專利名稱：一種海洋微生物來源的海藻糖合成酶及其編碼基因與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及海洋生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種海洋微生物來源的海藻糖合成酶及其編碼基因與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
海藻糖是一種穩(wěn)定的非還原性二糖，廣泛存在于細(xì)菌、真菌、酵母、昆蟲和多種植物體內(nèi)。由兩個吡喃環(huán)葡萄糖以α-1，1-糖苷鍵連結(jié)而成，海藻糖有3種光學(xué)異構(gòu)體，其中α α型海藻糖是最常見的海藻糖。α β和β β型在自然界中很少存在，α α型海藻糖結(jié)構(gòu)式如式(I)所示。
權(quán)利要求
1.一種海藻糖合成酶，具有如下(a)或(b)或(C)的蛋白質(zhì) (a)由SEQID N0:2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； (b)將SEQID NO:2的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與海藻糖合成酶相關(guān)的由SEQ ID N0:2衍生的蛋白質(zhì)； (c)將SEQID N0:2中的氨基酸序列在N端或C端加上一段序列，且與海藻糖合成酶相關(guān)的由SEQ ID N0:2衍生的蛋白質(zhì)。
2.一種如權(quán)利要求1所述的海藻糖合成酶的編碼基因，為如下(i )或( )的DNA分子 (i )如SEQ ID NO:1所示的DNA分子； ( )在嚴(yán)格條件下與(i )限定的DNA序列雜交且編碼所述海藻糖合成酶的DNA分子。
3.一種含有如權(quán)利要求2所述的海藻糖合成酶的編碼基因的重組表達載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或轉(zhuǎn)基因重組菌。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種含有海藻糖合成酶的編碼基因的重組表達載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或轉(zhuǎn)基因重組菌，其特征在于，重組表達載體是將如SEQ ID NO:1所示的DNA分子插入到大腸桿菌表達載體中得到的表達海藻糖合成酶的重組表達載體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種含有海藻糖合成酶的編碼基因的重組表達載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或轉(zhuǎn)基因重組菌，其特征在于，所述的大腸桿菌表達載體為pET-32a載體。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種含有海藻糖合成酶的編碼基因的重組表達載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或轉(zhuǎn)基因重組菌，其特征在于，所述的轉(zhuǎn)基因重組菌是將所述的重組表達載體導(dǎo)入大腸桿菌中，篩選得到表達海藻糖合成酶的轉(zhuǎn)基因重組菌。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種含有海藻糖合成酶的編碼基因的重組表達載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或轉(zhuǎn)基因重組菌，其特征在于，所述的大腸桿菌為大腸桿菌BL21 (DE3) pLysS。
8.—種如權(quán)利要求1所述的海藻糖合成酶在制備海藻糖中的應(yīng)用。
9.一種如權(quán)利要求2所述的海藻糖合成酶的編碼基因在制備海藻糖中的應(yīng)用。
10.一種如權(quán)利要求3所述的含有海藻糖合成酶的編碼基因的重組表達載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或轉(zhuǎn)基因重組菌在制備海藻糖中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及海洋生物技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明的目的在于尋找一種海洋微生物來源的海藻糖合成酶，利用該海藻糖合成酶生產(chǎn)的海藻糖轉(zhuǎn)化效率高、生產(chǎn)成本低。本發(fā)明提供了一種海洋微生物來源的海藻糖合成酶，來源于本申請人之前已保藏中國典型培養(yǎng)物保藏中心的海洋假單胞菌P8005(CCTCC NoM2010298)，命名為P8005-TreS，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本發(fā)明還提供了該海藻糖合成酶的編碼基因及其應(yīng)用。
文檔編號C12N15/70GK103013967SQ201210585409
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月28日
發(fā)明者高云, 劉小宇, 劉軍華, 奚悅, 胡波, 盧小玲, 焦炳華 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)