專利名稱：一種細(xì)菌纖維素菌株的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種菌株，具體涉及一種細(xì)菌纖維素菌株 {Gluconacetobacter. Sp)的分離、誘變、鑒定及培養(yǎng)。
背景技術(shù)：
除了植物和動(dòng)物能夠合成纖維素外，若干細(xì)菌能以異養(yǎng)方式比植物更高效地產(chǎn)生 胞外纖維素。通常把微生物合成的纖維素稱為“生物纖維素(Bio-cellulose)”或“細(xì)菌纖 維素(Bacterial cellulose，簡(jiǎn)稱BC)”。細(xì)菌纖維素具有許多優(yōu)良的特性，如高純度，超細(xì)， 高結(jié)晶度，高持水能力，高強(qiáng)度，良好的生物可降解性以及合成過程可調(diào)控性等優(yōu)點(diǎn)。作為 一種新型的微生物合成材料，細(xì)菌纖維素已經(jīng)應(yīng)用于食品、造紙、醫(yī)藥等多個(gè)領(lǐng)域。然而，目前產(chǎn)細(xì)菌纖維素菌株的產(chǎn)量低，生產(chǎn)成本高，遠(yuǎn)不能滿足實(shí)際需求，尋求 一種穩(wěn)定、高產(chǎn)的細(xì)菌纖維素菌株是本領(lǐng)域技術(shù)人員所期望的。目前，人工誘變是獲得高產(chǎn)菌株的有效途徑。多年來，物理和化學(xué)誘變一直是工業(yè) 微生物育種行之有效的方法。其中物理誘變因其簡(jiǎn)單實(shí)用、效果明顯而得到廣泛應(yīng)用。近 年來，隨著高壓理論和技術(shù)的發(fā)展，高壓生物學(xué)的研究已經(jīng)深入到生物學(xué)的多個(gè)領(lǐng)域，高壓 誘變技術(shù)在微生物育種方面有了新的進(jìn)展。高翔等用220MPa高壓處理大腸桿菌TGl、DH5a 和HBlOl，得到了耐壓的突變菌株TG1P、DH5 α P和ΗΒ101Ρ，它們?cè)?20MPa高壓力下的存活 率提高了 2 3個(gè)數(shù)量級(jí)。Silva等首次觀察到在高壓下發(fā)生亞基解離和聚合而失活的 病毒(VSV)仍保持高免疫原性。王歲樓等利用紫外線和150MPa壓力誘變漆酶產(chǎn)生菌靈芝 (G. Iucidum Karst)，發(fā)現(xiàn)超高壓對(duì)菌絲形態(tài)和發(fā)酵特性有大幅度誘變作用。王華等研究發(fā) 現(xiàn)高壓對(duì)米曲霉的存活率、形態(tài)特征、蛋白酶及淀粉酶活性有明顯的影響；高壓處理后獲得 一株生長(zhǎng)速度快、孢子數(shù)量多、蛋白酶活力高的理想變異菌株HP300a，其成曲的主要指標(biāo)均 優(yōu)于對(duì)照株。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)目前報(bào)道的細(xì)菌纖維素菌株產(chǎn)量比較低、不穩(wěn)定的缺陷，本發(fā)明目的在于， 通過對(duì)細(xì)菌纖維素菌株的分離、高壓誘變方法獲得了一種高產(chǎn)的細(xì)菌纖維素新菌株M438。 該菌株其纖維素產(chǎn)量(濕膜)可達(dá)40g/100mL培養(yǎng)基，遠(yuǎn)高于目前報(bào)道的細(xì)菌產(chǎn)纖維素量 (30g/100mL 培養(yǎng)基)。為了實(shí)現(xiàn)上述任務(wù)，本發(fā)明的方法是通過以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)
一種細(xì)菌纖維素菌株，其特征在于，該細(xì)菌纖維素菌株命名為細(xì)菌纖維素菌株M438 {Gluconacetobacter. sp. M438)，在中國普通微生物菌種保藏中心的保藏號(hào)為CGMCC No.3917。上述細(xì)菌纖維素菌株M438的16S rRNA基因全序列(1，403bp, GenBank accession GU227424)如下
AGGGAATGGGGGCATGCTTACACATGCAAGTCGCACGAACCTTTCGGGGTTAGTGGCGGACGGGTGAGTAACGCGTAGGGATCTGTCCATGGGTGGGGGATAACTTTGGGAAACTGAAGCTAATACCGCATGACACCTGAGGGTCAAAG GCGCGAGTCGCCTGTGGAGGAACCTGCGTTCGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGATGATCGAT AGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAA TATTGGACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCAATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTTTTCGGATTGTAAAGCACTTTCA GCGGGGACGATGATGACGGTACCCGCAGAAGAAGCCCCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGG GCAAGCGTTGCTCGGAATGACTGGGCGTAAAGGGCGCGTAGGCGGTTGTTACAGTCAGATGTGAAATTCCCGGGCTT AACCTGGGGGCTGCATTTGATACGTGACGACTAGAGTGTGAGAGAGGGTTGTGGAATTCCCAGTGTAGAGGTGAAAT TCGTAGATATTGGGAAGAACACCGGTGGCGAAGGCGGCAACCTGGCTCATGACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGG GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGATGTGTGCTGGATGTTGGATGGCTTGGCCATTC AGTGTCGTAGTTAACGCGATAAGCACACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGG GCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAGGACTTGACATGCGGAGGC TGTGTCCAGAGATGGGCATTTCTCGCAAGAGACCTCCAGCACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGA GATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCTTTAGTTGCCAGCACGTCTGGGTGGGCACTCTAAAGGA ACTGCCGGTGACAAGCCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGTCCTGGGCTACACACGTG CTACAATGGCGGTGACAGTGGGAAGCCAGGCAGCGATGCCGAGCGGATCTCCAAAAGCCGTCTCAGTTCGGATTGCA CTCTGCAACTCGAGTGCATGAAGGTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGC CTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTGGTTTGACCTTAAGCCGGTGAGCGAACCGCAAGGACGCAGCCGA CCACGGTCGTTCCCACGGGGTG。 上述細(xì)菌纖維素菌株的制備方法，其特征在于，該方法包括下列步驟
從釀制的蕎麥醋醪中分離細(xì)菌纖維素產(chǎn)生菌J2，其分離方法是先讓蕎麥醋醪在富集 培養(yǎng)基上進(jìn)行富集長(zhǎng)膜，待細(xì)菌纖維素膜長(zhǎng)出后，用無菌取樣的方法取Ig纖維素膜，無菌 研缽研碎后加入到9mL滅菌生理鹽水中制成10 1菌懸液，然后逐級(jí)稀釋，取10 — 5、10 一6、 10 一 7三個(gè)稀釋度的菌懸液0. 2mL涂布到醋酸菌專用培養(yǎng)基上，30°C恒溫培養(yǎng)3 4d，挑取 長(zhǎng)勢(shì)良好，菌落飽滿均勻，且稀釋度適宜的平板的單菌落，分別接種于斜面培養(yǎng)基中，待長(zhǎng) 出豐厚的菌苔后，各挑取一環(huán)斜面菌種，分別接種于裝有IOmL基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基的試管中， 30°C恒溫培養(yǎng)5d，篩選出能夠產(chǎn)凝膠膜的菌株；將可以產(chǎn)生凝膠膜的菌株，在分離培養(yǎng)基 平板上進(jìn)行劃線分離，連續(xù)劃線兩次，鏡檢為菌株純培養(yǎng)物后，斜面保藏于4°C冰箱；
富集培養(yǎng)基主要成分為葡萄糖2%，酵母膏0. 5%，K2HPO4 0. 1%，MgSO4 · 7H20 :1%，乙 醇2%，制霉素:50mg/L ；
醋酸菌專用培養(yǎng)基主要成分為葡萄糖10%，酵母膏1. 0%，CaCO3 2. 0%，瓊脂1. 5%， ρΗ6· 8 ；
分離培養(yǎng)基和斜面保藏培養(yǎng)基主要成分為葡萄糖2%，酵母膏0. 5%，K2HPO4 0. 1%， MgSO4 · 7Η20 :1%，乙醇2%，瓊脂1. 7%，ρΗ 自然;
基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基主要成分為葡萄糖2%，酵母膏0. 5%，K2HPO4 0. 1%，MgSO4 · 7Η20 1%，乙醇2% ；
2)細(xì)菌纖維素菌株的高靜水壓誘變
取液體培養(yǎng)18 h 24h的纖維素膜產(chǎn)量最高且產(chǎn)量較穩(wěn)定的菌株培養(yǎng)液，加已滅菌 的液體培養(yǎng)基稀釋，將菌體濃度調(diào)整為IO7個(gè)/ml左右，制成菌懸液；取制備好的菌懸液 15mL在無菌條件下裝入鋁箔聚丙烯袋中密封，在壓力為250MPa、溫度25°C條件下高壓誘變15min ；得到細(xì)菌纖維素菌株M438，將細(xì)菌纖維素菌株M438轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基4°C保藏；
斜面培養(yǎng)基主要成分為葡萄糖2%，酵母膏0. 5%，K2HPO4 0. 1%，MgSO4 · 7H20 :1%，乙 醇2%，瓊脂1.7%；
液體培養(yǎng)基主要成分為葡萄糖2%，酵母膏0. 5%，K2HPO4 0. 1%，MgSO4 · 7H20 :1%，乙 醇2% ；
上述細(xì)菌纖維素菌株M438的培養(yǎng)方法是，將保藏的細(xì)菌纖維素菌株M438高壓誘變 菌株按29Γ4%的接種量(ν/ν)轉(zhuǎn)接入種子培養(yǎng)基中，于30°C，150rpm恒溫?fù)u床振蕩培養(yǎng) 18 24h得到新鮮種子液。再將M438新鮮種子液按照9%的接種量(ν/ν)轉(zhuǎn)接入裝有IOOmL發(fā) 酵培養(yǎng)基的250mL廣口發(fā)酵瓶中，于30°C靜置培養(yǎng)7d，纖維素產(chǎn)量(濕膜)可達(dá)40g/100mL。種子培養(yǎng)基的主要成分為葡萄糖7%，酵母膏1%，K2HPO4 0. 5%，MgSO4 ·7H20 1. 5%,乙醇2% ；
發(fā)酵培養(yǎng)基主要成分為碳源(葡萄糖蔗糖=2:1) :3%，酵母膏0. 5%，K2HPO4 0. 08%, MgSO4 · 7H20 1. 5%, FeSO4 :0· 4%, ZnSO4 :0· 03%，檸檬酸:0· 05%,乙醇:0· 7%。本發(fā)明得到的細(xì)菌纖維素菌株Μ438與目前報(bào)道菌株的相比，具有高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)特 性，結(jié)合形態(tài)學(xué)、生理生化和系統(tǒng)發(fā)育分析，Μ438是fe. hansenii的亞種，是一株新的高產(chǎn) 細(xì)菌纖維素菌株。該菌種于2010年6月10日保藏于中國普通微生物菌種保藏中心，簡(jiǎn)稱 CGMCC，并登記入冊(cè)，該生物菌種于2010年6月10日起保存30年。


圖1是用MEGA 4. 1做M438的系統(tǒng)發(fā)育分析圖。以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
具體實(shí)施例方式為了獲得高產(chǎn)、穩(wěn)定的細(xì)菌纖維素菌株，提高細(xì)菌纖維素的產(chǎn)量，本發(fā)明在前期研 究的基礎(chǔ)上，利用超高壓技術(shù)對(duì)篩選出的細(xì)菌纖維素菌株進(jìn)行誘變處理，獲得了高產(chǎn)細(xì)菌 纖維素菌株M438，其纖維素產(chǎn)量(濕膜)可達(dá)40g/100mL，而目前報(bào)道最高的細(xì)菌纖維素產(chǎn)量 不超過 30g/100mL。1)細(xì)菌纖維素菌株M438菌種的制備
本實(shí)施例涉及篩選的細(xì)菌纖維素菌株M438菌種，是從蕎麥醋醪中分離篩選、經(jīng)高靜水 壓誘變后得到的，具體包括下列步驟 (1)細(xì)菌纖維素菌株的分離與純化
從實(shí)驗(yàn)室釀制的蕎麥醋醪中分離細(xì)菌纖維素產(chǎn)生菌，其分離方法是先讓蕎麥醋醪在 富集培養(yǎng)基上進(jìn)行富集長(zhǎng)膜，待細(xì)菌纖維素膜長(zhǎng)出后，用無菌取樣的方法取Ig纖維素膜， 無菌研缽研碎后加入到9mL滅菌生理鹽水中制成10 1菌懸液，然后逐級(jí)稀釋，取10 一 5、 10一6、10 —7三個(gè)稀釋度的菌懸液0. 2mL涂布到醋酸菌專用培養(yǎng)基上，30°C恒溫培養(yǎng)3-4d，挑 取長(zhǎng)勢(shì)良好，菌落飽滿均勻，且稀釋度適宜的平板的單菌落，分別接種于斜面培養(yǎng)基中，待 長(zhǎng)出豐厚的菌苔后，各挑取一環(huán)斜面菌種，分別接種于裝有IOmL基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基的試管， 30°C恒溫培養(yǎng)5d，篩選出能夠產(chǎn)凝膠膜的菌株。將可以產(chǎn)生凝膠膜的菌株，在分離培養(yǎng)基平 板上進(jìn)行劃線分離，連續(xù)劃線兩次，鏡檢為菌株純培養(yǎng)物后，斜面保藏于4°C冰箱。
富集培養(yǎng)基主要成分葡萄糖2%，酵母膏0. 5%, K2HPO4 0. 1%，MgSO4 · 7H20 :1%，乙 醇2%，制霉素:50mg/L, pH自然；
醋酸菌專用培養(yǎng)基主要成分葡萄糖10%，酵母膏1.0%，CaCO3 2. 0%，瓊脂1.5%， ρΗ6· 8 ；
分離培養(yǎng)基、斜面保藏培養(yǎng)基主要成分葡萄糖2%，酵母膏0. 5%，K2HPO4 0. 1%， MgSO4 · 7Η20 :1%，乙醇2%，瓊脂1. 7%，pH 自然;
基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基主要成分葡萄糖2%，酵母膏0. 5%, K2HPO4 0. 1%，MgSO4 · 7Η20 :1%，乙 醇2%，pH自然。(2)細(xì)菌纖維素菌株的高靜水壓誘變
取液體培養(yǎng)18_24h的纖維素膜產(chǎn)量最高且產(chǎn)量較穩(wěn)定的菌株純培養(yǎng)液，加已滅菌的 液體培養(yǎng)基稀釋菌液，將菌體濃度調(diào)整為IO7個(gè)/ml左右，制成菌懸液。取制備好的菌懸液 15mL在無菌條件下裝入鋁箔聚丙烯袋中密封，在壓力為250MPa、時(shí)間15min、溫度25°C條件 下進(jìn)行高靜水壓誘變，得到細(xì)菌纖維素菌株M438，將細(xì)菌纖維素菌株M438轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng) 基4°C保藏。斜面培養(yǎng)基主要成分葡萄糖2%，酵母膏0. 5%，K2HPO4 0. 1%，MgSO4 · 7H20 1%，乙 醇2%，瓊脂1.7%，pH自然;
液體培養(yǎng)基主要成分葡萄糖2%，酵母膏0. 5%, K2HPO4 0. 1%,MgSO4 ·7Η20 :1%，乙醇2%， PH自然。2)細(xì)菌纖維素菌株Μ438的培養(yǎng)
將保藏的細(xì)菌纖維素菌株Μ438按29Γ4%的接種量(ν/ν)轉(zhuǎn)接入種子培養(yǎng)基中，于 300C，150rpm恒溫?fù)u床振蕩培養(yǎng)18 24h得到M438新鮮種子液。再將M438新鮮種子液按照 9%的接種量(ν/ν)轉(zhuǎn)接入裝有IOOmL發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL廣口發(fā)酵瓶中，于30°C靜置培養(yǎng) 7d，纖維素產(chǎn)量(濕膜)可達(dá)40g/100mL。種子培養(yǎng)基的主要成分為葡萄糖7%，酵母膏1%，K2HPO4 0. 5%，MgSO4 · 7H20 1. 5%,乙醇2%。發(fā)酵培養(yǎng)基主要成分為碳源(葡萄糖蔗糖=2:1) :3%，酵母膏0.5%，K2HPO4 0. 08%, MgSO4 · 7H20 1. 5%, FeSO4 :0· 4%, ZnSO4 :0· 03%，檸檬酸:0· 05%,乙醇:0· 7%。3)細(xì)菌纖維素高產(chǎn)菌株Μ438的鑒定 ①形態(tài)學(xué)鑒定
個(gè)體形態(tài)菌體細(xì)胞呈桿狀，單個(gè)或成對(duì)，菌體大小在(2. 08 4. 16) X (0. 83 0. 94) μ m之間，菌株革蘭氏染色為陰性。群體形態(tài)平板菌落大小在0. 8 1. 5mm之間，圓形，表面光滑，凸起，不透明，呈乳 白色。斜面菌苔為絲狀，表面光滑，呈乳白色，不透明。液體培養(yǎng)3d，液體表面有浮膜產(chǎn)生， 不混濁，無沉淀，無氣泡，培養(yǎng)液色澤未變。②生理、生化特征鑒定如下表所示。表1 菌株M438的生理生化特征
權(quán)利要求
一種細(xì)菌纖維素菌株，其特征在于，該細(xì)菌纖維素菌株命名為細(xì)菌纖維素菌株M438(Gluconacetobacter.sp.M438)，在中國普通微生物菌種保藏中心的保藏號(hào)為CGMCC No.3917。
2.如權(quán)利要求1所述的細(xì)菌纖維素菌株，其特征在于，所述的細(xì)菌纖維素菌株M438的 基因序列如下AGGGAATGGGGGCATGCTTACACATGCAAGTCGCACGAACCTTTCGGGGTTAGTGGCGGACGGGTGAGTAAC GCGTAGGGATCTGTCCATGGGTGGGGGATAACTTTGGGAAACTGAAGCTAATACCGCATGACACCTGAGGGTCAAAG GCGCGAGTCGCCTGTGGAGGAACCTGCGTTCGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGATGATCGAT AGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAA TATTGGACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCAATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTTTTCGGATTGTAAAGCACTTTCA GCGGGGACGATGATGACGGTACCCGCAGAAGAAGCCCCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGG GCAAGCGTTGCTCGGAATGACTGGGCGTAAAGGGCGCGTAGGCGGTTGTTACAGTCAGATGTGAAATTCCCGGGCTT AACCTGGGGGCTGCATTTGATACGTGACGACTAGAGTGTGAGAGAGGGTTGTGGAATTCCCAGTGTAGAGGTGAAAT TCGTAGATATTGGGAAGAACACCGGTGGCGAAGGCGGCAACCTGGCTCATGACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGG GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGATGTGTGCTGGATGTTGGATGGCTTGGCCATTC AGTGTCGTAGTTAACGCGATAAGCACACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGG GCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAGGACTTGACATGCGGAGGC TGTGTCCAGAGATGGGCATTTCTCGCAAGAGACCTCCAGCACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGA GATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCTTTAGTTGCCAGCACGTCTGGGTGGGCACTCTAAAGGA ACTGCCGGTGACAAGCCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGTCCTGGGCTACACACGTG CTACAATGGCGGTGACAGTGGGAAGCCAGGCAGCGATGCCGAGCGGATCTCCAAAAGCCGTCTCAGTTCGGATTGCA CTCTGCAACTCGAGTGCATGAAGGTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGC CTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTGGTTTGACCTTAAGCCGGTGAGCGAACCGCAAGGACGCAGCCGA CCACGGTCGTTCCCACGGGGTG。
3.權(quán)利要求1所述的細(xì)菌纖維素菌株的制備方法，其特征在于，該方法包括下列步驟 1)細(xì)菌纖維素菌株的分離與純化從釀制的蕎麥醋醪中分離細(xì)菌纖維素產(chǎn)生菌，其分離方法是先讓蕎麥醋醪在富集培 養(yǎng)基上進(jìn)行富集長(zhǎng)膜，待細(xì)菌纖維素膜長(zhǎng)出后，用無菌取樣的方法取Ig纖維素膜，無菌研 缽研碎后加入到9mL滅菌生理鹽水中制成10 1菌懸液，然后逐級(jí)稀釋，取10 5、10 —6、10 一 7三個(gè)稀釋度的菌懸液0. 2mL涂布到醋酸菌專用培養(yǎng)基上，30°C恒溫培養(yǎng)3 4d，挑取長(zhǎng)勢(shì) 良好，菌落飽滿均勻，且稀釋度適宜的平板的單菌落，分別接種于斜面培養(yǎng)基中，待長(zhǎng)出豐 厚的菌苔后，各挑取一環(huán)斜面菌種，分別接種于裝有IOmL基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基的試管中，30°C 恒溫培養(yǎng)5d，篩選出能夠產(chǎn)凝膠膜的菌株；將可以產(chǎn)生凝膠膜的菌株，在分離培養(yǎng)基平板 上進(jìn)行劃線分離，連續(xù)劃線兩次，鏡檢為菌株純培養(yǎng)物后，斜面保藏于4°C冰箱；富集培養(yǎng)基主要成分為葡萄糖2%，酵母膏0. 5%，K2HPO4 0. 1%，MgSO4 · 7H20 :1%，乙 醇2%，制霉素:50mg/L ；醋酸菌專用培養(yǎng)基主要成分為葡萄糖10%，酵母膏1. 0%，CaCO3 2. 0%，瓊脂1. 5% ； 分離培養(yǎng)基和斜面保藏培養(yǎng)基主要成分為葡萄糖2%，酵母膏0. 5%，K2HPO4 0. 1%， MgSO4 · 7H20 :1%，乙醇2%，瓊脂1. 7%，pH 自然;基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基主要成分為葡萄糖2%，酵母膏0. 5%，K2HPO4 0. 1%，MgSO4 · 7H20 1%，乙醇2% ；2)細(xì)菌纖維素菌株的高靜水壓誘變?nèi)∫后w培養(yǎng)18 h 24h的纖維素膜產(chǎn)量最高且產(chǎn)量較穩(wěn)定的菌株培養(yǎng)液，加已滅菌的 液體培養(yǎng)基稀釋，將菌體濃度調(diào)整為IO7個(gè)/ml左右，制成菌懸液，取制備好的菌懸液15mL 在無菌條件下裝入鋁箔聚丙烯袋中密封，在壓力為250MPa、溫度25°C條件下高靜水壓誘變 15min ；得到細(xì)菌纖維素菌株M438，將細(xì)菌纖維素菌株M438轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基4°C保藏；斜面培養(yǎng)基主要成分葡萄糖2%，酵母膏0. 5%，K2HPO4 0. 1%，MgSO4 · 7H20 :1%，乙醇 2%，瓊脂1. 7% ；液體培養(yǎng)基主要成分葡萄糖2%，酵母膏0. 5%, K2HPO4 0. 1%,MgSO4 ·7Η20 :1%，乙醇2%。
4.權(quán)利要求1所述的細(xì)菌纖維素菌株的培養(yǎng)方法，其特征在于，將保藏的細(xì)菌纖維素 菌株Μ438按29Γ4% ν/ν的接種量轉(zhuǎn)接入種子培養(yǎng)基中，于30°C，150rpm恒溫?fù)u床振蕩培 養(yǎng)18 24h得到M438新鮮種子液，再將M438新鮮種子液按照9% ν/ν的接種量轉(zhuǎn)接入裝有 IOOmL發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL廣口發(fā)酵瓶中，于30°C靜置培養(yǎng)7d，纖維素產(chǎn)量達(dá)40g/100mL ；種子培養(yǎng)基主要成分為葡萄糖:7%，酵母膏:1%，K2HPO4 0. 5%，MgSO4 · 7H20 1. 5%，乙 醇2%。發(fā)酵培養(yǎng)基主要成分為碳源3%，酵母膏0. 5%，K2HPO4 0. 08%, MgSO4 · 7H20 1. 5%， FeSO4 0. 4%, ZnSO4 0. 03%，檸檬酸0· 05%,乙醇0· Tl。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述的碳源的質(zhì)量比組成為葡萄糖蔗糖 =2:1。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新的細(xì)菌纖維素菌株，該細(xì)菌纖維素菌株命名為細(xì)菌纖維素菌株M438(Gluconacetobacter.sp.M438)，在中國普通微生物菌種保藏中心的保藏號(hào)為CGMCCNo.3917。該菌株由蕎麥醋醪中分離篩選、高壓誘變獲得，經(jīng)鑒定是Ga.hansenii的亞種，是一株新的細(xì)菌纖維素菌株，其纖維素產(chǎn)量可高達(dá)40g/100mL培養(yǎng)基。具有高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)特性，該菌種于2010年6月10日保藏于中國普通微生物菌種保藏中心。
文檔編號(hào)C12R1/01GK101993847SQ20101051594
公開日2011年3月30日 申請(qǐng)日期2010年10月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月22日
發(fā)明者李志西, 杜雙奎, 楊甲平, 林德彗, 葛含靜 申請(qǐng)人:西北農(nóng)林科技大學(xué)