一種1,5-脫水葡糖醇的氧化酶法測定方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種1，5-脫水葡糖醇的氧化酶法測定方法，可廣泛應用在醫(yī)學及生物化學【技術領域】。其特點是：通過葡萄糖激酶(GK)和磷酸葡萄糖異構酶(PGI)將樣品中葡萄糖(Glu)轉化為果糖-6-磷酸(Fru-6-P)，并通過系統(tǒng)中的丙酮酸激酶(PK)和磷酸烯醇式丙酮酸鹽(PEP)，建立ATP再生系統(tǒng)，確保Glu向Fru-6-P轉化。樣品中1，5-AG經(jīng)吡喃糖氧化酶(PROD)作用生成1，5-脫水果糖(1，5-AF)和H2O2，后者借Trinder’s系統(tǒng)顯色定量。
【專利說明】一種1 ’ 5-脫水葡糖醇的氧化酶法測定方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及1，5-脫水葡糖醇(1，5-AG)的氧化法測定方法，可廣泛應用在醫(yī)學及生物化學【技術領域】。
【背景技術】
[0002]血清中1，5_脫水葡糖醇濃度不受即時的飲食、葡萄糖攝食量影響，能快速、靈敏的反映3-5天內總血糖變化情況。糖尿病患者血清1，5-AG顯著降低，當糖尿病得到良好控制時，血清1，5-AG的日回升率十分穩(wěn)定，不受冶療方法、性別、年齡、體重、患病時間和血清中1，5-AG起初的濃度影響，回升幅度和對糖尿病診斷的敏感性及特異性均明顯大于常用的糖尿病診斷指標糖化血紅蛋白(HbAlc)和果糖胺(GSP)。
[0003]文獻報道測定1，5_AG的方法有陰離子交換層析法、高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜質譜法(LC-MS)、全自動酶分析法等，前三種方法需要對1，5-AG進行衍生和復雜的樣品前處理，同時需特殊、昂貴儀器，不適合臨床常規(guī)分析。全自動酶法雖好，但易受血清中高濃度葡萄糖干擾，如Fukumura Y (Clin Chem, 1994,40:2013-2016.)、陳國軍等(中華醫(yī)學檢驗雜志，1999，22 (6):358-361.)在測定1，5-AG時，將葡萄糖通過葡萄糖激酶(GK)轉化為6-磷酸葡萄糖，然后用吡喃糖氧化酶(PROD)將1，5-AG氧化產(chǎn)生過氧化氫并偶聯(lián)TrindreJ s反應顯色定量。由于PROD酶的底物特異性不佳，反應中生成的6-磷酸葡萄糖在丙酮酸激酶等含量不足時易重新轉化為葡萄糖，生成的葡萄糖被PROD酶氧化后參與Trindre^ s反應并顯色，從而引起1，5_AG的測定結果假性升高。
[0004]本發(fā)明的目 的是為了解決上述技術的不足，將葡萄糖轉化為6-磷酸葡萄糖后，進一步利用磷酸葡萄糖異構酶的催化作用將6-磷酸葡萄糖轉化為不與PROD酶作用的6-磷酸果糖，并通過系統(tǒng)中的丙酮酸激酶(PK)和磷酸烯醇式丙酮酸鹽(PEP)，建立ATP再生系統(tǒng)，確保葡萄糖向6-磷酸葡萄糖轉化，該法測定試劑4°C開瓶穩(wěn)定性達27d，對1，5-AG具有良好的選擇性，高達85.0mol/L的葡萄糖不干擾本法測定。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明提供了 1，5_脫水葡糖醇(1，5-AG)的氧化酶法測定方法，用于血清1，5_脫水葡糖醇的測定。該測定體系主要是通過葡萄糖激酶(GK)和磷酸葡萄糖異構酶(PGI)將樣品中葡萄糖(Glu)轉化為果糖-6-磷酸(Fru-6-P)，并通過系統(tǒng)中的丙酮酸激酶(PK)和磷酸烯醇式丙酮酸鹽(PEP)，建立ATP再生系統(tǒng)，確保Glu向Fru-6-P轉化。樣品中1，5-AG經(jīng)吡喃糖氧化酶(PROD)作用生成1，5-脫水果糖(1，5-AF)和H2O2，后者借Trinder’s系統(tǒng)顯色定量。
[0006]為了達到理想的檢測效果，本發(fā)明還特別提供了 1，5_脫水葡糖醇(1，5-AG)的氧化酶法測定試劑，分為A、B 二個組份。兩個組份的具體成份組成可表述如下。
[0007]A 組份:
[0008]
【權利要求】
1.一種1，5-脫水葡糖醇的氧化酶法測定方法，其特征是通過葡萄糖激酶(GK)將主要干擾物葡萄糖轉化為葡萄糖-6磷酸(Glu-6-P)，葡萄糖-6磷酸(Glu-6-P)再經(jīng)磷酸葡萄糖異構酶(PGI)轉化為果糖-6-磷酸(Fru-6-P)，并通過系統(tǒng)中的丙酮酸激酶(PK)和磷酸烯醇式丙酮酸鹽(PEP)，建立ATP再生系統(tǒng)，確保Glu向Fru-6-P轉化。樣品中1，5-AG經(jīng)吡喃糖氧化酶(PROD)作用生成1，5_脫水果糖(1，5-AF)和H2O2，后者借Trinder’s系統(tǒng)顯色定量。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種1，5_脫水葡糖醇的氧化酶法測定方法，其特征是在將主要干擾物葡萄糖轉化為果糖-6-磷酸(Fru-6-P)的同時，必須建立ATP再生系統(tǒng)。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種1，5_脫水葡糖醇的氧化酶法測定方法，其特征是在將主要干擾物葡萄糖轉化為葡萄糖-6磷酸(Glu-6-P)的酶是葡萄糖激酶(GK)。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種1，5_脫水葡糖醇的氧化法測定方法，其特征是將待測物1，5-脫水葡萄糖醇(1，5-AG)氧化的酶是吡喃糖氧化酶(PROD)。
【文檔編號】C12Q1/533GK103725749SQ201210417645
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2012年10月16日 優(yōu)先權日:2012年10月16日
【發(fā)明者】潘利琴 申請人:溫州市人民醫(yī)院