運(yùn)行成本也高；二是化學(xué)方法主要采用明礬、聚鋁、聚鐵等高分 子化合物作為絮凝劑，這些絮凝劑本身具有毒性，對(duì)微生物產(chǎn)品有毒害作用，同時(shí)對(duì)微生物 產(chǎn)品的使用對(duì)象及其環(huán)境也有不利影響。因此，針對(duì)微生物菌劑研制出一種高效經(jīng)濟(jì)，安全 無毒的濃縮方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員有待解決的難題之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)以上現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，提出一種微生物 制劑菌體的濃縮方法，簡(jiǎn)單易行，無毒高效，能將微生物菌液中的菌體濃縮20-60倍，細(xì)胞 得率可達(dá)95%以。本發(fā)明解決以上技術(shù)問題的技術(shù)方案是微生物制劑菌體的濃縮方法，按以下步驟進(jìn)行(1)將發(fā)酵好的微生物菌液裝入容器中；(2)稱取海藻酸鈉，用蒸餾水配制成20g/L 30g/L的海藻酸鈉溶液；(3)稱取羧甲基纖維素鈉，用蒸餾水配制成20g/L 30g/L的羧甲基纖維素鈉溶 液；(4)按照海藻酸鈉溶液微生物菌液=1 10 1 20的比例將步驟(2)所得海 藻酸鈉溶液緩慢加入步驟(1)的微生物菌液中，使海藻酸鈉在微生物菌液中的濃度為2g/ L 3g/L，攪拌靜置使菌體與海藻酸鈉粘合，得到菌體與海藻酸鈉粘合的微生物菌液；(5)按照羧甲基纖維素鈉溶液步驟(4)所得菌體與海藻酸鈉粘合的微生物菌液 =1 10 1 20的比例將步驟(3)所得羧甲基纖維素鈉溶液緩慢加入步驟(4)所得菌 體與海藻酸鈉粘合的微生物菌液中，使羧甲基纖維素鈉在微生物菌液中的濃度為2g/L 3g/L，攪拌靜置后，用虹吸管吸掉上部清液，收集沉淀即為濃縮菌體。這樣，本發(fā)明采用海藻酸鈉與羧甲基纖維素鈉為絮凝劑來濃縮微生物菌劑，簡(jiǎn)單 易行，無毒高效，細(xì)胞得率達(dá)到了 95%以，能將微生物菌液中的菌體濃縮20 60倍。作為本發(fā)明進(jìn)一步限定的技術(shù)方案步驟(4)中，海藻酸鈉溶液緩慢加入微生物菌液中后，先快速攪拌5 10分鐘，隨后緩慢攪拌30 60分鐘，隨后靜置1 2小時(shí)使菌體與海藻酸鈉粘合。步驟(5)中，羧甲基纖維素鈉溶液緩慢加入步驟(4)所得菌體與海藻酸鈉粘合的 微生物菌液中后，先快速攪拌5 10分鐘，隨后緩慢攪拌30 60分鐘，最后靜置24 36 小時(shí)，再用虹吸管吸掉上清液，收集沉淀即為濃縮菌體。步驟(1)中，容器為圓柱形容器。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是(1)成本低廉本發(fā)明中需要的設(shè)備投入很少，耗能少，運(yùn)行成 本低，原材料來源廣泛，成本低廉；(2)無毒無害，安全性高本發(fā)明中所用的海藻酸鈉與羧 甲基纖維素鈉都是安全無毒的食品添加劑，作為增稠劑，粘合劑廣泛的應(yīng)用于食品，醫(yī)藥等 行業(yè)；(3)濃縮效率高本發(fā)明的方法能將液體微生物菌劑濃縮20 60倍，濃縮回收率達(dá) 到95 %以上，具有高效的濃縮效果；(4)操作簡(jiǎn)便，易于大規(guī)模生產(chǎn)本發(fā)明操作簡(jiǎn)便，成 本低，克服了傳統(tǒng)的離心法和過濾法設(shè)備投資大，耗能高成本高的缺點(diǎn)，非常便于大規(guī)模生 產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例一光合細(xì)菌菌劑的濃縮將光合細(xì)菌菌劑成品100L倒入圓柱型容器中，在圓柱型容器中抽取IOmL菌液對(duì) 其進(jìn)行菌體濃度檢測(cè)，檢測(cè)方法按照NY527-2002《光合細(xì)菌菌劑》標(biāo)準(zhǔn)中的MPN5管法進(jìn)行； 稱取海藻酸鈉和羧甲基纖維素鈉，用蒸餾水分別單獨(dú)配制成20g/L溶液；先加入海藻酸鈉 溶液，按海藻酸鈉溶液微生物菌液=1 10的比例的將海藻酸鈉溶液緩慢加入光合細(xì)菌 微生物菌液中，先快速攪拌5分鐘，隨后緩慢攪拌30分鐘，靜置1小時(shí)使菌體與海藻酸鈉粘 合充分；再加入羧甲基纖維素鈉溶液，按羧甲基纖維素鈉溶液微生物菌液=1 10的比 例緩慢加入菌液中，先快速攪拌5分鐘，隨后緩慢攪拌30分鐘，隨后靜置24小時(shí)，用虹吸管 吸掉上清液，收集沉淀，約得到4. 6L的濃縮的光合細(xì)菌菌劑。吸取濃縮后的光合細(xì)菌菌劑 10mL，測(cè)定濃縮后菌體濃度。檢測(cè)結(jié)果如下表表1 實(shí)施例二枯草芽孢桿菌菌劑的濃縮將枯草芽孢桿菌菌劑成品IOOL倒入圓柱型容器中，在圓柱型容器中抽取IOmL菌 液對(duì)其進(jìn)行菌體濃度檢測(cè)，檢測(cè)方法按照NYT 1467-2007《飼料微生物添加劑-地衣芽孢 桿菌》標(biāo)準(zhǔn)中的方法進(jìn)行；稱取海藻酸鈉和羧甲基纖維素鈉，用蒸餾水分別單獨(dú)配制成25g/ L溶液；先加入海藻酸鈉溶液，按海藻酸鈉溶液微生物菌液=1 15的比例的將海藻酸鈉溶液緩慢加入光合細(xì)菌微生物菌液中，先快速攪拌8分鐘，隨后緩慢攪拌45分鐘，隨后靜 置1. 5小時(shí)使菌體與海藻酸鈉粘合充分；再加入羧甲基纖維素鈉溶液，按羧甲基纖維素鈉 溶液微生物菌液=1 20的比例緩慢加入菌液中，先快速攪拌10分鐘，隨后緩慢攪拌60 分鐘，隨后靜置30小時(shí)，用虹吸管吸掉上清液，收集沉淀，用虹吸管吸掉上清液，收集沉淀， 約得到4. 4L的濃縮的枯草芽孢桿菌菌劑。吸取濃縮后的枯草芽孢桿菌菌劑10mL，測(cè)定濃縮 后菌體濃度。檢測(cè)結(jié)果如下表
表 2 實(shí)施例三產(chǎn)朊假絲酵母菌菌劑的濃縮將產(chǎn)朊假絲酵母菌菌劑成品IOOL倒入圓柱型容器中，在圓柱型容器中抽取IOmL 菌液對(duì)其進(jìn)行菌體濃度檢測(cè)，檢測(cè)方法按照GB/T4789. 15-2003《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)霉 菌和酵母計(jì)數(shù)》標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行；稱取海藻酸鈉和羧甲基纖維素鈉，用蒸餾水分別單獨(dú)配制成30g/ L溶液；先加入海藻酸鈉溶液，按海藻酸鈉溶液微生物菌液=1 20的比例的將海藻酸 鈉溶液緩慢加入產(chǎn)朊假絲酵母菌微生物菌液中，先快速攪拌10分鐘，隨后緩慢攪拌60分 鐘，靜置2小時(shí)使菌體與海藻酸鈉粘合充分；再加入羧甲基纖維素鈉溶液，按羧甲基纖維素 鈉溶液微生物菌液=1 15的比例緩慢加入菌液中，先快速攪拌8分鐘，隨后緩慢攪拌 40分鐘，隨后靜置36小時(shí)，用虹吸管吸掉上清液，收集沉淀，約得到3. 2L的濃縮的產(chǎn)朊假絲 酵母菌菌劑。吸取濃縮后的產(chǎn)朊假絲酵母菌菌劑10mL，測(cè)定濃縮后菌體濃度。檢測(cè)結(jié)果如 下表表3 本發(fā)明還可以有其它實(shí)施方式，凡采用同等替換或等效變換形成的技術(shù)方案，均 落在本發(fā)明要求保護(hù)的范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
微生物制劑菌體的濃縮方法，其特征在于按以下步驟進(jìn)行(1)將發(fā)酵好的微生物菌液裝入容器中；(2)稱取海藻酸鈉，用蒸餾水配制成20g/L～30g/L的海藻酸鈉溶液；(3)稱取羧甲基纖維素鈉，用蒸餾水配制成20g/L～30g/L的羧甲基纖維素鈉溶液；(4)按照海藻酸鈉溶液∶微生物菌液＝1∶10～1∶20的比例將步驟(2)所得海藻酸鈉溶液緩慢加入步驟(1)的微生物菌液中，使海藻酸鈉在微生物菌液中的濃度為2g/L～3g/L，攪拌靜置使菌體與海藻酸鈉粘合，得到菌體與海藻酸鈉粘合的微生物菌液；(5)按照羧甲基纖維素鈉溶液步驟(4)所得菌體與海藻酸鈉粘合的微生物菌液＝1∶10～1∶20的比例將步驟(3)所得羧甲基纖維素鈉溶液緩慢加入步驟(4)所得菌體與海藻酸鈉粘合的微生物菌液中，使羧甲基纖維素鈉在微生物菌液中的濃度為2g/L～3g/L，攪拌靜置后，用虹吸管吸掉上部清液，收集沉淀即為濃縮菌體。
2.如權(quán)利要求1所述的微生物制劑菌體的濃縮方法，其特征在于所述步驟(4)中，海 藻酸鈉溶液緩慢加入微生物菌液中后，先快速攪拌5 10分鐘，隨后緩慢攪拌30 60分 鐘，隨后靜置1 2小時(shí)使菌體與海藻酸鈉粘合。
3.如權(quán)利要求1所述的微生物制劑菌體的濃縮方法，其特征在于所述步驟(5)中，羧 甲基纖維素鈉溶液緩慢加入步驟(4)所得菌體與海藻酸鈉粘合的微生物菌液中后，先快速 攪拌5 10分鐘，隨后緩慢攪拌30 60分鐘，最后靜置24 36小時(shí)，再用虹吸管吸掉上 清液，收集沉淀即為濃縮菌體。
4.如權(quán)利要求1所述的微生物制劑菌體的濃縮方法，其特征在于所述步驟(1)中，容 器為圓柱形容器。
全文摘要
本發(fā)明屬于應(yīng)用微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種微生物制劑菌體的濃縮方法，按以下步驟進(jìn)行用蒸餾水配制成20g/L～30g/L海藻酸鈉溶液；用蒸餾水配制成20g/L～30g/L甲基纖維素鈉；按照海藻酸鈉溶液∶微生物菌液＝1∶10的比例的將海藻酸鈉糊狀體緩慢加入微生物菌液中，使海藻酸鈉在菌液中濃度為2g/L～3g/L，攪拌靜置使菌體與海藻酸鈉粘合；按照羧甲基纖維素鈉溶液∶微生物菌液＝1∶10的比例的的將羧甲基纖維素鈉溶液緩慢加入微生物菌液中，使羧甲基纖維素鈉在菌液中濃度為2g/L～3g/L，攪拌靜置后，用虹吸管吸掉上清液，收集沉淀即為濃縮菌體。本發(fā)明簡(jiǎn)單易行，無毒高效，能將微生物菌液中的菌體濃縮20～60倍，細(xì)胞得率可達(dá)95％以。
文檔編號(hào)C12N1/00GK101914446SQ20101023308
公開日2010年12月15日 申請(qǐng)日期2010年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月22日
發(fā)明者孫義 申請(qǐng)人:領(lǐng)綠生物鎮(zhèn)江有限公司