專利名稱：木瓜總酚酸提取物在制備防治關節(jié)炎藥物或食品中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，是木瓜總酚酸提取物用于制備防治痛風性關節(jié)炎或類風濕性關節(jié)炎的藥物或食品的新用途。
背景技術：
痛風性關節(jié)炎是由于嘌呤代謝障礙引起的血尿酸鹽濃度增高而導致體內尿酸鹽沉積于關節(jié)部位所致的一種代謝性骨關節(jié)疾病，主要侵犯關節(jié)的滑膜、關節(jié)軟骨和皮下組織。發(fā)病時下肢小關節(jié)卒然紅腫熱痛，不能行走，非常痛苦?，F(xiàn)代醫(yī)學認為痛風性關節(jié)炎急性發(fā)作其主要的病理改變是尿酸結晶(MSU)在關節(jié)周圍組織沉積引起急性炎癥反應。MSU與滑膜液中IgG結合，被白細胞及滑膜細胞吞噬，促使這些細胞立即釋放組胺、凝血因子、補體及花生四烯酸(AA)等物質，AA通過環(huán)氧化酶和脂氧化酶兩條途徑分別生成PGE2及白三烯，進而促使IL-I β、IL-8等因子大量分泌，所有這些物質短期中引起局部血管擴張、通透性増加、滲出、水腫、白細胞聚集、發(fā)熱等炎癥反應，并發(fā)展到高峰。痛風性關節(jié)炎屬于中醫(yī)學“痹癥”范疇，與痹痛、風痹關系密切。其病因是風、寒、濕、熱等外部的侵入，內因與正氣不足，勞逸不當，體質虛虧有夫，主要病機為留滯經脈，氣血運行滯澀，腎氣虧損，表現(xiàn)有虛有實，以實證為主。目前國內外治療痛風性關節(jié)炎仍以秋水仙堿為首選，但由于臨床上的毒副作用較大，而不能長期應用，在臨床應用上受到嚴格限制。類風濕性關節(jié)炎最早由Alfred Garod(1858年)首先從痛風和風濕性關節(jié)炎中區(qū)分出來，是ー種以關節(jié)和關節(jié)周圍組織的非感染性炎癥為主的全身性自身免疫性疾病，其病理特點為關節(jié)滑膜的慢性炎癥，細胞浸潤，滑膜翳形成，軟骨及骨組織的侵襲，導致關節(jié)結構的破壞，最終導致關節(jié)畸形、功能障礙或喪失，甚至殘廢，喪失生活能力。類風濕性關節(jié)炎是ー個世界范圍性疾病，據統(tǒng)計，其在全世界成人中的發(fā)病率約占1% 2%，井隨著年齡的增長而增高，35歲以下成人的發(fā)病率約O. 3%，而65歲以上者發(fā)病率超過10%，我國患病率為O. 3% O. 5%。類風濕性關節(jié)炎目前尚無特異療法，藥物治療是目前主要的治療手段，盡管抗風濕藥物很多，或因不良反應嚴重，或因控制早期癥狀能力差而一直無重大突破，目前還缺乏令人滿意的防治類風濕性關節(jié)炎藥物，從中藥開發(fā)標本兼治、安全有效的藥物有著重要的實際價值。中藥木瓜為我國常用中藥，具有平肝舒筋、和胃化濕等功效，《中國藥典》2010年版一部收載木瓜為薔薇科植物貼梗海棠Chaenomeles speciosa (Sweet) Nakai的干燥近成熟果實，皺皮木瓜是其果實加工而形成的產品。另外還有兩種也廣泛作木瓜使用光皮木瓜為薔薇科植物棋楂C. sinensis (Thouin) Koehen的果實；木瓜海棠為薔薇科植物毛葉木瓜C. cathayensis (Hemsl) Schneid的果實。皺皮木瓜主產安徽、山東、浙江、湖北、云南、貴州、四川等地，主要含有機酸、三萜類、黃酮類、多糖等成分。在國內外研究中，目前主要有對木瓜總苷及總酚酸提取物抗感染性炎癥和鎮(zhèn)痛方面的報道(中國實驗方劑學雜志，2011，17(1) :113-116,119 Journal of Medical Food, 2009,12(5) : 1016-1022)，但尚未見有木瓜總酚酸提取物用于防治痛風性關節(jié)炎或類風濕性關節(jié)炎方面的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種木瓜總酚酸提取物用于制備防治痛風性關節(jié)炎或類風濕性關節(jié)炎藥物的新用途。本發(fā)明木瓜總酚酸提取物的制備方法如下按常規(guī)將皺皮木瓜果實粉碎后，以30% -80%乙醇水溶液常溫下浸泡24-48小時，得浸泡液，再于常溫下用30% -80%乙醇水溶液滲漉提取2-5次，合并浸泡液和滲漉液，即得木瓜提取液；將上述木瓜提取液濃縮后離心或過濾，棄沉淀，將上清液或濾液用大孔樹脂吸附，以蒸餾水淋洗除去雜質，然后再以5% -20%乙醇水溶液進行洗脫，收集洗脫液，濃縮至無醇味，按同法再用大孔樹脂吸附和洗脫，合并洗脫液并濃縮至無醇味，干燥后即為木瓜總酚酸提取物。經成分分析，本發(fā)明木瓜提取物主要成分為原兒茶酸、氯原酸等多種酚酸類化合物，其中含原兒茶酸30-35 %，含氯原酸20-25 %，酚酸類化合物占木瓜提取物的50-60%，故稱為木瓜總酚酸提取物。動物實驗一、本發(fā)明木瓜總酚酸提取物經如下動物實驗，說明其具有防治痛風性關節(jié)炎活性I.通過制備尿酸結晶致大鼠足趾腫脹模型，觀察木瓜總酚酸提取物對痛風性關節(jié)炎的預防作用。木瓜總酚酸提取物的低、中、高三個劑量組(按體重劑量依次為50mg/kg，100mg/kg,200mg/kg)與模型對照組比較，均能明顯抑制尿酸結晶引起的大鼠踝關節(jié)腫脹，特別是高劑量組在造模后I 6小時均具有非常顯著的抑制作用。結果表明木瓜總酚酸提取物對痛風性關節(jié)炎足趾腫脹具有明顯的預防作用。2.通過制備尿酸結晶誘導家兔痛風性關節(jié)炎模型，觀察木瓜總酚酸提取物對痛風性關節(jié)炎的預防作用。陽性對照組(藥物為秋水仙堿)和木瓜總酚酸提取物低、中、高三個劑量組(按體重劑量依次為25mg/kg，50mg/kg，100mg/kg)均可降低MSU致炎家兔的關節(jié)液中白細胞滲出，改善關節(jié)組織炎癥反應程度。其中，中劑量組與模型對照組相比差異顯著(P< 0. 05)，高劑量組及陽性對照組與模型對照組相比差異非常顯著(P < 0. 01)。病理切片顯示，木瓜總酚酸提取物和陽性對照藥秋水仙堿一樣，均可明顯減輕滑膜組織的毛細血管充血、腫脹、壞死及炎性細胞浸潤，從而表明木瓜總酚酸提取物具有抑制痛風性關節(jié)炎炎癥反應的藥效學基礎，對痛風性關節(jié)炎具有顯著的預防和改善作用。3.按照McCarty，DJ經典造模方法制備家兔痛風性關節(jié)炎模型，觀察木瓜總酚酸提取物治療痛風性關節(jié)炎的作用機制。與模型對照組比較，木瓜總酚酸提取物組和陽性對照組的家兔關節(jié)液IL-I β、IL-8水平均顯著下降(P < 0. 01)，木瓜總酚酸提取物組甚至比陽性對照組的關節(jié)液IL-I β、IL-8水平還低(P < 0. 05)，說明木瓜總酚酸提取物對兔痛風性關節(jié)炎關節(jié)液中IL-I β和IL-8的水平有明顯下調作用。 因此木瓜總酚酸提取物可用于制備治療痛風性關節(jié)炎的藥物或食品。
二、本發(fā)明木瓜總酚酸提取物經如下動物實驗，說明其具有防治類風濕性關節(jié)炎活性通過建立大鼠的佐劑關節(jié)炎模型，觀察木瓜總酚酸提取物對類風濕性關節(jié)炎的防治作用。結果顯示木瓜總酚酸提取物預防性給藥可明顯抑制注射局部的早期炎癥反應和8天后的再度腫脹，對大鼠佐劑性關節(jié)炎原發(fā)病變有顯著的消腫、抗炎效果；對繼發(fā)病變的預防性給藥，可抑制對側足腫脹，使注射側足腫脹明顯消退，減輕再腫脹的程度；對繼發(fā)病變的治療性給藥，可降低注射對側足爪的腫脹度、前肢和尾部的病變度。說明木瓜總酚酸提取物對類風濕性關節(jié)炎的原發(fā)病變和繼發(fā)病變有顯著的預防和治療作用。因此木瓜總酚酸提取物可用于制備防治類風濕性關節(jié)炎的藥物。
本發(fā)明木瓜總酚酸提取物制備方法簡便，具有明顯的防治痛風性關節(jié)炎或類風濕性關節(jié)炎活性，因此可用于制備防治痛風性關節(jié)炎或類風濕性關節(jié)炎的藥物或食品。


圖I為尿酸結晶誘導痛風性關節(jié)炎的各組家兔滑膜病理切片對照圖。
具體實施例方式下面結合實施例對本發(fā)明作詳細描述。實施例I制備木瓜總酚酸提取物將IOOkg的中藥木瓜干燥藥材粉碎后，過10目篩，投入提取罐，以70%乙醇水溶液200L常溫下浸泡24h,于常溫下用70%乙醇水溶液1500L滲漉提取3次,合并浸泡液及滲漉液，濃縮至50L，過濾，將濾液按常規(guī)用聚苯乙烯多孔性吸附大孔樹脂吸附，柱內大孔樹脂裝量為200L，以1500L蒸餾水淋洗除去雜質，然后再以10%乙醇水溶液進行洗脫，收集2000L洗脫液，濃縮至無醇味，再用同法進行二次大孔樹脂吸附、脫附，干燥后即得棕褐色粉末狀木瓜總酚酸提取物O. 25kg。按生藥投藥量計算，木瓜總酚酸提取物得率為O. 25%。取實施例I得到的木瓜總酚酸提取物2g，用50%甲醇溶解后通過S印hadex LH-20凝膠柱，用50%甲醇洗脫，薄層層析法檢測，收集洗脫液后合并相同部分，得到兩個單體化合物，用ESI-MS、NMR等光譜技術和化學方法鑒定所分離化合物為原兒茶酸、氯原酸。再用高效液相色譜法檢測木瓜總酚酸提取物中原兒茶酸、氯原酸的含量分別為30-35%、20-25%,確定酚酸類化合物占木瓜提取物的50-60%以上。動物實驗實驗所用的木瓜總酚酸提取物由實施例I制備，所用的動物由第二軍醫(yī)大學動物中心提供。一、木瓜總酚酸提取物防治痛風性關節(jié)炎的動物實驗I、木瓜總酚酸提取物對大鼠痛風性關節(jié)炎足跖腫脹的預防實驗本實驗通過制備尿酸結晶致大鼠足趾腫脹模型，觀察木瓜總酚酸提取物對大鼠痛風性關節(jié)炎的預防作用。尿酸結晶的制備尿酸，sigma公司出品,批號120k5305 ;碳酸氫鈉,泌陽盤古藥業(yè)有限責任公司，批號071212。將5g尿酸置IOOOml沸水中，用NaHC03調pH至7. 4，再加熱至95°C。室溫冷卻并輕輕攪拌，4°C冰箱冷卻，過濾，得微晶型尿酸鈉結晶。臨用前高溫滅菌，用無菌生理鹽水配成100mg/ml。取雄性Wistar大鼠50只，體重220±20克，隨機分成5組，即模型對照組、陽性對照組、木瓜總酚酸提取物低、中、高劑量組，每組10只大鼠。陽性對照組，其推薦臨床平均秋水仙堿劑量為O. 05mg/Kg/人/日(人按60Kg體重計算)，轉換為大鼠劑量為O. 3mg/kg木瓜總酚酸提取物組，根據預實驗結果，木瓜總酚酸提取物低、中、高劑量組按體重給藥劑量依次為 50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg ；模型對照組給予等體積生理鹽水。
給藥途徑灌胃，體積為按體重每只大鼠10ml/kg。給藥次數連續(xù)給藥7天,姆天I次。實驗方法給藥前，測量每只大鼠右后足踝關節(jié)圓周長。按上述給藥劑量連續(xù)灌胃給藥七天，每天一次，最后一次給藥Ih后每只大鼠右后足跖皮下注射MSU混懸液(濃度為100mg/ml) 0. Iml致炎，并測量致炎后lh, 2h、3h、4h、5h、6h大鼠右踝關節(jié)圓周長,計算各組腫脹率，進行組間比較。計算公式為腫脹率(％)=(致炎后周長-致炎前周長)/致炎前周長X 100%實驗數據采用SPSS 13.0進行統(tǒng)計分析，組間多項數據比較采用單因素方差分析，數據以(x±5 )表示，P < 0. 05作為顯著性差異。實驗結果結果見表I.表I.木瓜總酚酸提取物對大鼠痛風性關節(jié)炎踝關節(jié)腫脹的影響(i±^,n = 10)
權利要求
1.木瓜總酚酸提取物在制備防治關節(jié)炎藥物或食品中的應用，其特征在于所說的關節(jié)炎為痛風性關節(jié)炎或類風濕性關節(jié)炎，木瓜總酚酸提取物的制備方法如下 1)按常規(guī)將木瓜果實粉碎后，以30^-80%乙醇水溶液常溫下浸泡24-48小時，得浸泡液，再于常溫下用30% -80%乙醇水溶液滲漉提取2-5次，合并浸泡液和滲漉液，即為木瓜提取液； 2)純化 將上述木瓜提取液濃縮后離心或過濾，棄沉淀，將上清液或濾液用聚苯乙烯多孔性大孔樹脂吸附，以蒸餾水淋洗去除雜質，然后再以5% -20%乙醇水溶液進行洗脫，收集洗脫液，濃縮至無醇味，按同法再用大孔樹脂吸附和洗脫，合并洗脫液并濃縮至無醇味，干燥后即為木瓜總酚酸提取物，其中含原兒茶酸30-35 %，含氯原酸20-25 %，酚酸類化合物占木瓜提取物的50-60%。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，是木瓜總酚酸提取物在制備防治關節(jié)炎藥物或食品中的應用，其特征在于所說的關節(jié)炎為痛風性關節(jié)炎或類風濕性關節(jié)炎。本發(fā)明用木瓜果實制備木瓜總酚酸提取物，經成分分析，本發(fā)明木瓜提取物主要成分為原兒茶酸、氯原酸等多種酚酸類化合物，其中含原兒茶酸30-35％，含氯原酸20-25％，酚酸類化合物占木瓜提取物的50-60％，故稱為木瓜總酚酸提取物。經動物實驗。本發(fā)明木瓜總酚酸提取物具有明顯的防治痛風性關節(jié)炎或類風濕性關節(jié)炎活性，因此可用于制備防治痛風性關節(jié)炎或類風濕性關節(jié)炎的藥物或食品。
文檔編號A23L1/29GK102631434SQ201210124980
公開日2012年8月15日 申請日期2012年4月25日 優(yōu)先權日2012年4月25日
發(fā)明者孫蕾, 孫連娜, 席忠新, 李霞, 楊穎博, 邱彥, 陳萬生 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學