專利名稱：轉(zhuǎn)基因油菜標(biāo)準(zhǔn)樣品、其建立方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于轉(zhuǎn)基因食品檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及轉(zhuǎn)基因油菜RT73的標(biāo)準(zhǔn)樣品制備、其建立方法及其在檢測轉(zhuǎn)基因油菜RT73中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
近年來，轉(zhuǎn)基因作物培育技術(shù)取得突破進(jìn)展，陸續(xù)推出了ー批新品種，在改善農(nóng)作物品質(zhì)、提高產(chǎn)量等方面發(fā)揮了巨大作用。然而，人們對轉(zhuǎn)基因食品的安全性問題存在著很多的爭論。轉(zhuǎn)基因作物的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)、可能帶來的環(huán)境問題、作為食品對人體健康影響的問題、產(chǎn)品加貼標(biāo)簽問題、運(yùn)輸問題、國際貿(mào)易問題、知識(shí)產(chǎn)權(quán)問題等已引起世界廣泛性的關(guān)注。轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性問題已由學(xué)術(shù)觀點(diǎn)分岐，發(fā)展到知識(shí)產(chǎn)權(quán)、環(huán)境問題、經(jīng)濟(jì)問題甚至政治問題。歐盟和ー些國家相繼出臺(tái)了轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品管理法規(guī)，我國于2002年3月開始實(shí)施《農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全管理?xiàng)l例》及其三個(gè)配套管理辦法。2001年，歐盟要求對轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行標(biāo)識(shí)管理，并提出對非轉(zhuǎn)基因食品只要不是有意污染，允許含有1%的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品(閾值)，而不用標(biāo)識(shí)。日本、韓國、澳大利亞等不同國家限量閾值不同，從1%_5%不等。轉(zhuǎn)基因食品的檢測是這些g在保護(hù)生物和生態(tài)安全、維護(hù)消費(fèi)者權(quán)益、促進(jìn)貿(mào)易和經(jīng)濟(jì)健康發(fā)展的法規(guī)和政策的基本依據(jù)，其標(biāo)準(zhǔn)化將為制訂、實(shí)施和改進(jìn)這些法規(guī)和政策提供有力保證。國內(nèi)外轉(zhuǎn)基因食品的檢測研究剛剛起步，許多問題都有待解決，標(biāo)準(zhǔn)樣品則是該領(lǐng)域尚未解決的重要問題。開展轉(zhuǎn)基因成分檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制在保證測試結(jié)果的可比性和溯源性、保障食品安全、解決貿(mào)易爭端，促進(jìn)經(jīng)濟(jì)發(fā)展等方面均具有重要的意義。更為嚴(yán)峻的問題是目前國外僅有轉(zhuǎn)基因大豆粉、轉(zhuǎn)基因玉米粉M0N810等少數(shù)幾個(gè)品種的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，價(jià)格非常昂貴，手續(xù)繁多，周轉(zhuǎn)時(shí)間長，不能適時(shí)地滿足檢驗(yàn)檢疫工作的需要；日本正在加緊研制轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測的分子DNA參考標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的定量檢測；2005年，我們率先在國內(nèi)研制成功了轉(zhuǎn)基因大豆粉國家ニ級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，填補(bǔ)了我國在轉(zhuǎn)基因成分檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品方面的空白，但轉(zhuǎn)基因油菜籽等標(biāo)準(zhǔn)樣品仍是空白。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于國內(nèi)轉(zhuǎn)基因標(biāo)準(zhǔn)樣品緊缺的狀況，本項(xiàng)轉(zhuǎn)基因油菜RT73標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備完成，對全面深入的研究解決轉(zhuǎn)基因成分檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備技術(shù)和穩(wěn)定性保證技術(shù)，積極開展我國轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制，添補(bǔ)該測量領(lǐng)域的空白，具有很重要的現(xiàn)實(shí)意 義。轉(zhuǎn)基因油菜籽RT73品系簡介抗草甘膦轉(zhuǎn)基因油菜(Roundup Ready )RT73品系含有的外源基因是1)耐除草劑基因CP4 EPSPS，受FMV35S+CTP2啟動(dòng)子和E9 3’終止子調(diào)控；2)標(biāo)記篩選基因G0Xv247，啟動(dòng)子和終止子分別為FMV35S+CTP1和E9 3’。質(zhì)粒圖譜為
權(quán)利要求
1.轉(zhuǎn)基因油菜RT73標(biāo)準(zhǔn)樣品，其特征在于，通過下述方法制備 a取油菜籽原料放在研缽中，于通風(fēng)櫥內(nèi)加入乙醚并用研棒攪拌、研磨，待乙醚蒸發(fā)后，將其過100目標(biāo)準(zhǔn)篩，收集粉末備用； b向步驟a所獲得的粉末中加入等質(zhì)量的水，攪拌均勻后，靜置lh，棄上清，將沉淀物制備成凍干粉； c以轉(zhuǎn)基因油菜RT73為原料，按照步驟a和b所述方法制備凍干粉；d以非轉(zhuǎn)基因油菜籽為原料，按照步驟a和b所述方法制備凍干粉；e將步驟c制備的凍干粉與步驟d制備的凍干粉按2. 5 :100的重量比例混合后，向混合粉末中加入等質(zhì)量的水，攪拌均勻后，靜置lh，棄上清，將沉淀物制備成凍干粉并分裝，(T4°C貯存； 上述步驟ITe中任一步驟所述的凍干粉，其制備方法為 ①樣品預(yù)凍先把樣品在_80°C冷凍2h； ②冷凍過程關(guān)好冰凍干燥機(jī)的干燥室門，開始干燥室制冷；干燥室溫度降至_35°C時(shí)，開始冷卻阱制冷；冷卻阱制冷溫度降至_40°C時(shí)，將步驟①處理的樣品迅速放入干燥室內(nèi)，關(guān)好干燥室門；啟動(dòng)真空泵開始抽真空；當(dāng)真空度降至O. 5Torr時(shí)，結(jié)束冷凍過程； ③樣品干燥干燥室的溫度設(shè)置為15°C，當(dāng)真空度降至O.ITorr時(shí)，樣品已干燥好； ④關(guān)閉真空泵，使干燥室與外界大氣相通，待內(nèi)外氣壓平衡后，打開干燥室門，取出樣品，迅速旋緊瓶蓋。
2.—種轉(zhuǎn)基因油菜RT73的Real-Time PCR檢測試劑盒，其特征在于，包括轉(zhuǎn)基因油菜檢測基因和陽性標(biāo)準(zhǔn)對照品 陽性標(biāo)準(zhǔn)對照品是權(quán)利要求I所述的轉(zhuǎn)基因油菜RT73標(biāo)準(zhǔn)樣品，最小取樣量為IOOmg ； 轉(zhuǎn)基因油菜檢測基因，包括 RT73基因的檢測引物和探針序列 正向引物SEQIDN0:1 反向引物SEQ ID NO :2 探針SEQ ID NO 3 FatA基因的檢測引物和探針序列 正向引物SEQ ID NO :4 反向引物SEQ ID NO :5 探針SEQ ID NO :6。
全文摘要
本發(fā)明公開一種轉(zhuǎn)基因油菜RT73的標(biāo)準(zhǔn)樣品制備、其建立方法及其在檢測轉(zhuǎn)基因油菜RT73中的應(yīng)用，分別以轉(zhuǎn)基因油菜RT73或非轉(zhuǎn)基因油菜為原料，將原料研磨、過篩、加水，攪拌、靜置、將沉淀物制備成凍干粉；再將二者以科學(xué)的比例混合，并重復(fù)“加水，攪拌、靜置、將沉淀物制備成凍干粉”的過程，分裝,0℃~4℃貯存；通過上述方法獲得轉(zhuǎn)基因油菜RT73的標(biāo)準(zhǔn)樣品，也可以應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因油菜RT73的Real-Time PCR檢測試劑盒。這對全面深入的研究解決轉(zhuǎn)基因成分檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備技術(shù)和穩(wěn)定性保證技術(shù)，積極開展我國轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制，添補(bǔ)該測量領(lǐng)域的空白，具有很重要的現(xiàn)實(shí)意義。
文檔編號C12Q1/68GK102703590SQ20121017336
公開日2012年10月3日 申請日期2012年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月30日
發(fā)明者于兵, 徐君怡, 曹冬梅, 曹際娟 申請人:于兵, 徐君怡, 曹冬梅, 曹際娟