專利名稱：油松花粉小肽的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子生物工程與生物化學(xué)工程領(lǐng)域，尤其是一種油松花粉小肽的提取方法。
背景技術(shù)：
油松花粉含有人體所需的全部營(yíng)養(yǎng)成分，且搭配合理，能夠全部補(bǔ)充、均衡人體所需的營(yíng)養(yǎng)，素有“綠色黃金”之稱。近年來的研究表明，蛋白質(zhì)在動(dòng)物消化道中的消化酶作用下水解終產(chǎn)物大部分是2或3個(gè)氨基酸殘基組成的小肽，肽的吸收具有速度快、耗能低、 不易飽和且各種肽之間轉(zhuǎn)運(yùn)無競(jìng)爭(zhēng)性和抑制性的特點(diǎn)，生物酶工程加工方法在溫和反應(yīng)條件下，水解生成多肽及氨基酸等物質(zhì)，具有很高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值與功能特性，具有反應(yīng)可控、副反應(yīng)少、產(chǎn)品質(zhì)量好和不破壞氨基酸等特點(diǎn)，生物酶法將是植物蛋白資源開發(fā)利用最有效、最有前途的加工方法。油松花粉破壁一般采用氣流干法法，能耗高，營(yíng)養(yǎng)物損失大，有文獻(xiàn)報(bào)道采用濕法破壁比較理想，但需要添加助磨劑，而且破壁后糊狀物需要干燥。本發(fā)明的方法的優(yōu)勢(shì)在于將濕法破壁時(shí)的水量提高數(shù)倍，避免了研磨過程中物料粘稠問題，固液分離后的濾液可以在酶水解制備小肽時(shí)作為媒介使用。專利文獻(xiàn)CN101100691公開了一種用復(fù)合酶從油松花粉中提取小肽的方法，由于審查員認(rèn)為該申請(qǐng)沒有充分說明油松花粉的溶出方法，因此被認(rèn)為公開不充分，本申請(qǐng)基于該申請(qǐng)的基礎(chǔ)上，充分說明了油松花粉的破壁方法，并獲得良好的效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供了一種油松花粉小肽的提取方法，本方法在于采用濕法膠體磨破壁，加入的水可以用于酶法水解蛋白質(zhì)的介質(zhì)，該方法不僅生產(chǎn)周期短，產(chǎn)品收率高。一種油松花粉小肽的提取方法，其特征在于提取小肽的方法包括以下步驟(1)將油松花粉與水混合，用膠體磨將油松花粉進(jìn)行濕法破壁，破壁后過濾，得到破壁油松花粉及過濾液；(2)將破壁油松花粉用溶劑萃取出可溶性的成分；(3)將萃取后的油松花粉脫溶劑后放入帶有攪拌器的容器內(nèi)，加入過濾液，調(diào)節(jié)溶液PH值為8 9后，在20 70°C條件下攪拌2 4小時(shí)，形成油松花粉混合液；(4)在油松花粉混合液中加入復(fù)合酶，充分?jǐn)嚢? 8小時(shí)；(5) 90°C條件下滅酶，離心分離去除料渣，即得到小肽營(yíng)養(yǎng)液。而且，所述步驟O)的溶劑為食用溶劑油或超臨界C02。而且，所述的油松花粉與水的質(zhì)量比為1 5 15。而且，所述的在油松花粉混合液中加入的酶為堿性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶中的其中幾種的混合物。
而且，所述的酶的添加量與油松花粉干基的重量比為0. 2 0. 4 50 150。而且，所述小肽營(yíng)養(yǎng)液中小肽分子量為300-1000道爾頓，即2 8個(gè)氨基酸所組成小分子肽。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果為1.本發(fā)明是利用濕法將油松花粉破壁，破壁后含有營(yíng)養(yǎng)組分的濾液可以用于酶水解工藝用媒介，克服了濕法破壁時(shí)由于料液比小物料粘稠，料液比大后續(xù)處理費(fèi)用高的問題，最大限度保留油松花粉天然、高營(yíng)養(yǎng)的性質(zhì)。2.采取本發(fā)明的方法制得的油松花粉提取液，由于破壁徹底，使活性的小分子肽以及維生素、多糖、礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)成分充分溶出，更加適合食用，營(yíng)養(yǎng)更加豐富。3.采用本發(fā)明制得的油松花粉提取液容易分離，水溶性高，不破壞花粉的營(yíng)養(yǎng)成份，而且不存在花粉提取液受熱產(chǎn)生蛋白質(zhì)凝固的現(xiàn)象，這種產(chǎn)品具有易于人體吸收的活性小肽及一些礦物質(zhì)等微量營(yíng)養(yǎng)元素。4.本發(fā)明是利用復(fù)合酶水解油松花粉蛋白，根據(jù)不同酶的反應(yīng)特點(diǎn)，不用調(diào)節(jié)PH 值，由于蛋白質(zhì)在水解過程中產(chǎn)生較多的羧基，使體系PH值不斷降低，最初體系為堿性，采用2709枯草桿菌發(fā)酵得到的堿性蛋白酶，最適于PH值為9-11，主要催化絲氨酸，當(dāng)體系pH 值降到8以下時(shí)，中性蛋白酶發(fā)揮作用，中性蛋白酶由枯草芽孢桿菌發(fā)酵得到，最適于pH值為6. 0-7. 5，可由于多種蛋白質(zhì)水解；而木瓜蛋白酶有較寬的pH范圍，由于不用堿調(diào)節(jié)pH 值，體系不產(chǎn)生鹽。
具體實(shí)施例方式下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳述，以下實(shí)施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例1 本發(fā)明用酶從油松花粉中提取小肽的方法，是利用復(fù)合酶的催化反應(yīng)作用，使油松花粉中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)橐妆蝗梭w吸收的活性小分子肽，其提取方法包括以下步驟(1).在敞口容器中中加入除雜后油松花粉200份，飲用水2000份，用膠體磨研磨破壁，在顯微鏡下觀察破壁達(dá)到95%時(shí)，用板框壓濾機(jī)分離，得到破壁油松花粉和濾液；(2).取150份破壁后油松花粉，用二氧化碳超臨界萃取提取出油松花粉可溶性非蛋白成分；將萃取后的油松花粉份放入一個(gè)帶攪拌器的容器內(nèi)，在45°C溫度條件下，加入 1800份的濾液制成混合液，用堿調(diào)節(jié)混合液pH = 10，浸泡攪拌3小時(shí)。(3).在上述混合液中加入0. 2份堿性蛋白酶(南寧東恒華道生物科技有限責(zé)任公司，枯草桿菌堿性蛋白酶)，0. 2份中性蛋白酶(南寧東恒華道生物科技有限責(zé)任公司)，在 45°C溫度條件下充分?jǐn)嚢?小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束，pH = 5. 8 ；(4).在90°C條件下滅酶30min，冷卻至40°C離心分離，除去料渣，制成小肽營(yíng)養(yǎng)液。(5).采用高效液相色譜法測(cè)定分子量，主要出峰位置在300-700道爾頓，即2_8個(gè)氨基酸組成的小肽。實(shí)施例2 將實(shí)施例1中的工藝步驟O)中的pH值調(diào)整為9，將工藝步驟(3)中酶的種類由中性蛋白酶改成木瓜蛋白酶即可，反應(yīng)結(jié)束，體系PH = 5. 8。其他操作方法同實(shí)施例1。實(shí)施例3(1).在敞口容器中中加入除雜后油松花粉200份，飲用水1000份，用膠體磨研磨破壁，在顯微鏡下觀察破壁達(dá)到95%時(shí)，用板框壓濾機(jī)分離，得到破壁油松花粉和濾液；(2).取100份破壁后油松花粉，用6#溶劑油(符合GB 16629-2008標(biāo)準(zhǔn))萃取出油松花粉可溶性非蛋白成分；將萃取后的油松花粉放入一個(gè)帶攪拌器的容器內(nèi)，在50°C溫度條件下，用1000份的濾液將溶液調(diào)節(jié)至pH = 10，浸泡攪拌3小時(shí)。(3).在上述溶液中加入0. 2份堿性蛋白酶，0. 1份中性蛋白酶，0. 2份木瓜蛋白酶充分?jǐn)嚢?小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束，pH = 5. 5 ；(4).在90°C條件下滅酶30min，冷卻至40°C離心分離，離心分離，除去料渣，制成
小肽營(yíng)養(yǎng)液。
權(quán)利要求
1.一種油松花粉小肽的提取方法，其特征在于提取小肽的方法包括以下步驟(1)將油松花粉與水混合，用膠體磨將油松花粉進(jìn)行濕法破壁，破壁后過濾，得到破壁油松花粉及過濾液；(2)將破壁油松花粉用溶劑萃取出可溶性的成分；(3)將萃取后的油松花粉脫溶劑后放入帶有攪拌器的容器內(nèi)，加入過濾液，調(diào)節(jié)溶液 PH值為8 9后，在20 70°C條件下攪拌2 4小時(shí)，形成油松花粉混合液；(4)在油松花粉混合液中加入復(fù)合酶，充分?jǐn)嚢? 8小時(shí)；(5)90°C條件下滅酶，離心分離去除料渣，即得到小肽營(yíng)養(yǎng)液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油松花粉小肽的提取方法，其特征在于所述步驟O)的溶劑為食用溶劑油或超臨界C02。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油松花粉小肽的提取方法，其特征在于所述的油松花粉與水的質(zhì)量比為1 5 15。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油松花粉小肽的提取方法，其特征在于所述的在油松花粉混合液中加入的酶為堿性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶中的其中幾種的混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油松花粉小肽的提取方法，其特征在于所述的酶的添加量與油松花粉干基的重量比為0.2 0.4 50 150。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油松花粉小肽的提取方法，其特征在于所述小肽營(yíng)養(yǎng)液中小肽分子量為300-1000道爾頓，即2 8個(gè)氨基酸所組成小分子肽。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種油松花粉小肽的提取方法，該方法包括以下步驟(1)將油松花粉與水混合，用膠體磨將油松花粉濕法破壁，過濾；(2)將過破壁后的油松花粉用溶劑油萃取出可溶性的成分；(3)將溶劑萃取后的油松花粉放入帶有攪拌器的容器內(nèi)，加入(1)中得到的濾液，用堿調(diào)節(jié)pH值為8～9，在20～70℃條件下攪拌2～4小時(shí)，形成油松花粉混合液；(4)酶解、滅酶，離心分離去除料渣，即得到富含小肽的油松花粉營(yíng)養(yǎng)液。本發(fā)明不僅生產(chǎn)周期短，產(chǎn)品收率高，而且提取液的營(yíng)養(yǎng)成份是容易被人體吸收的小分子肽，所得的活性小分子肽營(yíng)養(yǎng)液水溶性高，可直接使用。
文檔編號(hào)C12P21/06GK102229973SQ20111016134
公開日2011年11月2日 申請(qǐng)日期2011年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月15日
發(fā)明者尹樹花, 王貴玉, 薛潤(rùn)鵬, 郭麗梅 申請(qǐng)人:承德暢達(dá)生物科技有限公司