專利名稱：一種酶羥化3β-膽固醇乙酸酯制備7β-羥基-3β膽固醇乙酸酯的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備7β-羥基-3β膽固醇乙酸酯的方法，尤其涉及了一種酶輕 化3 β -膽固醇乙酸酯制備7 β -羥基-3 β膽固醇乙酸酯的方法。
背景技術(shù)：
維生素D，是固醇類衍生物，在人體內(nèi)的主要作用是促進(jìn)骨質(zhì)鈣化，調(diào)節(jié)鈣、磷代謝 及細(xì)胞生長(zhǎng)分化，還是一種良好的選擇性免疫調(diào)節(jié)劑。其中又以活性維生素D3的生理作用 最強(qiáng)，圖(III)所示的為維生素D3中的一種。
權(quán)利要求
1. 一種酶羥化3β-膽固醇乙酸酯制備7β-羥基-3β膽固醇乙酸酯的方法，其特征在 于，包括下列步驟步驟a:將化合物3 β-膽固醇乙酸酯(I)溶解于助溶劑中，然后將溶解后的3β-膽固 醇乙酸酯(I)溶液投放到緩沖溶液中，加入酶制劑和雙氧水溶液，調(diào)節(jié)ρΗ值于6 10之 間，于搖床中或者動(dòng)力攪拌裝置中充分?jǐn)嚢璺磻?yīng)，控制反應(yīng)溫度為15 50°C，反應(yīng)時(shí)間為 0.5-9h ；步驟b 采用TLC硅膠板或高效液相色譜對(duì)反應(yīng)過(guò)程進(jìn)行跟蹤監(jiān)測(cè)，直至反應(yīng)進(jìn)行完畢；步驟c 反應(yīng)完畢后，用有機(jī)溶劑萃取反應(yīng)液，然后減壓除去有機(jī)溶劑，得到化合物 7β-羥基-3β-膽固醇乙酸酯(II)的粗品； 上述酶制劑為未經(jīng)純化的游離酶粉末； 反應(yīng)方程式為
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酶羥化3β -膽固醇乙酸酯制備7 β -輕基-3 β膽固醇 乙酸酯的方法，其特征在于所述的步驟a中的攪拌轉(zhuǎn)速控制在50-200r/min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酶羥化3β -膽固醇乙酸酯制備7 β -輕基-3 β膽固醇 乙酸酯的方法，其特征在于所述的酶制劑為細(xì)胞色素Ρ450單加氧酶、細(xì)胞色素Ρ450羥化 酶、秀麗隱桿線蟲(chóng)單加氧酶中的任何一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酶羥化3β -膽固醇乙酸酯制備7 β -輕基-3 β膽固醇 乙酸酯的方法，其特征在于所述的步驟a中雙氧水溶液的濃度為1 100mM。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酶羥化3β-膽固醇乙酸酯制備7β-羥基-3β膽固醇乙 酸酯的方法，其特征在于所述的步驟b中的跟蹤監(jiān)測(cè)采用TLC硅膠板跟蹤監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)度， 使用乙酸乙酯與石油醚的混合試劑作為展開(kāi)劑，通過(guò)監(jiān)測(cè)反應(yīng)中新產(chǎn)生的點(diǎn)的濃度和剩下 的點(diǎn)的濃度來(lái)判斷反應(yīng)終點(diǎn)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酶羥化3β -膽固醇乙酸酯制備7 β -輕基-3 β膽固醇 乙酸酯的方法，其特征在于所述的步驟b中的跟蹤監(jiān)測(cè)采用高效液相色譜跟蹤監(jiān)測(cè)反應(yīng) 進(jìn)度，通過(guò)監(jiān)測(cè)液相色譜中化合物7 β -羥基-3 β -膽固醇乙酸酯的形成和化合物3 β -膽 固醇乙酸酯(I)的消失來(lái)判斷反應(yīng)終點(diǎn)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酶羥化3β -膽固醇乙酸酯制備7 β -輕基-3 β膽固醇 乙酸酯的方法，其特征在于所述的步驟c中的有機(jī)溶劑為乙醚、甲苯、氯苯、二氯甲烷、乙 酸乙酯、異丙醚、正己烷、甲酸乙酯、環(huán)己烷中的任何一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酶羥化3β -膽固醇乙酸酯制備7 β -輕基-3 β膽固醇乙酸酯的方法，其特征在于所述的助溶劑為叔丁醇、乙醇、甲醇、異丙醇、丙酮、丁酮中的任 何一種，緩沖溶液為2 15mM，pH = 6. 0 10. 0的Tris鹽酸緩沖溶液或2 15mM，pH = 6. 8 10. 0的PBS磷酸緩沖溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或8所述的一種酶羥化3β -膽固醇乙酸酯制備7 β -羥基-3 β膽 固醇乙酸酯的方法，其特征在于所述的助溶劑與緩沖溶液的體積比為1 20-1 5。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酶羥化3β-膽固醇乙酸酯制備7 β-羥基-3 β膽固醇 乙酸酯的方法，其特征在于所述的化合物3β-膽固醇乙酸酯⑴與酶制劑的質(zhì)量之比為 1 0. 001 0. 1。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種制備7β-羥基-3β膽固醇乙酸酯的方法，尤其涉及了一種酶羥化3β-膽固醇乙酸酯制備7β-羥基-3β膽固醇乙酸酯的方法，包括下列步驟將化合物3β-膽固醇乙酸酯溶解于助溶劑中，將溶解后的3β-膽固醇乙酸酯溶液投放到緩沖溶液中，加入酶制劑和雙氧水溶液，調(diào)節(jié)pH值6～10，充分?jǐn)嚢璺磻?yīng)，反應(yīng)溫度為15～50℃，反應(yīng)時(shí)間為0.5-9h；采用TLC硅膠板或高效液相色譜對(duì)反應(yīng)過(guò)程進(jìn)行跟蹤監(jiān)測(cè)，直至反應(yīng)進(jìn)行完畢；用有機(jī)溶劑萃取反應(yīng)液，減壓除去有機(jī)溶劑，得化合物7β-羥基-3β-膽固醇乙酸酯的粗品。本發(fā)明反應(yīng)條件溫和易控，合成操作比較簡(jiǎn)單，成本低廉，產(chǎn)率高，革除了高毒性化學(xué)試劑，對(duì)環(huán)境友好。
文檔編號(hào)C12P33/06GK102002518SQ20101052350
公開(kāi)日2011年4月6日 申請(qǐng)日期2010年10月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月28日
發(fā)明者于洪巍, 徐紅娜, 王博 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)