專利名稱：甘蔗b家族蔗糖磷酸合成酶基因及其編碼蛋白序列的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種植物體內控制蔗糖合成的關鍵酶基因及其編碼蛋白的序列。
背景技術：
蔗糖磷酸合成酶(以下簡稱SPQ是高等植物體內控制蔗糖合成的關鍵酶，植物體內蔗糖的積累與SPS活性正相關，此外，SPS還參與植物的生長和產量形成，并在植物抗逆性，如抗寒、抗旱和耐鹽過程中起重要作用。轉SPS基因的研究在20世紀90年代初首先在番茄上進行，將玉米SPS基因導入番茄中，轉基因番茄葉片中SPS活性增加了 6倍，葉片中淀粉含量減少而蔗糖含量增加。之后，在多種植物上進行了轉SPS基因的研究。將玉米的SPS基因轉入水稻中，轉基因水稻的 SPS活性是未轉基因水稻的3倍，使轉基因水稻的株高明顯比未轉基因的高。轉擬南芥SPS 基因的煙草莖內蔗糖含量增加，且由于節(jié)間增長和莖徑增粗，轉基因煙草的莖重明顯增力口。 轉玉米SPS基因的馬鈴薯葉片中的SPS活性是對照植株的四倍，轉基因植株地上部分和地下部分的干重也分別增加15%和20%，表明葉片中蔗糖的合成有助于促進植株的生長。導入玉米SPS基因的番茄植株葉片的SPS活性顯著提高，葉片分配向蔗糖的碳同化物提高了 50%，轉基因植株比對照的果實個數增加1.5倍，果實成熟提前，總干重提高32%。轉玉米 SPS基因的煙草葉片中的SPS超量表達，使蔗糖合成和碳吸收能力提高，有助于整個植株的生長和發(fā)育，提高開花數目，故轉基因煙草提前開花，并且開花數目比野生型的煙草多。轉擬南芥A家族SPS基因(AtSPSA)的楊樹的木質部纖維長度增加，葉片和莖組織細胞內蔗糖含量增加，春季葉片衰老減緩而萌芽提前。表明SPS基因參與調控白楊的發(fā)育過程。此外， 轉SPS基因還能提高棉花品質。以上轉基因研究表明，將SPS基因導入作物體內，是提高作物產量和品質、增強作物抗逆性的有效途徑。甘蔗是高光合效率C4作物，它的蔗糖含量是所有植物中是最高的，表明其控制蔗糖合成的關鍵酶-SPS的作用效率也是非常高效的。用甘蔗SPS基因改良其它作物品種或通過改變甘蔗SPS表達調控途徑進一步提高甘蔗蔗糖含量和產量具有重要意義。Langenkamper等對高等植物基因組和已知的SPS基因的全長序列和其保守序列進行生物信息學分析后把SPS基因分為A、B、C三個家族。但是，Castleden等之后還對小麥等單子葉植物的SPS基因進行研究后認為，雙子葉植物中的SPS基因至少有A、B、C三個家族，而禾本科的單子葉植物中的SPS基因則可分為五個家族，分別為A、B、C、DIII和DIV。 且不同植物中SPS基因的數量不同，柑橘基因組中有三個SPS基因，分別屬于A、B、C三個家族；擬南芥基因組中有四個SPS基因，其中兩個屬于A家族，另外兩個分別屬于B、C家族。 水稻基因組中有五個SPS基因，分別屬于五個家族。而玉米基因組中至少有七個SPS基因， 其中A、C、DIII家族各有一個，而B、DIV家族各有兩個。甘蔗屬于禾本科的單子葉植物，所以甘蔗基因組中至少有5個分別屬于5個不同家族的SPS基因。但是，目前甘蔗中只克隆了一個SPS基因的完整CDNA序列，且沒有進一步研究的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是在對所有全長序列的植物SPS基因進行進化分析的基礎上，研究克隆出甘蔗B家族的SPS基因(SOSPSB)全長cDNA序列，為進一步研究甘蔗SPS基因的功能及應用甘蔗SPS基因改良作物品種打下堅實基礎。本發(fā)明所釆取的技術方案如下本發(fā)明在對所有全長序列的植物SPS基因進行進化分析的基礎上，比對植物 B家族SPS基因的cDNA序列，并設計擴增kSPSB基因核心片段的引物；提取甘蔗幼嫩葉片總RNA，并經反轉錄，用常規(guī)PCR法擴增kSPSB基因核心片段；再通過RACE (Rapid Amplification ofcDNA ends, cDNA末端快速擴增)技術克隆到甘蔗蔗糖磷酸合成酶基因(SofSPSB)的全長cDNA序列，總長:3481bp ；經VectorNTI軟件分析，該序列的ORF(Open Reading Frame，幵放閱讀框)為3222bp，編碼含1074個氨基酸殘基的蛋白質。起始密碼子 (ATG)位于轉錄起始位點后56bp處，終止密碼子(TAA)后還有一段204bp的非編碼序列，并帶有真核生物典型的polyA尾巴。甘蔗B家族蔗糖磷酸合成酶基因(kfSPSB)，它具有序列表中SEQID NO. 1的DNA 序列，且它的編碼區(qū)從第56位核苷酸到3277位核苷酸。以下是本發(fā)明所獲得的甘蔗SofSPSB基因的全長cDNA序列 atagagtaccgccggccgggcgcgcgggagaggagggtctcgcggggaggatccg ^t^ gccgggaacga gtggatcaatgggtacctggaggcgatcctcgacagccgcgcctcggcggggggagggggaggaggaggcggcggcg gggaccccaggtcgccgacgaaggcggcgagcccccgcggcccgcacatgaacttcaacccctcgcactacttcgtc gaggaggtggtcaagggcgtcgacgagagcgacctccaccggacgtggatcaaggtcgtcgctacacgcaacgcccg cgagcgcagcaccaggctcgagaacatgtgctggcggatctggcacctcgcgcgcaagaagaaacagctggagctgg agggcatccagagaatctcagcacgcaggaaggaacaggagcaggtgcgccgtgaggcgacggaggacctggccgag gatctgtcagagggcgagaagggggacaccctcggtgagcttgcgccggttgagacggccaagaagaagttccagag gaacttctctgaccttaccgtctggtctgacgacaataaggagaagaagctttacattgtgctcatcagtgtgcatg gtcttgttcgtggcgaaaacatggaactaggtcgtgattctgacaccggtggccaggtgaaatatgtcgtcgaactt gcaagagcgatgtcaatgatgcctggagtgtacagggtggacctcttcactcgtcaagtgtcatctcctgacgtgga ctggagttatggtgagccaaccgagatgttatgctccggttccaatgatggagaggggatgggtgagagtgctggag cctacattgtgcgcataccgtgtgggccacgggataaatacctcaagaaagaagcactgtggccttacctccaagaa tttgtcgatggagctctggcgcatatcctgaacatgtccaaggctctgggagagcaggttggaaatgggaggccagt actgccttatgtgatacatggacactatgccgatgctggagatgttgctgctctcctttctggtgcgctgaatgttc ccatggtgctcactggtcactcacttgggaggaacaagctggagcaactgctgaagcaagggcgcatgtccaaggag gagatagattcaacctacaagatcatgaggcgtatcgagggtgaggagctggccctcgatgcgtcagagcttgtcat cacgagcacaaggcaggagattgatgaacagtggggactgtacgatggatttgacgtcaagcttgagaaagtgttga gggcccgggcgaggcgtggggttagctgtcatggtcgtttcatgcctaggatggtggtgattcctccaggaatggac ttcagcaatgttgtggttcctgaagacattgatggggatggtgacagcaaagatgatatcgttggtttggagggtgc ctcacccaagtcaaggcccccaatttgggctgaggtgatgcggttcctaaccaatcctcacaagccgatgatcctcg cgttgtcaaggccagacccgaagaagaacatcactaccctcgtcaaagcgtttggagagtgccgcccactcagggaa cttgcaaaccttactctgatcatggggaacagagatgacatcgacgatatgtctgctgggaatgccagtgtcctcac
5cacagttctgaagctgattgacaagtatgatctgtatggaagtgtggcgttccctaagcatcacaaccaggctgatg tcccggagatctaccgcctcgcggccaaaatgaagggcgtcttcatcaaccctgctctcgttgagccgttcggtctc acccttatcgaggctgcggcacacggacttccaatagtcgctaccaagaatggtggtccagtcgacattacaactgc actgaacaatggactgctcgttgacccacacgaccagaacgccatcgctgatgcactgctgaagcttgtagcagaca agaacctgtggcaggaatgccggagaaacgggttgcgcaacatccacctctactcatggccggagcactgccgcact tacctcaccagggtggctgggtgccggttaaggaacccgaggtggctgaaggacacaccggcagatgccggagctga tgaggaggagttcctggaggattccatggacgctcaggacctgtcactccgtctgtccatcgacggtgagaagagct cgctgaacactaacgacccactgtcgttggacccgcaggatcaggtgcagaagatcatgaacaagatcaagcagtcg tccgcgcttccgccgtccatgtcctcggtcggagacggtgccaagaatgcagccgaggccacaggcagcaccatgaa caagtacccacccctgcgccggcgccggcgcctgttcgtcatagctgtggactgctaccaagacgatggccgtgcta gcaagaagatgctgcaggtgatccaggaagttttcagagcagtccggtcggactcccagatgtccaagatctcaggg ttcgcgctgtcgactgccatgccgttgtccgagacactccagcttctgcagctcggcaggatccaagcgaccgactt cgacgcccttatctgtggcagtggcagcgaggtgtactatcctggcacggcgaactgcatcgatgctgaaggaaagc tgcgcccagaccaggactatctgatgcacatcagccaccgctggtcccatgacggcgtgaggcagaccatagcgaag ctcatggccagtcaggacggttcagacgacgctgtcgagctggacgtggcgtccagtaatgcacactgcttcgcctt cctcatcaaagatcccaaaaaggtgaaaacggtcgatgagetgagggagaggctgaggatgcgtggtctccggtgcc acatcatgtactgcaggaacgcgacaagacttcaggttgtccctctgctagcatcaaggtcacaggcactcaggtac cttttcgtgcgctggggcctatctgtggggaacatgtatctgatcactggggaacatggcgacaccgatctagagga gatgctatctggattacacaagactgtgatcgtccggggtgtcaccgagaagggttcggaagcgctggtgaggagcc caggaagctacaagagggacgacgtcgtcccgtctgagacccccttggctgcgtacacgactggtgagetgaaggcc gatgagatcatgcgggctctgaagcaggtctccaagacttctagcggcatg§ga|attgctgctgggaaggctgattct ctgttcataactcaaaaggcagactcattttgtccttttcttcactactacataaataacttgtgaacagtaccacg RRtRtatatattRcaRtRttctactRRtRRctcacRactRtRaRRtRattaataatatacRactRtcttRtRaaaaa 3.3.1^3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.SofSPSDIII編碼的蛋白，是具有序列表中SEQID NO. 2氨基酸殘基序列的蛋白質， 或者是將SEQID NO. 2的氨基酸殘基序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代、缺失或添加且具有與SEQID NO. 2的氨基酸殘基序列相同活性的衍生蛋白質。以下是本發(fā)明所獲得的甘蔗SofSPSB基因所編碼蛋白的氨基酸序列MAGNEWINGYLEAILDSRASAGGGGGGGGGGDPRSPTKAASPRGPHMNFNPSHYFVEEVVKGVDESDL HRTWIKVVATRNARERSTRLENMCWRIWHLARKKKQLELEGIQRISARRKEQEQVRREATEDLAEDLSEGEKGDTL GELAPVETAKKKFQRNFSDLTVWSDDNKEKKLYIVLISVHGLVRGE匪ELGRDSDTGGQVKYVVELARAMSMMPG VYRVDLFTRQVSSPDVDWSYGEPTEMLCSGSNDGEGMGESAGAYIVRIPCGPRDKYLKKEALWPYLQEFVDGALA HIL匪SKALGEQVGNGRPVLPYVIHGHYADA⑶VAALLSGALNVPMVLTGHSLGRNKLEQLLKQGRMIEEIDST YKIMRRIEGEELALDASELVITSTRQEIDEQWGLYDGFDVKLEKVLRARARRGVSCHGRFMPRMVVIPPGMDFSN VVVPEDID⑶ O^KDDIVGLEGASPKSRPPIffAEVMRFLTNPHKPMILALSRPDPKKNITTLVKAFGECRPLREL ANLTL MGNRDDIDDMSAGNASVLTTVLKLIDKYDLYGSVAFPKHHNQADVPEIYRLAAKMKGVFINPALVEPFG LTLIEAAAHGLPIVATKNGGPVDITTALNNGLLVDPHDQNAIADALLKLVADKNLWQECRRNGLRNIHLYSWPEH CRTYLTRVAGCRLRNPRWLKDTPADAGADEEEFLEDSMDAQDLSLRLSIDGEKSSLNTNDPLSLDPQDQVQKIMN KIKQSSALPPSMSSV⑶GAKNAAEATGSTMNKYPPLRRRRRLFVIAVDCYQDDGRASKKMLQVIQEVFRAVRSDSQMSKISGFALSTAMPLSETLQLLQLGRIQATDFDALICGSGSEVYYPGTANCIDAEGKLRPDQDYLMHISHRffSH DGVRQTIAKLMASQDGSDDAVELDVASSNAHCFAFLIKDPKKVKTVDELRERLRMRGLRCHIMYCRNATRLQVVP LLASRSQALRYLFVRWGLSVG匪YLITGEHGDTDLEEMLSGLHKTVIVRGVTEKGSEALVRSPGSYKRDDWPSE TPLAAYTTGELKADEIMRALKQVSKTSSGM本發(fā)明不僅為研究甘蔗蔗糖磷酸合成酶的轉錄和表達機制，進一步探討蔗糖的積累機理奠定基礎，而且通過氨基酸序列可以獲得具有生物活性的純化蛋白，為研究蔗糖磷酸合成酶的生物學功能及應用甘蔗SPS基因改良作物品種提供了基礎。
具體實施例方式本發(fā)明的具體實施方式
如下1.植物SPS(蔗糖磷酸合成酶)基因進化分析用“sucrose phosphate synthase" 搜索NCBI網站(http://www.ncbi.nlm.nih. gov)非冗余氨基酸數據庫，獲得所有植物SPS 序列。對所獲得的所有序列進行分析，除去重復的序列。共得到植物SPS序列77條，其中全長序列43條。用ClustalX對所有全長SPS的氨基酸序列進行比對，并將比對結果保存為 PHYLIP 格式；然后用 PHYLIP 軟件包的 kqboot，Protdist, Neighbor 和 Consense 程序進行進化分析，將植物所有全長SPS基因分為相應的家族。2.設計擴增SoSPSB基因核心片段的引物比對植物B家族SPS基因的cDNA序列， 在保守區(qū)設計一對用于擴增SofSPSB部分片段的引物SofSPSB-F(5' -atgaacttcaacccctcgcactac-3 ‘)SofSPSB-R(5，_tcacgccgtcatgggacca_3，)。3.甘蔗總RNA的提取(1)取50 IOOmg甘蔗相應組織(如幼嫩葉鞘、葉片等)在液氮中研磨成粉末，加入ImlTrizol提取液，吹吸混勻；(2)將溶液快速轉移至1. 5ml的離心管中，室溫下放置5min，以完全溶解核蛋白體；(3) 40C，12，000g/min,離心 15min ；(4)吸取上清液于另一個1. 5ml離心管中，以0. 2ml氯仿Iml Trizol提取液的比例加入0. 2ml新鮮的氯仿，充分振蕩混勻15sec，室溫放置2 ^iin后出現分層；(5) 40C，12，000g/min,離心 15min ；(6)吸取上清液于另一個1. 5ml離心管中，加入等體積預冷的異丙醇，室溫放置 IOmin 沉淀 RNA ；(7) 40C，12，000g/min,離心 IOmin ；(8)丟棄上清液，留沉淀，用0.5-lml 75 %的乙醇漂洗沉淀2遍(每次4 °C， 12，OOOg，離心 5min)。(9)將沉淀晾干后溶于適量的DEPC處理水，于_70°C保存(或_20°C短期貯存?zhèn)溆?；(10)取1 μ 1 RNA樣品用1 %瓊脂糖凝膠進行電泳檢測，另取1 μ 1 RNA樣品測濃度。4. RT-PCR (反轉錄 PCR)
(1)準備一個0. 2ml的離心管，加入以下成分
甘蔗總 RNA 0. 1-5μ g ；
oligo (dT) 18 引物(0. 5 μ g/μ 1) :1μ 1 ；
加入DEPC處理的水到總體積12μ 1 ；
短暫離心混勻。
(2)70°C溫育5min后置于冰上，短暫離心。
(3)將離心管置于冰上，加入以下成分
5Xreaction buffer 4 μ 1 ；
RiboLock Ribonuclease Inhibitor (20u/μ 1) 1μ 1 ；
IOmM dNTP mix :2μ 1 ；
短暫離心混勻。
(4)37°C溫育 5min。
(5)加入 1 μ 1 RevertAid M-MuLV 反轉錄酶(200u/y 1)；使終體積達到 20 μ 1。
(6)42°C溫育 60min。
(7)70°C溫育IOmin終止反應，將離心管置于冰上。
5. SoSPSB基因核心片段克隆以2 μ 1 RT-PCR產物為模板，用SofSPSB-F和SofSPSB--R引物進行常規(guī)PCR擴增，PCR產物經膠回收純化后克隆到T載體并測序。測序結
果表明，PCR產物長度25Mbp。6. SoSPSB基因全長cDNA克隆根據上一步測序獲得的核心區(qū)序列，設計了 5，-RACE和3，-RACE的基因特異引物，B5， -GSPl(5， _cagctgtttcttcttgcgcgcga_3，)B5， _GSP2(5， _ccttgatccacgtccggtggaggt_3，)B3， -GSPl(5， _ctatcctggcacggcgaactgca_3，)B3' -GSP2(5' -gctgaaggaaagctgcgcccaga-3')。提取甘蔗幼嫩葉總RNA，按 SMARTTM RACE cDNA Amplification Kit (Clontech)試劑盒操作手冊進行5’-RACE和3’-RACE。產物經膠回收純化后克隆到T載體并測序。測序結果表明，5，-RACE產物長度27^ρ，3，-RACE產物長度807bp。7.甘蔗SoSPSB基因全長序列分析將所獲得的三個序列進行拼接，獲得了 SofSPSB基因全長cDNA序列，總長;3481bp。經VectorNTI軟件分析，該序列的ORF為322^p， 編碼1074個氨基酸。起始密碼子(ATG)位于轉錄起始位點后56bp處，終止密碼子(TAA) 后還有一段204bp的非編碼序列，并帶有真核生物典型的polyA尾巴。甘蔗B家族蔗糖磷酸合成酶基因(SofSPSB)序列表，見后頁。
權利要求
1.甘蔗B家族蔗糖磷酸合成酶基因及其編碼蛋白序列，其特征在于 a.甘蔗B家族蔗糖磷酸合成酶基因(SofSPSB)，它具有序列表中SEQID NO. 1的DNA序列，且它的編碼區(qū)從第56位核苷酸到3277位核苷酸； 甘蔗SofSPSB基因的全長cDNA序列atagagtaccgccggccgggcgcgcgggagaggagggtctcgcggggaggatccg 0 gccgggaacgagtg gatcaatgggtacctggaggcgatcctcgacagccgcgcctcggcggggggagggggaggaggaggcggcggcgggg accccaggtcgccgacgaaggcggcgagcccccgcggcccgcacatgaacttcaacccctcgcactacttcgtcgag gaggtggtcaagggcgtcgacgagagcgacctccaccggacgtggatcaaggtcgtcgctacacgcaacgcccgcga gcgcagcaccaggctcgagaacatgtgctggcggatctggcacctcgcgcgcaagaagaaacagctggagctggagg gcatccagagaatctcagcacgcaggaaggaacaggagcaggtgcgccgtgaggcgacggaggacctggccgaggat ctgtcagagggcgagaagggggacaccctcggtgagcttgcgccggttgagacggccaagaagaagttccagaggaa cttctctgaccttaccgtctggtctgacgacaataaggagaagaagctttacattgtgctcatcagtgtgcatggtc ttgttcgtggcgaaaacatggaactaggtcgtgattctgacaccggtggccaggtgaaatatgtcgtcgaacttgca agagcgatgtcaatgatgcctggagtgtacagggtggacctcttcactcgtcaagtgtcatctcctgacgtggactg gagttatggtgagccaaccgagatgttatgetccggttccaatgatggagaggggatgggtgagagtgctggagcct acattgtgcgcataccgtgtgggccacgggataaatacctcaagaaagaagcactgtggccttacctccaagaattt gtcgatggagctctggcgcatatcctgaacatgtccaaggctctgggagagcaggttggaaatgggaggccagtact gccttatgtgatacatggacactatgccgatgctggagatgttgctgctctcctttctggtgcgctgaatgttccca tggtgctcactggtcactcacttgggaggaacaagctggagcaactgctgaagcaagggcgcatgtccaaggaggag atagattcaacctacaagatcatgaggcgtatcgagggtgaggagctggccctcgatgcgtcagagcttgtcatcac gagcacaaggcaggagattgatgaacagtggggactgtacgatggatttgacgtcaagcttgagaaagtgttgaggg cccgggcgaggcgtggggttagctgtcatggtcgtttcatgcctaggatggtggtgattcctccaggaatggacttc agcaatgttgtggttcctgaagacattgatggggatggtgacagcaaagatgatatcgttggtttggagggtgcctc acccaagtcaaggcccccaatttgggctgaggtgatgcggttcctaaccaatcctcacaagccgatgatcctcgcgt tgtcaaggccagacccgaagaagaacatcactaccctcgtcaaagcgtttggagagtgccgcccactcagggaactt gcaaaccttactctgatcatggggaacagagatgacatcgacgatatgtctgctgggaatgccagtgtcctcaccac agttctgaagctgattgacaagtatgatctgtatggaagtgtggcgttccctaagcatcacaaccaggctgatgtcc cggagatctaccgcctcgcggccaaaatgaagggcgtcttcatcaaccctgctctcgttgagccgttcggtctcacc cttatcgaggctgcggcacacggacttccaatagtcgctaccaagaatggtggtccagtcgacattacaactgcact gaacaatggactgctcgttgacccacacgaccagaacgccatcgctgatgcactgctgaagcttgtagcagacaaga acctgtggcaggaatgccggagaaacgggttgcgcaacatccacctctactcatggccggagcactgccgcacttac ctcaccagggtggctgggtgccggttaaggaacccgaggtggctgaaggacacaccggcagatgccggagctgatga ggaggagttcctggaggattccatggacgctcaggacctgtcactccgtctgtccatcgacggtgagaagagctcgc tgaacactaacgacccactgtcgttggacccgcaggatcaggtgcagaagatcatgaacaagatcaagcagtcgtcc gcgcttccgccgtccatgtcctcggtcggagacggtgccaagaatgcagccgaggccacaggcagcaccatgaacaa gtacccacccctgcgccggcgccggcgcctgttcgtcatagctgtggactgctaccaagacgatggccgtgctagca agaagatgctgcaggtgatccaggaagttttcagagcagtccggtcggactcccagatgtccaagatctcagggttc gcgctgtcgactgccatgccgttgtccgagacactccagcttctgcagctcggcaggatccaagcgaccgacttcgacgcccttatctgtggcagtggcagcgaggtgtactatcctggcacggcgaactgcatcgatgctgaaggaaagctgc gcccagaccaggactatctgatgcacatcagccaccgctggtcccatgacggcgtgaggcagaccatagcgaagctc atggccagtcaggacggttcagacgacgctgtcgagctggacgtggcgtccagtaatgcacactgcttcgccttcct catcaaagatcccaaaaaggtgaaaacggtcgatgagetgagggagaggctgaggatgcgtggtctccggtgccaca tcatgtactgcaggaacgcgacaagacttcaggttgtccctctgctagcatcaaggtcacaggcactcaggtacctt ttcgtgcgctggggcctatctgtggggaacatgtatctgatcactggggaacatggcgacaccgatctagaggagat gctatctggattacacaagactgtgatcgtccggggtgtcaccgagaagggttcggaagcgctggtgaggagcccag gaagctacaagagggacgacgtcgtcccgtctgagacccccttggctgcgtacacgactggtgagetgaaggccgat gagatcatgcgggctctgaagcaggtctccaagacttctagcggcatg|tga|attgctgctgggaaggctgattctct gttcataactcaaaaggcagactcattttgtccttttcttcactactacataaataacttgtgaacagtaccacggg tgtatatattgcagtgttctactggtggctcacgactgtgaggtgattaataatatacgactgtcttgtga^^aaa 1^3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3. b. SofSPSB編碼的蛋白，是具有序列表中SEQID NO. 2氨基酸殘基序列的蛋白質，或者是將SEQID NO. 2的氨基酸殘基序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代、缺失或添加且具有與SEQID NO. 2的氨基酸殘基序列相同活性的衍生蛋白質；甘蔗SofSPSB基因所編碼蛋白的氨基酸序列MAGNEWINGYLEAILDSRASAGGGGGGGGG⑶PRSPTKAASPRGPHMNFNPSHYFVEEVVKGVDESDLHRTW IKVVATRNA RERSTRLE匪CWRIWHLARKKKQLELEGIQRISARRKEQEQVRREATEDLAEDLSEGEK⑶TLGELA PVETAKKKFQRNFSDLTVWSDDNKEKKLYIVLISVHGLVRGENMELGRDSDTGGQVKYVVELARAMSMMPGVYRVDL FTRQVSSPDVDWSYGEPTEMLCSGSNDGEGMGESAGAYIVRIPCGPRDKYLKKEALWPYLQEFVDGALAHIL匪SKA LGEQVGNGRPVLPYVIHGHYADA⑶VAALLSGALNVPMVLTGHSLGRNKLEQLLKQGRMSKEEIDSTYKIMRRIEGE ELALDASELVITSTRQEIDEQWGLYDGFDVKLEKVLRARARRGVSCHGRFMPRMVVIPPGMDFSNVVVPEDIDGDGD SKDDIVGLEGASPKSRPPIWAEVMRFLTNPHKPMILALSRPDPKKNITTLVKAFGECRPLRELANLTLIMGNRDDID DMSAGNASVLTTVLKLIDKYDLYGSVAFPKHHNQADVPEIYRLAAKMKGVFINPALVEPFGLTLIEAAAHGLPIVAT KNGGPVDITTALNNGLLVDPHDQNAIADALLKLVADKNLWQECRRNGLRNIHLYSWPEHCRTYLTRVAGCRLRNPRW LKDTPADAGADEEEFLEDSMDAQDLSLRLSIDGEKSSLNTNDPLSLDPQDQVQKMNKIKQSSALPPSMSSV⑶GAK NAAEATGSTMNKYPPLRRRRRLFVIAVDCYQDDGRASKKMLQVIQEVFRAVRSDSQMSKISGFALSTAMPLSETLQL LQLGRIQATDFDALICGSGSEVYYPGTANCIDAEGKLRPDQDYLMHISHRffSHDGVRQTIAKLMASQDGSDDAVELD VASSNAHCFAFLIKDPKKVKTVDELRERLRMRGLRCHIMYCRNATRLQVVPLLASRSQALRYLFVRWGLSVGNMYLI TGEHGDTDLEEMLSGLHKTVIVRGVTEKGSEALVRSPGSYKRDDVVPSETPLAAYTTGELKADEIMRALKQVSKTSS GM
全文摘要
本發(fā)明公開了一種甘蔗B家族蔗糖磷酸合成酶基因及其編碼蛋白序列，是在對所有植物蔗糖磷酸合成酶基因全長序列進行進化分析的基礎上，以同一家族的蔗糖磷酸合成酶基因序列的保守區(qū)設計引物，從甘蔗幼嫩葉片提取總RNA，并經反轉錄，用常規(guī)PCR法擴增，結合RACE技術克隆到甘蔗蔗糖磷酸合成酶基因SofSPSB基因的全長cDNA序列。本發(fā)明不僅為研究甘蔗蔗糖磷酸合成酶的轉錄和表達機制，進一步探討蔗糖的積累機理奠定基礎，而且通過氨基酸序列可以獲得具有生物活性的純化蛋白，為研究蔗糖磷酸合成酶的生物學功能及應用甘蔗SPS基因改良作物品種提供了基礎。
文檔編號C12N15/52GK102154332SQ20111003246
公開日2011年8月17日 申請日期2011年1月30日 優(yōu)先權日2011年1月30日
發(fā)明者吳凱朝, 廖青, 方鋒學, 李雙喜, 李楊瑞, 桂意云, 梁俊, 汪淼, 田智得, 黃東亮, 黎濤 申請人:廣西壯族自治區(qū)甘蔗研究所