專利名稱：一種乳制品中阪崎腸桿菌的快速增菌劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及檢驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種乳制品中阪崎腸桿菌的快速增菌劑及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
阪崎腸桿菌QEnterobacter sakazakii)自從19 年被報(bào)道可引起嬰兒敗血癥到 1980年以前，被認(rèn)為是非典型的產(chǎn)黃色素的陰溝腸桿菌。1980年，F(xiàn)ARMER和他的同事根據(jù)其DNA和生理生化特征，將其正式更名為阪崎腸桿菌，歸類為腸桿菌屬腸桿菌科的一個(gè)新種。近年來(lái)，食品安全危象層出不窮，阪崎腸桿菌的致病性使其在乳制品細(xì)菌污染事件中最受矚目。自1961年Uimeny和Franklin首次報(bào)道了新生兒腦膜炎之后，隨后在全球范圍內(nèi)相繼報(bào)道了一系列新生兒阪崎腸桿菌感染事件，惠氏嬰兒配方奶粉、德國(guó)“美寶樂(lè)”、 美國(guó)美贊臣、新西蘭恒天然奶粉事件等。阪崎腸桿菌可能引起嚴(yán)重的新生兒腦膜炎、小腸結(jié)腸炎和菌血癥，并且可引起神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥和死亡，該菌感染引起的死亡率高達(dá)50%以上， 2004年FA0/WH0在制定嬰幼兒配方奶粉標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，經(jīng)過(guò)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估后，將阪崎腸桿菌與沙門氏菌列為嬰幼兒配方奶粉的A類致病菌。為了有效控制病原的發(fā)生和擴(kuò)散，準(zhǔn)確及時(shí)的檢測(cè)手段是預(yù)防控制阪崎腸桿菌傳播的關(guān)鍵。目前國(guó)內(nèi)國(guó)際上檢測(cè)乳制品阪崎腸桿菌都采用了預(yù)增菌、增菌、分離純化、鑒定4 個(gè)步驟，這樣下來(lái)一個(gè)樣品要4-7天才能出檢測(cè)結(jié)果，耗費(fèi)了大量的時(shí)間，而且需要檢測(cè)人員準(zhǔn)備和清洗、滅菌很多實(shí)驗(yàn)器皿，費(fèi)時(shí)又費(fèi)力。近年來(lái)，快速檢測(cè)方法中的PCR方法、金標(biāo)試紙法、酶聯(lián)免疫法和特異性的顯色生化鑒定技術(shù)等快速檢測(cè)方法，已被應(yīng)用到食品安全檢測(cè)中來(lái)，使得阪崎腸桿菌檢測(cè)技術(shù)有了很大的發(fā)展，然而使用這些快速檢測(cè)技術(shù)必須經(jīng)過(guò)長(zhǎng)達(dá)2天的前增菌、增菌培養(yǎng)階段，操作繁瑣、限制了這些技術(shù)的推廣和應(yīng)用。因此，研究開發(fā)能快速實(shí)現(xiàn)阪崎腸桿菌選擇性增菌的培養(yǎng)基具有十分重要的意義和應(yīng)用價(jià)值。目前用來(lái)預(yù)增菌阪崎腸桿菌主要是無(wú)菌水和無(wú)菌緩沖蛋白胨水，之后再接種到腸道菌增菌肉湯、 改良月桂基硫酸鹽胰酪蛋白肉湯-萬(wàn)古霉素中進(jìn)行選擇性增菌，用了 48小時(shí)的時(shí)間完成阪崎腸桿菌的選擇性增菌，這樣才能夠?qū)嵱每焖俚臋z測(cè)方法。申請(qǐng)?zhí)枮?00910037189. 0的中國(guó)專利申請(qǐng)公開了一種富集阪崎腸桿菌的試劑及其制備方法；申請(qǐng)?zhí)枮?01010165329. 5的中國(guó)專利申請(qǐng)公開了一種快速檢測(cè)篩選阪崎腸桿菌的方法，上述兩個(gè)發(fā)明專利申請(qǐng)都是在樣品中加入免疫磁珠與樣品中的阪崎腸桿菌發(fā)生特異性結(jié)合以達(dá)到富集的目的，進(jìn)而可以快速檢測(cè)。兩個(gè)發(fā)明均沒(méi)有涉及到對(duì)樣品中阪崎腸桿菌的增菌培養(yǎng)，而當(dāng)樣品中阪崎腸桿菌污染量很少時(shí)很容易導(dǎo)致陰性的檢測(cè)結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于根據(jù)現(xiàn)有的阪崎腸桿菌檢測(cè)中存在的當(dāng)阪崎腸桿菌污染量很CN 102154161 A
說(shuō)明書
2/7頁(yè) 少時(shí)難以檢測(cè)、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，步驟繁瑣等問(wèn)題，提供一種快速、定向、簡(jiǎn)便檢測(cè)阪崎腸桿菌増菌劑。本發(fā)明另一目的在于提供上述增菌劑的制備方法。本發(fā)明還有一個(gè)目的在于提供上述增菌劑的應(yīng)用。本發(fā)明上述目的通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)
一種乳制品中阪崎腸桿菌的快速增菌劑，其組分為低聚己糖、蛋白胨、膽鹽、SDS、丙酮酸鈉和水。上述増菌劑中，所述低聚己糖和蛋白胨可以彌補(bǔ)檢測(cè)樣本被稀釋后中營(yíng)養(yǎng)的不足，可以作為阪崎腸桿菌生長(zhǎng)需要的碳源、氮源的補(bǔ)充。膽鹽和SDS可以有效抑制雜菌，特別是革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)。作為一種優(yōu)選方案，本發(fā)明乳制品中阪崎腸桿菌的快速增菌劑包括如下組分低聚己糖2 10g，蛋白胨2 8g，膽鹽廣5g，SDS0. 05 0. 5g，丙酮酸鈉廣2. 5g，水900mL。更進(jìn)一步地，上述增菌劑中，所述低聚己糖為低聚葡萄糖、低聚半乳糖或低聚果糖。更進(jìn)一步地，上述增菌劑中，所述蛋白胨為胰蛋白胨、酪蛋白胨、植物蛋白胨或多聚蛋白胨。本發(fā)明乳制品中阪崎腸桿菌的快速增菌劑中，所述乳制品可以是消毒牛乳、酸牛乳、煉乳、乳粉、奶油、奶酪或乳清粉。本發(fā)明乳制品中阪崎腸桿菌的快速增菌劑的制備方法包括如下步驟
(1)將低聚己糖、蛋白胨、膽鹽、SDS和丙酮酸加入到900mL水中混勻；
(2)滅菌。作為一種優(yōu)選方案，上述制備方法中，步驟(2)中所述滅菌的溫度為115°C，滅菌時(shí)間為20min。本發(fā)明乳制品中阪崎腸桿菌的快速增菌劑可在常溫下保存1天，使用前應(yīng)預(yù)熱至 44 "C。本發(fā)明乳制品中阪崎腸桿菌的快速增菌劑可廣泛應(yīng)用于阪崎腸桿菌的分離或鑒定中。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果
(1)本發(fā)明從微生物生理生化角度出發(fā)，利用阪崎腸桿菌的生理生化特征，實(shí)現(xiàn)了對(duì)阪崎腸桿菌的定向選擇增菌，通過(guò)結(jié)合使用阪崎腸桿菌顯色生化快速檢測(cè)方法，提高了檢測(cè)效率；
(2)本發(fā)明通過(guò)阪崎腸桿菌的快速增菌劑對(duì)待檢樣品進(jìn)行培養(yǎng)，可在4飛h實(shí)現(xiàn)阪崎腸桿菌的快速選擇性增菌，增菌液可以直接進(jìn)行分離純化培養(yǎng)，并進(jìn)行快速檢測(cè)或鑒定；
(3)將預(yù)增菌和增菌合二為一，將時(shí)長(zhǎng)2天的預(yù)增菌和增菌步驟直接變成4飛h的選擇性增菌。本發(fā)明所建立的一套系統(tǒng)的阪崎腸桿菌檢測(cè)方法，可對(duì)乳品和乳制品中的阪崎腸桿菌進(jìn)行準(zhǔn)確、即使的檢測(cè)和鑒定，為微生物可素檢測(cè)提供了新的途徑，并且不需要昂貴的檢測(cè)儀器和設(shè)備，不需要太多的人力成本就可以完成阪崎腸桿菌的檢測(cè)，有利于向一般的乳品廠和基層的檢驗(yàn)單位推行。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步解釋本發(fā)明，但實(shí)施例并不對(duì)本發(fā)明做任何形式的限定。實(shí)施例1増菌劑的制備
稱取低聚葡萄糖2g，胰蛋白胨2g，膽鹽5g，SDS :0. 5g，丙酮酸鈉2. 5g，加入900mL蒸餾水或去離子水，混勻后，115°C滅菌20min，常溫可存放1天。使用時(shí)預(yù)熱至44°C。實(shí)施例2増菌劑制備
稱取低聚果糖:10g,酪蛋白胨:8g,膽鹽:lg, SDS :0. 5g，丙酮酸鈉Ig,加入900mL蒸餾水或去離子水，混勻后，每IOOmL分裝于一個(gè)容量為300mL錐形瓶中，115°C滅菌20min，常溫可存放1天。使用時(shí)預(yù)熱至44°C。實(shí)施例3
稱取低聚半乳糖2g，植物蛋白胨2g，膽鹽:5g, SDS :0. 5g，丙酮酸鈉2. 5g，加入900mL 蒸餾水或去離子水，混勻后，添加IOOg奶粉樣品充分溶解，加入到錐形瓶中，沸水浴20min， 冷卻恒溫至44°C備用。平行取以上4份增菌液，一瓶作為空白對(duì)照，其余瓶分別加入阪崎腸桿菌 (ATCC513^)、腸炎沙門氏菌39111、鼠傷寒沙門氏菌50115、銅綠假單胞菌ATCC9027、大腸埃希氏菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌CMCC (B)沈003、糞腸球菌ATC(^9122、蠟樣芽孢桿菌CMCC63303、陰溝腸桿菌和變形桿菌(兩個(gè)為本實(shí)驗(yàn)室分離，經(jīng)過(guò)API鑒定)，44°C培養(yǎng)液4飛h。各吸取ImL增菌液加入到ImL無(wú)菌平皿內(nèi)，倒入15mL營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng) 4 士池，觀察并記錄平皿中菌落數(shù)量。結(jié)果分析營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板對(duì)人工污染樣品增菌后的檢測(cè)結(jié)果見表1。糞腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、蠟樣芽孢桿菌在經(jīng)過(guò)增菌培養(yǎng)后，NA平板上少量生長(zhǎng)或無(wú)生長(zhǎng)，阪崎腸桿菌數(shù)量顯著增高，腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、大腸桿菌、陰溝腸桿菌在經(jīng)過(guò)增菌培養(yǎng)后數(shù)量有所增加，但是不形成生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)。表1各種菌經(jīng)過(guò)增菌后在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上檢測(cè)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種乳制品中阪崎腸桿菌的快速增菌劑，其特征在于該増菌劑的組分為低聚己糖、 蛋白胨、膽鹽、SDS、丙酮酸鈉和水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳制品中阪崎腸桿菌的快速增菌劑，其特征在于所述增菌劑包括如下組分低聚己糖2 10g，蛋白胨2、，膽鹽1~5g，SDS 0. 05 0. 5g，丙酮酸鈉1~2. 5g，水 900mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳制品中阪崎腸桿菌的快速增菌劑，其特征在于所述低聚己糖為低聚葡萄糖、低聚半乳糖或低聚果糖。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳制品中阪崎腸桿菌的快速增菌劑，其特征在于所述蛋白胨為胰蛋白胨、酪蛋白胨、植物蛋白胨或多聚蛋白胨。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳制品中阪崎腸桿菌的快速增菌劑，其特征在于所述乳制品為消毒牛乳、酸牛乳、煉乳、乳粉、奶油、奶酪或乳清粉。
6.權(quán)利要求廣5中任意一條權(quán)利要求所述乳制品中阪崎腸桿菌的快速增菌劑的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)將低聚己糖、蛋白胨、膽鹽、SDS和丙酮酸加入到900mL水中混勻；(2)滅菌。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述乳制品中阪崎腸桿菌的快速增菌劑的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述滅菌的溫度為115°C，滅菌時(shí)間為20min。
8.權(quán)利要求廣5中任意一條權(quán)利要求所述乳制品中阪崎腸桿菌的快速增菌劑在阪崎腸桿菌的分離或鑒定中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種乳制品中阪崎腸桿菌的快速增菌劑及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明快速增菌劑中的組分有低聚己糖、蛋白胨、膽鹽、SDS、丙酮酸鈉和水。本發(fā)明增菌劑可以代替目前通用的阪崎腸桿菌兩步增菌法，達(dá)到快速增菌的目的，直接用于進(jìn)行阪崎腸桿菌的分離鑒定。
文檔編號(hào)C12Q1/02GK102154161SQ201010613330
公開日2011年8月17日 申請(qǐng)日期2010年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月30日
發(fā)明者盧新, 梁锏文, 陳娟麗 申請(qǐng)人:廣州綠洲生化科技有限公司