專利名稱：蟲草銀杏功能性食品、制備方法及用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物技術領域，特指利用三種酶水解白果，再經(jīng)過蟲草真菌發(fā)酵生產(chǎn)的蟲草銀杏功能性食品的方法和用途。
背景技術：
銀杏的果實俗稱白果，白果的主要成分是蛋白質、淀粉和脂肪，另外含有黃酮、萜類化合物、銀杏酸、氫化白果酸、氫化白果亞酸、銀杏醇、白果酚、五碳多糖；脂面醇瓣虞分。我國中醫(yī)古書，一直將白果列為重要藥材，白果酸抑制多種桿菌及皮膚真菌，并對葡萄球菌、鏈球菌、白喉、炭瘟桿菌，枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、傷寒菌等都有不同程度的抑制作用。從鮮白果中提取出來的白果酚甲，有降壓作用，并且使血管的滲透性增力Π。近年來各地臨床試驗證明，經(jīng)常食用白果，可治高血壓、止白帶、咳鍬發(fā)熱；心腦血管、呼吸系統(tǒng)、皮膚病、牙痛等疾病，還有清熱擾菌、溫肺益氣、擴張血管、增加血流量、定痰喘、去皺紋、防衰老、潤音喉、健身美容、延年益壽等功效。但是白果中由于含有微量的白果酚、白果酸，易導致人體食欲不振、脫皮、觸痛，不等程度的肝損害、腎小球腎炎，白果酸有溶血作用引起驚厥和死亡。由于這些副作用阻礙了白果的大量的食用。因此采用一方面可以強化白果的藥用價值，同時具有降低白果毒性的技術開發(fā)利用白果資源具有重要社會學意義，同時也會帶來巨大的經(jīng)濟價值。 在銀杏資源綜合開發(fā)方面，國外主要集中在藥劑和保健品的開發(fā)利用上，利用銀杏葉為原料開發(fā)的銀杏制品已達30多種，年銷售額在20-40億美元。發(fā)展趨勢仍集中在銀杏葉上，一是對銀杏葉有效成份的新發(fā)現(xiàn)和分離；二是銀杏葉制劑的復配；三是銀杏葉藥用新功效的開發(fā)。在葉的利用上，以采用水或乙醇等作為溶劑生產(chǎn)銀杏葉提取物為主，產(chǎn)品大部分出口，少量的制成保健食品銷售；也有研制出用銀杏葉提取物制作專用化妝護膚品的報道。有些地區(qū)還生產(chǎn)銀杏葉茶和藥枕。在銀杏花粉的利用上，以果用樹人工授粉為主， 未見銀杏花粉類產(chǎn)品。在果的利用上，以出口或內(nèi)銷干果為主，消費主要集中在餐飲行業(yè)。 國內(nèi)在銀杏葉果方面的專利主要在提取和功能，而利用生物工程技術轉化同時轉化銀杏果和葉的提取物國內(nèi)外還沒有報道，也未查到相關專利。如發(fā)明專利“猴頭菌轉化銀杏葉提取物的制備方法及用途”(申請?zhí)?00710190182. 3)描述了利用猴頭菌轉化銀杏葉提取物提高發(fā)酵液的降血糖活性，沒有涉及銀杏果，同時也未涉及銀杏毒素的降解；發(fā)明專利“一種復合銀杏保健品及制備方法”(專利號99127020. 7)描述了銀杏提取物與其它藥物復配制得保健品，該保健品具有調節(jié)血脂、保護心腦血管、延緩衰老等功效；發(fā)明專利“一種銀杏食品添加劑”(申請?zhí)?00610068947. 1)描述了銀杏果仁與人參、枸杞和紅花復配制成的食品添加劑；“銀杏提取物在藥物組合物制備中的應用，以及銀杏提取物用作美容性治療的方法”(申請?zhí)?97192462. 7)描述了用銀杏的一種活性組分制作一種有免疫調節(jié)活性的組合物。關于銀杏脫毒的專利幾乎全部集中在提取方法的改進，如“制備具有低含量的 4’ -0-甲基吡哆醇和/或雙黃酮的銀杏提取物的改進方法”(申請?zhí)?00680013412. 2)描述了利用吸附樹脂和離子交換樹脂降低銀杏提取物中4' -0-甲基吡哆醇和/或雙黃酮的方法；“一種從銀杏提取物中去除銀杏酚酸的方法”(01133794. X)描述了采用反復萃取技術從銀杏提取物中去除銀杏酚酸的方法。所能查到的銀杏提取物脫毒的方法均采用化學方法。這些方法脫毒也只能去除其中某一種毒性物質。銀杏葉都含有白果酸、氫化白果酸和氫化白果亞酸等毒性物質，其中白果酚和銀杏酚分別為烴基取代的苯酚和間苯二酚衍生物，是銀杏的主要有毒物質，它們在銀杏果實中分布最多，是過多食用白果造成中毒的主要成分。這些銀杏毒素使得銀杏白果的食用量受到了一定的限制，限制了銀杏葉提取物及銀杏果的銷售量，盡管發(fā)明專利(申請?zhí)?201010145686. 5)涉及藥用真菌金耳液體發(fā)酵轉化白果技術，獲得的產(chǎn)品低毒或無毒，同時具有降低體內(nèi)氧化壓力，增強肌體免疫力，調節(jié)血糖、血脂，緩解老年性哮喘等功效。本技術采用生物工程技術極大的降低了銀杏毒素的含量，使產(chǎn)品變得更加安全，同時產(chǎn)品具有降低血壓和體內(nèi)氧化壓力之功效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供的是蟲草銀杏功能性食品生產(chǎn)技術，該食品含有銀杏活性成分(黃酮和萜類)和蟲草活性成分(蟲草多糖和膽固醇)，具有預防高血壓、降低體內(nèi)氧化壓力之功效。本發(fā)明蟲草銀杏功能性食品，特征在于采用三種酶水解銀杏白果，獲得銀杏白果水解液，該水解液中含有銀杏黃酮、萜類化合物、氨基酸和肽類、淀粉等活性化合物，其中氨基酸和肽類含量> 1%，淀粉含量> 2%，該水解液添加銀杏葉提取物后通過蟲草菌種轉化、 打漿、濃縮和干燥后獲得蟲草銀杏功能性食品。蟲草銀杏功能性食品，其中總黃酮含量0. 5 2mg/g，銀杏內(nèi)酯0. 1 0. 6 mg/g, 總萜類化合物含量3 80mg/g，蛋白質6 20mg/g，可溶性糖0 0. 2mg/g,蟲草酸0. 1 0. 3mg/g,蟲草素0. 05 0. 2mg/g,銀杏酚酸0 5ug/g,氫氰酸0 0. 1 μ g/g。本發(fā)明的目的在于提供一種蟲草銀杏功能性食品的制備方法，其特征在于按下述步驟制備得到
精確稱取已經(jīng)脫殼的銀杏白果，打漿加入1 5倍的水，煮沸糊化，加入0. 2 5. 0%(質量/體積)液化酶，80°C水浴10 50分鐘，冷卻到50 70°C后，加入0. 1 4. 0% (質量/ 體積)糖化酶，50 70°C水浴10 50分鐘，待冷卻至40 60°C以下后加入0. 2 3. 0% (質量/體積)蛋白酶40 60°C水解0. 5 9小時，制得銀杏白果水解液；銀杏白果水解液 100 120°C滅菌10 60分鐘，冷卻后接入蟲草試管斜面菌種，在轉速60 180轉/分鐘， 溫度22 33°C培養(yǎng)5 10天，制得蟲草液體搖瓶菌種；銀杏白果水解液經(jīng)過100 120°C 滅菌，以體積比3 10%接種量接入蟲草液體搖瓶菌種，在溫度22 33°C，攪拌轉速60 250轉/分，通風量1 :0. 3 1 1. 2v/v/m培養(yǎng)3 8天，制得蟲草銀杏一級液體菌種；銀杏水解液經(jīng)過100 120°C滅菌10 60分鐘，以體積比為3 10%接種量接入蟲草銀杏一級液體菌種，在溫度22 33°C，攪拌轉速60 250轉/分，通風量1 :0. 3 1 :1.2v/v/m 培養(yǎng)3 10天，制得蟲草銀杏發(fā)酵液；蟲草銀杏發(fā)酵液經(jīng)過薄膜濃縮，噴霧干燥(噴霧干燥時進口溫度160°C，出口溫度120°C)得到蟲草銀杏發(fā)酵液干粉；菌絲體經(jīng)過80°C烘干，干燥物粉碎，過200目篩，得到菌絲體干粉，菌絲體干粉與發(fā)酵液干粉混合均勻即為蟲草銀杏白果功能性食品。其中銀杏白果水解液制備過程中所使用的蛋白酶包括風味蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、高效水解蛋白酶、小麥蛋白水解專用酶等。用該工藝生產(chǎn)的蟲草銀杏白果功能性食品，其特征在于色質黃色至褐色，具有淡淡白果香味和蟲草發(fā)酵的特有香味。本發(fā)明提供的蟲草銀杏功能性食品，其特征在于該食品含有銀杏活性成分(黃酮和萜類)和蟲草活性成分(如蟲草多糖、甘露醇和蟲草酸)，具有降低血壓和體內(nèi)氧化壓力之效。


圖1是本發(fā)明的工藝流程圖
具體實施例方式本發(fā)明中所述的蟲草銀杏白果功能性食品中活性成分分別按下列方法檢測總黃酮含量的測定采用亞硝酸鈉一硝酸鋁法(鄧斌，蔣剛彪，陳六平分光光度法測定食品包裝紙用紫甘薯總黃酮的含量.包裝工程，2008，29(1) :27 29.)；萜類含量的測定采用王翔飛介紹的測定方法(王翔飛，潘旭東，劉雯霞，等黃花瓦松中總三萜成分的含量的測定.中國民族民間醫(yī)藥，2009，18(10): 11.)；銀杏內(nèi)酯含量測定采用分光光度法(張渝陽，王鑫，趙麗娟，荀紹馨，田明，張新，王曉寧，鄧桂春分光光度法測定銀杏萜內(nèi)酯的含量.遼寧化工，2006, 35(10) :618 620)；氫氰酸含量測定依據(jù)中華人民共和國國家標準GB/T15665-1995 豆類、配糖氫氰酸含量的測定；銀杏酚酸采用熒光分析法測定(田亞平，尤文元，李或娜熒光分析法測定銀杏酚酸.分析化學研究簡報.2006年特刊， sl55-sl57)，蟲草酸測定采用比色法(董巍巍，呂效平，李祥，陳建偉2，孫東東2，左堅 人工蟲草及野生蟲草的成分比較研究?，F(xiàn)代中藥研究與實踐2007，22 (2):39 41);蟲草素含量測定采用高效液相色譜法(夏敏反相高效液相色譜法測定蛹蟲草中蟲草素的含量.淮陰工學院學報，2004，13(3)22 24)。下面結合實施例對本發(fā)明做進一步闡述
本發(fā)明中實施例1 3中所使用的蟲草菌種為可以購買到的任意一種蟲草菌種。蟲草斜面菌種采用PDA培養(yǎng)基制備。IOOOmLPDA培養(yǎng)基含200g馬鈴薯提取液(去皮馬鈴薯切成碎片、IOOOmL蒸餾水煮沸30分鐘，八層紗布過濾，濾液定容至IOOOmL,濾液即為馬鈴薯提取液)加入蔗糖20g、瓊脂20g，煮沸待瓊脂完全溶化后分裝試管，塞上棉塞，121°C滅菌，制成斜面。無菌接種蟲草菌種，28°C培養(yǎng)7天，4°C冷藏待用。實施例1
精確稱取已經(jīng)脫殼的白果200g，打漿加入200mL的水，煮沸糊化，溫度降至60°C，加入 0. 4mL液化酶(無錫賽德生物工程有限公司，16萬單位/mL)60°C水解50分鐘，降溫到50°C， 加入0. 2mL糖化酶(無錫賽德生物工程有限公司，2萬單位/mL) 50°C水解50分鐘，降溫到 30°C，加入0. 4g木瓜蛋白酶(廣西南寧東恒華道生物科技有限公司，80萬單位/g)，水解9 小時，制得銀杏白果水解液；銀杏白果水解液分裝到250mL三角瓶，每瓶100mL，10(TC滅菌 60分鐘，冷卻后接入蟲草試管斜面菌種，在轉速60轉/分鐘，溫度22°C培養(yǎng)10天，制得蟲草液體搖瓶菌種；白果水解液經(jīng)過100°C滅菌60分鐘，以10%接種量接入蟲草的液體搖瓶菌種，在溫度22°C，攪拌轉速60轉/分，通風量1 :0. 3v/v/m培養(yǎng)8天，制得蟲草銀杏一級液體菌種；銀杏白果水解液經(jīng)過100°C滅菌60分鐘，以3%接種量接入蟲草的一級液體菌種，在溫度22°C，攪拌轉速60轉/分，通風量1 :0. 3v/v/m培養(yǎng)10天，制得蟲草銀杏發(fā)酵液；蟲草銀杏發(fā)酵液經(jīng)過薄膜濃縮，噴霧干燥(噴霧干燥時進口溫度160°C，出口溫度120°C)得到蟲草銀杏發(fā)酵液干粉；菌絲體經(jīng)過80°C烘干，干燥物粉碎，過200目篩，得到菌絲體干粉，菌絲體干粉與發(fā)酵液干粉混合均勻即為蟲草銀杏白果功能性食品，該食品色質是黃色。
實施例2
精確稱取已經(jīng)脫殼的白果200g，打漿加入IOOOmL水，煮沸糊化，降溫至70°C加入加入 1. 6mL液化酶(無錫賽德生物工程有限公司，16萬單位/mL)70°C水解30分鐘，降溫到60°C， 加入1. 6mL糖化酶(無錫賽德生物工程有限公司，2萬單位/mL) 60°C水解30分鐘，降溫到 40°C，加入0. 4g木瓜蛋白酶(廣西南寧東恒華道生物科技有限公司，80萬單位/g)，水解6 小時，制得銀杏白果水解液；銀杏白果水解液分裝到250mL三角瓶，每瓶lOOmL，110°C滅菌 30分鐘，冷卻后接入蟲草試管斜面菌種，在轉速120轉/分鐘，溫度28°C培養(yǎng)7天，制得蟲草液體搖瓶菌種；白果水解液經(jīng)過110°C滅菌30分鐘，以7%接種量接入蟲草的液體搖瓶菌種，在溫度28°C，攪拌轉速160轉/分，通風量1 :0. 8v/v/m培養(yǎng)5天，制得蟲草銀杏一級液體菌種；銀杏白果水解液經(jīng)過110°C滅菌30分鐘，以7%接種量接入蟲草的一級液體菌種， 在溫度28°C，攪拌轉速160轉/分，通風量1 :0. 8v/v/m培養(yǎng)5天，制得蟲草銀杏發(fā)酵液；蟲蟲草銀杏發(fā)酵液經(jīng)過薄膜濃縮，噴霧干燥(噴霧干燥時進口溫度160°C，出口溫度120°C)得到蟲草銀杏發(fā)酵液干粉；菌絲體經(jīng)過80°C烘干，干燥物粉碎，過200目篩，得到菌絲體干粉， 菌絲體干粉與發(fā)酵液干粉混合均勻即為蟲草銀杏白果功能性食品，食品色質是淺褐色。
實施例3
精確稱取已經(jīng)脫殼的白果200g，打漿，加入2000mL水，煮沸糊化，降溫至80°C，加入 IOOmL液化酶(無錫賽德生物工程有限公司，16萬單位/mL)80°C水解10分鐘，降溫到70°C， 加入IOOmL糖化酶(無錫賽德生物工程有限公司，2萬單位/mL) 70°C水解10分鐘，降溫到 500C，加入30g木瓜蛋白酶(廣西南寧東恒華道生物科技有限公司，80萬單位/g)，水解0. 5 小時，制得銀杏白果水解液；其中所述的搖瓶培養(yǎng)工藝是銀杏白果水解液分裝到250mL三角瓶，每瓶100mL，120°C滅菌10分鐘，冷卻后接入蟲草試管斜面菌種，在轉速180轉/分鐘，溫度33°C培養(yǎng)5天，制得蟲草液體搖瓶菌種；白果水解液經(jīng)過120°C滅菌，以10%接種量接入蟲草的液體搖瓶菌種，在溫度33°C，攪拌轉速250轉/分，通風量1 :1. 2v/v/m培養(yǎng) 3天，制得蟲草銀杏一級液體菌種；銀杏白果水解液經(jīng)過120°C滅菌10分鐘，以10%接種量接入蟲草的一級液體菌種，在溫度33°C，攪拌轉速250轉/分，通風量1 1. 2v/v/m培養(yǎng)3 天，制得蟲草銀杏發(fā)酵液；蟲草銀杏發(fā)酵液經(jīng)過薄膜濃縮，噴霧干燥(噴霧干燥時進口溫度 160°C，出口溫度120°C)得到蟲草銀杏發(fā)酵液干粉；菌絲體經(jīng)過80°C烘干，干燥物粉碎，過 200目篩，得到菌絲體干粉，菌絲體干粉與發(fā)酵液干粉混合均勻即為蟲草銀杏白果功能性食品，食品色質是褐色。實施例4
實施例1、實施例2和實施例3的測定結果顯示在表1。表1 實施例1 3成分分析表 表2 對照組與實驗組小鼠血壓值比較(ImmHg=O. 133KPa,平均值士標準誤)
實驗急 I 最大收I /mnH| /BflHg If'14 73 15+ 6.14 0J4± 5,16平均劫SjciE / in HI 14. 15+ 6. 83冷刺*對Sft93Ji±M6, 13II,Dl±冷刺激實德僵I愈I 80J3 +、71 3. 1±4. U'16, STi24冷刺*實*姆2ftI 7謂±S. 0J6± 3η, 3+ . 52冷肩激實繞倒Jii79 27士1. 4 170 S8±4. 16 5. §8± 7. 15
實施例6
蟲草銀杏食品抗氧化能力評價采用采用普魯士蘭法測定抗氧化能力(趙艷紅，李建科，李國秀.天然抗氧化物體外活性評價方法的優(yōu)選與優(yōu)化.食品科學，2008，29 (6): 64-69)。取1 mg蟲草銀杏食品，加入2. 5 mL pH 6.6的磷酸緩沖液和質量分數(shù)1%鐵氰化鉀溶液2. 5 mL,混合后在50°C下放置20 min,加入質量分數(shù)10%三氯乙酸溶液2. 5 mL混合，取混合液2. 5 mL，加入2. 5 mL蒸餾水和質量分數(shù)0. 1%氯化鐵2. 5 mL, 混勻，靜置10 min，在700 nm處測定吸光度。以蒸餾水代替蟲草銀杏食品重復上述操作作為對照。吸光度越高，抗氧化性越好，還原力越強。每個實施例測定重復三次，結果以平均值表示(表3)。結果顯示實施例1 3的吸光度均顯著高于對照組，說明實施例制得蟲草銀杏食品具有顯著的降低氧化壓力的作用。
表3 實施例1 3蟲草銀杏食品抗氧化作用評價
試驗對照實施例ι實施例2實施例3吸光度0. 610. 740. 780. 8權利要求
1.蟲草銀杏功能性食品，其特征在于其中總黃酮含量0.5 2mg/g，銀杏內(nèi)酯0.1 0. 6 mg/g,總萜類化合物含量3 80mg/g，蛋白質6 20mg/g，可溶性糖0 0. 2mg/g,蟲草酸0. 1 0. 3mg/g,蟲草素0. 05 0. 2mg/g,銀杏酚酸0 5ug/g，氫氰酸0 0. 1 μ g/
2.權利要求1所述的蟲草銀杏功能性食品，其特征在于按下述步驟制備得到精確稱取已經(jīng)脫殼的銀杏白果，打漿加入1 5倍的水，煮沸糊化，加入以質量與體積比計為 0. 2 5. 0%液化酶，80°C水浴10 50分鐘，冷卻到50 70°C后，加入以質量與體積比計為0. 1 4. 0%糖化酶，50 70°C水浴10 50分鐘，待冷卻至40 60°C以下后加入以質量與體積比計為0. 2 3. 0%蛋白酶40 60°C水解0. 5 9小時，制得銀杏白果水解液；銀杏白果水解液100 120°C滅菌10 60分鐘，冷卻后接入蟲草試管斜面菌種，在轉速60 180轉/分鐘，溫度22 33°C培養(yǎng)5 10天，制得蟲草液體搖瓶菌種；銀杏白果水解液經(jīng)過100 120°C滅菌，以體積比3 10%接種量接入蟲草液體搖瓶菌種，在溫度22 33°C， 攪拌轉速60 250轉/分，通風量1 :0. 3 1 1. 2v/v/m培養(yǎng)3 8天，制得蟲草銀杏一級液體菌種；銀杏水解液經(jīng)過100 120°C滅菌10 60分鐘，以體積比為3 10%接種量接入蟲草銀杏一級液體菌種，在溫度22 33°C，攪拌轉速60 250轉/分，通風量1 :0. 3 1 :1.2v/v/m培養(yǎng)3 10天，制得蟲草銀杏發(fā)酵液；蟲草銀杏發(fā)酵液經(jīng)過薄膜濃縮，噴霧干燥得到蟲草銀杏發(fā)酵液干粉，其中噴霧干燥時進口溫度160°C，出口溫度120°C，菌絲體經(jīng)過80°C烘干，干燥物粉碎，過200目篩，得到菌絲體干粉，菌絲體干粉與發(fā)酵液干粉混合均勻即為蟲草銀杏白果功能性食品。
3.權利要求2所述的蟲草銀杏功能性食品，其特征在于其中銀杏白果水解液制備過程中所使用的蛋白酶為風味蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、高效水解蛋白酶、 小麥蛋白水解專用酶。
4.權利要求1所述的蟲草銀杏功能性食品的用途，可用于預防高血壓或抗氧化。
全文摘要
本發(fā)明公開了蟲草銀杏功能性食品，涉及生物技術領域。本發(fā)明采用三種酶水解銀杏白果，獲得銀杏白果水解液，該水解液中含有銀杏黃酮、萜類化合物、氨基酸和肽類、淀粉等活性化合物，其中氨基酸和肽類含量≥1％，淀粉含量≥2%，該水解液添加銀杏葉提取物后通過蟲草菌種轉化、打漿、濃縮和干燥后獲得蟲草銀杏功能性食品。該產(chǎn)品中由于含有黃酮類化合物，萜類以及蟲草素等活性成分，因而具有降低血壓和體內(nèi)氧化壓力之功效。
文檔編號A23L1/28GK102246960SQ20111019767
公開日2011年11月23日 申請日期2011年7月15日 優(yōu)先權日2011年7月15日
發(fā)明者任曉鋒, 侯莎莎, 唐懿駿, 張志才, 張若花, 楊芳 申請人:江蘇大學