專利名稱：預(yù)防或者治療纖維化疾病的中藥組合物及制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及一種預(yù)防或者治療纖維化疾病的中藥組合物及制備方法和用途。
背景技術(shù)：
組織纖維化是內(nèi)外致病原引起組織損傷的共同后果，也是多種感染和非感染性炎癥疾病的基本病理改變。組織纖維增生不僅見于各種慢性肺疾病、心血管疾病、慢性進(jìn)行性腎病、肝硬化、慢性胰腺炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡以及黃斑變性等，而且能夠影響腫瘤生長與轉(zhuǎn)移、促進(jìn)器官移植的慢性排斥反應(yīng)發(fā)生。事實(shí)上，組織纖維化累及人體幾乎所有器官和系統(tǒng)，是許多疾病致殘、致死的主要原因，嚴(yán)重威脅人類健康。據(jù)美國有關(guān)統(tǒng)計(jì)資料證明，因各種疾病而致死的病人中，接近45%可以歸于各種組織纖維增生疾病。長期以來，抗炎藥，特別是糖皮質(zhì)激素，是治療肺纖維化的主要藥物，然而，糖皮質(zhì)激素的治療不僅副作用大，效 果不確切，長期使用還可能加重肺纖維化的發(fā)展。纖維增生性疾病屬于典型的由遺傳、環(huán)境等多種因素參與的慢性復(fù)雜疾病，其發(fā)病機(jī)制是由多靶點(diǎn)失衡造成的，單靶點(diǎn)藥物難以獲得足夠的治療效果，并且毒副作用較大。對多種纖維化疾病模型的研究發(fā)現(xiàn)，纖維化疾病是ー類Th2免疫反應(yīng)占優(yōu)勢的疾病，Th2免疫反應(yīng)是維持機(jī)體及受損組織處于慢性炎癥狀態(tài)、促進(jìn)組織發(fā)生纖維化的原兇。Th2細(xì)胞因子如IL-5、IL-13能促進(jìn)和加重器官纖維化；相反，Thl細(xì)胞因子如干擾素Y則具有抗纖維化的作用。目前，組織纖維增生性疾病仍然沒有針對性有效的治療方案。因此，開發(fā)新的抗組織纖維化藥物以提高患者生活品質(zhì)和降低死亡率，是一件迫在眉睫的事。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題就是針對的現(xiàn)有技術(shù)缺乏有效的預(yù)防或治療纖維化疾病的藥物的不足，提供一種新的預(yù)防或者治療纖維化疾病的中藥組合物及制備方法和用途。本發(fā)明提供一種預(yù)防或者治療纖維化疾病的中藥組合物，其配方包括原料A和/或原料A的提取物；所述的原料A的提取物為水或こ醇水溶液的提取物；其中，所述的原料A 包括黃苗、黑木耳(Auricularia auricula (L. exHooke) Underw)、三七、以及靈芝 B ;所述的靈芝 B 為赤芝(Ganoderma Lucidum (Leyss. ex Fr. ) Karst.)和 / 或紫芝(Ganodermasinense Zhao, Xu et Zhangノ；白勺胃LAuricularia auricula (L. exHooke；Underw)、‘三七、以及靈芝B之間的重量比為9 30 9 30 Γ9 6 12。本發(fā)明中，所述的黃苗、黑木耳(Auriculariaauricula (L. exHooke) Underw)>三七、以及靈芝B之間的重量比較佳的為12:9:1 :6。需要說明的是，本發(fā)明中所說的原料A的重量比均以原料的重量計(jì)量，即若本發(fā)明中藥組合物配方中使用的是原料A的提取物，在計(jì)算用量時也以其原料A的重量計(jì)量。本發(fā)明中，所述的黃芪、三七本領(lǐng)域技術(shù)人員均知，均為中國藥典收錄名稱定義的中藥材。本發(fā)明中，所述的赤芝(GanodermaLucidum (Leyss. ex Fr. ) Karst.)、紫芝(Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang)為本領(lǐng)域常規(guī)所用藥材，為中國藥典收錄,其中，所述的紫芝(Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang)的同物異名為紫芝(Ganodermajaponicum(Fr.)Lloyd)。本發(fā)明中，所述的原料A在直接使用吋，一般按本領(lǐng)域常規(guī)粉碎使用，較佳的使粒徑大小過40目篩即可。本發(fā)明中，所述的原料A的提取物一般按本領(lǐng)域常規(guī)方法制得，較佳的按下述方法制得將原料A用3 10重量倍數(shù)的水或3 10重量倍數(shù)的70v/v% 95v/v%こ醇水溶液回流提取2 3次，每次提取I 3小時，合并提取液，過濾，濃縮，干燥，粉碎即可。其中，所述的原料A的提取物在制備時按本領(lǐng)域常規(guī)操作，既可以將原料A中各原料分別制備提取物后混合，也可以各原料混合后再制備提取物。其中，當(dāng)將原料A中各原料分別制備提取物后混合時，黃芪的提取物的提取時間較佳的為1-2小時；黑木耳(Auricularia auricula (L. exHooke)Underw)的提取物的提取時間較佳的為I. 5 3小時；三七的提取物、以及靈芝B的提取物的提取時間分別較佳的為2^3小時。本發(fā)明中，所述的中藥提取物較佳的還含有原料C和/或原料C的發(fā)酵培養(yǎng)物，所述的原料 C 為冬蟲夏草(Cordyceps sinensis (Berk. ) Sacc)和 / 或隱孔菌(Crytoporusvolvatus (Peck. ノHubbara. )0其中，所述的冬蟲夏草(Cordyceps sinensis (Berk. ) Sacc)的發(fā)酵培養(yǎng)物較佳的為蝙幅蛾被毛孢(Hiresutella hepiali Chen et Shen. (1985))的發(fā)酵培養(yǎng)物；蝙幅蛾被毛抱(Hiresutella hepiali Chen et Shen. (1985))的同種異名為中國被毛抱(Hiresutella sinensis X. J. Liu, Y. L. Guo. (1989))。其中，所述的隱孔菌(Crytoporus volvatus (Peck. )Hubbara.)的發(fā)酵培養(yǎng)物較佳的為中華隱孔菌(Crytoporus sinensis Sheng H. Wu&M. Zang)的發(fā)酵培養(yǎng)物。本發(fā)明中，所述的冬蟲夏草發(fā)酵培養(yǎng)物為按本領(lǐng)域常規(guī)發(fā)酵方法將冬蟲夏草發(fā)酵培養(yǎng)獲得，較佳的由下述方法制得將冬蟲夏草菌種接種至液體培養(yǎng)基中，之后進(jìn)行通氣培養(yǎng)得發(fā)酵培養(yǎng)物，干燥即可。所述的冬蟲夏草菌種為按本領(lǐng)域常規(guī)方法經(jīng)過ニ級或三級種子培養(yǎng)獲得的菌種。其中，所述的ニ級種子培養(yǎng)是指依次經(jīng)過斜面菌種培養(yǎng)、搖瓶種子培養(yǎng)、一級和ニ級種子罐培養(yǎng)。所述的三級級種子培養(yǎng)是指依次經(jīng)過斜面菌種培養(yǎng)、搖瓶種子培養(yǎng)、一級、ニ級和三級種子罐培養(yǎng)。所述的培養(yǎng)的條件為本領(lǐng)域常規(guī)操作，較佳的為10°c 18°C、pH
6.O 7. 5。所述的斜面菌種培養(yǎng)、搖瓶種子培養(yǎng)、ー級、ニ級和三級種子罐培養(yǎng)的培養(yǎng)時間，較佳的分別為30 60天、10天、6天、6天、6天和6 12天。其中，所述的液體培養(yǎng)基為本領(lǐng)域常規(guī)使用，較佳的為重量百分比的碳源0.5% 5%，氮源0. 2% 5%、微量元素、維生素，補(bǔ)足余量的水；更佳的為重量百分比蠶蛹粉2. 0%,蛋白胨I. 5%，玉米粉I. 8%，蔗糖I. 6%，磷酸ニ氫鉀0. 1%，硫酸鎂0. 05%，其余為水分。其中，所述的通氣按本領(lǐng)域常規(guī)操作，一般為通入無菌空氣。 其中，所述的干燥為本領(lǐng)域常規(guī)操作，較佳的為噴霧干燥。所述的干燥可按本領(lǐng)域常規(guī)，直接將發(fā)酵培養(yǎng)物勻漿后干燥，也可以先過濾得菌絲體和發(fā)酵濾液(或經(jīng)膜分離獲得有效發(fā)酵濾液)之后分別干燥。本發(fā)明中，所述的隱孔菌發(fā)酵培養(yǎng)物為按本領(lǐng)域常規(guī)發(fā)酵方法將隱孔菌發(fā)酵培養(yǎng)獲得，同前述冬蟲夏草發(fā)酵培養(yǎng)物的制備方法，即較佳的由下述方法制得將隱孔菌菌種接種至液體培養(yǎng)基中，之后進(jìn)行通氣培養(yǎng)得發(fā)酵培養(yǎng)物，干燥即可。所述的隱孔菌菌種為按本領(lǐng)域常規(guī)方法經(jīng)過ニ級或三級種子培養(yǎng)獲得的菌種。其中，所述的ニ級種子培養(yǎng)、三級級種子培養(yǎng)如前所述。所述的培養(yǎng)的溫度為本領(lǐng)域常規(guī)操作，較佳的為20°C 30°C。所述的斜面菌種培養(yǎng)、搖瓶種子培養(yǎng)、ー級、ニ級和三級種子罐培養(yǎng)的培養(yǎng)時間，較佳的分別為3 10天、6天、6天、6天、6天和I 10天。其中，所述的液體培養(yǎng)基、通氣、干燥的操作同前述冬蟲夏草發(fā)酵培養(yǎng)物制備操作條件。所述的液體培養(yǎng)基較佳的為重量百分含量葡萄糖O. 6%-3. 0%，麥芽糖I. 5%-1. 8%，玉米粉 0-0. 3%，蛋白胨 O. 1%-0. 5%,酵母粉 O. 8%-1%，KH2PO4 O. 1%，MgSO4 · 7H20 O. 05%,維生素B1 O. 05%-0. 1%，瓊脂 0-2. 7%, pH 4. 5-5. 0，其余成分為水。 本發(fā)明中，所述的原料C和/或原料C的發(fā)酵培養(yǎng)物的用量較佳的為重量份數(shù)3 20，更佳的為3 9。所述的原料C的發(fā)酵培養(yǎng)物計(jì)量以原料C的發(fā)酵培養(yǎng)物重量計(jì)。本發(fā)明中，所述的靈芝B和/或靈芝B提取物還可以被替代為原料C和/或原料C的發(fā)酵培養(yǎng)物，獲得本發(fā)明的中藥提取物。本發(fā)明中，所述的中藥組合物還可以含有藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明中，所述的藥學(xué)上可接受的載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體。其中，稀釋劑如淀粉、糖粉、糊精、微晶纖維素、甘露醇、乳糖和大豆油等；粘合劑如聚こ烯吡咯烷酮或羥丙基纖維素等；崩解劑如羧甲基纖維素鈉或低取代羥丙纖維素等；潤滑劑如硬脂酸鎂或滑石粉等；穩(wěn)定劑如羧甲基纖維素鈉或環(huán)糊精等；防腐劑如對羥基苯甲酸こ酯或苯甲酸鈉等。另外，還可以在該藥物組合物中加入其他輔助劑如香味劑和/或甜味劑如蔗糖、果糖和天冬甜素等。該藥物組合物的活性成分是治療有效量的上述的本發(fā)明的提取物。該藥物組合物可采用醫(yī)學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的方法，將所述的活性成分與藥學(xué)上可接受的載體制成各種劑型。用于ロ服時，可將其通過常規(guī)方法包括混合、制粒、干燥、裝膠囊或壓片或分裝成顆粒劑等制備成常規(guī)的固體制劑如片劑、膠囊、軟膠囊、液體制劑、顆粒劑、煎膏劑、丸剤、懸浮齊U、分散劑或糖漿劑等。本發(fā)明的中藥組合物較佳經(jīng)ロ服途徑應(yīng)用，安全有效。所述的中藥組合物的使用劑量根據(jù)患者的年齡和病情而定，常用的每日劑量約為O. OOOf 100g，優(yōu)選O. 01 5(^,更優(yōu)選O. I 20g,給藥次數(shù)一天一次或數(shù)次。本發(fā)明還提供前述中藥組合物的制備方法為按配方，將各成分均勻混合即可。本發(fā)明還提供前述的中藥提取物在制備預(yù)防或治療纖維化疾病的藥物中的用途。本發(fā)明中，所述的纖維化疾病一般包括心臟纖維化疾病、肺臟纖維化疾病、腎臟纖維化疾病或肝臟纖維化疾病等在內(nèi)的具有纖維增生性特征的疾病。其中，所述的肺纖維化疾病通常由慢性阻塞性肺病(C0PD)、特發(fā)性肺纖維化或間質(zhì)性肺炎等疾病引起或伴發(fā)。本發(fā)明中藥組合物能有效治療經(jīng)典藥物性導(dǎo)致肺纖維化疾病模型(博來霉素模型)。其中，所述的心臟纖維化疾病通常由高血壓心臟病、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(又稱冠心病)、擴(kuò)張性心肌病、肥厚性心肌病、心律失常(特別是心房纖顫或室性心動過速)或慢性心衰等疾病引起或伴發(fā)。本發(fā)明中藥組合物能有效治療經(jīng)典藥物性導(dǎo)致心臟纖維化疾病模型(阿霉素模型)。其中，所述的肝纖維化疾病(肝硬化)通常由病毒性肝炎、酒精性肝炎或脂肪肝等疾病引起或伴發(fā)。所述的病毒性肝炎通常是指甲肝、こ肝或丙肝。其中，所述的腎纖維化疾病包括終末期腎病(各種原因引起的腎衰)，通常由可導(dǎo)致腎衰的腎小管、腎小球等疾病引起或伴發(fā)。本發(fā)明中藥組合物能有效治療經(jīng)典梗阻性腎病導(dǎo)致腎臟纖維化疾病模型(單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UUO)模型)。在預(yù)防或治療纖維化疾病時，本發(fā)明的中藥組合物可以單獨(dú)使用或者與其他沒有拮抗作用的藥物聯(lián)合使用。本發(fā)明中，為方便表達(dá)及描述，在


及具體實(shí)施方式
中將本發(fā)明的中藥組合物以縮寫CFZ代替。本發(fā)明中，上述優(yōu)選條件在符合本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實(shí)例。本發(fā)明所用的原料或試劑除特別說明之外，均市售可得。本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于I、本發(fā)明的中藥組合物可以同時作用于多個靶點(diǎn)，降低單靶點(diǎn)藥物引起的副作用，各成分有協(xié)同作用藥效治療效果超過單組份藥效的總和。2、本發(fā)明中藥組合物在預(yù)防和逆轉(zhuǎn)肺纖維化的應(yīng)用中，對于小鼠纖維化疾病，包括心臟纖維化疾病、肺臟纖維化疾病、腎臟纖維化疾病或肝臟纖維化疾病等在內(nèi)的具有纖維增生性特征的疾病具有明顯的預(yù)防或治療效果；能顯著抑制博萊霉素引起的肺纖維化降低肺纖維化小鼠的死亡率，降低肺纖維化小鼠的肺重指數(shù)；降低肺纖維化小鼠肺組織羥脯氨酸、膠原的含量，并降低與肺纖維化相關(guān)的α -肌動蛋白(α -SM)的表達(dá)，減少肺纖維化小鼠肺泡灌洗液中多種炎性細(xì)胞的數(shù)量；增加肺臟中抑纖維化的Thl細(xì)胞因子的分泌，減少促纖維化的Th2細(xì)胞因子的分泌，調(diào)節(jié)纖維化肺臟的抑制性免疫微環(huán)境。3、本發(fā)明的中藥組合物在預(yù)防和逆轉(zhuǎn)阿霉素(DOX)所致擴(kuò)心病心室異常重構(gòu)及心肌組織纖維化的應(yīng)用中，能顯著改善阿霉素所致擴(kuò)心病心室異常重構(gòu)及心肌組織纖維化；可以顯著抑制左心室舒張期前壁厚度、后壁厚度和室間隔厚度的減小，顯著抑制舒張期左室內(nèi)徑的増加，顯著改善體現(xiàn)心臟收縮和舒張功能的各項(xiàng)指標(biāo)，表現(xiàn)為心臟射血分?jǐn)?shù)、左心室短軸縮短率、左心室收縮壓上升最大速率、左心室舒張壓下降最大速率増加，降低心肌中膠原的含量，并降低與纖維化相關(guān)的a -SMA的表達(dá)，抗心臟組織纖維化表現(xiàn)為與改變組織Thl/Th2免疫極化方向，增強(qiáng)抗組織纖維化因子的表達(dá)，抑制促組織纖維化因子表達(dá)關(guān)系密切。4、本發(fā)明的中藥組合物在預(yù)防和逆轉(zhuǎn)單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UUO)誘導(dǎo)的腎纖維化病變的應(yīng)用中，能夠減輕單側(cè)輸尿管結(jié)扎所誘導(dǎo)的小鼠腎纖維化，表現(xiàn)為減少腎組織的膠原沉積，上調(diào)上皮細(xì)胞特征性蛋白E-鈣粘素表達(dá)，減少活化的成纖維細(xì)胞標(biāo)志性蛋白a -SMA表達(dá)。

圖I為預(yù)防性給予樣品藥物降低博萊霉素引起肺纖維化小鼠的死亡率隨時間變、化關(guān)系圖；其中，博來霉素造模后第7天開始給予中藥組合物或干擾素-Y，CFZ低為低劑量組(lg/kg/day)，CFZ中為中劑量組(2g/kg/day)，CFZ高為高劑量組(4g/kg/day)；##P<0. Olvs假手術(shù)組；*P〈0. 05vs模型組。圖2為預(yù)防性給予樣品藥物降低肺纖維化小鼠的肺臟膠原沉積Masson染色圖，及絕對膠原面積比較圖；其中，博來霉素造模后第7天開始給予中藥組合物或干擾素Y，CFZ低為低劑量組(lg/kg/day)，CFZ中為中劑量組(2g/kg/day)，CFZ高為高劑量組(4g/kg/day) ；###P<0. OOlvs 假手術(shù)組;*Ρ〈0· 05，_Ρ〈0· OOlvs 模型組。圖3為預(yù)防性給予樣品藥物對肺纖維化小鼠肺組織羥脯氨酸含量的影響圖；其中，博來霉素造模后第7天開始給予中藥組合物或干擾素Y ;CFZ低為低劑量組(lg/kg/day), CFZ中為中劑量組(2g/kg/day)，CFZ高為高劑量組(4g/kg/day) ；##P<0. Olvs假手術(shù)組;*Ρ〈0· 05，**Ρ〈0· Olvs 模型組。 圖4為預(yù)防性給予樣品藥物對小鼠肺組織α-SMA表達(dá)水平的影響圖；其中，博來霉素造模后第7天開始給予中藥組合物或干擾素Y，CFZ低為低劑量組(lg/kg/day)，CFZ中為中劑量組(2g/kg/day)，CFZ高為高劑量組(4g/kg/day) ；##P<0. Olvs假手術(shù)組，*P〈0. 05vs 模型組。圖5為預(yù)防性給予樣品藥物對肺纖維化小鼠的肺臟炎癥影響的HE染色圖，及炎癥對比圖；其中，博來霉素造模后第7天開始給予中藥組合物或干擾素Y，CFZ低為低劑量組(lg/kg/day)，CFZ中為中劑量組(2g/kg/day)，CFZ高為高劑量組(4g/kg/day)；###PくO. OOlvs 假手術(shù)組；**Ρ〈0· 01，***Ρ〈0· OOlvs 模型組。圖6為預(yù)防性給予樣品藥物對肺纖維化小鼠肺泡灌洗液中多種炎性細(xì)胞影響的數(shù)量對比圖；其中，博來霉素造模后第7天開始給予中藥組合物或干擾素Y，CFZ低為低劑量組(lg/kg/day)，CFZ中為中劑量組(2g/kg/day)，CFZ高為高劑量組(4g/kg/day)；##PくO. 01，###PくO. OOlvs 假手術(shù)組;*P〈0. 05vs 模型組。圖7為預(yù)防性給予樣品藥物對肺纖維化小鼠肺組織Thl、Th2細(xì)胞因子分泌的調(diào)節(jié)作用(ELISA)含量對比圖；其中，博來霉素造模后第7天開始給予中藥組合物或干擾素Y，CFZ低為低劑量組(lg/kg/day)，CFZ中為中劑量組(2g/kg/day)，CFZ高為高劑量組(4g/kg/day) ;##PくO. 01，###PくO. OOlvs 假手術(shù)組;*Ρ〈0· 05，**Ρ〈0· Olvs 模型組。圖8為治療性給予樣品藥物對博萊霉素引起肺纖維化小鼠的死亡率隨時間變化關(guān)系圖；其中，博來霉素造模后第14天開始給予中藥組合物或干擾素Y，CFZ中Af為中劑量治療組(2g/kg/day)，CFZ高Af為高劑量治療組(4g/kg/day) ；##P<0. Olvs假手術(shù)組；*P〈0. 05vs 模型組。圖9為治療性給予樣品藥物對肺纖維化小鼠作用的肺臟膠原沉積Masson染色圖，及絕對膠原面積比較圖；其中，博來霉素造模后第14天開始給予中藥組合物或干擾素Y，CFZ中Af為中劑量治療組(2g/kg/day)，CFZ高Af為高劑量治療組(4g/kg/day)；###PくO. OOlvs 假手術(shù)組，**Ρ〈0· 01，***Ρ〈0· OOlvs 模型組。圖10為治療性給予樣品藥物對肺纖維化小鼠肺組織羥脯氨酸含量的影響圖；其中，博來霉素造模后第14天開始給予中藥組合物或干擾素Y，CFZ中Af為中劑量治療組(2g/kg/day), CFZ 高 Af 為高劑量治療組(4g/kg/day) ;##PくO. Olvs 假手術(shù)組，**P〈0. Olvs模型組。
圖11為預(yù)防性給予樣品藥物對阿霉素所致擴(kuò)心病小鼠心室擴(kuò)張的影響圖，代表性心臟切片(圖A左)和超聲心動圖(圖A右)，左心室超聲心動圖參數(shù)(圖B、C、D和E)，左心室舒張期前壁厚度(LVAWd)、后壁厚度(LVPWd)、室間隔厚度(IVSd)及舒張期左室內(nèi)徑(LVDd) ；#P<0. 05，##PくO. Olvs 正常組;*P〈0. 05vs 模型組。圖12為預(yù)防性給予樣品藥物對阿霉素致擴(kuò)心病小鼠心功能的影響圖；CFZ對心臟射血分?jǐn)?shù)(EF)、左心室短軸縮短率(FS)的影響(圖A和B)，CFZ對左心室收縮壓上升最大速率(+dP/dtmax)、左心室舒張壓下降最大速率(-dP/dtmax)、心率(HR)、平均動脈壓(MAP)等血流動力學(xué)指標(biāo)的影響(圖C-F) ;#PくO. 05，##P<0. Olvs正常組;*P〈0. 05，*Ρ〈0· Olvs模型組。圖13為預(yù)防性給予樣品藥物對阿霉素致擴(kuò)心病小鼠心臟組織纖維化影響圖；心肌組織切片HE染色(圖Α)，心肌組織切片Masson’ s染色分析心臟組織纖維化(圖B和D);免疫組化檢測a -SMA表達(dá)(圖C和Ε) ；##P<0. Olvs正常組，*P〈0. 05vs模型組。 圖14為預(yù)防性給予樣品藥物對阿霉素致擴(kuò)心病小鼠心臟Thl/Th2平衡的影響圖；CFZ抑制轉(zhuǎn)化生長因子-β (TGF-β )表達(dá)(圖A和C)，CFZ促進(jìn)干擾素Y表達(dá)(圖B和D);CFZ 增加干擾素 Y/轉(zhuǎn)化生長因子 β 比值(IFNi/TGF-β)(圖 Ε);##ρ〈0· 01，###ρ〈0· OOlvs正常組，**ρ〈0· 01, ***ρ〈0· OOlvs 模型組。圖15為預(yù)防性給予樣品藥物對阿霉素致擴(kuò)心病小鼠心臟組織氧化應(yīng)激反應(yīng)影響圖；超氧化物歧化酶(SOD)檢測(圖Α)，丙ニ醛(MDA)檢測(圖B) ；##p<0. Olvs正常組，**ρ〈0· 05, ***ρ〈0· Olvs 模型組。圖16為預(yù)防性給予樣品藥物對單側(cè)輸尿管結(jié)扎致小鼠腎纖維化影響圖，腎組織切片Masson’s染色和a -SMA染色(圖Α)，腎小管損傷評分(圖B)，腎纖維化評分(圖C)，小鼠腎外觀(圖D)，a-SMA半定量評價(圖Ε)，蛋白質(zhì)印跡檢測a-SMA表達(dá)(圖F) ;#ρ〈0. 05，##ρくO. 01，###ρくO. Olvs 假手術(shù)組，*ρ〈0· 05，**ρ〈0· 01，_ρ〈0· OOlvs 模型組。圖17為預(yù)防性給予樣品藥物對基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs) /基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物(HMPs)平衡影響圖；代表性RT-PCR結(jié)果(圖Α)，前膠原I、a-SMA、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物I (TIMPl)和基質(zhì)金屬蛋白酶(ΜΜΡ2)的表達(dá)和分析(圖B-E), MMPs/TIMPs比值(圖F)；#pくO. 05，##pくO. 01，###PくO. OOlvs 假手術(shù)組;*p〈0. 05vs 模型。圖18為治療性給予樣品藥物對單側(cè)輸尿管結(jié)扎致小鼠腎纖維化影像圖(14天)，腎組織切片Masson’s染色圖(放大100倍，圖A，放大400倍，圖B)，腎組織切片以抗a -SMA抗體染色觀察激活的成肌纖維細(xì)胞(圖C)和以E-鈣粘素染色觀察腎上皮細(xì)胞(圖D)，CFZ減少腎膠原面積(圖Ε)，蛋白質(zhì)印跡檢測a-SMA和E-鈣粘素表達(dá)(圖F) ;CFZ高為高劑量給藥組(4g/kg/day), CFZ 低為低劑量給藥組(lg/kg/day), ##pくO. 01, ###pくO. Olvs 假手術(shù)組;**ρ〈0· 01, ***ρ〈0· OOlvs 模型組。圖19為治療性給予樣品藥物對單側(cè)輸尿管結(jié)扎致小鼠腎纖維化影響圖(21天)，其中，腎組織切片Masson’ s染色(放大100倍，圖A，放大200倍，圖B)，CFZ減少腎膠原面積和膠原面積比值(圖C)，蛋白質(zhì)印跡檢測a -SMA和E-鈣粘素表達(dá)(圖D) ；CFZ高為高劑量給藥組(4g/kg/day)，CFZ 低為低劑量給藥組(lg/kg/day);#ρ〈0· 05，###p<0. Olvs 假手術(shù)組;*ρ〈0· 05, **ρ〈0· 01, ***ρ〈0· OOlvs 模型組。圖20為治療性給予樣品藥物對單側(cè)輸尿管結(jié)扎致腎纖維化小鼠腎功能影響圖；單側(cè)輸尿管結(jié)扎14天，結(jié)扎ー側(cè)腎和對側(cè)正常腎、脾重和體重分析(圖A-F);單側(cè)輸尿管結(jié)扎21天，結(jié)扎ー側(cè)腎和對側(cè)正常腎、脾重和體重分析(圖G-L)，腎功能以血清肌酐(圖D、E)和尿素氮(圖J、K)評價雨〈O. 01，###p<0. Olvs假手術(shù)組;*ρ〈0· 05，**ρ〈0· Olvs模型組。
具體實(shí)施例方式下面用實(shí)施例來進(jìn)ー步說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。實(shí)施例I配方黃苗1500g,黑木耳(Auricularia auricula(L. exHooke)2000g,三七 500g, 靈芝(赤芝(Ganoderma Lucidum (Leyss. ex Fr. ) Karst. ) 1500g (質(zhì)量比為 9 :12 :3 :9)。制備步驟(I)黑木耳提取物的制備黑木耳加10倍量水提取3次，每次提取I小時，合并提取液，濾過，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(2)黃芪、三七、靈芝分別粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(3)黑木耳提取物、黃芪、三七、靈芝混勻后，制粒，干燥，裝膠囊，即得。實(shí)施例2配方黃苗75Og,黑木耳(Auriculariaauricula (L. exHooke)2500g,三七75Og,靈芝(赤芝(Ganoderma Lucidum (Leyss. ex Fr. )Karst. ))IOOOg (質(zhì)量比為 9 30 9 :12)。制備步驟(I)黑木耳提取物的制備黑木耳加6倍量95%こ醇水溶液提取2次，每次I. 5小吋，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(2)黃芪、三七、靈芝分別粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(3)黑木耳提取物、黃芪、三七和靈芝混勻，制粒，干燥，壓片即得。實(shí)施例3配方黃苗1600g,黑木耳(Auricularia auricula(L. exHooke)1200g,三七 400g,靈芝(赤芝(Ganoderma Lucidum (Leyss. ex Fr. ) Karst. )) 1600g (質(zhì)量比為 8 :6 :2 :8)。制備步驟(I)黃芪提取物的制備黃芪加3倍量70%こ醇水溶液提取3次，每次3小吋，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎成細(xì)粉，備用。(2)三七提取物的制備三七加5倍量60%こ醇水溶液提取3次，每次2小時，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(3)黑木耳、靈芝粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。( 4 )黃芪、三七提取物、黑木耳、靈芝混勻，制粒，干燥，分裝成顆粒劑，即得。實(shí)施例4配方黃苗1600g,黑木耳(Auricularia auricula (L. exHooke) 1600g,三七1200g,靈芝(赤芝(Ganoderma Lucidum (Leyss. ex Fr. )Karst. ))800g (質(zhì)量比為 8 :8 :6 :4)。制備步驟(I)黃芪提取物的制備黃芪加5倍量水提取3次，每次提取2小時，合并提取液，濾過，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(2)黑木耳提取物的制備黑木耳加10倍量95%こ醇水溶液提取2次，每次3小吋，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。
(3)三七、靈芝粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。( 4 )黃芪提取物、黑木耳提取物、三七、靈芝混勻，制粒，干燥，裝膠囊，即得。實(shí)施例5配方黃苗1200g,黑木耳(Auricularia auricula(L. exHooke)3000g,三七 IOOg,靈芝(赤芝(Ganoderma Lucidum (Leyss. ex Fr. ) Karst. )) 900g (質(zhì)量比為 12 3 I :9)。制備步驟(I)黃芪提取物的制備黃芪加3倍量70V/V%こ醇水溶液提取3次，每次3小吋，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(2)黑木耳提取物的制備黑木耳加5倍量60v/v%こ醇水溶液提取3次，每次2小吋，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(3)靈芝粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。( 4 )黃芪提取物、黑木耳提取物、三七、靈芝混勻，制粒，干燥，分裝成顆粒劑，即得。實(shí)施例6配方黃苗2500g,黑木耳(Auricularia auricula (L. exHooke)750g,三七 750g,靈芝(赤芝(Ganoderma Lucidum (Leyss. ex Fr. ) Karst. )) 750g (質(zhì)量比為 10 3 3 :3)。制備步驟(I)黃芪提取物的制備黃芪加5倍量水提取3次，每次提取2小時，合并提取液，濾過，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(2)靈芝提取物的制備靈芝加10倍量95%こ醇水溶液提取2次，每次3小時，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(3)黑木耳、三七粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。( 4 )黃芪提取物、靈芝提取物、黑木耳、三七混勻，制粒，干燥，壓片，即得。實(shí)施例7配方黃苗3000g,黑木耳(Auricularia auricula(L. exHooke)1200g,三七 IOOg,靈芝(赤芝(Ganoderma Lucidum (Leyss. ex Fr. )Karst. ))1200g (質(zhì)量比為 30 12 I :12)。制備步驟(I)黃芪提取物的制備黃芪參加6倍量95%こ醇水溶液提取2次，每次I. 5小吋，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(2)黑木耳、三七、靈芝分別粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(3)黃芪提取物、黑木耳、三七和靈芝混勻，制粒，干燥，壓片即得。實(shí)施例8配方黃苗2000g,黑木耳(Auricularia auricula(L. exHooke)2000g,三七 200g,靈芝(赤芝(Ganoderma Lucidum (Leyss. ex Fr. ) Karst. )) 400g (質(zhì)量比為 10 :10 :1 :2)。制備步驟(I)黑木耳提取物的制備黑木耳加10倍量水提取3次，每次提取I小時，合并提取液，濾過，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。
(2)黃芪、三七、靈芝分別粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(3)黑木耳提取物、黃芪、三七和靈芝混勻后，制粒，干燥，裝膠囊，即得。實(shí)施例9配方黃苗2400g,黑木耳(Auricularia auricula(L. exHooke)1800g,三七 200g,靈芝(赤芝(Ganoderma Lucidum (Leyss. ex Fr. ) Karst. )) 1200g (質(zhì)量比為 12 :9 :1 :6)。制備步驟(I)黃芪提取物的制備黃芪加3倍量70%こ醇水溶液提取3次，每次3小吋，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。 (2)黑木耳提取物的制備黑木耳加5倍量60%こ醇水溶液提取3次，每次2小吋，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(3)靈芝提取物的制備靈芝加10倍量95%こ醇水溶液提取2次，每次3小時，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(4)三七粉碎成細(xì)粉，備用。(5)黃芪提取物、黑木耳提取物、三七和靈芝提取物混勻，制粒，干燥，分裝成顆粒齊U，即得。實(shí)施例10配方黃苗1800g,黑木耳(Auricularia auricula(L. exHooke)1800g,三七 200g,靈芝(赤芝(Ganoderma Lucidum (Leyss. ex Fr. ) Karst. )) 1200g (質(zhì)量比為 9 :9 :1 :6)。制備步驟(I)黃芪提取物的制備黃芪加3倍量70%こ醇水溶液提取3次，每次3小吋，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(2)黑木耳提取物的制備黑木耳加5倍量60%こ醇水溶液提取3次，每次2小吋，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(3)三七、靈芝粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(4)黃芪提取物、黑木耳提取物、三七和靈芝細(xì)粉混勻，制粒，干燥，裝膠囊，即得。實(shí)施例11配方黃苗2400g,黑木耳(Auricularia auricula(L. exHooke)1800g,三七 200g,冬蟲夏草(Cordyceps sinensis (Berk. ) Sacc) 1200g (質(zhì)量比為 12 :9 :1 :6)。制備步驟(I)黃芪提取物的制備黃芪加3倍量70%こ醇水溶液提取3次，每次3小吋，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(2)黑木耳提取物的制備黑木耳加5倍量60%こ醇水溶液提取3次，每次2小吋，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(3)三七、冬蟲夏草粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(4)黃芪提取物、黑木耳提取物、三七和冬蟲夏草細(xì)粉混勻，制粒，干燥，分裝成顆粒劑，即得。實(shí)施例12配方黃苗2400g,黑木耳(Auricularia auricula(L. exHooke)1800g,三七 200g,隱孔菌(Crytoporus volvatus (Peck.) Hubbara. ) 1200g (質(zhì)量比為 12 :9 :1 :6)。
制備步驟(I)黃芪提取物的制備黃芪加3倍量70%こ醇水溶液提取3次，每次3小吋，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(2)黑木耳提取物的制備黑木耳加5倍量60%こ醇水溶液提取3次，每次2小吋，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(3)三七、隱孔菌粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(4)黃芪提取物、黑木耳提取物、三七和隱孔菌細(xì)粉混勻，制粒，干燥，分裝成顆粒 齊U，即得。實(shí)施例13配方黃苗2400g,黑木耳(Auricularia auricula(L. exHooke)1800g,三七 200g,冬蟲夏草發(fā)酵培養(yǎng)物1200g (質(zhì)量比為12 :9 :1 :6)。制備步驟(I)黃芪提取物的制備黃芪加3倍量70%こ醇水溶液提取3次，每次3小吋，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(2)黑木耳提取物的制備黑木耳加5倍量60%こ醇水溶液提取3次，每次2小吋，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(3)三七粉碎、過篩，得過40目篩的細(xì)粉，備用。(4)黃芪提取物、黑木耳提取物、三七和冬蟲夏草發(fā)酵培養(yǎng)物混勻，制粒，干燥，分裝成顆粒劑，即得。冬蟲夏草菌發(fā)酵培養(yǎng)物的制備中國冬蟲夏草無性代菌種蝙幅蛾被毛抱(Hiresutella hepiali Chen et Shen.(1985))(浙江賜富醫(yī)藥有限公司出售菌種)在液體培養(yǎng)基上發(fā)酵，獲得發(fā)酵上清液、菌絲體及各種代謝物。發(fā)酵方法為依次斜面菌種培養(yǎng)、搖瓶種子培養(yǎng)、ー級、ニ級種子罐培養(yǎng)、液體發(fā)酵罐中通氣培養(yǎng)，10 18°C，pH 6. 0 7· 5，分別培養(yǎng)50、10、6、6、10天。液體培養(yǎng)基(重量百分比，％)為蠶蛹粉2. 0，蛋白胨I. 5，玉米粉I. 8，蔗糖I. 6，磷酸ニ氫鉀O. 1，硫酸鎂O. 05，其余為水分，發(fā)酵過程中通入無菌空氣。發(fā)酵完畢后固液分離，得到菌絲體和發(fā)酵液，發(fā)酵液再進(jìn)行膜分離(超濾膜，膜孔徑300)，收集膜截留液即得到富含有效成分的發(fā)酵濾液，發(fā)酵濾液濃縮后與菌絲體混合、勻漿、噴霧干燥，即得所述的冬蟲夏草發(fā)酵培養(yǎng)物。實(shí)施例14配方黃苗2400g,黑木耳(Auricularia auricula(L. exHooke)1800g,三七 200g,隱孔菌發(fā)酵培養(yǎng)物1200g (質(zhì)量比為12 :9 :1 :6)。制備步驟(I)黃芪提取物的制備黃芪加3倍量70%こ醇水溶液提取3次，每次3小吋，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎成細(xì)粉，備用。(2)黑木耳提取物的制備黑木耳加5倍量60%こ醇水溶液提取3次，每次2小吋，濾過，合并濾液，濃縮干燥，粉碎成細(xì)粉，備用。(3)三七粉碎成細(xì)粉，備用。(4)黃芪提取物、黑木耳提取物、三七和隱孔菌發(fā)酵培養(yǎng)物混勻，制粒，干燥，分裝成顆粒劑，即得。隱孔菌發(fā)酵培養(yǎng)物的制備(I)菌種活化將4°C條件下保存的隱孔菌菌種(Crytoporus sinensis Sheng
H.Wu&M. Zang)(浙江賜富醫(yī)藥有限公司出售菌種)，通過無菌操作移植到培養(yǎng)基中，在真菌常規(guī)培養(yǎng)溫度下培養(yǎng)8天。培養(yǎng)基組分和重量百分含量為(％):葡萄糖O. 6，麥芽糖1.5，蛋白胨O. 1，酵母粉O. 8，KH2PO4 O. LMgSO4 · 7H20 O. 05，維生素 B1O. 07，瓊脂 2. 7，pH 4. 8，其余成分為水。(2)搖瓶培養(yǎng)將上述活化的隱孔菌菌絲移入內(nèi)裝200mL下述培養(yǎng)液的500mL三角瓶中，在震蕩頻率為200epm、溫度為2(T30°C條件下在搖床中震蕩培養(yǎng)6天。培養(yǎng)液組分和質(zhì)量(％)為葡萄糖O. 7，麥芽糖I. 6，蛋白胨O. 2，酵母粉1，KH2PO4 O. LMgSO4 · 7H20 O. 05，維生素 B1 O. I, pH 5.0，其余成分為水。(3)液體發(fā)酵培養(yǎng)在20L發(fā)酵罐中裝入14L的下述培養(yǎng)液，用壓差法移接相當(dāng)于罐容量3%搖瓶培養(yǎng)的隱孔菌菌絲液，在通風(fēng)量為1:0. Γ1. O (v/v/分鐘)、葉輪攪拌速度為200rpm、罐壓大于O. 05kg/cm2,溫度20 30°C條件下發(fā)酵10天。培養(yǎng)液組分和重量百分含量(％)為葡萄糖3.0，麥芽糖I. 8，玉米粉O. 3，蛋白胨
O.5，酵母粉 1，KH2PO4 O. 1，MgSO4 · 7H20 O. 05，維生素 B10. 05，pH 4. 5，其余成分為水。(4)將上述發(fā)酵罐內(nèi)的隱孔菌發(fā)酵產(chǎn)物采用常規(guī)過濾方法過濾得到菌絲體和發(fā)酵上清液；隱孔菌菌絲體濾餅在8(T90°C條件下烘干，粉碎、過篩，得到顆粒小于60目的隱孔菌菌粉；發(fā)酵上清液7(T80°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至密度為I. 4克/毫升，再加熱濃縮至稠膏狀，加入上述所得菌粉，攪拌均勻，烘干、粉碎，過60目篩，即得所述隱孔菌發(fā)酵培養(yǎng)物。效果實(shí)施例I本發(fā)明的中藥組合物在預(yù)防或治療肺纖維化中的應(yīng)用I、材料和方法I. I主要試劑本效果實(shí)施例所用的中藥組合物是上述實(shí)施例9所得的產(chǎn)品，縮寫為CFZ。實(shí)驗(yàn)所用博萊霉素(BLM)購自日本化藥(日本化藥株式會社)，批號191140。實(shí)驗(yàn)所用干擾素-Y(干擾素Y )購自上?？寺∩锔呒夹g(shù)有限公司，批號20090307。I. 2實(shí)驗(yàn)動物實(shí)驗(yàn)所用的SPF級C57BL/6小鼠(雄性，6 8周齡，16 18g)，均購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司。I. 3肺纖維化動物模型制備雄性C57BL/6 (周齡6 8周)小鼠，隔夜禁食，戊巴比妥鈉(45mg/kg，i. p.)麻酔，氣管內(nèi)注射博萊霉素(5U/kg)。具體方案如下以盡量小的創(chuàng)傷切開頸部皮膚，在彎頭眼科鑷的協(xié)助下，暴露氣管，使用微量進(jìn)樣器穿刺氣管，向氣管內(nèi)注入約50 μ I博萊霉素，迅速地旋轉(zhuǎn)并直立5分鐘，以便使博萊霉素均勻地進(jìn)入左右肺葉。整個操作在約60°C左右的手術(shù)操作臺進(jìn)行。假手術(shù)組(Sham)氣管內(nèi)注射等量的注射用生理鹽水。I. 4實(shí)驗(yàn)分組(I) CFZ預(yù)防肺纖維化為研究本發(fā)明的中藥組合物在預(yù)防肺纖維化的形成中的效果，將上述制備的動物模型在造模7天后分組給藥，分組和給藥情況如表I所示
表I肺纖維化動物模型在造模7天后分組給藥的情況
權(quán)利要求
1.一種預(yù)防或者治療纖維化疾病的中藥組合物，其特征在于配方包括原料A和/或原料A的提取物；所述的原料A的提取物為水或こ醇水溶液的提取物；其中，所述的原料A包括黃苗、黑木耳(Auricularia auricula (L. exHooke) Underw)、三七、以及靈芝B ;所述的靈芝 B 為赤芝(Ganoderma Lucidum (Leyss. ex F r. ) Karst.)和 / 或紫芝(Ganodermasinense Zhao, Xu et Zhang；CAuricularia auricula (L. exHooke；Underw)、三七、以及靈芝B之間的重量比為9 30 9 30 Γ9 6 12。
2.如權(quán)利要求I所述的中藥組合物，其特征在于所述的黃苗、黑木耳(Auriculariaauricula (L. exHooke)Underw)、三七、以及靈芝B之間的重量比為12 9 1 6 ;所述的原料A在直接使用時，粉碎使用，使粒徑大小較佳的過40目篩。
3.如權(quán)利要求I所述的中藥組合物，其特征在于所述的原料A的提取物按下述方法制得將原料A用3 10重量倍數(shù)的水或3 10重量倍數(shù)的70v/v% 95v/v%こ醇水溶液回流提取2 3次，每次提取I 3小時，合并提取液，過濾，濃縮，干燥，粉碎即可。
4.如權(quán)利要求3所述的中藥組合物，其特征在于所述的原料A的提取物在制備時為將原料A中各原料分別制備提取物后混合，或者將各原料混合后再制備提取物； 當(dāng)所述的原料A的提取物在制備時將原料A中各原料分別制備提取物后混合，黃芪的提取物的提取時間為1-2小時;黑木耳(Auricularia auricula (L. exHooke) Underw)的提取物的提取時間為I. 5 3小時；三七的提取物、以及靈芝B的提取物的提取時間分別為2^3小時。
5.如權(quán)利要求I所述的中藥組合物，其特征在于所述的中藥提取物還含有原料C和/或原料C的發(fā)酵培養(yǎng)物,所述的原料C為冬蟲夏草(Cordyceps sinensis (Berk. ) Sacc)和 / 或隱孔菌(Crytoporus volvatus (Peck. ) Hubbara.)。
6.如權(quán)利要求I所述的中藥組合物，其特征在于所述的靈芝B和/或靈芝B提取物被替代為原料C和/或原料C的發(fā)酵培養(yǎng)物,所述的原料C為冬蟲夏草(Cordyceps sinensis(Berk. ) Sacc)和 / 或隱孔菌(Crytoporus volvatus (Peck. ) Hubbara.)。
7.如權(quán)利要求5或6所述的中藥組合物,其特征在于所述的冬蟲夏草(Cordycepssinensis (Berk. ) Sacc)的發(fā)酵培養(yǎng)物為編幅蛾被毛抱(Hiresutella hepiali Chen etShen. (1985))的發(fā)酵培養(yǎng)物；所述的隱孔菌(Crytoporus volvatus (Peck. ) Hubbara.)的發(fā)酵培養(yǎng)物為中華隱孔菌(Crytoporus sinensis Sheng H. Wu&M. Zang)的發(fā)酵培養(yǎng)物。
8.如權(quán)利要求5或6所述的中藥組合物，其特征在于所述的原料C和/或原料C的發(fā)酵培養(yǎng)物的用量為重量份數(shù)3 20，較佳的為重量份數(shù)3 9。
9.如權(quán)利要求7所述的中藥組合物，其特征在于所述的原料C的發(fā)酵培養(yǎng)物由下述方法制得將原料C菌種接種至液體培養(yǎng)基中，之后進(jìn)行通氣培養(yǎng)得發(fā)酵培養(yǎng)物，干燥即可；所述的原料C菌種為按經(jīng)過ニ級或三級種子培養(yǎng)獲得的菌種。
10.如權(quán)利要求9所述的中藥組合物，其特征在于所述的ニ級種子培養(yǎng)為依次經(jīng)過斜面菌種培養(yǎng)、搖瓶種子培養(yǎng)、ー級和ニ級種子罐培養(yǎng)；所述的三級級種子培養(yǎng)為依次經(jīng)過斜面菌種培養(yǎng)、搖瓶種子培養(yǎng)、ー級、ニ級和三級種子罐培養(yǎng)； 當(dāng)所述的原料C為冬蟲夏草時，所述的培養(yǎng)的條件為10°C 18°C、pH6. O 7. 5 ;所述的斜面菌種培養(yǎng)、搖瓶種子培養(yǎng)、ー級、ニ級和三級種子罐培養(yǎng)的培養(yǎng)時間分別為30 60天、10天、6天、6天、6天和6 12天；當(dāng)所述的原料C為隱孔菌時，所述的培養(yǎng)的條件為20°C 30°C;所述的斜面菌種培養(yǎng)、搖瓶種子培養(yǎng)、ー級、ニ級和三級種子罐培養(yǎng)的培養(yǎng)時間分別為3 10天、6天、6天、6天、6天和I 10天。
11.如權(quán)利要求9所述的中藥組合物，其特征在于所述的液體培養(yǎng)基為重量百分比蠶蛹粉2. 0%，蛋白胨I. 5%，玉米粉I. 8%，蔗糖I. 6%，磷酸ニ氫鉀O. 1%，硫酸鎂O. 05%,其余為水分； 當(dāng)所述的原料C為隱孔菌時，所述的液體培養(yǎng)基較佳的為重量百分含量葡萄糖O. 6%-3. 0%,麥芽糖 I. 5%-1. 8%,玉米粉 0-0. 3%，蛋白胨 O. 1%_0· 5%,酵母粉 O. 8%_1%，KH2PO4O. 1%，MgSO4 · 7H20 O. 05%,維生素 B1 O. 05%-0. 1%，瓊脂 0-2. 7%, pH 4. 5-5. 0，其余成分為水。
12.如權(quán)利要求f11任一項(xiàng)所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于按配方，將各成分均勻混合即可。
13.如權(quán)利要求f11任一項(xiàng)所述的中藥組合物在制備預(yù)防或治療纖維化疾病的藥物 中的用途。
14.如權(quán)利要求13所述的用途，其特征在于所述的纖維化疾病包括心臟纖維化疾病、肺臟纖維化疾病、腎臟纖維化疾病或肝臟纖維化疾病。
全文摘要
本發(fā)明公開一種預(yù)防或者治療纖維化疾病的中藥組合物及制備方法和用途。該中藥組合物配方包括原料A和/或原料A的提取物；所述的原料A的提取物為水或乙醇水溶液的提取物；其中，所述的原料A包括黃芪、黑木耳(Auricularia auricula(L.exHooke)Underw)、三七、以及靈芝B；所述的靈芝B為赤芝(Ganoderma Lucidum(Leyss.ex Fr.)Karst.)和/或紫芝(Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang)；所述的黃芪、黑木耳(Auricularia auricula(L.exHooke)Underw)、三七、以及靈芝B之間的重量比為9~30︰9~30︰1~9︰6~12。該制備方法為按配方將各成分均勻混合即可。該中藥組合物能夠有效預(yù)防或治療纖維化疾病。
文檔編號C12N1/14GK102716179SQ20121018366
公開日2012年10月10日 申請日期2012年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月5日
發(fā)明者嚴(yán)君, 何令帥, 崔冰, 胡卓偉, 陳黎 申請人:北京偉峰益民科技有限公司, 浙江賜富醫(yī)藥有限公司