專利名稱：水產(chǎn)用復合微生態(tài)制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及飼料添加劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種水產(chǎn)用復合微生態(tài)添加劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
微生態(tài)制劑又稱為微生態(tài)調(diào)節(jié)劑等，它是從天然環(huán)境中篩選出來的微生物菌體，經(jīng)培養(yǎng)、繁殖后制成的含有大量有益菌的活菌制劑。目前，國內(nèi)外常用的微生態(tài)制劑按用途可分為兩大類一類是腸道微生態(tài)改良劑，即通過添加到飼料中以改良養(yǎng)殖動物的胃腸道內(nèi)微生物群落組成；另一類是水質(zhì)微生態(tài)改良劑，即通過投放到水體中以改良水質(zhì)，主要有光合細菌、芽孢桿菌、EM菌等，不同種類的微生態(tài)制劑其針對性和作用效力不盡相同。養(yǎng)殖水體中的氨氮濃度過高時，對養(yǎng)殖生物有一定的毒害作用，且養(yǎng)殖水體中氨 態(tài)氮及硝態(tài)氮濃度提高是使魚蝦致病的直接或間接因素。為解決這一問題人們曾先后使用了物理、化學和生物的多種方法。但傳統(tǒng)的物理方法費時費力，化學方法雖見效快，但易形成二次污染。新興的微生物法利用從自然界中獲得的有益微生物降低氨氮，不但不會造成二次污染，還可調(diào)節(jié)養(yǎng)殖水體水質(zhì)，對養(yǎng)殖水體中的生態(tài)平衡起到一定作用。國內(nèi)外大量研究表明，硝化細菌、光合細菌、芽孢桿菌及諾卡氏菌等均對養(yǎng)殖水體中的氨氮具有較強的去除能力，且光合細菌和硝化細菌已在實踐中取得良好效果。但這兩種菌在分離和培養(yǎng)方面對營養(yǎng)和環(huán)境條件均有較高要求，而芽孢桿菌則易分離、易培養(yǎng)，在降低養(yǎng)殖水體氨氮含量和調(diào)節(jié)水質(zhì)方面有更好的應用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種多菌種配合的水產(chǎn)用復合微生態(tài)制劑及其制備方法。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種水產(chǎn)用復合微生態(tài)制劑，包括以下四種組分枯草芽孢桿菌CGMCC No. 4628菌粉、巨大芽孢桿菌菌粉、環(huán)狀芽孢桿菌菌粉、熱帶假絲酵母菌粉。其所含各種菌的活菌數(shù)為枯草芽孢桿菌2X 109CFU/g I X 10nCFU/g、環(huán)狀芽孢桿菌2 X 109CFU/g 2 X 10nCFU/g、巨大芽孢桿菌2 X 109CFU/g I X 10nCFU/g、熱帶假絲酵母 2 X 109CFU/g I X 10nCFU/g。所述枯草芽孢桿菌菌粉、巨大芽孢桿菌菌粉、環(huán)狀芽孢桿菌菌粉、熱帶假絲酵母菌粉，各成分的重量配比為
枯草芽孢桿菌菌粉O. 20 O. 50份
巨大芽孢桿菌菌粉O. 20 O. 60份
環(huán)狀芽孢桿菌菌粉O. 20 O. 50份
熱帶假絲酵母菌粉 O. 05 O. 30份。
所述的水產(chǎn)用復合微生態(tài)制劑的菌粉制備方法為(I)在種子罐內(nèi)的培養(yǎng)基中，按每毫升培養(yǎng)基接種2 3億個活性枯草芽孢桿菌、環(huán)狀芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌和熱帶假絲酵母四種菌種中的一種，在32 37°C下，培養(yǎng)12-24小時；(2)當種子罐內(nèi)培養(yǎng)基中每毫升含25 30億以上活性芽孢時，按每IOOml生產(chǎn)罐培養(yǎng)基中接種80 100億個活性芽孢的比例，將種子罐內(nèi)培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入生產(chǎn)罐內(nèi)培養(yǎng)基中深層通氣攪拌培養(yǎng)24 48小時，培養(yǎng)基溫度穩(wěn)定在28 32°C，攪拌次數(shù)每分鐘80 150次；
(3)當生產(chǎn)罐內(nèi)芽孢生產(chǎn)率達到85-95%時，即將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入高速離心設(shè)備收集菌體，收集的菌體為灰白色，菌體與淀粉按照1:3 6的比例混合均勻；經(jīng)60 80°C干燥和反復研磨，過80目篩制成菌粉，然后按質(zhì)量百分比菌粉30%、葡萄糖10%、淀粉60%的比例制成含活菌數(shù)為lX10n-5X10nCFU/g的菌粉。一種上述的水產(chǎn)用復合微生態(tài)制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(I)將枯草芽孢桿菌菌粉、巨大芽孢桿菌菌粉、環(huán)狀芽孢桿菌菌粉在40 90°C烘干，熱帶假絲酵母菌粉在30 70°C烘干；(2)將上述原料放入混合機中混合均勻，用紙塑及復合鋁箔袋包裝，儲存溫度需小于35°C,儲存環(huán)境濕度小于60%。所述混合機為混合均勻度變異系數(shù)小于5%的雙軸漿葉式高效混合機。本發(fā)明的有益效果是具有制造工藝簡單，菌種易得，成本低的特點，且無毒副作用，無殘留。本發(fā)明的復合微生態(tài)飼料添加劑應用于水產(chǎn)，即可為一種飼料添加劑，能夠改善飼料品質(zhì)，提高飼料中粗蛋白的含量，降低飼料中粗纖維的含量，也兼具改善水產(chǎn)養(yǎng)殖水質(zhì)作用，是一種新型安全可靠、無污染的純發(fā)酵多功能的新型微生態(tài)制劑產(chǎn)品。


圖I復合微生態(tài)制劑氨氮去除效果圖。圖2添加復合微生態(tài)制劑后水中化學需氧量和氨氮含量變化圖。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖和具體實施方式
對本發(fā)明作進一步詳細說明本發(fā)明的一種水產(chǎn)用復合微生態(tài)制劑，包括以下四種組分枯草芽孢桿菌CGMCCNo. 4628菌粉、巨大芽孢桿菌菌粉、環(huán)狀芽孢桿菌菌粉、熱帶假絲酵母菌粉。其所含各種菌的活菌數(shù)為枯草芽孢桿菌2X 109CFU/g I X 10nCFU/g、環(huán)狀芽孢桿菌2 X 109CFU/g 2 X 10nCFU/g、巨大芽孢桿菌2 X 109CFU/g I X 10nCFU/g、熱帶假絲酵母 2 X 109CFU/g I X 10nCFU/g。所述枯草芽孢桿菌菌粉、巨大芽孢桿菌菌粉、環(huán)狀芽孢桿菌菌粉、熱帶假絲酵母菌粉，各成分的重量配比為枯草芽孢桿菌菌粉O. 20 O. 50份
巨大芽孢桿菌菌粉O. 20 O. 60份
環(huán)狀芽孢桿菌菌粉O. 20 O. 50份
熱帶假絲酵母菌粉 O. 05 O. 30份。所述的水產(chǎn)用復合微生態(tài)制劑的菌粉制備方法為(I)在種子罐內(nèi)的培養(yǎng)基中，按每毫升培養(yǎng)基接種2 3億個活性枯草芽孢桿菌、環(huán)狀芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌和熱帶假絲酵母四種菌種中的一種，在32 37°C下，培養(yǎng)12-24小時；
(2)當種子罐內(nèi)培養(yǎng)基中每毫升含25 30億以上活性芽孢時，按每IOOml生產(chǎn)罐培養(yǎng)基中接種80 100億個活性芽孢的比例，將種子罐內(nèi)培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入生產(chǎn)罐內(nèi)培養(yǎng)基中深層通氣攪拌培養(yǎng)24 48小時，培養(yǎng)基溫度穩(wěn)定在28 32°C，攪拌次數(shù)每分鐘80 150次；(3)當生產(chǎn)罐內(nèi)芽孢生產(chǎn)率達到85-95%時，即將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入高速離心設(shè)備收集菌體，收集的菌體為灰白色，菌體與淀粉按照1:3 6的比例混合均勻；經(jīng)60 80°C干燥和反復研磨，過80目篩制成菌粉，然后按質(zhì)量百分比菌粉30%、葡萄糖10%、淀粉60%的比例制成含活菌數(shù)為IX 10n-5X 10nCFU/g的菌粉。一種上述的水產(chǎn)用復合微生態(tài)制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(I)將枯草芽孢桿菌菌粉、巨大芽孢桿菌菌粉、環(huán)狀芽孢桿菌菌粉在40 90°C烘干，熱帶假絲酵母菌粉在30 70°C烘干；(2)將上述原料放入混合機中混合均勻，用紙塑及復合鋁箔袋包裝，儲存溫度需小于35°C,儲存環(huán)境濕度小于60%。所述混合機為混合均勻度變異系數(shù)小于5%的雙軸漿葉式高效混合機。本發(fā)明采用的菌種及其特點是I.枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)革蘭氏染色陽性、桿狀、芽孢中生或偏生、孢囊膨大但不明顯，7%氯化鈉生長、pH5. 7生長、葡萄糖( + )、阿拉伯糖(± )、淀粉水解、硝酸鹽還原試驗陽性、大小為O. 7—O. 8X2. O-3. Oum02.環(huán)狀芽抱桿菌(Bacillus circulans)G同原群，革蘭氏染色陽性、桿狀、芽孢中生、孢囊不膨大，孢內(nèi)無羥基丁酸鹽顆粒，V-P反應陰性、V-P液的終ΡΗ5. 5，葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，阿拉伯糖不產(chǎn)酸，大小為O. 9X2. 1-3. Ιμπ ο本發(fā)明所用的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)為申請人從傳統(tǒng)發(fā)酵豆豉中分離得到，其生物學特征如下菌落表面粗糙，不透明，污白色，菌落圓形，邊緣呈鋸齒狀，革蘭氏陽性菌；芽孢形態(tài)為橢圓到柱狀，位于菌體中央或稍偏，芽孢形成后菌體不膨大。本發(fā)明的枯草芽孢桿菌顯著區(qū)別于現(xiàn)有的枯草芽孢桿菌，可以耐受pH2.0，l%胃蛋白酶的人工胃液，可以耐受O. 3%的人工膽鹽，可以耐受80°C的制粒溫度，可以抑制致病性大腸桿菌K88，K99和金黃色葡萄球菌，具有較強的產(chǎn)纖維素酶的能力，可以降解纖維素。本發(fā)明的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)已于2011年3月2日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCCJia :北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所，保藏編號為CGMCC No. 4628。3.巨大芽抱桿菌(Bacillus megatherium)革蘭氏染色陽性、桿狀、芽孢中生或偏中生，孢囊膨大不明顯，V-P反應陰性、接觸酶陽性、淀粉水解、葡萄糖產(chǎn)酸、甘露醇(±)、阿拉伯糖和木糖產(chǎn)酸、硝酸鹽還原試驗陽性、大小為 I. 2-1. 5X2. 0-5. O μ m。4.熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)是最常見的假絲酵母，在葡萄糖-酵母汁-蛋白胨液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，25°C，3天，細胞呈球形或卵球，多端芽殖生長，有竹節(jié)式的假菌絲體，并有少量的細長真菌絲，芽殖孢子輪生，有分枝且有短鏈，可發(fā)酵葡萄糖，D-半乳糖以及麥芽糖，大小為4 8 X 6 11 μ m。 環(huán)狀芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、熱帶假絲酵母(菌種在《中國菌種目錄》和《中國典型培養(yǎng)物保藏中心培養(yǎng)物目錄》中已公開記載。本發(fā)明的復合微生態(tài)制劑的制備方法為將枯草芽孢桿菌、環(huán)狀芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、熱帶假絲酵母，分別在斜面、一級液體活化培養(yǎng)后，在種子罐進行混合活化培養(yǎng)，再接入大發(fā)酵罐中進行混合發(fā)酵培養(yǎng)。所述的四種菌種在種子罐活化培養(yǎng)的工藝中，每種菌以基本相同的接種量接種。(I)將原菌種進行活化處理包括固體斜面培養(yǎng)基的制備，種子培養(yǎng)基的制備，其中的芽孢菌接種入固體斜面LB培養(yǎng)基，酵母接種入固體斜面馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基，37°C下恒溫培養(yǎng)18-24小時；LB培養(yǎng)基胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化鈉10g/L。馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、H2O IOOOmL, pH6. 5。(2)種子液制備挑取斜面上活化好的各菌株單菌落分別接種于相應的液體種子培養(yǎng)基，37°C下恒溫培養(yǎng)18-24小時；(3)富集培養(yǎng)將各菌株的種子培養(yǎng)液加入到含3L發(fā)酵培養(yǎng)基的5L發(fā)酵罐中，37 °C下恒溫培養(yǎng)18-24小時；(4)將菌種按體積比混合后加入液體培養(yǎng)基，即得。發(fā)酵培養(yǎng)基(按每升培養(yǎng)基所含克重g/Ι計算):葡萄糖20 30，尿素3 5，酵母浸出汁粉3 6，蛋白胨12 15，玉米漿4 8，酵母膏12 15，用醋酸調(diào)節(jié)pH至7. O;并在發(fā)酵過程中采用連續(xù)流加高濃度的營養(yǎng)補充培養(yǎng)基，其組分為(重量百分比克重g/Ι計算)葡萄糖35 45，酵母膏25 35，ρΗ7· O。本發(fā)明的具體發(fā)酵工藝過程為I.在種子罐內(nèi)的培養(yǎng)基中，按每毫升培養(yǎng)基接種2 3億個活性枯草芽孢桿菌、環(huán)狀芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌和熱帶假絲酵母四種菌種中的一種，在32 37°C下，培養(yǎng)12-24小時。2.當種子罐內(nèi)培養(yǎng)基中每毫升含25 30億以上活性芽孢時，按每IOOml生產(chǎn)罐培養(yǎng)基中接種80 100億個活性芽孢的比例，將種子罐內(nèi)培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入生產(chǎn)罐內(nèi)培養(yǎng)基中深層通氣攪拌培養(yǎng)24 48小時，培養(yǎng)基溫度穩(wěn)定在28 32°C，攪拌次數(shù)每分鐘80 150次。生產(chǎn)罐培養(yǎng)基組成及配制方法首先將凈化的自來水放入生產(chǎn)罐中，再按水溶液的重量添加蛋白胨2%、牛肉膏O. 5%、葡萄糖O. 3%、食用鹽O. 5%、pH7. O 7. 2、攪拌均勻，120°C高壓滅菌40 60分鐘，再降溫至28-32°C即可使用。3.當生產(chǎn)罐內(nèi)芽孢生產(chǎn)率達到85-95%時，即將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入高速離心設(shè)備收集菌體，收集的菌體為灰白色，菌體按照1:3 6的比例混合于淀粉內(nèi)(也可將培養(yǎng)基液直接與淀粉混合，而不經(jīng)離心收集菌體工序)；經(jīng)60 80°C干燥和反復研磨，過80目篩制成菌粉，然后按菌粉(30%)、葡萄糖(10%)、淀粉(60%)的比例制成含活菌數(shù)為lX10n-5X10nCFU/g的菌粉。本發(fā)明得到的復合菌劑在低溫條件下生物活性高、生長速度快且能在低溫條件下處理微污染水源水，效果明顯，且 出水硝酸鹽與亞硝酸鹽類不積累，不產(chǎn)生N2O,安全可靠。復合菌劑及其發(fā)酵制劑作為改善水產(chǎn)養(yǎng)殖水質(zhì)的復合微生態(tài)添加劑和飼用微生態(tài)添加劑方面的應用。本發(fā)明的創(chuàng)新點在于復合菌劑所涉及四個菌種中的兩個菌種，即環(huán)狀芽孢桿菌和熱帶假絲酵母，在國內(nèi)是首次運用到改善水產(chǎn)養(yǎng)殖水質(zhì)的作用方面。而對于巨大芽孢桿菌在解決水體污染的應用效果在本發(fā)明中也非常顯著。應用巨大芽孢桿菌的培養(yǎng)物于池塘微堿性水體后，可降低水體懸浮顆粒中除水溶性吸附態(tài)磷外的無機及有機磷含量的10. 83% 24. 92%,水體中可溶性正磷酸鹽的含量可提高140% 260%。巨大芽孢桿菌的適宜用量為I mL/m3，適宜作用時間為3天。研究表明，巨大芽孢桿菌具有一定的解磷功能，可促進水體的磷素循環(huán)。本發(fā)明的優(yōu)點在于復合菌劑應用于改善水產(chǎn)養(yǎng)殖水質(zhì)作用的同時又作為一種飼料添加劑，能夠改善飼料品質(zhì)，提高飼料中粗蛋白的含量，降低飼料中粗纖維的含量，是一種新型安全可靠、無污染的純發(fā)酵多功能的新型微生態(tài)制劑產(chǎn)品。本發(fā)明所提供的改善水產(chǎn)養(yǎng)殖水質(zhì)的復合菌劑主要由芽孢桿菌和酵母構(gòu)成，它們同時具有耐高溫的特點，因而具有不需要包被，可直接制粒的優(yōu)點。本發(fā)明的改善水產(chǎn)養(yǎng)殖水質(zhì)的復合菌劑除了安全、無污染、直接制粒之外，同時具有多種功能且用量少，因此具有大大節(jié)約生產(chǎn)成本的優(yōu)點。本發(fā)明的新型改善水產(chǎn)養(yǎng)殖水質(zhì)復合菌劑的制備方法簡單，操作容易，且不含化學藥劑，不僅防霉效果好，抑菌力強，而且具有改善飼料品質(zhì)，適口性強的優(yōu)點。該復合微生態(tài)制劑可用于顯著改善水產(chǎn)養(yǎng)殖水質(zhì)，運行25天時氨氮去除率為運行40天的實驗全程中的最大去除率為81%，平均去除率為69%。實施例I :復合微生態(tài)飼料添加劑的生產(chǎn)(I)分別取用液體發(fā)酵培養(yǎng)分離后在60 80°C溫度下烘干的枯草芽孢桿菌，巨大芽孢桿菌，環(huán)狀芽孢桿菌菌粉及熱帶假絲酵母菌粉。(2)按重量比例計算，取枯草芽孢桿菌菌粉O. 25Kg，巨大芽孢桿菌菌粉O. 40Kg，環(huán)狀芽孢桿菌的菌粉O. 25Kg，熱帶假絲酵母菌粉O. IOKg用混合均勻度變異系數(shù)小于5%的雙軸漿葉式高效混合機混合均勻，包裝用紙塑及復合鋁箔袋，儲存溫度小于35°C，儲存環(huán)境濕度小于60%。實施例2 :復合微生態(tài)飼料添加劑的生產(chǎn)原料同實施例I。原料配比為按重量比例計算，取枯草芽孢桿菌菌粉O. 20Kg,巨大芽孢桿菌菌粉O. 35Kg，環(huán)狀芽孢桿菌的菌粉O. 20Kg，熱帶假絲酵母菌粉O. 25Kg.。制法同實施例I制成產(chǎn)品。實施例3 :復合微生態(tài)飼料添加劑的生產(chǎn)原料同實施例I。原料配比為按重量比例計算，取枯草芽孢桿菌菌粉O. 30Kg,巨大芽孢桿菌菌粉O. 30Kg,環(huán)狀芽孢桿菌的菌粉O. 30Kg,熱帶假絲酵母菌粉O. 10Kg。制法同實施例I制成產(chǎn)品。實施例4 :復合微生態(tài)飼料添加劑的生產(chǎn)原料同實施例I。原料配比為按重量比例計算，取枯草芽孢桿菌菌粉O. 30Kg,巨大芽孢桿菌菌粉O. 30Kg,環(huán)狀芽孢桿菌的菌粉O. 30Kg,熱帶假絲酵母菌粉O. 10Kg。制法同實施例I制成產(chǎn)品。以下為本發(fā)明產(chǎn)品對養(yǎng)殖水質(zhì)改善效果的實施例。實施例5 :本發(fā)明所研制的復合微生態(tài)制劑對室內(nèi)靜態(tài)水體改良效果實驗在室內(nèi)小水池內(nèi)進行，試驗前每池加入50kg池水，靜止三天后開始試驗。試驗期間水溫為20 25°C，每池加入按照實施例I 4所得到的復合微生態(tài)制劑，每池加入O. 5g/m3，平行設(shè)置試驗組和空白對照組，每24小時定時采集水樣分析測定，連續(xù)分析7天。結(jié)果表明7天內(nèi)使用本復合微生態(tài)制劑對室內(nèi)池水的溶氧、pH無明顯的影響，可明顯降低池水的氨氮濃度、亞硝酸鹽氮、硫化物濃度。氨氮降低了 6. 93% 40. 26%，最大降解峰值出現(xiàn)在第4天；亞硝酸鹽氮降低7. 01% 21. 66%，最大降解峰值出現(xiàn)在第3天。實施例6 :本發(fā)明所研制的復合微生態(tài)制劑對養(yǎng)殖魚池的水質(zhì)改良效果按照實施例I 4所得到的復合微生態(tài)制劑，用于凈化從北京永定河水域采集的魚類養(yǎng)殖池塘中的養(yǎng)殖水，在20 25°C的條件下經(jīng)納氏試劑光度法檢測氨氮的含量，結(jié)果所示，運行25天時氨氮去除率為運行40天的實驗全程中的最大去除率為81%，平均去除率為69% (圖I和圖2),且出水氨氮濃度為O lmg/L ;且無硝酸鹽和亞硝酸鹽積累，不產(chǎn)生N2O并出水的化學需氧量COD為O 4mg/L，保持在很低的水平。本發(fā)明得到的復合飼料添加劑對養(yǎng)殖水質(zhì)具有明顯的改善作用。
實施例7 :復合微生態(tài)制劑與化學復合水質(zhì)改良劑應用效果對比研究 底層水質(zhì)改良劑是一種白色顆粒狀化學復合劑，主要成份是過氧化鈣CaO2。6 口魚塘分別投人該化學復合劑和按照實施例I 4所得到的復合微生態(tài)制劑并設(shè)置對照，7天、15天后水質(zhì)測定結(jié)果如表I。由表I看出，本發(fā)明所研制的復合微生態(tài)制劑以及化學復合劑都具有良好的水質(zhì)改善作用，對氨氮和亞硝酸鹽的消除效果非常明顯，但隨著時間的推移，微生態(tài)制劑對氨氮和亞硝酸鹽的消除率上升更加明顯，15天后氨氮消除率達50. 29%以上，亞硝酸鹽的降解率達18. 81%以上，而化學復合劑對氨氮和亞硝酸鹽的消除率則趨于穩(wěn)定分別達到40%和13. 86%，微生態(tài)制劑更有利于持續(xù)消除水中有害物質(zhì)，改善水質(zhì)環(huán)境。表I魚塘水質(zhì)監(jiān)測結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種水產(chǎn)用復合微生態(tài)制劑，其特征在于，包括以下四種組分枯草芽孢桿菌CGMCCNo. 4628菌粉、巨大芽孢桿菌菌粉、環(huán)狀芽孢桿菌菌粉、熱帶假絲酵母菌粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的水產(chǎn)用復合微生態(tài)制劑，其特征在于，其所含各種菌的活菌數(shù)為枯草芽孢桿菌2 X 109CFU/g I X 10nCFU/g、環(huán)狀芽孢桿菌2 X 109CFU/g 2X 10nCFU/g、巨大芽孢桿菌2X 109CFU/g I X 10nCFU/g、熱帶假絲酵母2 X 109CFU/g lX10nCFU/g。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的水產(chǎn)用復合微生態(tài)制劑，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌菌粉、巨大芽孢桿菌菌粉、環(huán)狀芽孢桿菌菌粉、熱帶假絲酵母菌粉，各成分的重量配比為枯草芽孢桿菌菌粉O. 20 O. 50份巨大芽孢桿菌菌粉O. 20 O. 60份環(huán)狀芽孢桿菌菌粉O. 20 O. 50份熱帶假絲酵母菌粉 O. 05 O. 30份。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的水產(chǎn)用復合微生態(tài)制劑，其特征在于，所述的菌粉制備方法為 (1)在種子罐內(nèi)的培養(yǎng)基中，按每毫升培養(yǎng)基接種2 3億個活性枯草芽孢桿菌、環(huán)狀芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌和熱帶假絲酵母四種菌種中的一種，在32 37°C下，培養(yǎng)12-24小時； (2)當種子罐內(nèi)培養(yǎng)基中每毫升含25 30億以上活性芽孢時，按每IOOml生產(chǎn)罐培養(yǎng)基中接種80 100億個活性芽孢的比例，將種子罐內(nèi)培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入生產(chǎn)罐內(nèi)培養(yǎng)基中深層通氣攪拌培養(yǎng)24 48小時，培養(yǎng)基溫度穩(wěn)定在28 32°C，攪拌次數(shù)每分鐘80 150次； (3)當生產(chǎn)罐內(nèi)芽孢生產(chǎn)率達到85-95%時，即將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入高速離心設(shè)備收集菌體，收集的菌體為灰白色，菌體與淀粉按照1:3 6的比例混合均勻；經(jīng)60 80°C干燥和反復研磨，過80目篩制成菌粉，然后按質(zhì)量百分比菌粉30%、葡萄糖10%、淀粉60%的比例制成含活菌數(shù)為IX 10n-5X 10nCFU/g的菌粉。
5.—種權(quán)利要求1-4任一項所述的水產(chǎn)用復合微生態(tài)制劑的制備方法,其特征在于，包括以下步驟 (1)將枯草芽孢桿菌菌粉、巨大芽孢桿菌菌粉、環(huán)狀芽孢桿菌菌粉在40 90°C烘干，熱帶假絲酵母菌粉在30 70°C烘干； (2)將上述原料放入混合機中混合均勻，用紙塑及復合鋁箔袋包裝，儲存溫度需小于350C，儲存環(huán)境濕度小于60%。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的水產(chǎn)用復合微生態(tài)制劑的制備方法，其特征在于，所述混合機為混合均勻度變異系數(shù)小于5%的雙軸漿葉式高效混合機。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種水產(chǎn)用復合微生態(tài)制劑及其制備方法，所述的添加劑是一種由四種菌及其發(fā)酵產(chǎn)物按照一定比例混合而成的復合微生態(tài)制劑，由如下重量組分組成枯草芽孢桿菌菌粉0.20～0.50份，巨大芽孢桿菌菌粉0.20～0.60份，環(huán)狀芽孢桿菌菌粉0.20～0.50份，熱帶假絲酵母菌粉0.05～0.30份；本復合微生態(tài)飼料添加劑具有制造工藝簡單，菌種易得，成本低的特點，且無毒副作用，無殘留。本發(fā)明的復合微生態(tài)飼料添加劑應用于水產(chǎn)，即可為一種飼料添加劑，能夠改善飼料品質(zhì)，提高飼料中粗蛋白的含量，降低飼料中粗纖維的含量，也兼具改善水產(chǎn)養(yǎng)殖水質(zhì)作用，是一種新型安全可靠、無污染的純發(fā)酵多功能的新型微生態(tài)制劑產(chǎn)品。
文檔編號C12N1/20GK102719380SQ20121019796
公開日2012年10月10日 申請日期2012年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月15日
發(fā)明者劉瀅, 龐潔, 王安如, 贠桂玲 申請人:北京大北農(nóng)科技集團股份有限公司, 天津昌農(nóng)科技有限責任公司