專(zhuān)利名稱(chēng)：一種谷氨酸脫氫酶的突變體酶及其構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及利用突變體酶及其構(gòu)建方法，特別屬于谷氨酸脫氫酶的突變體酶及其構(gòu)建方法。
背景技術(shù)：
氨基酸脫氫酶家族(amino acid dehydrogenases, EC 1. 4. 1)，該家族蛋白利用 NAD+或者NADP+為輔因子催化氨基酸氧化脫氨形成相應(yīng)的酮酸。反應(yīng)如下所示
權(quán)利要求
1.一種谷氨酸脫氫酶的突變體酶，其特征在于它具有SEQ ID NO :1，所示的氨基酸序列。
2.一種編碼權(quán)利要求1所述的谷氨酸脫氫酶的突變體酶的基因。
3.權(quán)利要求1所述的一種谷氨酸脫氫酶的突變體酶的構(gòu)建方法，包括以下步驟: 從鼠傷寒沙門(mén)氏菌(Salmonella typhimurium)中獲得谷氨酸脫氫酶基因，通過(guò)突變引物獲得了突變的基因片段，將突變基因片段與pET28b質(zhì)粒連接，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒 pET28b-KA/LG;該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，構(gòu)建用于突變體酶表達(dá)的基因工程菌 Rosetta(DE3)/pET28b-KA/LG ；所述的166位的突變引物為·166 位 anti-sense :5' -GATATCCCCCCCAGGCACGTCG-3‘； 166 位 sense :5' -GATACCGACGTGCCTGGGGGGGATA-3‘； 92位突變引物為·92 位 anti-sense :5' -GCATACCGCCAAGATAGGGGCCGATAG-3‘； 92 位 sense:5' ~TCGGCCCCTATCTTGGCGGTATGCG~3‘。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種谷氨酸脫氫酶的突變體酶及其構(gòu)建方法，所述的突變體酶具有SEQ ID NO1，所示的氨基酸序列。該突變基因在異源宿主大腸桿菌中獲得了良好表達(dá)，表達(dá)蛋白是一類(lèi)能催化多種氨基酸的脫氫酶。本發(fā)明過(guò)程主要包括以下步驟(1)獲得谷氨酸脫氫酶基因gdh并構(gòu)建重組質(zhì)粒；(2)突變菌株的構(gòu)建；3)表達(dá)菌株構(gòu)建；(4)表達(dá)和純化。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，所生成的工程菌不僅能催化谷氨酸，而且還能催化甲硫氨酸和正亮氨酸。
文檔編號(hào)C12N15/53GK102199578SQ20111005983
公開(kāi)日2011年9月28日 申請(qǐng)日期2011年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月14日
發(fā)明者宋平, 曹正宇, 朱國(guó)萍, 潘蔚, 王文才, 王暉, 王鵬, 靳明明 申請(qǐng)人:安徽師范大學(xué)